Abstract
Fundo
Microseminoprotein-beta (MSMB) regula a apoptose e usando associação do genoma estuda o polimorfismo de nucleotídeo único rs10993994 no
MSMB
promotor tem sido associada a um risco aumentado de desenvolver câncer de próstata. A localização do promotor do alelo de risco, e a sua capacidade para reduzir a actividade do promotor, sugeriu que o alelo de risco pode resultar em rs10993994 MSMB reduzido em tecido benigno levando ao aumento do risco de cancro da próstata.
Metodologia /Descobertas principais
MSMB expressão no tecido da próstata benigna e maligna foi examinada usando imuno-histoquímica e comparação com o genótipo rs10993994. concentrações MSMB urinários foram determinados por ELISA e correlacionada com a PSA urinária, a presença ou ausência de cancro, rs10993994 genótipo e idade de início. níveis MSMB em tecido prostático e na urina foram grandemente reduzido com tumorigénese. MSMB urinária foi melhor do que o PSA urinária em diferenciar os homens com câncer de próstata em todos os graus de Gleason. O alelo de risco elevado foi associado com a heterogeneidade de coloração MSMB e perda de MSMB tanto em tecido e urina em benigna da próstata.
Conclusões
Estes dados mostram que alguns alelos de alto risco descobertos usando todo o genoma Os estudos de associação produzir efeitos fenotípicos com potencial utilidade clínica. Nós fornecer a primeira ligação entre um polimorfismo penetrância baixa de cancro da próstata e um potencial de teste em tecidos humanos e fluidos corporais. Há potencial para desenvolver tecidos e MSMB urinária para um biomarcador de risco de câncer de próstata, diagnóstico e monitorização da doença
Citation:. Whitaker HC, Kote-Jarai Z, Ross-Adams H, Warren AY, Burge J, George Um, et ai. (2010) O rs10993994 Risco Alelo para resultados do cancro da próstata em alterações clinicamente relevantes na Expression Microseminoprotein-Beta no tecido e na urina. PLoS ONE 5 (10): e13363. doi: 10.1371 /journal.pone.0013363
editor: Andrew Vickers, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, Estados Unidos da América
Recebido: 30 de Junho de 2010; Aceito: 01 de setembro de 2010; Publicação: 13 de outubro de 2010
Direitos de autor: © 2010 Whitaker et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Os autores gostaria de agradecer o apoio da Universidade de Cambridge, Cancer Research UK (códigos de subvenção C522 /A8072 e C5047 /A8385), The Institute of Cancer Research, a campanha Everyman, o pacote de trabalho da UE FP7 Promark e Hutchison Whampoa Limited e The Prostate Cancer Research Foundation. Os autores gostariam de agradecer o apoio do Instituto Nacional de Pesquisa em Saúde, que financia o Centro de Investigação de Cambridge Bio-médica, Cambridge, Reino Unido, o Centro de Investigação Bio-médica no The Institute of Cancer Research e Royal Marsden NHS Foundation Trust eo Biomedical Centro de Investigação no Manchester Central Foundation Trust. Os autores também gostariam de agradecer o apoio do cancro da próstata investigação Nacional do Câncer: mecanismos de progressão e Tratamento (PROMPT) colaborativo (código concessão G0500966 /75.466), que tem financiado coleções de tecidos e urina em Cambridge. Os autores também gostariam de agradecer o apoio dos Conselhos do Câncer de Victoria e Austrália do Sul, a Fundação Câncer de Próstata da Austrália, a Agência Cancer vitoriana, Jack e Judy Baker por seu apoio no Sistema de Saúde da Universidade NorthShore e The Ronald e Rita McAulay Foundation que apoia a recolha estudo IMPACT. Douglas Easton é um Principal Research Fellow of Cancer Research UK. Hans Lilja é financiado pelos [números de subvenção R33-CA127768-02] National Cancer Institute; Swedish Cancer Society [3455]; e Conselho de Pesquisa sueco (Medicina) [20095]. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
Conflito de interesses:. Dr. Hans Lilja detém patentes para ensaios de PSA e hK2 livres. Isto não altera a adesão dos autores para todos os PLoS ONE políticas de dados e materiais de compartilhamento, como detalhado em linha no guia para os autores.
Introdução
Microseminoprotein-beta (MSMB) é o segunda proteína mais abundante encontrado no sémen depois de antigénio específico da próstata (PSA) [1]. Ao contrário de PSA, MSMB não é regulada directamente por androgénios e o seu nível não é afectada pela manipulação hormonal [2], [3], [4]. especificidade da próstata de expressão MSMB foi inicialmente demonstrada em roedores [5], [6] e apoiados pelo desenvolvimento de um modelo de rato de próstata que usou o
MSMB e região promotor /intensificador para direcionar a expressão específico da próstata [7], [8]. No entanto, estudos em humanos sugerem MSMB pode ser expresso num número de tecidos secretores e mucosas, se bem que em níveis muito mais baixos do que na próstata [9], [10], [11], [12], [13], [14].
Dois estudos de associação ampla de genoma (GWAS) identificaram um polimorfismo tag pequena nucleotídeo (SNP), rs10993994, em 10q que está fortemente associada a um risco aumentado de desenvolver câncer de próstata [15], [16]. Este SNP está na 5 ‘UTR de
MSMB
. O alelo de risco é comum, com uma frequência de ~30-40% em europeus e 70-80% em homens de ascendência Africano, e confere um risco aumentado de câncer de próstata de 1,3 (por probabilidades de alelos ratio). Esta associação é observada em ambos os europeus e afro-americanos e parece ser independente da idade do diagnóstico e do grau do tumor [17]. mapeamento Belas escala não identificou quaisquer outras variantes associadas de forma independente na região. Além disso, um estudo recente em linhas celulares demonstrou que o alelo de risco (T) reduziu significativamente a actividade de promotor do gene para 13% do que no alelo de baixo risco (C) [18]. Como este SNP está dentro da
é sugerido MSMB
atividade do promotor reduzido região promotora proximal para ocorrer através de sítios de ligação de fatores de transcrição alterada como CREB [19]. Estes dados sugerem fortemente que o alelo T é rs10993994 causalmente associada com o risco de cancro da próstata, e que essa associação pode ser mediada através de expressão reduzida de proteína MSMB no tecido da próstata benigna. Tem sido relatado que
MSMB
ARNm em linhas de células foi reduzido em células homozigóticas para o alelo de risco, o que sugere uma hipótese em que a expressão reduzida MSMB em indivíduos com o alelo de risco rs10993994 poderia conduzir a uma regulamentação reduzida do crescimento celular e um risco acrescido de tumorigénese [19].
Vários grupos têm estudado expressão MSMB no cancro da próstata e todos encontraram níveis mais elevados de MSMB em tecidos ou no soro benigna e normal, quando comparado com o material a partir de tumores [2], [ ,,,0],3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. Até o momento não existem estudos foram concluídos na urina. Altos níveis de MSMB em tecido benigno é consistente com a hipótese de que MSMB se liga a receptores da superfície celular e regula o crescimento da próstata, controlando apoptose possivelmente através de MAP quinase /AKT de sinalização [24], [25], [26].
o câncer de próstata é o câncer masculino sólido mais comum no Reino Unido. Actualmente a melhor ferramenta de diagnóstico é de PSA no soro, enquanto ARNm de PCA3 urinária também é usado como um teste de diagnóstico útil em particular para homens com PSA elevado e uma biópsia inicial negativa [27]. No entanto, a necessidade de um exame rectal digital de antes do ensaio impede a sua utilização como uma ferramenta de rastreio. PSA urinária foi classificado como uma ferramenta de diagnóstico potencialmente úteis em homens com PSA do soro 2,5-10 ng /ml, e é de particular interesse no rastreio e monitorização da doença, uma vez que é mais aceitável para os pacientes. [28].
temos utilizado estudos de imuno-histoquímica de MSMB no tecido da próstata benigno para demonstrar uma relação entre a expressão da proteína MSMB eo genótipo rs10993994. Nós desenvolvemos um ensaio ELISA urinária para examinar a associação entre a PSA urinária, os níveis MSMB e MSMB genótipo para determinar se este tem potencial para clinicamente usar como uma triagem ou ferramenta de diagnóstico.
Materiais e Métodos
Ética Declaração
aprovação ética completa foi obtida para todas as colecções de amostras humanas a partir de qualquer Comitê de West Midlands multi-Centro de Investigação de Ética ou Comitê de Ética em Trent multi-Centro de Investigação. Todas as amostras foram obtidas com consentimento por escrito e analisados anonimamente.
coortes de pacientes
tecidos, amostras de sangue e urina de pacientes com câncer de próstata diagnosticado foram obtidos a partir Hospital Addenbrooke, em Cambridge, Reino Unido (prostatectomia radical recolhidos entre 2001 e 2008) e do Instituto de Pesquisa do Câncer (biópsia e prostatectomies trans-uretrais recolhidos 1995-2002). pacientes normais /benigna foram recrutados como parte do estudo de impacto, um estudo do risco de câncer de próstata em homens com
BRCA1 /2
mutações germinativas no Instituto de Pesquisa do Câncer (05 /MRE07 /25) [29]. Esta coorte não tinham histórico de doença da próstata e incluiu homens com uma mutação e do tipo selvagem (controle)
BRCA1
e
BRCA2
. A mediana de idade, PSA e Gleason pontuação dos grupos utilizados são apresentados na Figura S1.
Nem todos os pacientes tiveram o tecido de boa qualidade para IHC, DNA para genotipagem, medições de PSA no soro e na urina disponível. Para superar isso, os pacientes foram divididos em três grupos para responder a perguntas específicas. 168 pacientes com tecido de boa qualidade foram utilizados para o estudo de IHC representado na Figura 1. Amostras de 133 dos pacientes foram feitas em uma micromatriz de tecido (TMA) contendo múltiplos núcleos de regiões normais /benignas ( 3), prostática intra-epitelial neoplasia (PIN) e pelo menos duas regiões distintas de tumor para cada paciente. Os demais casos foram parte de uma TMA adicional de jovens pacientes com câncer de próstata de início (definido como diagnosticado em ≤ 60 anos) do Estudo Cancer UK genética próstata. Este TMA incluídas várias regiões normais /tumorais benignas e em 35 pacientes. n = indica o número de eventos em vez do número de núcleos examinados isto é onde a patologia heterogénea foi encontrado duas regiões foram pontuadas de forma independente.
MSMB imuno-histoquímica foi realizada em TMA usando um Autostainer BondMax. Para todas as seções núcleos são mostrados na coloração azul e MSMB na cor marrom. (A) MSMB não estava presente no urotélio (painel esquerdo), seta preta – urothelium, seta branca – próstata, vesícula seminal (painel central), seta preta – vesícula seminal, seta branca – próstata, bexiga (painel direito), seta preta – células de gordura, seta branca – propria bexiga muscular. (B) coloração MSMB na próstata é específico para as glândulas benignas (setas brancas) e não células de tumor da próstata (Gleason 3) (setas pretas). MSMB também não conseguiu manchar glândulas benignas atróficas. Exemplos dos critérios de coloração (nenhuma /fracos, moderados e fortes) aplicado para a imuno-histoquímica. Os resultados da coloração foram altamente significativas como calculado utilizando um teste de Kruskal-Wallis. n representa o número de eventos patológicos azar.
apenas 145 pacientes tinham ADN que pode ser utilizado para genotipagem, como mostrado na Figura 2B. seções radical da próstata completos ou muito grandes secções de tecido foram disponível a partir de 32 pacientes da coorte de Addenbrookes.
(A) Um exemplo de coloração mega-bloco de secções de próstata grandes que mostram homogênea (painel esquerdo) ou heterogéneos (painel direito ) coloração. imunohistoquímica MSMB foi marcado como antes tão forte, moderada, fraca ou perdido para cada paciente e estratificada de acordo com o genótipo; T – alto risco, baixo risco C-. Os valores de p foram calculados utilizando um teste de Kruskal-Wallis. n representa o número de eventos patológicos azar.
Para o ELISA MSMB mostrado na Figura 3 89 homens com cancro da próstata que tinham tecido, de ADN e uma amostra de urina foram usadas. Os pacientes benignas /normais foram recrutados como parte do estudo de impacto, um estudo do risco de câncer de próstata em homens com
BRCA1 /2
mutações germinativas (n = 215). Todas as amostras de urina foram obtidas antes de qualquer exame digital rectal, divididos em alíquotas e congelado imediatamente a -80 ° C. Onde foi determinada disponível idade, PSA e escore de Gleason no momento do diagnóstico para cada paciente.
concentrações MSMB e PSA urinário foram determinadas e normalizadas para creatinina. (A) MSMB urinária foi determinada por ELISA para a coorte normais /benigna paciente e uma coorte menor, com um diagnóstico de cancro da próstata. O mesmo grupo também foi testado para PSA urinária e valores de PSA no soro agrupadas. Curvas ROC foram geradas; AUC = área sob a curva, intervalos de confiança entre parênteses e os valores p são dados em níveis de confiança de 95%. A diferença entre MSMB urinária e PSA ROC curvas p = 0,0021. A diferença entre o MSMB urinária e da coorte tumor foi ainda estratificada por pontuação soma Gleason (B). MSMB urinária e PSA a partir de baixo amostras de Gleason (6 e 7) foram comparadas com alta Gleason (8 e 9) amostras e curvas ROC gerada e apresentada como antes. MSMB urinária também foi estratificada de acordo com o alelo de risco rs10993994 (C). n = número de indivíduos examinados em cada grupo.
A genotipagem
A genotipagem foi concluída como descrito anteriormente [15]. O DNA foi extraído a partir de sangue inteiro para a série 2 e 3, quer comercialmente por GeneProbe ou com QIA-amp® DNA Mini Kit (Qiagen) de acordo com as instruções do fabricante. A genotipagem de amostras foi realizada por ensaio 5’exonuclease (Taqman ™) utilizando o sistema de detecção de sequência ABI Prism 7900HT de acordo com as instruções do fabricante. Primers e sondas foram fornecidos diretamente pela Applied Biosystems como ensaios-By-Design ™.
Imunohistoquímica
Todos os imuno-histoquímica (IHQ) foi realizada utilizando um stainer automatizado Bondmax e anticorpo anti-MSMB (Abcam) (1:400) sobre o tecido da série 1 e 2. Para a matriz /tumor multi-normal de um núcleo 48 a partir de TMA Stretton Scientific foi usada. Os núcleos foram contrastadas com hematoxilina e desliza fotografada usando um sistema de scanning Aperio. Patologia foi confirmada por um especialista uro-patologista (AW) antes da marcação de qualquer coloração imuno-histoquímica. Pontuação foi realizada por dois observadores, um dos quais era um uro-patologista (AW), e um consenso obtido. hematoxilina sequencial e seções eosina foram usadas para confirmar a patologia. A coloração foi classificada como; ‘None’ – sem coloração, “fraco” – nem todas as células epiteliais manchadas e coloração pálida, “moderado” – a maioria ou todas as células epiteliais manchadas moderadamente, “forte” – todas as células epiteliais manchadas fortemente (Figura 1B). Onde secções contidas coloração heterogéneo um consenso geral foi alcançada com base nas proporções relativas dos diferentes pontuações. Onde patologia heterogêneo existia dentro núcleos por exemplo lado-a-lado e regiões tumorais benignas, cada região foi marcado como um evento separado. n = indica o número de eventos em vez de o número de núcleos examinados
PSA e MSMB medições
Soro e PSA urinária (Free Total). ensaios de creatinina foram realizados pelo NIHR Cambridge Biomedical Research Centre Núcleo Bioquímica Ensaio de Laboratório, Addenbrookes Hospital usando o kit Prostratus Livre /Total PSA DELFIA (Perkin Elmer Life Ciências Analítica) e analisador Dimension RXL (Siemens Healthcare). Para o ELISA MSMB todos os procedimentos foram realizados com agitação à temperatura ambiente. Os poços foram lavados entre cada passo três vezes com 0,05% PBS-Tween e uma platewasher BioTek Elx50. Noventa e seis placas de poços (Fisher Scientific) foram revestidas durante a noite a 4 ° C em anticorpo anti-rato PSP94 (1:1000, Abcam) diluído em PBS. Os poços foram bloqueados com 1% de BSA (Sigma) durante 1 hora antes de 50 ul de amostra ou padrão foi adicionado a cada poço em duplicado e incubadas durante mais 2 horas. As diluições em série (25-0,78 ug /ul) de PSP94 recombinante (rPSP94, R D Systems) foram usadas como controlo em cada placa. De cabra anti-MSMB (R D systems 0,2 ug /ml) foi adicionado a cada poço durante 1 hora, seguido por A1 hora de incubação com burro anti-cabra-HRP (Abcam, 1:20,000). Para visualizar 100 ul de TMB (Sigma) foi adicionado a cada poço durante 15 minutos. A reacção foi parada pela acidificação com HCl a 50 ul e a absorvância medida a 450 nm utilizando um espectrofotómetro de Lúcia II.
A gama dinâmica do ELISA foi determinada como sendo de 0,01-100 ug /ml, embora a gama não linear foi muito maior. Qualquer placa exibindo 20% da variabilidade na curva padrão foi considerado como tendo falhado e repetida. variabilidade intra e inter-ensaio foi de 8,8% e 22%, respectivamente. Efeitos sobre a estabilidade da proteína foram mostrados para ser 20% após o teste de congelação descongelação 3 vezes antes do ensaio ou incubando rPSP94 pré-diluído -3 durante 4 horas à temperatura ambiente antes do ensaio. A recuperação de diferentes fluidos foi determinada como sendo de 20% por diluição rPRDX-3 em PBS, albumina de soro bovino a 0,1% (Sigma) ou soro de cabra a 10% (Dako Cytomation). MSMB concentração foi determinada por interpolação de valores a partir de regressão não-linear da curva padrão sigmoidal. A concentração de todas as amostras de urina foram normalizados utilizando creatinina medida utilizando um kit de ensaio da creatinina (R D Systems) e o declive da curva padrão determinado por padrões conhecidos (20-0,3125 mg /dL) e regressão linear. Somente as amostras que podem ser interpolados a partir das curvas padrão, sem a extrapolação foram incluídos na análise.
Métodos Estatísticos
Todas as estatísticas de regressão linear e incluindo interpolação para o ensaio de ELISA foram realizadas utilizando o GraphPad Prism 5. comparar a sensibilidade ea especificidade de medidas na coorte de tumor em comparação com a coorte benigna foram realizadas curvas receiver-operador (ROC). Um teste ANOVA de 1 via com uma correção de Kruskal-Wallis foi utilizado para determinar se os níveis de tecido ou MSMB urinário foi significativamente diferente entre os grupos tumor benigno e quando a coorte tumor foi estratificada de acordo com Gleason grau ou genótipo. Um teste t de Student de Mann Whitney bicaudal foi utilizado para todas as comparações aos pares. Para todas as experiências de um valor-p de 0,05 foi considerado significativo.
Resultados
Com excepção benigna da próstata não tecidos normais ou tumorigênicas demonstrou qualquer coloração MSMB sugerindo que ao nível da proteína no tecido MSMB é altamente específico da próstata (Figura 1A e Figura S2). Em particular, os tecidos circundantes da próstata, por exemplo, urothelium, vesículas seminais e camada própria bexiga muscular não apresentaram coloração enquanto glândulas prostáticas benignas adjacentes foram fortemente coradas (Figura 1A).
De acordo com relatórios anteriores glândulas benignas da próstata apresentaram níveis significativamente mais elevados de coloração em comparação com as regiões tumorigênicas em nosso coorte (p 0,0001, Figura 1B e Figura S1) [2], [3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. MSMB coloração também foi consistentemente perdido em prostáticos neoplasia intra-epitelial (PIN) em comparação com o tecido benigno (p 0,0001), sugerindo que pode ser um início, causalidade, caso em tumorigénese. A coloração para MSMB no tecido benigno variou de homogênea, que foi mais comumente visto com forte coloração (Figura 2A, painel esquerdo) e variável, coloração heterogênea frequentemente visto com coloração fraca e moderada (Figura 2A, painel da direita).
coloração MSMB no tecido foi significativamente associada com o genótipo rs10993994 (p 0,0001), manchando a ser mais fraco em homens homozigotos para o alelo de alto risco (TT) e mais forte nos homozigotos CC (Figura 2B). Não havia nenhuma evidência de uma associação entre a coloração MSMB e idade ou PSA no momento do diagnóstico nesta série maligna dos homens (figura S3).
Nós determinamos os níveis urinários de MSMB em 215 homens normais /benignos sem história de próstata doença e 89 homens com câncer de próstata (Figura S4). Consistente com a associação no tecido da próstata, houve uma diminuição significativa na MSMB urinário em homens com tumores, em comparação com os homens sem história de doença da próstata (Apoio 4A Documento) (p 0,0001). MSMB urinária significativamente melhorado PSA urinária, mas não ao PSA no soro, para o diagnóstico do cancro da próstata nesta coorte (diferença entre MSMB urinária e curvas ROC PSA IC 0,21, 95%: 0,075, 0,34, p = 0,0021) (Figura 3A). Quando as amostras de tumor foram estratificados em baixo (6 e 7) e alta (8 e 9) A soma de Gleason MSMB urinária demonstraram altos níveis de especificidade e sensibilidade particularmente quando comparado com PSA urinária (Figura 3B). Houve uma diminuição significativa na MSMB urinária com o alelo de alto risco em comparação (TT) para o alelo de risco baixo (CC) (Figura 3C) (p = 0,0319), embora isso não se refletiu em uma diferença significativa nas curvas ROC. Levantou MSMB urinária benigna é improvável que refletem um aumento do volume da próstata benigna, pois não houve aumento significativo no MSMB urinária com a idade (Documento de Apoio 4B) (p = 0,543). Para demonstrar que a correlação foi específica para o genótipo rs10993994 comparamos níveis urinários MSMB e estado de mutação BRCA1 e BRCA2 da linha germinativa, que são conhecidos fatores de risco de câncer de próstata [30], [31], e não encontraram nenhuma ligação (Figura S4).
Discussão
Este é o primeiro estudo para descrever a relação entre o alelo de risco do rs10993994 tag SNP e os níveis de MSMB no tecido da próstata benigno e tumor e correlacionar o nível de proteína com o genótipo ea agressividade da próstata Câncer. A perda quase completa da MSMB em PIN (Figura 1B) sugere que MSMB reduzida é um evento precoce na tumorigénese consistente com uma associação entre o risco de câncer de próstata e o genótipo rs10993994.
Há fortes evidências ligando o SNP rs10993994 em
região MSMB
promotor para um risco aumentado de desenvolver câncer de próstata [15], [16]. MSMB foi estudado por um grande número de grupos como um biomarcador putativo porque níveis no tecido e no soro é reduzido ou perdido com o desenvolvimento do cancro [2], [3], [4], [12], [20], [ ,,,0],21], [22], [23] (Figura 1B). Confirmámos estas descobertas e também que é em grande parte MSMB específico da próstata no nível de proteína no tecido (Figura 1A e Figura S2). Evidências recentes sugerem que uma vez rs10993994 tumores da próstata têm desenvolvido tem pouco efeito sobre a progressão da doença, indicando que qualquer aumento no risco afecta a glândula benigna e o desenvolvimento do tumor inicial [17]. Isto é consistente com a perda de MSMB que observamos em PIN, o que sugere que a expressão reduzida ou perdida MSMB em benigna da próstata é necessário para a transformação maligna. A ligação entre o alelo de risco MSMB e expressão em tecido foi altamente significativa (p 0,0001) (Figura 2B). heterogeneidade pronunciada Também foi observado no tecido com moderada a baixa expressão mais comumente ligado ao alelo TT (Figura 2A).
Vários grupos examinaram os níveis MSMB no soro demonstrando valor prognóstico após a prostatectomia radical [3], [32 ]. Consistente com a perda de MSMB em glândulas tumorigénicos (Figura 1B) que demonstraram uma perda muito significativa de MSMB na urina de pacientes com cancro da próstata de grau de baixa e alta Gleason foi comparado com os que não têm a doença da próstata conhecido (Figura 3A). Estes resultados são comparados favoravelmente com PSA urinária que foi previamente relatado para ter utilidade clínica potencial em doentes com um PSA de soro de 4-10 ng /ml [28]. MSMB urinária não era tão preciso quanto PSA, o teste atual padrão ouro para o diagnóstico de cancro da próstata (AUC de 0,97 para PSA soro e 0,77 para MSMB urinária. No entanto, nossos companheiros não representa o falso positivos e negativos visto quando PSA é usado para rastreio da população sugerindo uma coorte menos tendencioso deve ser testado estabelecer o verdadeiro benefício de MSMB urinária de rastreio do cancro da próstata. Embora talvez seja surpreendente que tais mudanças são tão facilmente detectável devido à potencialmente pequeno número de glândulas tumorigênicas dentro de uma próstata de outra forma benigna. no entanto, temos mostrado especificidade da próstata quase completa para a proteína MSMB sugerindo que é improvável que níveis significativos de MSMB surgir a partir de qualquer outro tecido. é provável que uma proporção dos homens no nosso estudo normais /benigna (idade média de 53 anos) terá algum grau da hiperplasia prostática benigna (BPH), mas observamos nenhum aumento significativo na MSMB urinária com o aumento da idade, sugerindo que o aumento do volume da próstata tem pouco efeito sobre MSMB urinário (Figura S4).
diferenças urinário em MSMB com o alelo de risco foram significativa, mas não suficientemente discriminatória nossa amostra relativamente pequena. Alterações eram independentes de outros fatores de risco genéticos estabelecidos, tais como
BRCA1
e
BRCA2
mutação (Figura S4). O aumento da sensibilidade do ensaio e teste de uma coorte representativa baseada na população em comparação com o PSA são mais prováveis de demonstrar qualquer significado clínico na verdade usando MSMB urinária para estimar o risco e diagnosticar o cancro da próstata. A urina é uma medida altamente biológico aceitável para os pacientes e os nossos resultados indicam que MSMB é um alvo potencial para posterior investigação como um biomarcador urinário para o rastreio e o diagnóstico do cancro da próstata, sem a necessidade de um exame rectal digital. Ao contrário de PSA, os relatórios anteriores sugeriram que os níveis MSMB não são afetados pela terapia de ablação hormonal frequentemente utilizado no tratamento do câncer de próstata e que precisamos para determinar se MSMB pode ser útil na carga da doença monitoramento em pacientes submetidos a várias formas de tratamento [2], [3] , [4]. MSMB também pode ser útil na detecção de pacientes com PSA levantadas, mas uma biópsia negativa que se beneficiariam de uma investigação mais aprofundada.
estudos quantitativos de RT-PCR de linhas celulares demonstrou anteriormente uma ligação entre o alelo rs109939994 T e baixou MSMB ARNm, muito provavelmente devido ao factor de transcrição de ligação alteradas [19]. A demonstração de uma associação semelhante com MSMB urinária e coloração MSMB no tecido da próstata benigno reforça a associação causal entre a expressão MSMB e câncer de próstata. Dentro da próstata MSMB Acredita-se que regulam a apoptose através de receptores de superfície celular, MAP quinase AKT e [24], [25]. Nós hipótese de que a expressão reduzida MSMB em homens com o alelo de alto risco pode reduzir a apoptose das células da próstata e, finalmente, promover o crescimento da próstata menos controlada. A perda de uma importante via tal regulamentação poderia promover tumorigénese e fornecer uma explicação para um risco aumentado de desenvolver câncer de próstata enquanto teve pouco efeito sobre o resultado, uma vez câncer se desenvolveu [17].
Nossos resultados levantam a possibilidade de que urinária MSMB relacionado com o genótipo pode ser um biomarcador útil para o rastreio para o risco e o desenvolvimento do cancro da próstata. Isso precisa ser mais estudado para atingir aqueles homens com risco aumentado para o aumento da vigilância e intervenção precoce e identificar os homens com câncer de próstata.
Informações de Apoio
Figura S1.
(A) No total, 168 doentes com tumores foram estudadas, mas nem todos os pacientes tinham de tecido, de ADN e de urina disponível. A partir da coorte tinha tecido 168 que incluiu benigno o qual foi utilizado na Figura 1. 145 pacientes tinha tecido e ADN e foram incluídos na Figura 2. 89 pacientes tiveram também uma amostra de urina e poderia ser usada para o ensaio ELISA representado na Figura 3. (B ) os detalhes das coortes tumor benigno e utilizados no estudo
doi: 10.1371. /journal.pone.0013363.s001
(0.73 MB EPS)
Figura S2.
MSMB é específico da próstata em tecidos normais e tumorais. Um tecido multi-normais TMA foi corada para MSMB usando immunohostochemistry e uma Autostainer Bondmax. A matriz continha vários núcleos a partir dos seguintes tecidos; pele, da mama, da glândula tiróide, esófago, rim, bexiga, pulmão, cólon, fígado, ovário, útero e estômago. Imagens representativas de testículos (tumor seminoma), de mama e de próstata são mostrados. coloração MSMB é marrom, núcleos são azul e doi:. 10.1371 /journal.pone.0013363.s002
(7.19 MB EPS)
Figura S3.
A correlação entre o genótipo e idade /PSA no diagnóstico e coloração imuno-histoquímica e idade /PSA no momento do diagnóstico. N = número de indivíduos em cada grupo examinado. Os valores de p foram calculados usando um 1-way ANOVA com uma correcção de Kruskal-Wallis
doi:. 10.1371 /journal.pone.0013363.s003
(1,21 MB EPS)
Figura S4.
(A) MSMB níveis urinários foram comparados através de ELISA e um teste t de duas caudas. (B) valores MSMB urinários foram analisados de acordo com a idade do indivíduo (anos) no momento da coleta da amostra. medições (C) de PSA para a coorte benigna estratificados de acordo com o genótipo rs10993994. (D) urinária MSMB não altera com mutações de BRCA. homens benigna na coorte 3 foram genotipadas quanto a mutações em genes BRCA 1 e BRCA 2 que são conhecidos por conferir risco de desenvolver cancro da próstata. genótipo BRCA foi comparado com MSMB urinária. Controle – nenhuma mutação, BRCA 1 – mutação no BRCA 1, BRCA 2 -. Mutação no BRCA 2. Para todos os gráficos n = número de amostras analisadas e os valores de p foram calculados usando um 1-way ANOVA com correção de Kruskal-Wallis
doi: 10.1371 /journal.pone.0013363.s004
(2.03 MB EPS)
Reconhecimentos
Nós gostaríamos de agradecer ao Dr. William J. Howat ea Histopatologia /ISH Facility, Research UK Research Institute Cambridge Cancer pela ajuda com a imuno-histoquímica MSMB. Gostaríamos também de agradecer ao Cancer Research UK Cambridge Research Institute Bioinformática Núcleo de assistência estatística. Estamos muito gratos ao Instituto Nacional de Centro de Investigação Research Cambridge Health Biomedical Núcleo Bioquímica Ensaio de laboratório para assistência com os ensaios bioquímicos.