Abstract
O câncer de esôfago foi o quinto câncer mais comumente diagnosticado ea quarta principal causa de morte relacionada ao câncer na China em 2009 . fatores genéticos podem desempenhar um papel importante na carcinogênese do carcinoma epidermóide de esôfago (CEE). Foi realizado um estudo caso-controle de base hospitalar para avaliar dez
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polimorfismos de marcação de nucleotídeo único (SNPs) sobre o risco de ESCC. Seiscentos e vinte e nove casos CICAc e 686 controles foram recrutados. Os genótipos foram determinados usando o método da reacção de detecção de ligação. Em analisa o único locus, houve uma diferença estatisticamente significativa da fronteira em freqüências genotípicas de
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rs1565684 T C SNP entre os casos e os controles (
p
= 0,057). O
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genótipo rs1565684 CC foi associado com um limite de risco significativamente aumentado de ESCC (CC
vs
TT:. OR ajustado = 1,77, 95% CI = 0,97-3,21,
p
= 0,063 e CC
vs
TT /TC:. OR ajustado = 1,68, 95% CI = 0,93-3,04,
p
= 0,085). A associação foi evidente entre os pacientes idosos e pacientes que nunca bêbado. Após a correção de Bonferroni, em todos os modelos de comparação,
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rs1565684 T C SNP não foi associada a risco ESCC (
p Art 0,05). Para os outros nove
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SNPs, após a correção de Bonferroni, em todos os modelos de comparação, os nove SNPs também não foram associados com o risco ESCC (
p Art 0,05). Assim, nove
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marcação SNPs não foram associados com risco de ESCC.
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rs1565684 T C SNP pode desempenhar um papel na ligeira CICAc etiologia. Adicionais estudos, maiores e caracterização biológica específica de tecido são necessários para confirmar os resultados atuais
Citation:. Wang L, Tang W, Chen S, Sun Y, Fan Y, Shi Y, et al. (2014)
N-acetiltransferase 2
polimorfismos e risco de câncer de esôfago na população chinesa. PLoS ONE 9 (2): e87783. doi: 10.1371 /journal.pone.0087783
editor: Qing-Yi Wei, Cancer Institute, Duke, Estados Unidos da América
Recebido: 03 de novembro de 2013; Aceito: 01 de janeiro de 2014; Publicação: 19 de fevereiro de 2014
Direitos de autor: © 2014 Wang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiado em parte pela National Natural Science Foundation da China (81370001, 81371927, 81101889, 81000028), província de Jiangsu Natural Science Foundation (BK2010333, BK2011481), Fundação para o Desenvolvimento social da Zhenjiang (SH2010017), talentos Changzhou Jovens e Fundação Ciência-Tecnologia de Serviços de saúde (QN201102), Hospital Coligadas Popular da Universidade fundo de Jiangsu (Y200913) e da Universidade de Jiangsu medicina clínica fundo de ciência e tecnologia para o desenvolvimento (JLY20120004). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer de esôfago foi a quarta principal causa de morte por câncer e o quinto câncer mais comumente diagnosticado na China em 2009 [1]. Fatores genéticos, tais como polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs), pode desempenhar um papel importante na carcinogênese do carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) [2].
N-acetiltransferase 2 (NAT2) é uma enzima que desempenha um papel essencial no metabolismo de carcinogéneos potenciais diferentes. NAT2 é expresso principalmente no fígado e tracto gastrointestinal humano. O gene de
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está localizado na 8p21.3-23.1 e codifica uma proteína de 290-amino ácido, NAT2 [3].
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é polimórfico, e pensava-se que a alteração NAT2 estado de acetilação causada pela
NAT
polimorfismos diminuição da atividade enzimática e resultar em falta de eficiência de desintoxicação, o que poderia levar a um aumento na suscetibilidade ao câncer [ ,,,0],4]. Tem sido relatado que
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polimorfismos e /ou a sua interacção com o tabagismo está associado com vários tipos de doenças malignas.
A variação genética da
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pode levar a diferenças na taxa de metabolismo arilamina e, consequentemente, aumentar o risco de câncer [5]. Os substratos para NAT2 que estão envolvidas na carcinogénese, são representadas principalmente por aminas heterocíclicas e anéis de hidrocarbonetos aromáticos policíclicos encontrados na carne cozida ou fumado [6] e fumaça de cigarro [7].
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variações genéticas podem contribuir para o desenvolvimento de CICAc. Em um estudo de caso-controle de base hospitalar, realizamos análises de genotipagem de dez
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marcação SNPs em 629 casos CICAc e 686 controles em uma população chinesa.
Materiais e Métodos
a aprovação ética do protocolo do estudo
o Conselho da Universidade de Jiangsu (Zhenjiang, China) Review aprovou este estudo de caso-controle de base hospitalar. Nós cumpriram com a Declaração da Associação Médica Mundial de Helsinki em relação à conduta ética da pesquisa envolvendo seres e /ou animais humanos. Todos os indivíduos fornecidas por escrito, o consentimento informado para ser incluído no estudo.
pacientes e controles
Seiscentos e vinte e nove pacientes com câncer de esôfago foram consecutivamente recrutados Hospital Popular afiliada da Universidade de Jiangsu e Affiliated Hospital da Universidade de Jiangsu (Zhenjiang, China) entre outubro de 2008 e dezembro de 2010. Todos os casos de câncer de esôfago foram diagnosticados como CICAc patologicamente. Os critérios de exclusão foram pacientes que tinham tido anteriormente: câncer; qualquer metástase de câncer; radioterapia ou quimioterapia. Os 686 controles foram pacientes sem câncer e foram pareados com os casos em relação à idade (± 5 anos) e sexo. Eles foram recrutados de dois hospitais mencionados acima durante o mesmo período de tempo. A maioria dos controles foram admitidos em hospitais para o tratamento de trauma.
entrevistadores treinados, utilizando um questionário pré-testado, questionou cada assunto pessoalmente para obter informações sobre dados demográficos (idade, sexo) e afins fatores de risco (incluindo tabagismo e consumo de álcool). Depois da entrevista, de 2 ml de amostras de sangue venoso foram recolhidas de cada sujeito. Indivíduos que fumavam um cigarro por dia para 1 ano, foram definidos como “fumantes”. Os indivíduos que consumiam mais de três bebidas alcoólicas por semana durante 6 meses foram considerados “consumidores de álcool”
Isolamento de DNA, a seleção SNPs e genotipagem por reacção de detecção de ligação
As amostras de sangue. foram coletadas de pacientes em uso de Vacutainers e transferido para tubos alinhados com ácido tetra-acético etilenodiamina (EDTA). O ADN genómico foi isolado a partir de sangue total com o DNA QIAamp sangue Mini Kit (Qiagen, Berlim, Alemanha) [8]. Nós usamos uma estratégia de marcação baseada em bloco para encontrar a marcação SNPs utilizando Haploview 4,2 software, de acordo com o banco de dados HapMap (https://www.hapmap.org/, fase II Nov08, em conjunto NCBI B36, B126 dbSNP; população: chinesa Han população); menor freqüência do alelo (MAF) ≥0.05, Hardy-Weinberg (HWE)
p
≥0.05 e chamar taxa de ≥95%), com base em pares de desequilíbrio de ligação r
2 limite de 0,8. Ten
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marcação SNPs foram assim selecionado. As amostras foram genotipados usando o método de reacção de detecção de ligação (LDR), com o apoio técnico do Shanghai Biowing Applied Biotechnology Company [9], [10]. Para controle de qualidade, análises repetidas foram feitas por 160 (12,17%) amostras selecionadas aleatoriamente com alta qualidade DNA.
Análises Estatísticas
As diferenças entre as distribuições de características demográficas, variáveis selecionadas e genótipos de
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variantes entre os casos e controles foram avaliados usando o
χ
2 de teste. As associações entre os dez SNPs e risco de ESCC foram estimados pelo cálculo da odds ratio (OR) e seus intervalos de confiança de 95% (IC), utilizando análises de regressão logística para as RUP brutos e ajustados RUP quando o ajuste para idade, sexo, tabagismo e estado bebendo . O processo de correcção de Bonferroni foi aplicada por causa do número de comparações. A HWE foi testado por um bem-of-fit
χ
2 teste para comparar as freqüências genotípicas observadas para as frequências esperadas entre os indivíduos do grupo controle. Todas as análises estatísticas foram realizadas com o SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, EUA).
Resultados
características da população de estudo
Características de casos e controles incluídos no estudo estão resumidos na Tabela 1. os casos e controles parecia ser adequadamente compensada na idade e sexo, conforme sugerido pelas
χ
2 testes. Como mostrado na Tabela 1, foi detectada diferença significativa no estado entre os casos e os controlos de fumar, e taxa de beber foi maior em pacientes CICAc do que em indivíduos de controlo. A informação primária para oito genotipados SNPs estava na Tabela 2. As taxas de concordância de análises repetidas foram de 100%, exceto
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rs11996129 T C (157/160, 98,13%), rs1565684 T C (159/160 , 99,38%) e rs1799930 G A (159/160, 99,38%). MAF em nossos controles foi similar ao MAF para o chinês no banco de dados para todos os SNPs. As freqüências genotípicas observadas para estes dez polimorfismos nos controles estavam todos em HWE exceto
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rs4540438 A . C (
p
= 0,015) (Tabela 2)
Associações entre NAT2 marcação polimorfismos e risco de ESCC
a distribuição dos genótipos de
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rs1565684 T C, nos casos e os controles são apresentados na Tabela 3. na única analisa lugar, houve uma diferença estatisticamente significativa limítrofe em freqüências genotípicas de
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rs1565684 T C SNP entre os casos e os controles (
p
= 0,057). Quando o
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genótipo rs1565684 TT homozigoto foi usado como grupo de referência, o genótipo TC não foi associado com o risco de ESCC (TC vs. TT: OR = 1,14, 95% CI = 0,90-1,44,
p
= 0,269); o genótipo CC foi associado com um risco significativamente aumentado de ESCC (CC vs. TT: OR = 1,95, 95% CI = 1,08-3,51,
p
= 0,026). No modelo dominante, a
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TC rs1565684 /variantes CC não foram associados com o risco de ESCC, em comparação com o
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genótipo rs1565684 TT (TC /CC vs. TT: OR = CI 1,20, 95% = 0,96-1,51,
p
= 0,107). No modelo recessivo, quando o
NAT2
TT rs1565684 /genótipos CT foram utilizados como grupo de referência, o genótipo homozigoto CC foi associado com um risco aumentado de 86% da ESCC (CC vs. TT /TC: OR = 1,86, 95% CI = 1,04-3,33,
p
= 0,037) (Tabela 3). Após ajustes para idade, sexo, tabagismo e estado de beber, o genótipo CC foi associado com um limite de risco significativamente aumentado de ESCC (CC vs. TT: OR ajustado = 1,77; IC95% = 0,97-3,21,
p
= 0,063 e CC vs. TT /TC: OR ajustado = 1,68, 95% CI = 0,93-3,04,
p
= 0,085). Após a correção de Bonferroni, em todos os modelos de comparação,
NAT2
rs1565684 T C SNP não foi associada a risco ESCC (
p Art 0,05).
para os outros nove SNPs, no analisa o único locus, não houve diferença estatisticamente significativa em freqüências genotípicas destes nove SNPs entre os casos e os controles (
p Art 0,05). Análises de regressão logística revelou que nenhum desses nove sítios polimórficos foi associada com a susceptibilidade a ESCC. Em todos os modelos de comparação, os nove SNPs não foram associados com o risco de ESCC (
p Art 0,05) antes e após a correção de Bonferroni (Tabela 3)
analisa Estratificação de rs1565684 NAT2 T polimorfismos C e risco de ESCC
para avaliar os efeitos do
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rs1565684 T genótipos C no risco CICAc de acordo com diferentes idades, sexo, tabagismo e estado de consumo de álcool; foi realizada a análise de estratificação (Tabela 4). Um aumento significativo do risco de ESCC associada ao
NAT2
rs1565684 T . Polimorfismo C foi evidente entre os pacientes idosos e pacientes que nunca bebido (Tabela 4)
Discussão
neste estudo caso-controle de base hospitalar de ESCC, descobrimos que dez selecionados
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marcação não foram associados com o risco de ESCC após a correção de Bonferroni.
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genótipo rs1565684 CC foi associado com uma fronteira aumento significativo do risco de ESCC. Um aumento significativo do risco de ESCC associada ao
NAT2
rs1565684 T polimorfismo C foi evidente entre os pacientes idosos e pacientes que nunca bêbado. Para o melhor de nosso conhecimento, é o primeiro resultado positivo de
NAT2
rs1565684 T . C polimorfismo eo risco CICAc
NAT2 está envolvido no metabolismo de uma importante classe de carcinógenos do fumo do tabaco ( aminas aromáticas) e
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alelos variantes resultar na depuração lenta de aminas aromáticas. Nos seres humanos, o
gene NAT2
codifica uma enzima de fase II que desempenha um papel essencial na aminas aromáticas heterocíclicas, e hidrazinas metabolismo [11]. NAT2 influencia a desintoxicação de substâncias cancerígenas aminas aromáticas e heterocíclicas (que estão presentes no fumo do tabaco) por duas vias: a reacção de metabolismo pode resultar na desintoxicação por N-acetilação, ou bioativação por O-acetilação muitas vezes precedido por CYP450 hidroxilação [11].
relatórios de caso-controle anteriores têm produzido resultados inconsistentes em relação à associação de
NAT2
SNPs com câncer, possivelmente por causa do pequeno número de indivíduos, o que comprometeria o poder das análises estatísticas nestes estudos. No esôfago, o lento
NAT2
genótipo acetilação foi mais suscetível ao câncer de esôfago no Japão [12]. No entanto, em outro estudo, em Taiwan,
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polimorfismos não afetou o risco de câncer de esôfago, independentemente de fatores ambientais [13]. Em um estudo mais recente na Índia,
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genótipos de acetilação não influenciou a suscetibilidade ao câncer de esôfago.
NAT2
polimorfismos não modulam significativamente o risco de câncer após a interação com fatores ambientais, tais como o tabaco, álcool ou exposição ocupacional [14]. Em outro estudo no Vale da Caxemira, nenhum dos três
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alelos polimórficos (rs1799929, rs1799930 e rs1799931) foi encontrado para ser associados de forma independente com o risco de esôfago e cancros gástricos [15], que também estava de acordo com nossos resultados. meta-análise também sugeriu que
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genótipos são não associadas com o cancro do pulmão [16], câncer gástrico [17], o cancro da mama [18], o câncer de próstata [19] e câncer oral [20].
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rs1565684 T C está em desequilíbrio de ligação com outro importante SNP
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rs4345600 A G (NS 12, -9306 A G) (r
2 = 0,845) em população Han Pequim chinês. Embora
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rs1565684 T C SNP é funcional utilizando SNP sites de previsão de função (https://snpinfo.niehs.nih.gov/snpinfo/snpfunc.htm e https://www.regulomedb.org/) . A etiologia da
NAT2
rs1565684 T C SNP ainda não é bem conhecida e precisa de uma investigação mais aprofundada
Este caso-controle estudo teve várias limitações.. Primeiro, os pacientes e controles foram inscritos de hospitais; viés inerente pode ter resultado em resultados espúrios. Em segundo lugar, o poder estatístico do nosso estudo foi limitado por causa do tamanho da amostra moderado e ausência de uma coorte de validação; são necessários mais estudos de replicação. Terceiro, a infecções virais e parâmetros imunológicos informações não estavam disponíveis, o que restringe o poder de nossas análises. Finalmente, nós não obter informações detalhadas sobre a metástase do câncer e sobrevivência, que restringiu novas análises dos papéis do
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polimorfismos em progressão CICAc e prognóstico.
Em conclusão, nosso estudo fornece evidências que
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SNPs marcação não pode contribuir para o risco de ESCC. Maiores estudos bem desenhados são necessários para confirmar os resultados atuais.
Reconhecimentos
Agradecemos a todos os pacientes que participaram deste estudo. Queremos agradecer Dr. Yiqun Chen (Biowing Applied Biotechnology Company, Xangai, China) para suporte técnico.