Abstract
Fundo
O papilomavírus humano (HPV) é um fator causal para carcinoma de células escamosas das amígdalas (TSCC) e pacientes com HPV positivo (HPV
+) TSCC ter um melhor resultado clínico do que aqueles com negativo HPV (HPV
-) TSCC. No entanto, uma vez que nem todos os pacientes com HPV
+ TSCC responder ao tratamento, biomarcadores adicionais são necessários, juntamente com status de HPV para prever melhor resposta à terapia e para individualizar o tratamento. Para este fim, examinamos se o número de tumor infiltrando citotóxicos e células T reguladoras em TSCC correlacionados com o status do HPV e resultado clínico.
Métodos
formalina parafina e fixado incorporados TSCC, previamente analisadas para DNA de HPV, derivadas a partir de 83 pacientes, foram divididos em quatro grupos, dependendo do estado do HPV do tumor e o resultado clínico. Os tumores foram coradas por imuno-histoquímica e avaliadas para o número de infiltrar citotóxico (CD8
+) e regulamentar (Foxp3
+) células-T.
Resultados
A alta CD8
+ infiltração de células T foi significativamente correlacionada positivamente com uma boa evolução clínica em ambos os pacientes com HPV
+ e HPV
– pacientes TSCC. Da mesma forma, um alto CD8
+ /Foxp3
+ TIL relação foi correlacionada com a sobrevida livre de doença de 3 anos. Além disso, o HPV
+ TSCC tinha em comparação com HPV
-TSCC, os números mais altos de infiltração + células-T
CD8
+ e Foxp3.
Conclusões
em conclusão, uma correlação positiva entre um elevado número de infiltração CD8
+ e evolução clínica indica que CD8
+ podem contribuir para um resultado clínico benéfico em pacientes TSCC, e pode potencialmente servir como um biomarcador. Da mesma forma, o CD8
+ /Foxp3
+ índice de célula pode, potencialmente, ser usado para o mesmo fim
Citation:. Näsman A, Romanitan M, Nordfors C, Grün N, Johansson H, L Hammarstedt , et ai. (2012) infiltrado no tumor CD8
+ e Foxp3
+ Linfócitos Correlato ao desfecho clínico e status Papilomavírus Humano (HPV) em Câncer tonsilar. PLoS ONE 7 (6): e38711. doi: 10.1371 /journal.pone.0038711
editor: Joseph Califano, John Hopkins Medical School, Estados Unidos da América
Recebido: 07 de fevereiro de 2012; Aceito: 11 de maio de 2012; Publicação: 12 de junho de 2012
Direitos de autor: © 2012 Näsman et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este trabalho foi apoiada pela Sociedade sueca de Câncer (TD, 100.258), o Conselho Sueco de Investigação médica (TD, TR, K2011-56X-15282-07-6), o Cancer Society Estocolmo (TD, 101.081), a Henning e Ida Perssons Foundation (TD), o Instituto Karolinska (TD, TR) e da Câmara Municipal de Estocolmo (TD, TR, SEM, 2.010.067). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
Conflito de interesses:. Co-autor Torbjörn Ramqvist é membro do Conselho Editorial PLoS ONE. Isto não altera a adesão dos autores para todos os PLoS ONE políticas em dados e materiais de compartilhamento.
Introdução
Estudos recentes da Europa e os EUA têm relatado um aumento na incidência de escamosas da orofaringe carcinoma de células (CEB), particularmente para carcinoma de células escamosas das amígdalas (TSCC). Este aumento tem sido atribuída a um aumento da prevalência da infecção pelo vírus do papiloma humano (HPV) [1], [2], [3], [4]. Assim, um aumento de 7 vezes na HPV-positivos (HPV
+) TSCC, em paralelo a um declínio na HPV-negativo (HPV
-) TSCC foi demonstrada para pacientes em Estocolmo, na Suécia, os três últimos décadas [3] e uma tendência similar foi demonstrada em os EUA [2]. É importante salientar igualmente, o HPV tem sido mostrado para ser um fator de bom prognóstico para pacientes com CEB incluindo TSCC [5], [6], [7], [8]. No entanto, nem todos os pacientes com HPV
+ TSCC saem bem e, portanto, apesar de HPV por si só é um importante marcador de prognóstico, os biomarcadores adicionais são necessários TSCC para melhor prever a resposta ao tratamento antes do tratamento individualizado pode ser implementada na prática clínica.
tem sido sugerido que o HPV
+ e HPV
-TSCC são duas entidades doença tumor diferentes, com diferentes tumor e características do paciente. Considerando os tumores HPV associados, incluindo HPV
+ TSCC são movidos por oncogenes virais, por exemplo, E6 e E7, e têm menos mutações celulares, HPV
-TSCC desenvolver pelo acúmulo de alterações genéticas causadas principalmente por fatores ambientais, tais como o tabagismo [9]. Como antigénios estranhos, E6 e E7 podem actuar como alvos potenciais de uma resposta imune contra tumores induzidos por HPV e
In vitro
estudos têm mostrado que as células T isoladas a partir de HPV
+ cancro cervical podem reconhecer e matar E6 e E7 células de tumor que expressam [10]. Além disso, as células T específicas do tumor são detectadas em pacientes com cancro mais cervical, embora em níveis insuficientes baixo e [11], [12] e a presença de linfócitos infiltrados no tumor (TIL) tem sido associada a um melhor prognóstico [13], [ ,,,0],14]. Isto também foi observado por outros tipos de tumores com qualquer associação virai conhecido [15], [16]. No entanto, TIL pode agir como uma espada de dois gumes. Enquanto uma infiltração acentuada de CD8
linfócitos + tem sido associada a um prognóstico favorável em muitas malignidades, o papel de infiltrar células T reguladoras (Tregs) (muitas vezes definida como Foxp3
+ linfócitos) é muitas vezes o contrário [17] . Tregs pode promover a progressão do tumor, e o aumento dos níveis de Tregs têm sido observados em pacientes com uma variedade de tumores e ligado a um prognóstico pior [18], [19], apesar de haver excepções, onde Treg infiltração tem sido associada a um prognóstico favorável [ ,,,0],20], [21]. No entanto, o papel de se infiltrar CD8
+ e Foxp3
+ linfócitos tem, a nosso conhecimento, não foi investigada em TSCC em correlação com o estado resultado e HPV paciente.
o objetivo deste estudo foi examinar a presença de tumor infiltrando CD8
+ e Foxp3
+ células T em TSCC em relação ao desfecho clínico e do estado HPV tumor, e para estabelecer se estas TIL pode, potencialmente, ser usado em a clínica como biomarcadores, quer isoladamente, ou em conjunto com o estatuto de HPV do tumor para prever o resultado clínico.
TSCC com (a) de baixo e (B) de alta CD8
+ infiltração e (C) e baixo (D) de alta Foxp3
+ infiltração.
Declaração de Materiais e Métodos
Ética
o estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Karolinska Institutet, Estocolmo, Suécia, de acordo com as permissões éticas 2005 /431-31 /4, 2005 /1330-32 e 2009 /1278-31 /4. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os participantes do estudo.
A) número de CD8
+ TIL, B) Número de Foxp3
+ TIL e C) a CD8
+ /Foxp3
+ índice de célula. “Good” e “pobres” denota o resultado clínico. Além dos quatro grupos TSCC definidos na secção de Métodos, diferentes combinações de grupos também foram comparados. Assim, “HPV
+ bom” corresponde ao grupo A; “HPV
+ pobres” para o grupo B; “HPV
– bom” para o grupo C; “HPV
– pobres” para o grupo D; HPV
+ para os grupos A + B, HPV
– a grupos C + D; “Bom” para os grupos A + C; e “pobres” para os grupos B + D. A fim de visualizar melhor os detalhes da parte inferior da Figura 1C a parte superior do diagrama incluindo o suiça superior (numa proporção de 80) foi omitida.
A) de HPV
+ TSCC e B) HPV
-TSCC pacientes estratificados pelo número de CD8
+ TIL. Alta e baixa denota CD8
+ TIL contar acima e abaixo dos valores médios de 33 para HPV
+ TSCC e 4,4 HPV
-TSCC. C) HPV
+ TSCC e D) HPV
-TSCC pacientes estratificados por a proporção de CD8
+ /Foxp3
+ índice de célula. Alta e baixa denota CD8
+ /Foxp3
+ índice de célula acima e abaixo 1.
Pacientes e material
A coorte consistiu de todos os pacientes, diagnosticados 2000- 2006, com TSCC (CID-10 C09.0-9), que foram tratados com a intenção de curar no Hospital Universitário Karolinska, de Estocolmo, Suécia, e tinha disponíveis pré-tratamento embebidos em parafina biópsias de tumores. O tratamento consistiu em radioterapia acelerada (RT) (1,1 + 2,0 Gy /dia durante 4,5 semanas, a dose total: 68 Gy) ou RT convencional (2,0 Gy /dia, para 6,5-7 semanas, a dose total: 68 Gy) ou, em quatro casos, a quimioterapia de indução seguida por concomitante RT (CRT). Após o tratamento, os pacientes foram acompanhados por exame clínico a cada 3 meses durante os primeiros 2 anos e cada 6 meses o 3º ano.
Os dados sobre a presença de tipos de HPV de alto risco (presença de DNA do HPV por PCR) e p16
estatuto INK4a (por imuno-histoquímica) foram obtidos a partir de estudos anteriores [3], [7], [22] e os pacientes foram divididos em 4 grupos (AD) na linha de base (para mais detalhes ver Tabelas 1 e 2); (A) uma amostra aleatória (n = 31) de todos os pacientes (n = 109) com HPV
+, p16
INK4a positivo ( 75% p16
INK4a células tumorais positivas) (p16
+) tumores com um bom resultado clínico (definida como ausência de recidiva e vivas 3 anos após o diagnóstico); (B) todos os pacientes (n = 21) com HPV
+, p16
+ tumores com prognóstico clínico (definida como uma recaída na doença e /ou mortos da doença no prazo de 3 anos após o diagnóstico); (C) todos os pacientes (n = 11) com HPV
-, p16
negativo INK4a (p16
-) tumores com um bom resultado clínico; (D) todos os pacientes (n = 20) com HPV
-, p16
– tumores com prognóstico clínico (Tabela 1). Uma amostra de 31 dos 109 tumores originais do grupo A foi escolhida para se obter um número mais semelhante de pacientes de cada grupo para estudos de TIL, uma vez que este grupo dominado com 68% do número total de tumores. Pacientes com HPV
+, p16
– (n = 17) e HPV
-, p16
+ tumores (n = 4) foram excluídos da análise posterior para obter grupos homogéneos e de incluir apenas HPV
+ TSCC expressando HPV E6 /E7, desde p16
expressão INK4a em HPV
+ tumores é considerado uma indicação de expressão E7 [23]. Também foram excluídos os pacientes que morrem de outras causas que TSCC. Todos HPV
+ TSCC foram HPV16
+ com exceção de um tumor com HPV33 e um com HPV56.
Imunohistoquímica
Um método peroxidase estreptavidina-biotina padrão foi empregada em 4 mm fixadas com formalina, embebido em parafina, secções utilizando os anticorpos monoclonais de murganho anti-CD8 (diluição 1:40; clone 4B11; Novocastra Laboratories) e anti-Foxp3 (diluição 1:100, clone 236A /E7; eBioscience). Todas as secções foram depois incubadas com o anticorpo secundário anti-ratinho biotinilado (1:200, Vector Laboratories, Burlingame, CA, EUA), seguido por incubação com avidina-biotina-PO usando o kit VECTASTATIN® Elite® ABC (Vector Laboratories) e desenvolvido em DAB.
O CD8
+ e Foxp3
+ infiltração de linfócitos tumor foi avaliada por dois pesquisadores, cego para os resultados clínicos, cada um contando as células em 10 campos de alta potência selecionados aleatoriamente ( 40 vezes) por amostra. O valor médio foi relatado para cada tumor. A proporção de tumor infiltrando CD8
células
+ e Foxp3 + foi calculado para cada tumor individual, a média desses índices foi então calculada por subgrupo.
Análise Estatística
Testes para comparações de dados contínuos foram realizadas utilizando modelos de regressão linear. Os resultados foram apresentados como diferenças médias ou odds-ratios em conjunto com intervalo de confiança de 95%. As comparações de paciente e do tumor características entre os diferentes grupos nas Tabelas 1 e 2 foram realizadas utilizando o teste exato de Fisher (bicaudal). Todas estas análises foram realizadas no STATA11 (StataCorp). A p-value≤0.05 foi considerado significativo.
livre de doença sobrevivência (DFS) foi definido como o tempo a partir da data do diagnóstico até a data da última ocasião conhecido que o paciente estava livre da doença ou a data de recorrência da doença (local, regional ou recorrência à distância). Morte sem recorrência documentada foi censurado na data da morte. As curvas de Kaplan-Meier foram usados para apresentar dados de sobrevivência eo teste de log-rank foi utilizado para comparar as curvas de sobrevida. No multivariada analisar, um modelo de riscos proporcionais de Cox foi usado para ajustar para co-variáveis. foram relatados valores de p frente e verso. Estas análises foram realizadas no SPSS (IBM SPSS Statistics, v20).
Resultados
clínicas e patológicas Parâmetros de pacientes e tumores
Detalhes de todos os pacientes e seus tumores são mostrados nas Tabelas 1 e 2. Como descrito acima, os pacientes foram divididos em 4 grupos de estudo dependendo do estado do HPV no tumor e o resultado clínico no prazo de 3 anos. A única diferença significativa entre os diferentes grupos de estudo foi que os pacientes com HPV
-tumors e boa evolução clínica teve um estágio clínico mais baixos do que os pacientes com prognóstico clínico (p = 0,005).
Não houve diferenças em relação a qualquer um dos parâmetros clínicos estudados entre a amostra de 31 pacientes ea população total de 109 pacientes com HPV
+ TSCC e boa evolução clínica (Tabela 2).
o Número de CD8
+ TIL se correlaciona com status HPV e o resultado clínico para pacientes com TSCC
pacientes TSCC com uma boa evolução clínica tinha um número significativamente maior de CD8
+ TIL em seus tumores (Figura 1), do que aqueles com mau resultado clínico, independente do estado HPV tumor (média de 50,4 e 12,8 respectivamente, p . 0.001), (Tabela 3 e Figura 2A). Além disso, quando estratificar o estatuto de HPV, HPV
+ TSCC, de pacientes com boa evolução clínica, tinha mais CD8
TIL + do que os de pacientes com prognóstico clínico (média de 61,4 e 21,0 resp., P = 0,002 ), (Tabela 3). O número médio de CD8
+ TIL também foi significativamente maior nos HPV
-TSCC de pacientes com boa evolução clínica, quando comparado com HPV
-TSCC de pacientes com prognóstico clínico (média de 19,4 e 4,7 respectivamente. , p = 0,001).
Além disso, o HPV
+ TSCC tinha um número significativamente maior média de tumor infiltrando CD8
linfócitos + em comparação com HPV
-TSCC (média de 45,6 e 9,9 respectivamente. , p 0,001) (Figura 2A). Esta diferença ainda era significativa quando ajustada para o prognóstico (p = 0,001).
Para estudar a correlação entre CD8
+ TIL e DFS em HPV
+ pacientes TSCC, uma análise de Kaplan-Meier foi realizada . HPV
+ e HPV
-TSCC pacientes foram dicotomizadas com base no valor médio (33 e 4,4 respectivamente) de CD8
+ TIL. Como demonstrado em pacientes Figura 3A com HPV
+ tumores e um elevado número de CD8
+ TIL tiveram uma sobrevida acumulada de 84% em comparação com 55% para pacientes com baixo número de CD8
+ (p = 0,02 ). Similar tendências de sobrevivência cumulativos (64% e 36%, respecitvely) também foram observados por HPV
– pacientes, embora estas diferenças não foram estatisticamente significativas (Figura 3B). Notavelmente, para pacientes com HPV
+ TSCC as curvas de Kaplan-Meier foram calculadas com amostra de TSSC pertencente ao grupo A e todos TSCC do grupo B (Figura 3A).
O Número de Foxp3
+ TIL se correlaciona com status HPV em TSCC
Um número significativamente maior de Foxp3
+ TIL (Figura 1) foram observados em HPV
+ TSCC quando comparada com a de HPV
-TSCC (média de 33,2 e 14,7, respectivamente, p . 0.001) (Figura 2B). Ao ajustar para o prognóstico, esta diferença ainda era significativa (p = 0,001). No entanto, não houve diferenças nos níveis de Foxp3
+ TIL foram observados em tumores de pacientes com um bom ou mau resultado clínico (média de 27,9 e 24,6, respectivamente.) (Tabela 3).
A alta CD8
+ /Foxp3
+ rácio está ligada a uma boa evolução clínica em pacientes com TSCC
Como uma medida do número relativo de citotóxicos e células T reguladoras nos tumores, a proporção de tumor infiltrando CD8
+ e Foxp3
+ células foi calculado para cada tumor. Um alto CD8
+ /Foxp3
+ índice de célula é uma indicação de que as células T reguladoras são uma minoria e, assim, menos provável a ofuscar a função das células T citotóxicas. Para pacientes com TSCC um alto CD8
+ /Foxp3
+ rácio foi positivamente correlacionada a uma boa evolução clínica quando ajustado para o prognóstico (p = 0,04) (Tabela 3). No entanto, a diferença em relação ao prognóstico em CD8
+ /Foxp3
+ rácio TIL não foi significativa quando os pacientes com HPV
+ TSCC ou HPV
-TSCC foram analisados separadamente, embora a tendência foi semelhante ao observada em doentes TSCC em geral.
para estudar a correlação entre uma alta /baixa CD8
+ /Foxp3
+ relação de TIL e DFS para TSCC, foi realizada uma análise de Kaplan-Meier. HPV
– e HPV
+ pacientes TSCC foram dicotomizadas com base em uma CD8
+ /Foxp3
rácio + TIL acima ou abaixo de 1. Como demonstrado em pacientes Figura 3D com HPV
-TSCC e um alto CD8
+ /Foxp3
+ rácio TIL tiveram uma sobrevida acumulada de 73%, em comparação com 28% para pacientes com um baixo CD8
+ /Foxp3
+ rácio TIL (p = 0,03) . Da mesma forma, HPV
+ pacientes TSCC com alto CD8
+ /Foxp3
rácio + TIL tiveram uma sobrevida cumulativa mais elevada (82%) do que aqueles com um baixo CD8
+ /Foxp3
+ rácio TIL (54%, p = 0,04) (Figura 3C).
Correlação entre parâmetros clínicos, CD8
+ e Foxp3
células + e 3 anos DFS em pacientes com TSCC
Quando CD8
+ e Foxp3
+ TIL valores para todas as TSCC, estratificada para o status de HPV, foram analisados por idade, sexo ou estágio clínico, não foi encontrada correlação (dados não mostrados).
As razões de risco (HR) foram calculados separadamente para HPV
+ e HPV
-TSCC, por meio de testes, tanto uni e multivariada (Tabela 4). Para HPV
+ TSCC a taxa de risco para um número elevado de CD8
+ células foi de 0,27 (p = 0,029), enquanto que para HPV
-TSCC a taxa de risco para uma alta CD8
+ /Foxp3
+ relação era de 0,27 (p = 0,048). Para determinar se CD8
células + e CD8
+ /Foxp3
+ rácio foram fatores prognósticos independentes, uma análise multivariada de Cox foi realizada com o estágio clínico, idade e sexo como co-variáveis (Tabela 4). Para HPV
+ TSCC, tanto no número de CD8
+ células e idade foram independentemente significativamente correlacionada com 3 anos DFS (p = 0,034 e p = 0,009, resp.). Para HPV
-TSCC tanto CD8
+ /Foxp3
+ rácio e estágio foi significativamente independentemente correlacionada a 3 anos DFS (p = 0,023 e p = 0,039, resp.). Da mesma forma, um alto CD8
+ /Foxp3
+ relação correlacionada com um 3-year DFS tanto na análise uni e multivariada também para HPV
+ TSCC (HR 0,33, p = 0,048 e HR 0,23, p = 0,015, respectivamente) (dados não mostrados).
Discussão
neste estudo, verificou-se uma correlação significativa entre a CD8
+ infiltração alta de células T e o resultado clínico para pacientes com HPV
+ e HPV
-TSCC, bem como entre um alto CD8
+ /Foxp3
+ TIL proporção e sobrevida livre de doença para os pacientes com HPV
+ e HPV
-TSCC. Além disso, nós demonstramos uma correlação tanto entre tumor infiltrando CD8
+ e Foxp3
+ células-T para o status de HPV em TSCC.
O facto de CD8
+ infiltração foi mais pronunciada e influenciou positivamente o prognóstico neste estudo para HPV
+ TSCC, pode ser uma razão importante por que a maioria dos HPV
+ TSCC ter um bom resultado clínico em comparação com HPV
-TSCC [6], [7 ]. Esta seria, de acordo com estudos experimentais mostrando a importância do sistema imunológico para combater o HPV
+ carcinoma de cabeça e pescoço de células escamosas (CECP) [24]. O resultado também é em concordância com diversos estudos sobre os tumores a partir de outros sítios e.g. para câncer de cólon e cervical [13], [14], [15], [18]. Notavelmente, no cancro do colo do útero, onde a grande maioria dos tumores são HPV
+, tanto um elevado número de células T CD8
+ TIL e uma alta taxa de CD8
+ /de células T reguladoras foi correlacionada com a ausência de metástase ganglionar [14]. Um resultado semelhante também foi publicada por HNSCC, onde Ogino e colegas demonstram uma correlação positiva entre um alto CD8 infiltração
+ de células T e causar sobrevida específica [25]. Além disso, a presença de células T específicas de HPV16 em HPV
+ HNSCC foi recentemente demonstrado, embora a correlação prognóstico não foi investigada [26]. A forte correlação positiva entre CD8
+ TIL e boa evolução clínica de pacientes com TSCC indica que a avaliação da CD8
+ TIL poderia ser usado como um biomarcador de prognóstico adicional em combinação com status de HPV tumor.
também demonstramos que um alto CD8
+ /Foxp3
+ proporção de células T significativamente correlacionada com a sobrevida livre de doença em ambos os pacientes com HPV
+ e HPV
-TSCC. publicações anteriores ligados Foxp3
TIL + a um pior prognóstico em, por exemplo, ovário e câncer de mama [16], [18]. Além disso, uma elevada percentagem de Tregs foi correlacionada com uma baixa sobrevida de 5 anos em câncer cervical [27]. No entanto, existem também casos em que Foxp3
+ TIL têm sido associados a um prognóstico favorável, como por exemplo no câncer de cólon, linfoma de Hodgkin e HNSCC [20], [21], [28]. O resultado obtido no presente estudo indica que a infiltração de células T também são de grande importância para o resultado clínico em pacientes com HPV
-TSCC, embora possivelmente em menor grau. rácio + de células T a avaliação da CD8
+ /Foxp3
poderia, portanto, também ser usado como um marcador de prognóstico clínico para pacientes com HPV
+ ou HPV
-TSCC.
é importante ressaltar que a estimativa CD8
+ e Foxp3
+ TIL por IHC pode ser realizada em unidades de patologia em hospitais. O estatuto de HPV de TSCC já é avaliada rotineiramente em algumas clínicas, e.g. no Hospital Universitário Karolinska, em Estocolmo, e se usado em conjunto com a avaliação de CD8
+ e Foxp3
+ TIL em unidades de patologia, pode ser obtida uma melhor previsão da evolução clínica. No entanto, o tamanho do campo avaliado e valores de corte têm de ser definidas com precisão.
Além disso, observou-se que o HPV
+ TSCC teve uma infiltração significativamente maior de ambos CD8
+ e Foxp3
+ células do HPV
-TSCC. Isto não era inesperado, uma vez que o HPV
+ TSCC expressa antígenos virais estrangeiros. Na verdade, os dados indicam que, embora a defesa imunológica não foi capaz de impedir o desenvolvimento do HPV
+ TSCC, ainda há uma diferença imunológica entre HPV
+ e HPV
-TSCC.
é importante notar que a presença de TIL no TSCC não é suficiente para a rejeição do tumor. No entanto, foi demonstrado num modelo de ratinho que uma defesa imune intacto é importante para uma recarga completa do tumor, após tratamento de radiação [24]. Além disso, é possível que a irradiação pode activar a resposta imunológica tanto contra restantes células viáveis de tumor original e contra linfonodo metástases.
Recentemente, muitos biomarcadores tumorais têm sido exploradas no que diz respeito ao prognóstico para pacientes com carcinoma epidermóide [ ,,,0],29], [30], [31], [32]. No entanto, na maioria desses estudos o status de HPV dos tumores não foi tida em conta e muitas vezes os tumores de diferentes subsites CECP foram agrupadas quando biomarcadores foram correlacionados com o prognóstico. Os resultados do presente estudo demonstram a importância de tumores que separam dependendo do estado HPV. Além disso, em estudos deste tipo, os tumores deverão igualmente ser estratificada dependendo subsítio do tumor, uma vez que, por exemplo, a sobrevida global para pacientes com CECP difere dependendo tanto de estatuto de HPV e subsite tumor.
Há algumas limitações no presente estudo. Em primeiro lugar, é um estudo retrospectivo com todos os pacientes diagnosticados com TSCC em Estocolmo durante 2000-2006 e tratados com intenção de curar. No entanto, é importante notar que o tratamento durante este período foi padronizado com convencional /RT acelerada. Além disso, publicações anteriores, que analisam a evolução clínica dos pacientes incluídos no presente estudo, não demonstraram diferenças no resultado clínico em pacientes com câncer de orofaringe dependendo do tratamento [33], [34].
Em segundo lugar , a maioria TSCC hoje são HPV
+ com uma evolução clínica favorável para os pacientes. Assim, este grupo foi reduzida no presente estudo de randomização. Por outro lado, não foram capazes de demonstrar qualquer diferença significativa entre a amostra do estudo eo material total neste grupo. Outra limitação é o reduzido número de pacientes do HPV
– grupos, embora todos os pacientes foram incluídos com esse recurso. Para melhor estudar o HPV
população -TSCC, outros centros médicos devem ser incluídos.
Finalmente, nós não avaliou se o tumor infiltrando CD8
+ e Foxp3
+ células são direcionados contra tumor específico associado antígenos ou ensaiado para CD8 funcional
+ usando por exemplo, granzima B. Além disso, desde Foxp3, embora em níveis baixos, podem ser transitoriamente induzida em CD4
+ e CD8
+ células-T após estimulação, todos Foxp3
+ TIL pode não ser Tregs [35]. No entanto, para o propósito deste estudo, ou seja, encontrar marcadores clinicamente relevantes e facilmente identificáveis, isso não era de importância, apesar de que seria de interesse para abordar estas questões em outros estudos.
Em conclusão, tumor infiltrando CD8
+ e Foxp3
+ células em TSCC exibir perfis diferentes dependendo do estado HPV tumor e resultado clínico. Assim, combinando a presença de CD8
+ células-T e /ou CD8
+ /Foxp3
+ índice de célula com estatuto de HPV, pode ser de aditivo valor prognóstico e para um melhor tratamento individualização paciente.