PLOS ONE: O desempenho de um escore de risco genético Multilocus adipocina Caminho-Base para Prostate Cancer Risk Prediction

Abstract

Alguns biomarcadores estão disponíveis para prever o risco de câncer de próstata. polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) tendem a ter efeitos individuais fracos, mas, em combinação, eles têm valor preditivo mais forte. vias adipocina têm sido implicados na patogénese. Usamos uma abordagem via candidato para investigar 29 SNPs funcionais em genes-chave de vias adipocitoquinas relevantes em uma amostra de 1006 homens elegíveis para a biópsia da próstata. Foi utilizada a regressão logística multivariada passo a passo e bootstrapping para desenvolver um escore de risco genético multilocus pesando cada SNP risco empiricamente com base na sua associação com a doença. Sete polimorfismos funcionais comuns foram associados com câncer de próstata de alto grau em geral e (Gleason≥7), enquanto três variantes foram associados com câncer de próstata metastático alta de risco (ng PSA≥20 /mL e /ou Gleason≥8). A adição de variantes genéticas para idade e PSA melhorou a precisão da previsão para o câncer de próstata de alto grau em geral e, usando a área sob as curvas características do receptor-operacionais (P 0,02), a melhoria reclassificação líquido (P 0,001) e integrada melhora a discriminação (P 0,001) medidas. Estes resultados sugerem que os polimorfismos funcionais em vias de adipocinas podem agir individualmente e cumulativamente para afetar o risco e gravidade do câncer de próstata, apoiando a influência das vias adipocitoquinas na patogênese do câncer de próstata. O uso de tais adipocina multilocus escore de risco genético pode melhorar o valor preditivo de PSA e idade na estimativa do risco absoluto, que apoia a futura avaliação do seu significado clínico

Citation:. Ribeiro RJT, Monteiro CPD, Azevedo ASM, Cunha VFM , Ramanakumar AV, Fraga AM, et al. (2012) Desempenho de um escore de risco genético Multilocus adipocina Caminho-Base para predição de risco do cancro da próstata. PLoS ONE 7 (6): e39236. doi: 10.1371 /journal.pone.0039236

Autor: Michael Scheurer, Baylor College of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 15 de fevereiro de 2012; Aceito: 17 de maio de 2012; Publicado: 29 Junho 2012 |

Direitos de autor: © 2012 Ribeiro et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada pela Fundação Português para a Ciência e Tecnologia (PTDC /SAL-FCF /71552/2006); o Centro de Investigação em Meio Ambiente, Genética e Oncobiologia da Universidade de Coimbra (CIMAGO 07/09); a Liga Português contra o cancro – Centro Norte; e por uma concessão educacional irrestrita para a pesquisa básica em Oncologia Molecular da Novartis Oncology Portugal. RR é o destinatário de uma bolsa de doutoramento de Programa Operacional Potencial Humano /Fundo Social Europeu (POPH /FSE, SFRH /BD /30021/2006) e de uma tecnologia International Cancer Transferir Fellowship da União de Controle do Câncer Internacional (UICC-ICRETT, ICR /10/079/2010). AVR foi apoiado por fundos da Sociedade de Pesquisa do Câncer para a Divisão de Cancer Epidemiology na Universidade McGill. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. Os autores leram a política da revista e tem as seguintes conflitos: Co-autor Rui Medeiros é um membro PLoS ONE Editorial Board. Os autores receberam financiamento da Novartis Oncology Portugal. Isto não altera a adesão dos autores para todos os PLoS ONE políticas de dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

O câncer de próstata é uma doença complexa e imprevisível, com o risco de ser afetado por avanço da idade, etnia e história familiar. Embora as causas do câncer de próstata ainda não são totalmente compreendidos, variação genética influencia o risco de doença [1]. O câncer de próstata é geralmente acompanhada por um aumento na concentração de PSA no soro, que tem sido usado por décadas como um biomarcador sensível, mas pouco específica, e um preditor controversa de mortalidade por câncer de próstata [2], [3]. Muitas biópsias prostáticas são desnecessárias [4], o que reforça a necessidade de melhores modelos de previsão com maior especificidade para ajudar os clínicos decidir se deve ou não recomendar a biópsia. Além disso, esta é especialmente relevante em homens com valores de PSA ligeiramente elevados (3-10 ng /ml), mas onde o risco de ser diagnosticado com câncer de próstata é apenas cerca de 20-25% [5]. Após o diagnóstico, alguns tipos de câncer são indolentes e não causam problemas clínicos, enquanto outros progressos e pode ser fatal [6]. Portanto, é importante para pesquisar biomarcadores do resultado clínico agressivo. marcadores genéticos fornecem bons candidatos para esse papel.

polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) identificados como loci associados com câncer de próstata em estudos de associação do genoma (GWAS) são comuns, mas conferir apenas pequenos aumentos no risco ea mecanismos subjacentes à sua associação com o risco de câncer de próstata permanecem desconhecidos [7], [8]. Recentemente, SNPs seleccionados de GWAS foram analisados ​​e convertidos em um escore de risco genético, que foi mostrado para reduzir o número de biópsias apesar de não discriminar casos agressivos [9].

A associação entre massa corporal e risco de cancro da próstata é suportado por meta-análises que sugerem maior risco de câncer de próstata agressivo em obesos [10], e por estudos que utilizam métodos para estimar a adiposidade abdominal [11]. Trabalhos recentes tem-se centrado no papel da adipocitoquinas e moléculas relacionadas com a obesidade na etiologia do cancro da próstata [12], [13]. As variantes em genes que codificam componentes de estas vias foram avaliadas para o risco de cancro da próstata e candidatos promissores foram identificados [14], [15], [16], [17]. Estes código de genes candidatos para moléculas encontrado para ser super ou sub-expressos em obesidade [18], [19], [20] e estão envolvidos em vários mecanismos biológicos que modulam a proliferação do tumor, apoptose, angiogênese, motilidade, a migração e imunidade [12], [21], isto é, características que, em última análise influenciam o comportamento do tumor. Assim, polimorfismos comuns em vias de adipocinas são candidatos plausíveis que podem ajudar a prever a suscetibilidade ao câncer de próstata. No entanto, poucos estudos examinaram o risco de câncer de próstata no contexto de SNPs multi-loci em diferentes vias de adipocinas. Neste relatório, nós testamos a hipótese de que SNPs em genes candidatos envolvidos nas vias de adipocinas podem contribuir para a susceptibilidade ea agressividade do câncer de próstata em uma população de homens que se refere à vigilância de diagnóstico. Também avaliamos a utilidade clínica de um escore adipocina risco genético para aumentar o valor preditivo da idade e do PSA para prever os indivíduos de alto risco para triagem e manejo terapêutico.

Resultados

Um total de 449 histologicamente confirmado cancro da próstata e 557 doentes com cancro da próstata não foram incluídos nas análises. pacientes com câncer de próstata eram mais velhos (P 0,0001) e apresentado com níveis de PSA e um rácio inferior livre /PSA total significativamente maior em circulação (P 0,0001 e P 0,0001, respectivamente) (Tabela 1)

Foram avaliadas as associações entre cada SNP individuais na susceptibilidade câncer de próstata (Tabela S2). Nos modelos de efeitos dominantes (referente: wild-type homozigotos) houve diminuição significativa no risco de

LEPR

Gln223Arg (ORa = 0,6, IC 95%: 0,5-0,8, ORa = 0,6, IC 95%: 0,5 CI -0.8 e ORa = 0,5, 95%: 0,4-0,8, para todos, de alta qualidade e de alto risco de câncer de próstata para a metástase, respectivamente) e para

FGF2

223 C T (ORa = 0,7 , 95% CI: 0,5-1,0 no câncer de próstata de alto grau). Um aumento no risco de câncer de próstata de alto grau foi encontrada em portadores do

IL6R

variante Asp358Ala (ORa = 1,3, IC 95%: 1,0-1,7). Nos modelos de efeitos recessivos (referente: homozigotos do tipo selvagem e heterozigotos) um aumento significativo do risco foi observado para

IGF1R

3174 G A (ORa = 1,3, IC 95%: 1,0-1,9 para o câncer de próstata geral ),

IGFBP3

-202 a C (ORa = 1,3, IC 95%: 1,0-1,8 e ORa = 1,3, IC 95%: 1,0-1,8, para o câncer de próstata de alto grau em geral e, respectivamente) e com o

SPP1

-66 T C (ORa = 1,8, IC 95%: 1,1-3,0, ORa = 1,9, IC 95%: 1,1-3,2 e ORa = 2,4, IC 95%: 1,2-4,8 , no cancro da próstata de alto risco, em geral, de alto grau e de metástases, respectivamente). Da mesma forma, foi observado um efeito protetor significativo para o câncer de próstata de alto grau para os portadores do

IL6

-597 G A variante (ORa = 0,7, IC 95%: 0,4-1,0). Age-estratificação nos supracitados sete SNPs indicou que os efeitos foram praticamente restrito a indivíduos com idade inferior a mediana (do grupo não-câncer, Tabela S3).

A Figura 1 mostra que, entre os casos de câncer de próstata havia uma espera mais curta time-to-início em

IL6R

Asp358Ala transportadores C-alelo (p = 0,026) e em

IGF1R

3174 homozigoto AA (P = 0,002). Nenhum dos outros cinco SNPs influenciou o tempo para o início da doença (dados não mostrados)

(A)

IL6R

D358A A . C e (B)

IGF1R

3174 G A. Na Figura 1A a linha a tracejado corresponde a AA e a linha ponteada a CC /CA genótipo. Na figura 1B a linha a tracejado representa AA, enquanto que os sólidos que corresponde GG /genótipo GA. O teste Log Rank foi utilizado para comparar os genótipos em

IL6R

D358A A C (P = 0,026) e

IGF1R

3174 G . A (P = 0,002)

para testar a nossa hipótese de que a variabilidade genética em SNPs de vias adipocitoquinas pode contribuir com um efeito combinado de risco e /ou agressividade do câncer de próstata, estimamos os efeitos globais mutuamente ajustados por regressão logística multivariada passo a passo. O SNPs em

LEPR

Gln223Arg,

SPP1

-66 T G,

IGF1R

3174 G A,

IGFBP3

-202 A C ,

FGF2

223 C T e

IL6

-597 G a, além de idade e PSA manteve-se associada de forma independente com o risco de, em geral, e para o câncer de próstata de alto grau (Tabela 2) . No grupo de cancro da próstata com alto risco de metástases, apenas o

LEPR

Gln223Arg,

SPP1

-66 T G e

FGF2

223 C variantes genéticas T, idade e persistiu PSA (Tabela 2). Dentro de todos os grupos, análise de bootstrap confirmou os resultados (Tabela 2).

O inclusive (idade e PSA adicionado ao multi-locus do conjunto genético) escores de risco lineares calculadas com base em modelos de regressão logística acima foram testados como preditores de risco em geral categorizados em tercis com base na distribuição no grupo não cancro da próstata. Como mostrado na Tabela 3, o risco de câncer de próstata e câncer de próstata de alto grau aumentou de acordo com o tercil do escore de risco (P

tendência 0,0001 para ambas as categorias de resultados). As RUP ajustadas por idade para mudanças de unidade no escore de risco incluído foram 2,52 (IC 95%: 2,0-3,2) e 2,77 (95% CI: 2,2-3,5) para todos os cancros da próstata e câncer de próstata de alto grau, respectivamente. A qualidade do ajuste para os modelos de regressão logística com base na pontuação inclusive foram significativamente maiores do que para os modelos baseados na idade mais PSA pontuação restrito, para todos os cancros da próstata (p = 0,0002) e cânceres de próstata de alto grau (P = 0,0001) , após o teste da razão de verossimilhança.

a Figura 2 mostra as curvas ROC para o escore de risco genético tudo incluído e para a idade eo escore de risco com base no PSA. As estimativas da AUC para ambos os resultados (todos os cânceres de próstata e câncer de próstata de alto grau) foram significativamente maiores para a pontuação all-inclusive do que com a idade, mais PSA preditor, P = 0,0099 e P = 0,0196, respectivamente (Figura 2). O valor preditivo estatisticamente superior da pontuação all-inclusive foi confirmado através da NRI (todos os cancros da próstata: 9,5%, P 0,0001, o câncer de próstata de alto grau: 13,3%, P 0,0001) e IDI (todos os cancros da próstata: 0,021, P 0,0001, o câncer de próstata de alto grau:. 0.024, P comparações 0,0001)

(a) Todos câncer de próstata e (B) restrita ao câncer de próstata de alto grau. linha contínua corresponde à pontuação tudo incluído, enquanto que linha tracejada representa o escore de risco PSA e idade. A linha pontilhada indica o comportamento de uma pontuação aleatória hipotética. O teste da razão de verossimilhança foi utilizado para estimar a superioridade do escore de risco, inclusive em relação à da pontuação idade + PSA para todo o cancro da próstata (inclusive: AUC = 0,6806, PSA e idade: AUC = 0,6476, P = 0,0002) e alta câncer de próstata de grau (inclusive: AUC = 0,7119, PSA e idade: AUC = 0,6808, P = 0,0001). PSA, antígeno específico da próstata.

distribuições genotípicas em quatro SNPs desviaram Hardy-Weinberg (Tabela S1). Na análise de sensibilidade dos três SNPs relevantes, o equilíbrio foi alcançado após restringindo o grupo controle a condições restritas, ao passo que a tendência para o aumento do risco manteve-se estável, independentemente do grupo de controle utilizado (restrita ou irrestrita) (Tabela S4). Três destes quatro SNPs desviadas acabou no escore de risco com tudo incluído. Portanto, como um passo adicional para esclarecer a importância relativa desses SNPs testamos quatro SNP escore de risco (excluindo os 3 SNPs que não estavam em equilíbrio). Os resultados mostraram que a capacidade preditiva e discriminativo do escore de risco, inclusive com base em 4 SNPs permaneceu significativo (dados não mostrados). Por isso, foi utilizada a todos pontuação inclusive.

Discussão

desregulamentação tecido adiposo tem sido proposta como um mecanismo relevante subjacente de câncer relacionado à obesidade, devido à divulgação inadequada de adipocinas biologicamente ativas. Assim, SNPs funcionais nos genes que codificam moléculas envolvidas nas vias de adipocinas podem modular a expressão, o transporte, ou a sinalização de adipocinas, influenciando assim o risco de câncer de próstata e biologia. Os nossos resultados mostram que os SNPs em genes de vias adipocitoquinas (leptina, interleucina-6, factor de crescimento de fibroblastos 2, osteopontina, e factor de crescimento semelhante à insulina) podem influenciar o desenvolvimento de cancro da próstata e doença agressiva. Curiosamente, descobrimos que tanto o

LEPR

Gln223Arg homozigoto A e

SPP1

-66 homozigotos G foram significativamente associados com todos os resultados (riscos de global, de alta qualidade, e próstata metastático alta de risco cancros).

Os efeitos pleiotrophic de leptina, ou seja, no desenvolvimento e progressão tumoral são mediados por seu receptor [12], [13]. Estudos de SNPs que afetam esta via forneceram resultados inconsistentes em câncer de próstata. O SNP leptina na posição -2548 foi proposto como um locus de susceptibilidade para câncer de próstata [14], [15], embora nossos dados não suportam esta afirmação. Por outro lado, verificou-se um aumento do risco em

LEPR

Gln223Arg A homozigotos para o câncer de próstata, enquanto outros não observaram tal associação [14], [16].

LEPR

Gln223Arg portadores de AA têm menor afinidade de ligação da leptina para solúvel do receptor da leptina e aumentaram leptina circulante livre e níveis solúveis de leptina receptores [22], [23]. Portanto, há um aumento da disponibilidade de leptina para a ligação ao longo leptina isoforma sinalização do receptor na membrana da célula do tumor de próstata. Cumulativamente, a alteração de aminoácidos nesta SNP pode influenciar o sinal para o receptor de reciclagem ou degradação [24] intracelular, modulando a disponibilidade de receptor de leptina ligado à membrana em células de tumor.

A osteopontina é uma molécula de matriz extracelular de citocinas do tipo , que influencia a migração celular e anti-apoptose no cancro [25]. Esta molécula tem sido implicado na doença agressiva e metastático, e é um de uma assinatura de quatro genes em cancro da próstata que prediz metástases e morte [26], [27]. A substituição de T em G na posição -66 na humana

SPP1

gene modula a actividade do promotor [28]. A biodisponibilidade modificada de osteopontina pode induzir a mudança de Th1 para Th2, modular o microambiente [28], e o desenvolvimento do tumor.

A activação mediada por IGF-1 de IGF1R foi demonstrado contribuir para a progressão tumoral [29]. As proteínas de ligação a IGF modulam os efeitos de IGF-1 e a sua função biológica nos diferentes tecidos. Evidências recentes indicam aumento do risco de câncer de próstata em indivíduos com níveis de IGF1 alta de soro, enquanto que o risco foi reduzido em pessoas com altos níveis de IGFBP-3 [30]. Além disso, também verificou-se que o

IGFBP3

-202 A C SNP foi associada com câncer de próstata e com baixos níveis circulantes de IGFBP3 [30]. O presente estudo corrobora os resultados anteriores sobre o

IGFBP3

-202 A C risco CC genótipo para câncer de próstata e doenças de alto grau [30], [31]. Cumulativamente, estudos funcionais confirmou a subexpressão de

IGFBP3

em portadores C-alelo [32], resultando no aumento da biodisponibilidade IGF1. A sinalização através do IGF1R, é necessário para o crescimento e sobrevivência [29]. O sinónimo

IGF1R

SNP no locus de 3174 foi descrita como um possível regulador splicing [33], gerando assim a diversidade da proteína [34] e serve como um mecanismo para a modulação da expressão de genes [35]. Nossos resultados mostram que as transportadoras AA permaneceram independentemente associados com o risco para todos e para o câncer de próstata de alto grau, sugerem que esta SNP pode modular a quantidade de proteína da superfície celular IGF1R, bem como IGF1R /internalização IGF1R e degradação, consequentemente influenciando o crescimento do tumor de próstata. substrato receptor da insulina -1 (IRS1) é a proteína de ancoragem primária de IGF1R, que medeia a activação da via PI3K dentro do sistema de IGF1 /IGF1R. Embora o

IRS1

resultados Gly972Arg SNP em diferenças de proteínas estruturais [36] em nosso estudo este SNP não foi associado com o risco de câncer de próstata, confirmando achados anteriores [37].

FGF2 pode ter um papel na tumorigênese e progressão do câncer através da indução de angiogênese [38]. O

FGF

223 variante do exão 1 está associado com a expressão de FGF2 ao nível da transcrição e da tradução [39]. Nossos resultados mostram aumento do risco para todos, de alto grau, e cancro da próstata risco de alta metástase entre os portadores de CC, que são coerentes com a regulação positiva funcional do FGF2. Esta molécula interage com uma família de quatro receptores distintos, de alta afinidade de tirosina-quinase, o FGFR 1-4. Embora o aumento da disponibilidade de FGF2 e mudanças na disponibilidade de receptor FGFR2 poderia desempenhar um papel na iniciação e progressão do câncer de próstata, não encontramos uma associação entre o

FGFR2

rs2981582 no exão 2 e câncer de próstata.

Iniciação e progressão do cancro da próstata são estimuladas por IL-6 [40]. Descobertas anteriores relataram nenhuma associação do

IL6

-174 G C SNP com câncer de próstata [17], [41], com exceção de um pequeno estudo do risco de doença agressiva [42]. Nós não encontrou uma associação para a

IL6

-174 G C SNP e câncer de próstata. Por outro lado, verificou-se que os portadores da

IL6

-597 G-alelo estavam em risco aumentado para câncer de próstata de alto grau. Na verdade, SNPs funcionais na região promotora de

IL6

(-174, -572 e -597) não agir de forma independente na regulação da IL6 transcrição [43]. O genótipo GG no

IL6

-597 está ligada ao genótipo GG no

IL6

-174, que está associada com níveis aumentados de mRNA e proteína IL6. Portanto, o maior risco de câncer de próstata de alto grau associada ao

IL6

-597 G-alelo pode ser devido ao aumento da IL6. IL6 sinais são transmitidos através de um complexo receptor heterodimérico consistindo de uma interleucina-6 subunidade alfa e uma subunidade solúvel de transdução de sinal ligada à membrana, IL6ST. O comum

IL6R

variante Asp385Ala é responsável por níveis séricos de IL6R solúvel e IL6 e associados com ligação à membrana IL6R devido ao local de clivagem alterada [44], portanto, explicando os nossos resultados. A ativação predominante de IL6 /via IL6R solúvel trans-sinalização em câncer de próstata agressivo [45], em conjunto com o funcional influência IL6R Asp358Ala neste mecanismo, suporta o aumento do risco de câncer de próstata de alto grau observou-se para as transportadoras C (portadores ALA) .

Vários dos SNPs candidatos em vias de adipocitoquinas conhecidos por afetar oncogênese, aqui investigados, não foram associados com o risco de câncer de próstata. A maioria dos nossos resultados nulos para SNPs candidatos em

ADIPOQ

276,

VEGF

-460,

VEGF

405,

VEGF

936,

PPARG

Pro12Ala e

TNF

-308, estão de acordo com outros estudos [14], [17], [46], [47]. Para nosso conhecimento, não houve relatos anteriores de associações nulas de

KDR

-604,

PPARd

-87,

PPARGC1A

Gly482Ser,

TNFRSF1A

-329,

ADIPOQ

45,

ADIPOQ

-11.426,

IL6ST

Gly148Arg,

IL6

-6331, e

TNF

-863 SNPs funcionais com câncer de próstata.

observamos que alguns SNPs ter um efeito risco significativo principalmente em idades mais jovens. A exposição all-vida para o aumento dos níveis de adipocinas e ativação da via podem influenciar o desenvolvimento precoce do câncer de próstata. Além disso,

IL6R

Asp358Ala e

IGF1R

+3174 SNPs foram significativamente associados com o câncer de próstata precoce, possivelmente devido à formação de tumores acelerado.

Nós testamos cada SNP para a associação com duas definições clinicamente relevantes de resultados desfavoráveis: de alta qualidade (pontuação combinada Gleason ≥7) e ao risco elevado de metástase (pontuação combinada Gleason ≥8 e /ou PSA≥20 ng /mL) cancros da próstata. escore de Gleason combinado é um poderoso preditor da progressão da doença e mortalidade [48], ao passo que marcar Gleason ≥8 está associada com o comportamento biológico agressivo e aumento do risco de doença disseminada oculto [49]. Encontramos variantes funcionais em genes de leptina, osteopontina, fator de crescimento semelhante à insulina, fator de crescimento de fibroblastos 2 e interleucina 6 vias de ser relacionados com câncer de próstata de alto grau, enquanto SNPs na associada eixo fator leptina, osteopontina e de crescimento de fibroblastos 2 com alta risco de metástase do cancro da próstata. Estas vias são conhecidas por serem envolvidos no câncer de próstata agressivo, dando suporte para esses SNPs como marcadores clínicos de doença agressiva. O SNPs no escore de risco de prever alta qualidade /doença agressiva, mas também prever o risco geral de câncer de próstata. A capacidade de prever geral, bem como os cânceres de alto grau pode ser devido à proporção significativa de câncer de próstata de alto grau (Gleason≥7) (83%) em nossa população câncer.

Apesar de uma riqueza de evidências demonstra a efeitos de adipocitoquinas individuais sobre a carcinogénese da próstata, é pouco provável que o impacto fisiopatológico global é devido à influência de uma única adipocina in vivo. Nós mostramos que a análise da susceptibilidade cumulativo contribuído por SNPs de vias adipocitoquinas ajuda na estratificação de risco. Nossas análises indicam que o inclusiva (idade e PSA adicionado ao multi-locus genético set) escore de risco fornece melhorias na discriminação e previsão de todos os cânceres de próstata e câncer de próstata de alto grau. Nós sugerimos que os genótipos de risco no modelo inclusivo pode cooperar para influenciar o sistema endócrino e parácrina de vias adipocitoquinas que leva ao desenvolvimento e progressão tumoral. No entanto, os mecanismos subjacentes a estas interações de alta ordem entre os polimorfismos genéticos nos genes vias adipocitoquinas na modulação do risco de câncer de próstata ainda não foram completamente elucidados.

Neste coorte de homens submetidos a biópsia da próstata devido à anormal clínica e /ou achados PSA onde foi utilizado um esquema de biópsia extensa, que mostraram que através da adição de um marcador genético baseado em 7 SNPs melhorou significativamente o poder discriminatório de um modelo parcimonioso estabelecido apenas com PSA e idade. A AUC aumentaram significativamente 0,65-0,68 para todos os cancros da próstata e 0,68-0,71 cancro da próstata em grau elevado, quando as variantes genéticas foram adicionadas ao modelo. Além disso, o valor preditivo melhorada da pontuação para o risco de câncer de próstata persistiu com uma pontuação de risco de quatro SNPs (excluindo SNPs desviou de Hardy-Weinberg). Embora nós apresentamos o maior esforço até o momento para estudar a associação entre adipocina escore de risco genético e risco de câncer de próstata, nossos resultados devem ser interpretados no contexto de várias limitações potenciais. Nós teve uma abordagem gene candidato focado para avaliar SNPs chave em vias de adipocinas, mas nosso painel de SNP pode ser incompleta. Da mesma forma, vários SNPs associado ao risco de cancro da próstata recentemente notificados de estudo de associação genômica ampla não foram incluídos no modelo de predição de risco. Se tivéssemos sido capaz de incluí-los, a previsão global de risco poderia ter melhorado. Nós também estimou associações de risco nesta população de estudo, de caráter exploratório, sem ter a oportunidade de validar os nossos resultados em uma amostra separada de pacientes submetidos a rastreio do cancro da próstata. Portanto, são necessários mais estudos em populações independentes. Finalmente, apesar de nosso tamanho relativamente grande amostra, que tinha limitado poder estatístico para examinar as variações genéticas em relação ao câncer de próstata risco de alta metástase, por causa do pequeno número de casos neste grupo. No entanto, nosso estudo tem vários pontos fortes: i) foi prospectivo e grande o suficiente para os resultados-chave de interesse, ii) a maioria dos genes e SNPs foram selecionados com base em evidências biológicas de importância funcional; iii) projeto de estudo e análises estatísticas representaram fatores de risco relevantes, tais como etnia e idade [50], e, embora nós não temos dados sobre a informação hereditariedade em um grande conjunto de assuntos, apenas 2,2% eram na verdade menos de 55 anos de idade, sugerindo que os cancros da próstata hereditários eram raros em nossa amostra; iv) que usamos estratégias estatísticas para avaliar a robustez das associações, tais como reamostragem bootstrap e medidas de melhoria da discriminação; e v) todos os homens foram selecionados para o cancro da próstata com base em tanto a nível de PSA e toque retal durante o período de recrutamento e diagnóstico foi determinado pela biópsia padrão, tornando, assim, resultado má classificação improvável.

Em resumo, foram identificados SNPs em adipocitoquinas vias que estão associados com o desenvolvimento do cancro da próstata e com um fenótipo mais agressivo. A inclusão de SNPs no modelo de pontuação risco significativamente melhorada, embora modesta, o desempenho do PSA e idade para predizer o cancro da próstata e em geral o risco de cancro da próstata de alto grau em homens submetidos a biópsia. A inclusão de outros SNPs funcionais num modelo de susceptibilidade para o cancro da próstata é garantido, a fim de determinar um modelo multi-locus de prever com exactidão o cancro da próstata e a agressividade da doença. O uso de melhores modelos de risco, tais como o descrito aqui, podem impactar estratégias de saúde pública se mostrado para ter utilidade clínica quando combinado com estratégias de triagem e de redução de riscos individualizados.

Materiais e Métodos

ética Declaração

Este estudo foi aprovado pelos comitês de ética do Hospital Militar do Porto e Hospital São João (Porto, Portugal). Os pacientes foram incluídos após assinar um consentimento informado por escrito.

Assuntos

Os participantes foram recrutados entre Setembro de 2007 e Outubro de 2010, depois de ser designado para os departamentos de urologia dos hospitais participantes para biópsia ultra-som transretal da próstata guiada (8-13 núcleos), com base em exames rectais digitais anormais e /ou os níveis basais de PSA individuais mais de 2,5 ng /mL. Nossa população de estudo consistiu de 1099 homens caucasianos consecutivamente-admitidos que tiveram avaliação histológica e consentiu para genotipagem.

Foi selecionado um grupo de pacientes com câncer não-próstata (hiperplasia benigna da próstata [HPB] ou prostatite crônica) do controle os homens prospectivamente inscritos submetidos a biópsia da próstata. A escolha deste grupo de controlo foi baseado nas seguintes razões: (i) o diagnóstico foi contemporânea com a de cancros; (Ii) a sua idade avançada no momento do diagnóstico permitiu combinar com pacientes com câncer idosos; (Iii) todos os pacientes foram submetidos a exame de toque retal, exame de PSA e biópsia de agulha de próstata, fazendo com que a possibilidade de controle remoto crossover. A maioria dos homens desenvolvem HBP ou prostatite crônica pelo 7

th-8

th décadas de vida, tornando-se normal em homens dessa idade para transportar a doença prostática benigna. Isso permitiu que nossos indivíduos do grupo controle ter idades comparáveis ​​aos dos nossos pacientes com câncer de próstata, minimizando assim a probabilidade de erros de classificação resultado. Se tivéssemos restrito controles para homens sem doença prostática não teria havido um grave desequilíbrio na distribuição etária, que introduziria viés.

patologia da próstata e escores de Gleason foram determinados através de biópsia. Em indivíduos biopsiados re-somente o último diagnóstico patológico, mais relevante foi considerada. Noventa e três homens foram excluídos do estudo devido a um relatório de patologia de alto grau de próstata neoplasia intra-epitelial ou uma biópsia suspeita de apenas câncer. Nenhum dos participantes tinha sofrido um tratamento de câncer de próstata (castração hormonal, cirurgia, quimioterapia ou radioterapia). Foram incluídos todos os 1006 pacientes elegíveis restantes para análise molecular.

genética Variantes e Genotipagem

SNPs candidatos foram selecionados entre as melhores evidências de estudos publicados e através de bases de dados públicas que fornecem informações sobre os riscos fenotípicas. foram selecionados genes candidatos envolvidos nas vias de adipocitoquinas conhecidos por afetar oncogênese. SNPs com menores freqüências alélicas 0,05 foram excluídos. Um total de 29 SNPs funcionais putativos definido pelo literatura em 19 genes diferentes foram selecionados, correspondendo a 9 vias de adipocinas (Tabela S1).

A genotipagem de 22 SNPs (dois em

ADIPOQ

,

IL6

,

IL6R

,

KDR,

três em

VEGF

,

LEP

, dois em

LEPR

,

PPARG

,

PPARGC1A

,

PPARd

,

SPP1

,

IGF1R

,

IGFBP3

,

IRS1

,

FGF2

,

FGFR2

,

TNF

,

TNFRSF1A

) foi realizada utilizando a discriminação TaqMan alélicas (Applied Biosystems), enquanto 7 SNPs foram genotipados através da reação em cadeia da polimerase – análise de restrição do comprimento do fragmento de polimorfismo (

IL6

-597 /-572 /-174,

ADIPOQ

45,

IL6ST

Gly148Arg,

LEPR

Gln223Arg e

TNF

-863), usando protocolos previamente descritos. Para controle de qualidade que usamos controles não-modelo em todas as corridas e avaliação de genótipos cego replicar em 5% das amostras. Para a maioria dos SNPs, observamos concordância quase total entre os duplicados.

Análise Estatística

O teste de Mann-Whitney foi utilizado para comparar médias entre câncer de próstata e grupos não-cancerosas. O teste do qui-quadrado foi usado para testar para partidas de Hardy-Weinberg para cada SNP com base na distribuição entre o grupo não cancro da próstata.

regressão logística incondicional foi utilizada para estimar odds ratio ajustada por idade ( ORa) e intervalos de confiança de 95% (95% IC) para as associações entre os polimorfismos e desenvolvimento de câncer de próstata com base em ambos os modelos recessivos e dominantes. SNP, single nucleotide polymorphism;

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