Abstract

Fundo

Cancro-testículo antígenos (CTAs) são proteínas imunogênicas que são pobres marcadores prognósticos em câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). Nós investigamos a expressão de CTAs em NSCLC e sua associação com a resposta à quimioterapia, mutações genéticas e sobrevivência

Métodos

Foram estudados 199 pacientes com patológica N2 NSCLC tratados com quimioterapia neoadjuvante (NAC;.

n

= 94), a observação pós-operatória (

n

= 49), a quimioterapia adjuvante (

n

= 47) ou desconhecida (

n

= 9 ). A imuno-histoquímica para o NY-ESO-1, MAGE-A e MAGE-C1 foi realizada. características clínico-patológicas, a resposta ao tratamento neoadjuvante e sobrevida global foram correlacionados. mutações no DNA foram caracterizados usando o painel v1.0 Sequenom Oncocarta. dados Affymetrix do estudo quimioterapia adjuvante JBR.10 foram obtidos a partir de um repositório público, normalizado e mapeados para CTAs.

Resultados

NY-ESO-1 foi expressa em 50/199 (25% ) amostras. Expressão de NY-ESO-1 na coorte NAC foi associado com taxas de resposta significativamente aumentados (

P

= 0,03), mas não a sobrevivência global. Na coorte de pós-operatório, análise multivariada identificou NY-ESO-1 como um marcador de prognóstico independente para aqueles que não tratados com quimioterapia (HR 2,61; IC 95% 1,28-5,33;

P

= 0,008), enquanto tratamento com quimioterapia e expressão de NY-ESO-1 foi um preditor independente da melhora da sobrevida (HR 0,267, IC 95% ,07-,980;

P

= 0,046). Descobertas similares para MAGE-A foram vistos, mas não se encontrou significância estatística. dados de expressão de genes independentes do conjunto de dados JBR.10 apoiar estas conclusões, mas foram underpowered para demonstrar diferenças significativas. Não houve associação entre mutações oncogênicas e expressão CTA.

Conclusões

NY-ESO-1 foi preditiva de aumento da resposta à quimioterapia neoadjuvante e beneficiar de quimioterapia adjuvante. Novos estudos que investigam a relação entre estes resultados e os mecanismos imunológicos são garantidos

Citation:. John T, Starmans MHW, Chen Y-T, Russell PA, Barnett SA, Branco SC, et al. (2013) The Role of Cancer-testículo Antígenos como preditivos e prognósticos marcadores em Non-Small Cell Lung Cancer. PLoS ONE 8 (7): e67876. doi: 10.1371 /journal.pone.0067876

editor: William C. S. Cho, a rainha Elizabeth Hospital, Hong Kong

Recebido: 28 de fevereiro, 2013; Aceito: 23 de maio de 2013; Publicação: 23 de julho de 2013

Direitos de autor: © 2013 John et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pela Agência Cancer vitoriana, Clinical Research Fellowship (CRF09-04), uma bolsa de pesquisa do cancro Pfizer, o Centro de Translational Medicine Molecular (www.ctmm.nl), Saúde Conselho de Investigação Médica (NHMRC) da Austrália Practitioner Fellowship (487.905) e de receber subvenções (542510 1.007.381), bem como o Instituto Ontário de Câncer Research através de financiamento concedido pelo Governo de Ontário para PB. Apoiado em parte pelo suporte de infra-estrutura de financiamento do Programa Operacional do Governo do Estado de Victoria. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. A concessão Cancer Research Pfizer é uma revisão por pares, concessão competitiva. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento.

Fundo

Embora a incidência global de câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) parece ser em declínio na América do Norte, a mortalidade só recentemente estabilizou [1]. Mais mortes são atribuíveis a NSCLC do que qualquer outro câncer [1]. Dado que os sintomas ocorrem tarde, a maioria dos pacientes são diagnosticados com doença localmente avançado ou metastásico. Gestão da doença em estágio final evoluiu para incluir sub-tipagem molecular de mutações somáticas e rearranjos de genes. Infelizmente a rápida tradução de informação molecular para o adjuvante e configurações neoadjuvante tem rendido resultados conflitantes e confusas. Por exemplo, mutações no receptor do factor de crescimento epidérmico (

EGFR

) gene são claramente preditivos de resposta a tirosina quinase e melhora da sobrevida para pacientes metastáticos. Na doença localmente avançada, no entanto, dois estudos de fraca potência não conseguiu reproduzir esta observação, e ainda não está claro se os inibidores de tirosina-quinase são benéficos para a fase inicial NSCLC [2], [3].

Atualmente, não há consenso para a gestão da localmente avançado (estágio IIIA) NSCLC. Esta continua a ser controversa devido a variações nas técnicas de preparo, conflitantes resultados de ensaios e práticas idiossincráticas entre as diferentes instituições [4]. As opções incluem cirurgia seguida de quimioterapia adjuvante (ACT), quimioterapia neoadjuvante (NAC), seguido por cirurgia e definitiva quimio-radioterapia sozinho ou seguido por cirurgia. Até à data, a única modalidade mostrado para melhorar significativamente a sobrevivência é a ressecção cirúrgica seguida pela ACT, como se mostra numa série de estudos de grandes [5]. Embora os estudos iniciais da NAC pareciam promissoras, o entusiasmo diminuiu à medida que mais dados de grandes estudos adjuvantes tornou-se disponível, levando a má recrutamento e análises de fraca potência [6]. Apenas um estudo comparou NAC ao ACT e demonstraram equivalência em pacientes com doença em estágio inicial [7], embora houvesse ressalvas [4].

Uma razão particular para usar NAC em oposição ao pós-operatório terapia adjuvante, é que ele fornece informações valiosas, potencialmente preditivo, baseado na sensibilidade de drogas

in vivo

. Em contraste atual marcadores preditivos, não pode determinar se um indivíduo com NSCLC irá responder a um determinado tratamento [8]. Isto é importante porque a resposta ao tratamento pode melhorar resectability e podem traduzir-se em melhoria na sobrevivência [9]. Além disso, a capacidade de prever, a priori, que os doentes irão beneficiar torna possível optimizar a terapêutica e evitar a toxicidade desnecessária naqueles que não são susceptíveis de responder.

antígenos Cancer-testículo (CTAs) são moléculas caracterizadas por expressão restrita a tecido normal testículo, mas expressão aberrante em uma variedade de tipos de cancro, incluindo 10-50% do NSCLC [10], [11]. Sua expressão é frequentemente coordenado [12] e associados com pior prognóstico clínico [13] e doença avançada [14], [15]. Existe alguma evidência de que são funcionais; interferente curto rastreio de ARN de uma linha de células de cancro do pulmão mostraram que vários CTA foram associados com resistência ao paclitaxel quimioterapia [16]. No entanto, os CTA identificadas nestes rastreios não têm sido extensivamente estudado e a sua presença em tumores pulmonares de pacientes ainda tem de ser avaliada. A associação com chemoresistance é análogo a observações em outros tipos de tumores, onde tem-se especulado que o CTA marcar mais primitivo, células-tronco “-like” [10], [17] – [19]. Na verdade, o estudo foi inicialmente realizado a fim de avaliar a relação entre esses antígenos e chemoresistance. Por conseguinte, foi uma surpresa para descobrir que o NY-ESO-1 e para um menor grau de MAGE-A3 foram associados com a quimiossensibilidade.

Enquanto o papel funcional de CTA no cancro permanece pouco clara, a imunogenicidade destas moléculas possui foi bem documentada [10]. Com efeito CTA foram originalmente identificado por clonagem de antigénios que activados linfócitos T citotóxicos e rastreio soros de doentes quanto a anticorpos imunorreactivos [20]. Até à data, foram identificados mais de 100 famílias CTA distintas [21] com aproximadamente 30 codificadas por genes localizados no cromossomo X (genes CT-X). As regiões promotoras para todos os genes estudados CT-X contêm ilhas de CpG metilado e são frequentemente em tecidos somáticos e, portanto, não expressos. No cancro, a desmetilação global do cromossoma X, incluindo as regiões promotoras dos genes CT-X Acredita-se que resultam na activação coordenada de múltiplos CTA [10], embora não seja claro se a CTA são passantes ou funcionalmente participar na tumorigénese.

Para avaliar a relação entre quimio-sensibilidade e expressão CTA em NSCLC, foram realizados estudos imunohistoquímicos em tumores de pacientes com acometimento patológico N2 (pN2) nodal (pelo menos Stage IIIA). Nós investigamos duas coortes clínicos, uma coorte pré-operatório e pós-operatório. Os pacientes tanto tinha sofrido pré-operatória NAC, em que investigou o tecido nodal mediastinal antes do tratamento ou foram tratados cirurgicamente com ou sem quimioterapia adjuvante no grupo de pós-operatório; onde investigamos o tecido do tumor primário pós-ressecção. Aqui demonstramos que o CTA NY-ESO-1 é de prognóstico para o resultado clínico pobre, no entanto, também parece ser preditiva para melhorar a resposta e benefício de sobrevivência da quimioterapia.

Materiais e Métodos

Pacientes e amostras clínicas

de acordo com um protocolo aprovado pelos comitês de ética de Austin Saúde, o hospital de St Vincent e hospitais Weill Cornell Medical Center, os pacientes que se submeteram à pré-operatória NAC ou cirurgia com ou sem ACT para a doença pN2 foram identificados e clínica informações capturadas retrospectivamente. Consentimento para tecidos acesso e registros clínicos foi dispensada sob a condição de que os detalhes do paciente foram de-identificados. NAC pacientes foram tratados com pelo menos três ciclos de quimioterapia com platina antes da cirurgia. pacientes da ACT foram tratados com quatro ciclos de quimioterapia à base de platina pós ressecção. Os pacientes que não receberam ACT foram observados sem qualquer tratamento adicional. Para o grupo de pré-operatório, as amostras obtidas a partir de amostragem linfonodo mediastinal antes da administração de quimioterapia foram usadas para a coloração de CTA e o isolamento de ADN. Na coorte de pós-operatório, foi utilizado o modelo de tumor de pulmão cirúrgico primário. Resposta a NAC foi definida patologicamente por down-encenação da lesão inicial de pós-operatório. Os pacientes foram encenadas no pré-operatório com exames de PET ou mediastinoscopy.

Para mais de validação investigamos pacientes tratados como parte do estudo BR.10 [22] cujos tumores foram submetidos a profiling molecular usando matrizes Affymetrix. O estudo original randomizados 482 pacientes para receberem quimioterapia adjuvante ou observação após a ressecção cirúrgica, no entanto, apenas 133 dessas amostras estavam disponíveis para arrays de expressão gênica [23].

CT antígeno coloração

Para CTA coloração, as secções de 4 ^ m de tecidos embebidos em parafina e fixados em formalina (FFPE) foram cortadas e coradas como descrito anteriormente [19]. NY-ESO-1 (E978) foi obtido a partir do Ludwig Institute for Cancer Research e utilizada a uma concentração de 2,5 ug /mL. MAGE-se um anticorpo (6C1) foi adquirido a partir de Abcam e utilizado em 0.3 ug /ml. anticorpo MAGE-C1 /CT7 (CT7-33) foi obtido a partir de Santa Cruz-(cat no SC-20034) e utilizou-se 0,5 ug /mL. A detecção de fluorescência nuclear e /ou citoplasmático em qualquer percentagem de células tumorais foi considerado positivo. completa ausência de coloração foi considerado negativo para cada CTA testado. testículo tecido foi utilizada como controlo positivo; tecido pulmonar normal e ausência de anticorpo primário foram usadas como controlos negativos.

mutacional Profiling

O ADN foi isolado a partir de blocos de FFPE ou lâminas não coradas. Para blocos de tumor, um H E corrediça foi avaliada histologicamente e 1,5 mm núcleos foram tomadas a partir do bloco correspondente em áreas de alta celularidade do tumor. Para slides, áreas de celularidade alta tumor foram raspadas a partir do slide. O tecido ou núcleo foi então de-parafinado por passagens em série em xileno e álcool, DNA isolado usando DNeasy sangue e kits de tecido (Qiagen, Melbourne, Austrália) e submetidos a mutacional perfil usando a plataforma MassARRAY da Sequenom, Painel Oncocarta v1.0, como anteriormente descrito [24]. Esta plataforma interroga 238 mutações em toda 19 oncogenes (https://www.sequenom.com/sites/genetic-analysis/applications/somatic-mutation-profiling.

Microarray Análise

abundâncias mRNA CTA foram avaliadas no conjunto de dados BR.10 [23]. Estes dados são disponibilizados ao público no Centro Nacional de Informações sobre Biotecnologia Gene Expression Omnibus (GSE14814) e do Projeto Desafio do Director [25]. Estas análises foram realizadas em R (v2.14.2). Pré-processamento de dados foi realizada por meio RMA [26] (Affymetrix pacote da versão 1.20.0) e atualizado anotação Entrez GeneID [27] (pacote hgu133ahsentrezgcdf v14.1.0). CTA foram pareados para a plataforma de microarray expressão do gene através de seus GeneIDs Entrez. Cada gene foi usado para médio dicotomizam coorte paciente. Diferenças na sobrevivência entre os dois grupos foram avaliadas com curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier e Cox modelagem razão de risco proporcional seguido pelo teste de Wald (sobrevivência pacote v2.36-12) em toda a coorte, os pacientes tratados com o ACT e os doentes não tratados com ACT .

Estatísticas

As diferenças de dados demográficos do paciente para grupos de pacientes positivos e negativos do CTA CTA foram avaliados com χ

2-testes. Um valor de p 0,05 foi considerado significativo. Além disso, para avaliar o valor prognóstico e preditivo da expressão CTA tanto Cox razão de risco proporcional análises de modelagem univariada e multivariada foram realizadas em R (v2.14.2, sobrevivência pacote v2.36-12).

Resultados

Os pacientes

dados clínicopatológicos estavam disponíveis para 199 pacientes em dois grupos. A primeira, uma coorte pré-operatório, incluiu 94 pacientes que foram submetidos a quimioterapia neoadjuvante seguido por cirurgia. Na segunda, um pós-operatório de coorte, 105 pacientes foram incluídos; 49 que tiveram ressecção cirúrgica sozinho, 47 que receberam quimioterapia adjuvante adicional e 9 onde os dados quimioterapia adjuvante não foi registrada. A informação clínica para cada grupo está resumida na Tabela 1. Os pacientes tratados com NAC que passou a cirurgia representam um subgrupo altamente seleccionada principalmente com base em resectability e bom estado geral de pós-quimioterapia. Na coorte de pós-operatório, os pacientes que não receberam quimioterapia foram principalmente tratados antes de 2004, quando o tratamento adjuvante foi mais amplamente aceito.

expressão CT Antigen

NY-ESO-1 coradas proporções semelhantes em cada coorte, com 24/94 (26%) nodos de PN2 na coorte de pré-operatório e 26/105 (25%) dos tumores pulmonares ressecados na coorte de pós-operatório (Figura 1). A idade média dos pacientes cujos tumores coradas positivas para NY-ESO-1 foi de 62 anos no pré-operatório e 66 anos na coorte de pós-operatório, o que foi semelhante para pacientes com NY-ESO-1 tumores negativos. Mais machos foram NY-ESO-1 positivo em ambos os grupos com 14/24 (58%) positivo na coorte de pré-operatório (Pχ

2 = 0,728) e 16/26 (62%) no grupo de pós-operatório (Pχ

2 = 0,605)

A:. Testículo (controle positivo), B: NY-ESO-1, C: MAGE-A, D: MAGE-C1, E: mapa de calor sobreposição detalhando na expressão de CTA e outras características clinicopatológicas na coorte de neoadjuvante.

MAGE-a expressão foi observada em apenas 27/94 (29%) pacientes pré-operativo, mas em 52/105 (50%) na coorte de pós-operatório (Pχ

2 = 0,004). MAGE-C1 coradas menos amostras, com 13/94 (13%) na coorte de NAC mas 32/105 (44%) no grupo de pós-operatório.

CTA foram expressos tanto em adenocarcinoma e carcinoma de células escamosas (Figura 1E, 1F). No entanto carcinomas de células escamosas mais foram positivos em ambos os conjuntos de dados, embora esta não atingiu significância estatística na coorte pré-operatório. Para o NY-ESO-1 na coorte de 22/08 (36%) carcinomas de células escamosas pré-operatórias foram positivos em comparação com 9/60 (15%) adenocarcinomas (Pχ

2 = 0,070). Da mesma forma, no pós-operatório de coorte 12/30 (30%) foram positivos em comparação com 8/59 (14%; Pχ

2 = 0,011) adenocarcinomas. Estas diferenças histológicas em antigénio coloração CT foram semelhantes para MAGE-A e MAGE-C1 e à relatada anteriormente [13]. Além disso expressão de uma CTA foi muitas vezes associada com a expressão dos outros, um fenómeno que também tem sido observado anteriormente [13].

As mutações genéticas e CT expressão de antigénios

A seguir, procurou determinar se CTA expressão foi associada com mutações genéticas específicas. Foram triados 238 mutações somáticas em 19 oncogenes usando da Sequenom OncoCarta painel v1.0. Foram observadas taxas mais baixas de mutações no coorte pré-operatória ao esperado em uma população caucasiana NSCLC, com apenas quatro

EGFR

(4%) mutações e nove

KRAS

(9%) mutações , todos os que ocorrem em adenocarcinomas como esperado. Dois casos adicionais abrigava

BRAF

mutações, enquanto três tiveram

TP53

mutações e um um

ARN

mutação. As baixas taxas de

EGFR

e

KRAS

mutações pode refletir uma maior taxa de resultados falso-negativos, devido à baixa percentagem de células tumorais na proporção de células não neoplásicas nestes gânglios linfáticos, embora áreas de alta celularidade do tumor foram especificamente seleccionadas para isolamento de ADN. Na coorte de pós-operatório, as taxas de mutações foram significativamente maiores, e mais próximo aos esperados para fase final de NSCLC, com 16

EGFR

mutações (15%) e 18 (17%)

KRAS

mutações. expressão CTA não foi associado com mutações oncogênicas em adenocarcinomas (Figura 1E).

Resposta a neoadjuvante quimioterapia

Resposta a NAC foi avaliada com base no estadiamento patológico para baixo. Dos NY-ESO-1 tumores 24 positivos, dois pacientes obtiveram resposta completa (CR;

ou seja

nenhum tumor residual foi patologicamente detectável), 14 uma resposta parcial (PR), seis tinham doença estável (SD) e dois progrediu por quimioterapia (PD). Nos NY-ESO-1 doentes negativos 70, havia um CR, 23 PRs, 36 SD, nove PDS e uma resposta em falta (Figura 2). Houve um aumento significativo da taxa de resposta (CR + PR) em NY-ESO-1 expressando tumores em comparação com NY-ESO-1 negativos (Pχ

2 = 0,034).

CR = Resposta Completa, PR = Partial Response, SD = doença estável, PD = doença progressiva, NA = Não avaliável. parcela florestal fatores associados à sobrevida em pacientes que foram tratados no grupo pós-operatório detalhamento. Quadrados = espinocelular, ADC = Adenocarcinoma, ACT = Quimioterapia Adjuvante (B).

Apesar respostas melhoradas para NAC, não foram observadas diferenças de sobrevivência em pacientes expressando NY-ESO-1 ou qualquer outro CTA comparação para aqueles tumores que não o fizeram. Patológica CR foi associada com sobrevivência prolongada; No entanto, para a maioria dos pacientes, a melhor resposta foi um PR. Deve notar-se que os pacientes que eram conhecidos como tendo progredido através de quimioterapia pré-operatório e, portanto, incapaz de prosseguir a cirurgia não foram incluídos neste estudo. Além disso, dada a baixa taxa de NY-ESO-1 expressão, estas análises foram underpowered para detectar uma diferença de sobrevivência.

A sobrevida após quimioterapia adjuvante

As respostas melhoradas para NAC em pacientes com NSCLC expressando pN2 NY-ESO-1 nos levou a investigar uma coorte de pós-operatório de pacientes com doença N2 oculto, metade dos quais receberam quimioterapia no cenário adjuvante. Dos 105 pacientes na coorte de pós-operatório, a utilização de quimioterapia adjuvante não pôde ser determinada em nove, deixando 96 pacientes para os quais a sobrevivência foi correlacionada com a expressão de CTA. A expressão de MAGE-A e /ou NY-ESO-1, foi associado com a sobrevivência mais pobre do que MAGE-negativos tumores negativos ou NY-ESO-1. expressão MAGE-C1 não foi associada a pior prognóstico. O tratamento com quimioterapia no entanto resultaram na sobrevivência significativamente melhorada, especialmente no NY-ESO-1 que expressam tumores (Figura 3). Na análise multivariada NY-ESO-1 expressão permaneceu um fator independente mau prognóstico (HR 2,61, 95% CI 1,28-5,33; p = 0,008 teste de Wald), enquanto que o tratamento com quimioterapia e expressão de NY-ESO-1 foi um preditor independente de melhora sobrevida (HR 0,267, IC 95% 0,073-0,980;. p = 0,046 Wald teste Tabela 2).

sobrevivência em uma coorte independente, utilizando dados de expressão de genes

procurou validar os nossos resultados usando dados de microarranjos publicados anteriormente a partir da quimioterapia adjuvante dataset BR.10 [23]. Esta coorte continha dados de microarrays Affymetrix para as abundâncias mRNA de 133 pacientes, dos quais 71 receberam quimioterapia adjuvante. Infelizmente, apesar de sondas de oligonucleótidos que representam MAGE-A1, MAGE-A4 e MAGE-C1 poderia ser mapeado para a matriz, NY-ESO-1 não estava presente após o mapeamento para modernos gene anotações. Expressão de MAGE-A1 e 4 antígenos foi associado à sobrevida inferior em pacientes randomizados para observação. No entanto MAGE-A1 e 4 pacientes positivos tratados com quimioterapia tinha melhorado a sobrevivência em comparação com MAGE-A1 e foram observados quatro pacientes negativos e as curvas de sobrevivência similares às observadas no nosso coorte pós-operatório de pacientes tratados de forma semelhante (Figura 4). No entanto, estas diferenças na sobrevivência não atingir o nível de significância estatística. É importante observar que, embora a sobrevivência no conjunto de dados BR.10 global mostrou diferenças estatisticamente significativas para os doentes tratados com quimioterapia adjuvante, neste subconjunto de 133 pacientes, a tendência para o aumento da sobrevida permaneceu, no entanto não foi significativa. Isto pode explicar porque nesta coorte de fraca potência, tendências semelhantes foram vistos aos observados em nossa coorte pós-operatório, embora não alcançou o nível de significância estatística.

Discussão

Estes dados proporcionar mais uma confirmação de que a expressão CTA em NSCLC está associada com mau prognóstico geral. Em particular NY-ESO-1, foi associado com resultados significativamente mais pobre em doentes não tratados com quimioterapia adjuvante quando em comparação com o NY-ESO-1 em pacientes que também negativos não foram tratados com quimioterapia adjuvante. Embora as tendências semelhantes foram observados para MAGE-A e MAGE-C1, NY-ESO-1 continuou a ser a mais forte preditor de resposta à quimioterapia neoadjuvante na configuração mas também para benefício da quimioterapia adjuvante. Estes resultados suportam NY-ESO-1 como um fator prognóstico útil, mas também um potencial fator preditivo para benefício significativo do adjuvante e quimioterapia neoadjuvante.

Apesar das respostas melhoradas para a quimioterapia neoadjuvante no ajuste foi surpreendente que nenhuma tradução de resposta em um benefício de sobrevivência foi observada em doentes com NY-ESO-1 + tumores. No entanto, deve ser enfatizado que estas análises foram underpowered para detectar uma diferença de sobrevivência. Estes resultados paralelo achados similares em pacientes tratados com quimioterapia neoadjuvante em câncer de mama. tumores de mama que foram negativas para receptor de estrogênio, receptor de progesterona e amplificação do gene HER2, também conhecido como cancros “triplo negativo” mama também expressou fortemente antigénios CT-X [28], [29] em comparação com tumores receptor-positivo. Além disso, triplos cancros da mama negativos foram mostrados para ser mais quimiossensíveis a antraciclina e platina quimioterapia baseada em [30], [31]. Curiosamente, no entanto, embora a resposta à quimioterapia foi significativamente melhorada em tumores triplo negativo, a sobrevivência não foi afetada nestes estudos, a não ser na minoria dos pacientes que atingiram uma resposta completa. Isto levou à hipótese de que o fenótipo mais pobre associado com expressão CTA e negatividade triplo resultou no aumento das taxas de recidiva, apesar das boas respostas iniciais [31]. Estes resultados podem explicar por que pacientes em nosso estudo cujos tumores expressaram NY-ESO-1 tinha melhorado significativamente respostas a quimioterapia neoadjuvante e ainda assim nenhum benefício de sobrevivência quando comparado com pacientes com NY-ESO-1 negativos tumores.

Uma ressalva para o nosso estudo é que o tecido investigado por nossos dois grupos eram diferentes, com a coorte pré-operatória consiste de tecido dos linfonodos e da coorte pós-operatória do tumor primário de pulmão. Havia diferenças claras em o número de amostras que eram positivas para os CTA, bem como para estas mutações entre coortes. No entanto, em pacientes submetidos a quimioterapia neoadjuvante, não é possível obter um grande porção de tecido primária e usando tecido de pós-quimioterapia pode também ser impreciso. Em nosso estudo também testou a amostra de tumor primário de pulmão depois de NAC para NY-ESO-1. Em amostras com tumor viável, NY-ESO-1 expressão não foi observada no tumor ressecado primário se o nó de linfa de pré-tratamento foi negativo; no entanto, em 13 casos, apesar de NY-ESO-1 + linfa tecido nodal, após quimioterapia NY-ESO-1 a expressão não foi detectada no tumor ressecado primário (dados não apresentados).

À medida que o papel funcional de CTA é pouco compreendida, é difícil definir um mecanismo pelo qual a sua expressão possa influenciar a quimiossensibilidade. Embora alguns dados existem apoiando

KRAS

mutações como um marcador de chemoresistance e

EGFR

mutações como um marcador de quimio-sensibilidade [8], os nossos dados não demonstram uma associação entre essas mutações e NY-ESO expressão -1. Certamente nossos resultados estão em contraste com estudos recentes que demonstram que em linhas celulares, outra CTAs incluindo acrosina de ligação de proteína (

ACRBP

) foram associados com

resistência

a taxano quimioterapia [16]. No entanto, ao contrário de

ACRBP

que é um não-X-CTA com uma função específica associada com o fuso mitótico [32], os antigénios CT-X avaliadas em seu estudo tem função bem definida até à data. Esta diferença provavelmente subjaz suas diferentes influências na quimio-sensibilidade. Outros estudos têm demonstrado que as proteínas MAGE formar complexos com Kap-1, um co-repressor conhecido de

TP53

MAGE e pode, assim, agir para evitar que as células de apoptose e promover a tumorigénese. No entanto, ligando estas vias para explicar a melhor resposta à quimioterapia no peito e agora mandados de cancro do pulmão investigação adicional.

Como CTAs são conhecidos por ser imunogênica, é talvez mais plausível que a melhor resposta e sobrevivência para os pacientes cujas tumores expressam NY-ESO-1 não foram o resultado do aumento da citotoxicidade, mas sim foram mediadas por mecanismos imunológicos. NY-ESO-1 é um potente estimulador de células T e tem sido utilizado como uma vacina de tumor numa variedade de tipos de tumores [21], [33] induzidas por quimioterapia lise das células tumorais podia permitir antigénios previamente ignorante a células T a ser processados ​​e apresentados através de antigénios das células com estimulação resultante de células T apresentando. Isto pode explicar, em parte, o aumento do down-estadiamento dos tumores no curto prazo, embora se poderia esperar uma resposta de células T a resultar em remissão mais duráveis. Prova disso é apoiada por estudos mais recentes com inibidores de checkpoint imunes, onde o impacto da ativação imune pode ser adiada de tal forma que a progressão da doença inicial pode ser observado seguido por remissões mais duráveis ​​[34]. Curiosamente, NY-ESO-1 respostas de células T específicas têm sido relatados para aumentar em frequência e funcionalidade durante o tratamento anti-CTLA-4, um inibidor do ponto de verificação imunológica, com remissões da doença duráveis ​​resultantes, por conseguinte, destacando a importância deste antigénio [35]. Estudos anteriores não têm mostrado uma correlação entre o desenvolvimento de anticorpos contra antigénios tumorais e remissões espontâneas. No entanto, no contexto da quimioterapia, o reconhecimento resposta imunológica e, além de quimioterapia induzida por depleção de células T reguladoras poderia explicar as taxas de resposta melhoradas que temos observado e a vantagem de sobrevivência a longo prazo no cenário adjuvante. Uma alternativa a estas hipóteses é que a vantagem de sobrevivência visto no contexto de adjuvante podem não representar aprimorados respostas tumorais pobres, mas a sobrevivência na ausência de quimioterapia. Mais estudos são necessários para melhor explicar os nossos resultados.

Ensaios clínicos recentes que investigam inibidores de checkpoint imunes em NSCLC têm demonstrado a promessa significativa especialmente em carcinomas de células escamosas [36], [37]. Um estudo de investigação de um anticorpo monoclonal dirigido contra CTLA-4, uma molécula que inibe a activação de células T, demonstrou um benefício global em prolongar a sobrevivência livre de progressão imuno-relacionada. Embora os tumores de todos os tipos histológicos diferentes apareceu para beneficiar, uma tendência para a melhoria benefício foi observado em pacientes com histologia de células escamosas, um subgrupo que também observamos a CTAs altamente expresso [36]. Estes dados resultaram no lançamento de um estudo randomizado de fase III comparando a adição de ipilimumab à quimioterapia em pacientes com histologia de células escamosas. Da mesma forma um inibidor da morte programada-1 Eficácia (PD-1), uma molécula também envolvidos na inibição de células T, foi recentemente demonstrada num estudo de Fase I [37]. Significativamente mais respostas foram observadas em pacientes com carcinoma de células escamosas, quando comparado com os tipos de tumores não-escamosas. Apesar de estarmos atualmente incapaz de demonstrar que CTAs desempenhar um papel nestes estudos iniciais, a forte associação destas moléculas imunogénicas com a mesma histologia para beneficiar a mandados imunoativação uma investigação mais aprofundada.

Estes dados demonstram que a expressão do CTA NY-ESO-1 está associada com o aumento da downstaging com quimioterapia dada na configuração neoadjuvante e benefícios significativos da sobrevivência com quimioterapia dada no contexto de adjuvante. Os nossos dados suportam, por conseguinte, NY-ESO-1 como tanto uma (pobre) marcador de prognóstico e também um marcador preditivo. Como o ensaio é simples e fácil de interpretar, NY-ESO-1 poderia facilmente ser estudados prospectivamente como um marcador. Talvez mais importante, a imunogenicidade desta molécula pode ser uma razão para futuros estudos usando NY-ESO-1 como um alvo terapêutico, tratamento, assim, melhor que personaliza para com aqueles com maior probabilidade de obter benefícios.

Reconhecimentos

Os autores agradecem ao Dr. Syed Haider para suporte técnico.