Abstract
Fundo
Além de seus efeitos anti-inflamatórios, cinnamaldehyde tem foram relatados como tendo actividade anti-cancerígena. Aqui, nós investigamos o seu impacto sobre as células do sistema imunológico.
Métodos
A activação do factor nuclear-kB por cinamaldeído (0-10 ug /ml) sozinha ou em combinação com lipopolissacarídeo foi avaliada em humanos THP1XBlue a linha de células monocíticas e em células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC). A proliferação e a secreção de citoquinas (IL10) e TNFa foi determinado em células imunitárias primárias e as linhas de células humanas (THP1, linhas de células Jurkat E6-1 e Raji) estimuladas com isoladamente ou em conjunto com lipopolissacárido cinamaldeído. O óxido nítrico foi determinada em células de ratinho RAW264.7. Além disso, diferentes PBMC tratadas foram coradas para CD3, CD20 e AnnexinV.
Resultados
As baixas concentrações (até 1 ng /ml) de cinamaldeído resultou em um ligeiro aumento na ativação do fator-kB nuclar , enquanto que concentrações mais elevadas levou a uma diminuição dependente da dose da activação do factor nuclear kB-(até 50%) em células THP1 estimuladas por lipopolysachharide e PBMC. Por conseguinte, o óxido nítrico, interleucina 10, bem como a secreção de proliferação celular foram reduzidos em células estimuladas RAW264.7-lipopolysachharide, PBMCs e THP1, Raji e Jurkat E6-células imunológicas na presença de cinamaldeído numa forma dependente da concentração. Citometria de fluxo e PBMC revelou que CD3 + foram mais afetados que CD20 + células a apoptose por cinnamaldehyde.
Conclusão
Nós atribuímos as propriedades anti-inflamatórias do cinnamaldehyde à sua capacidade de bloquear fator nuclear-kB activação de células imunes. O tratamento com cinamaldeído conduziu à inibição da viabilidade celular, proliferação e apoptose induzida de uma maneira dependente da dose no primário e imortalizadas de células imunitárias. Portanto, apesar de sua propriedade anti-cancerígeno descrito, o tratamento com cinnamaldehyde em pacientes com câncer pode ser contra-indicada devido à sua capacidade de inibir a ativação de células imunes
Citation:. Roth-Walter F, Moskovskich A, Gomez-Casado C, Diaz-Perales A, Oida K, Cantor J, et al. (2014) Immune supressora Efeito de cinamaldeído devido à inibição da proliferação e indução de apoptose em células Imunes: Implicações no cancro. PLoS ONE 9 (10): e108402. doi: 10.1371 /journal.pone.0108402
editor: Stephen J. Polyak, da Universidade de Washington, Estados Unidos da América
Recebido: 21 de março, 2014; Aceito: 28 de agosto de 2014; Publicação: 01 de outubro de 2014
Direitos de autor: © 2014 Roth-Walter et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão disponíveis aqui para Fig 1: https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1159002, aqui para Fig 2: https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1162655 , aqui para Fig 3: https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1162660, e aqui, por Fig. 4: https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1162666
Financiamento: o estudo foi apoiado pelo Fundo de Ciência austríaco (FWF) concessão P 23398-B11, e conceder-W1205-B09 para JS. CGC foi apoiado por uma bolsa de formação do Governo espanhol (programa FPI, MICINN-MINECO). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
a canela é amplamente utilizado na indústria de fabrico tal como um agente de especiarias e aromatizantes, mas também é um composto importante na medicina tradicional à base de plantas. O óleo essencial da casca de canela é constituído por 80% de cinamaldeído [1] e o extracto aquoso da especiaria canela foi atribuída com propriedades antioxidantes [2], [3]. Cinamaldeído (CA) é um composto bioactivo que foi identificado ter anti-bacteriana [4], [5], anti-inflamatório [6], [7], hipoglicémica [8], anti-mutagénicas [9], [10 ] e actividade anti-tumorigénica. Além disso, demonstrou-se ser anti-proliferativa e pró-apoptótica em várias linhas de células de cancro in
in vitro
[11] – [15]. A propriedade anti-cancerígenos por CA é conseguido por despolarização mitocondrial [16] que conduzem a espécies reactivas de oxigénio elevadas, a activação de proteínas da família Bcl-2 pró-apoptóticos, caspase-3 e proteínas quinases activadas por mitogénio [16], [17] bem como a inibição do NF-kB e AP-1 atividade [15], [18].
compostos que possuem ambos os anticorpos anti-cancro, bem como propriedades anti-inflamatórias como o CA pode, portanto, proporcionar um instrumento terapêutico atractivo para terapia do cancro. É bem conhecido, que a inflamação crónica é um gatilho para a promoção de cancro. No entanto, em um tumor estabelecido um ambiente imuno-supressora já existe e ainda mais imuno-supressão conduz à promoção de tumores [19] – [23]. A este respeito, a morte ou a acumulação de células dendríticas disfuncionais [24], [25], downregulation de moléculas HLA de classe I [26], [27] e o aumento do número de células T reguladoras atenção [28] no interior dos tumores ganharam. Imunossupressão no ambiente do tumor conduz a proliferação reduzida de células T periféricas
in vitro
, que se correlaciona com um resultado mais negativo em doentes com cancro [29]. Consequentemente, a estimulação com sucesso do sistema imunitário em resultado da terapia do cancro tem sido mostrado para reduzir a reincidência da doença e para melhorar a sobrevivência [30].
Assim, várias estratégias de imunoterapia do cancro têm surgido nos últimos anos para combater imunossupressora factores e de criar um ambiente anti-tumoral. Abordagens em imunoterapia anti-câncer ativo incluem: 1) a introdução de antígenos ou derivados associados a tumores do mesmo como vacinas em um contexto imunogênica para quebrar a tolerância tumor; [31] 2) isolamento de células imunes de doentes com cancro, seguido por pulsação antigénio e /ou a estimulação
ex vivo
antes de re-infusão no paciente [32], bem como 3) bloqueando moléculas imunossupressoras como T citotóxicos antigénio associado a linfócitos 4 (CTLA4), e programados proteína de morte de célula de 1 (PD1) com anticorpos monoclonais [33].
As propriedades anti-tumorigénica, que até agora têm sido atribuídas a cinamaldeído, foram deduzidas a partir de modelos concentrando-se em células cancerosas. No entanto, considerando a importância de células do sistema imunológico que se infiltram no tumor, objetivamos neste estudo para avaliar criticamente os seus efeitos sobre primário e imortalizado células do sistema imunológico.
Materiais e Métodos
declaração Ética
o estudo foi aprovado pelo comitê de ética institucional da Universidade médica de Viena (EK-Nr. 949/2011) e consentimento informado por escrito foi obtido de todos os assuntos antes de sua participação no estudo. voluntários saudáveis, sem alergia relatada a canela doou 15 ml de sangue.
isolamento e linhas celulares PBMC
periféricos células mononucleares do sangue (PBMC) de 6 voluntários saudáveis, sem alergia relatada a canela foram isolados a partir sangue total usando Ficoll-Paque centrifugação em gradiente de densidade, como descrito anteriormente [34], [35].
A linha THP1-XBlue monocítica humana de células, obtido a partir de Invivogen (San Diego, CA, EUA), bem como THP1 , Jurkat E6-1, Raji (todas da ATCC, Rockville, MD, EUA) e linhas celulares de células mononucleares humanas do sangue periférico (PBMCs) foram mantidas em suspensão em meio RPMI-1640 (Gibco Invitrogen, Darmstadt, Alemanha) contendo 10% inactivado pelo calor soro fetal de vitelo (FCS), 1% de penicilina /estreptomicina e 1% de L-glutamina. De acordo com o protocolo do fabricante, 200 ug /ml de zeocina foram adicionadas a propagação de células THP1-XBlue. RAW264.7 de macrófagos de murídeo, adquiridas a partir da ATCC foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco. (DMEM; Gibco Invitrogen, Darmstadt, Alemanha) suplementado com 10% de FCS e 1% de penicilina /estreptomicina
estimulação celular
Todas as células foram estimuladas com o CA (SAFC fornecimento de produtos químicos /Sigma Aldrich, Steinheim, Alemanha) em um intervalo de concentração de 0 até 10 ug /ml, com ou sem 5 ug /ml (15 000 EU /ml) de LPS de
E. coli
055: B5 (Sigma, St. Louis, MO, EUA)
extração Nuclear
PBMC (1 × 10
6 células /poço) foram semeadas em um. placa de 48 poços e estimuladas com CA (0 a 10 ug /ml) sozinha ou em combinação com LPS (5 ug /ml, 15 000 UE), durante 24 h. Subsequentemente, os extractos nucleares foram obtidos utilizando um comerciais disponíveis reagentes de extracção nuclear e de acordo com o protocolo do fabricante (Thermo Scientific, Pierce, Rockford, IL). Em resumo, as células foram lavadas em PBS e lisadas em citoplasmática reagente de extracção I e II. Após a remoção fracção citoplasmática, proteínas nucleares foram extraídas com reagente de extracto nuclear e armazenado a -80 ° C.
fosfo-p65 NFkB ensaio
fosfo-p65 NFkB foram determinadas das fracções nucleares usando um fosfo p65 -NFkB ELISA, (InstantOne ELISA, eBioscience, San Diego, CA) de acordo com o protocolo do fabricante. Resumidamente, os extractos nucleares, uma mistura cocktail de anticorpos foram adicionados durante uma hora antes da placa de lavagem e adição de reagente de detecção durante 30 minutos, parar a reacção e medindo a densidade óptica a 450 nm.
ensaio da activação de NF-kB
ensaios de activação do NF-kB foram realizadas utilizando células repórter THP1-XBlue, que expressam estavelmente um repórter de fosfatase alcalina segregada NF-kB /AP-1 induzível (SEAP), de acordo com o protocolo da empresa. Em resumo, 1 x 10
5 células /poço foram semeadas numa placa de 96 poços e estimuladas com CA (0 a 10 ug /ml) sozinha ou em combinação com LPS (5 ug /ml, 15 000 UE /ml ) durante 24 h. a actividade de NF-kB foi determinada adicionando quanti-Blue como um substrato de fosfatase alcalina segregada nos sobrenadantes e outra incubação durante 8 h a 37 ° C e 5% de CO
2. Subsequentemente, a densidade óptica (OD) foi medida a 625 nm utilizando um espectrofotómetro Tecan InfiniteM200 PRO (Tecan Group Ltd, Männedorf, Suíça).
nítrico determinação óxido
O óxido nítrico (NO) de concentrações Os sobrenadantes foram determinadas usando o reagente de Griess (Sigma Chemical Co. St. Louis, MO, EUA). células RAW264.7 (1 × 10
6 células /ml) foram incubadas com o CA (0 a 10 ug /ml) na presença ou na ausência de LPS (5 ug /ml) durante 24 h. Subsequentemente, foi adicionado um volume igual de reagente de Griess aos sobrenadantes. Após 10 minutos de incubação, OD foi medida a 550 nm. Zero a 100? M de nitrito de sódio (NaNO
2; Sigma) foi utilizada como padrão para calcular NO-níveis
análise de citocinas
RAW264.7 células e PBMC humanos (1 ×. 10
6 e 2 × 10
5 células /mL, respectivamente) foram incubados com o CA (0-10 ug /ml) na ausência ou na presença de LPS (5 ug /ml, 15 000 UE /ml) . Os sobrenadantes sem células foram recuperados e armazenados a -80 ° C até à sua utilização. As concentrações de IL-10 e TNF-α nos sobrenadantes foram determinados por ELISA, de acordo com o protocolo do fabricante (eBioscience, San Diego, CA).
A viabilidade celular ensaio
A viabilidade celular foi determinada com EZ4U ( Biomedica, Áustria), de acordo com o protocolo do fabricante. Duas centenas de microlitros As suspensões de células (THP1, 1 × 10
4 células /poço; Raji, 2 × 10
4 células /poço; Jurkat E6-1, 3 × 10
4 células /poço; e PBMCs humanos, 1 x 10
5 células /poço) foram incubadas em placas de 96 poços com CA (0-10 ug /ml) na ausência ou presença de LPS (5 ug /ml, 15 000 EU /ml ) durante 24 h. Resumidamente, 20 uL de solução de substrato foi adicionado a cada poço e incubou-se durante 3 h a 37 ° C, 5% de CO
2, antes da medição OD a 465 nm com um comprimento de onda de referência de 620 nm.
a análise de citometria de fluxo
As células foram coradas para a Anexina V como um marcador para a apoptose precoce e analisadas por FACS. PBMC humanas Resumidamente, isoladas de fresco (2 x 10
5 células) foram incubadas com o CA (0-10 ug /ml) na ausência ou presença de LPS (5 ug /ml, 15 000 UE /ml) durante 24 h antes de coloração com anti-CD3-APC (clone SK7) e anti-CD20-PE (clone 2H7) durante 30 min a 4 ° C (ambos os anticorpos eram do eBioscience e utilizado a uma concentração de 1 ul /50 ul de tampão de coloração). Subsequentemente, AnnexinV-FITC (1 ul /amostra, eBioscience, San Diego, CA, EUA) em tampão de ligação (HEPES 10 mM, NaOH a 140 mM, CaCl 2,5 mM
2, pH 7,4) foram adicionados às células durante 15 minutos à temperatura ambiente. Aquisição e posterior análise foi realizada em FACSCantoII (BD Biosciences).
A análise estatística
A análise estatística foi realizada utilizando o pacote de software GraphPad Prism versão 6. Os valores foram analisados utilizando uma análise de variância (ANOVA) seguido pelo teste de gama múltipla de Duncan. Os valores de p 0,05 foram considerados significativos. Todos os resultados foram expressos como média ± SD.
Resultados
O efeito de cinamaldeído em NF-kB /AP-1 ativação é dependente da concentração
O primeiro avaliou a contribuição de cinamaldeído na activação do NF-kB. CA foi reportado para amortecer a activação de NF-kB após estimulação com LPS, consequentemente, na qualidade de anti-inflamatório [36], [37]. Do mesmo modo, também se observou inibição de NF-kB /AP-1 até 65% após a estimulação por LPS em células THP1 repórter-XBlue, quando foram utilizadas concentrações superiores a 1 ng /ml. No entanto, em contraste com outros relatórios [36], [38] – [40], que estimulou células também com concentrações mais baixas de aldeído cinâmico e observou-se um aumento significativo (acima de 40%, utilizando 0,1 ug /ml de CA) no NF-kB /AP-1 de activação quando comparado com LPS sozinho (Fig. 1A). Assim, baixas concentrações de CA activado ainda NF-kB /AP-1 via, enquanto que as concentrações mais elevadas inibiu esta via.
A. células THP1-XBlue ou B. PBMC foram tratadas com diferentes concentrações de CA sozinho (barras brancas) ou em combinação com estimulação por LPS (barras pretas), durante 24 h. As barras representam os dados de A. três experimentos independentes normalizado para LPS só grupo e B. três seres humanos. Dados apresentados como média ± SD, * p . 0,05
Nós também avaliou a ativação NF-kB em células imunitárias humanas utilizando células mononucleares do sangue periférico (PBMC). Também aqui muito baixa concentração de CA resultou em posterior activação do NF-kB como medido por detecção de fosfo-p65 nas fracções nucleares de CMSPs estimuladas por LPS de dadores saudáveis e um aumento do CA-concentração de acima de 1 ug /ml resultou em dificultando NF-kB. Assim, CA foi capaz de inibir a activação de NF-kB quando utilizando imortalizada, bem como células primárias imunes de origem humana em concentrações acima de 1 ug /ml.
cinamaldeído afecta a secreção de citocina e de óxido nítrico em células imunológicas estimuladas com LPS
Em seguida, analisou a activação de células imunitárias estimuladas com LPS pela CA. Quando as PBMC estimuladas com LPS foram incubadas com o CA para as medições de libertação de citocinas, as concentrações mais elevadas do que 1 ug /ml a secreção de citoquina inibida de citocinas imunossupressoras como IL10 (Fig. 2A), bem como das citocinas inflamatórias como a TNF-α (Fig. 2B). Concentrações inferiores a 1 ug /ml não modificou os níveis de IL10 nos sobrenadantes (dados não mostrados). Além disso, não há de todo citocinas foram detectados, quando as células foram incubadas só com CA.
PBMC humanas foram incubadas com concentrações crescentes de CA na presença (círculos pretos) ou na ausência (triângulo aberto) de LPS durante 24 h e os sobrenadantes foram analisados para IL-10 A. B. e níveis de TNF-a. Dados apresentados como média ± SD de PBMC de três temas. C. A secreção de óxido nítrico foi determinada em RAW264.7, estimulado com o aumento da concentração de CA na presença ou na ausência de LPS, após 24 h. Os dados representativos a partir de uma de três experiências independentes realizadas em triplicado. Dados apresentados como média ± DP; * P 0,05, em relação ao controle amostras em cada grupo
Um padrão similar como para a secreção de citocinas foi oberserved, ao analisar NO efluxo em células de macrófagos de murino estimulados com LPS (RAW264.. 7). Também aqui, nenhuma secreção foi prejudicada (até 35%) quando as células foram incubadas com concentrações mais elevadas de Ca ( 1 ug /ml). No entanto, o aumento não mais, em nenhum nível foi observada utilizando concentrações mais baixas. Nenhuma secreção não foi detectado nas células sem estimulação com LPS (Fig. 2C).
cinamaldeído afecta negativamente a viabilidade e a proliferação de células imunes
Os dados até agora mostraram que, independentemente de citocinas (pró -OR anti-inflamatória, o TNF-α ou IL-10), de moléculas de sinalização (nO), bem como vias (NF-kB /AP-1) investigaram, uma diminuição na activação e a produção foi observada quando se utiliza concentrações mais elevadas do que um CA ug /ml (= 8 uM). Portanto, o próximo testado, se os resultados observados em que, devido à viabilidade reduzida em células imunes tratados com AC.
Tal como representado na Fig. 3, a baixa concentração de CA ( 1 ug /mL) conduziu a um aumento significativo na proliferação de PBMC humanas primárias, semelhante à concentração dependente de NF-kB do perfil de CA (Fig. 1). Uma tendência semelhante foi também observada quando se utiliza células imortalizadas como as células de monócitos humanos, como THP1, a linha celular B Raji e a linha de células T de Jurkat E6-1, embora esta não atingiu significância estatística. (THP1, células B de Raji, Jurkat E6-1 e PBMC humanas) No entanto, todas as células do sistema imunológico testados tinham em comum que a maior concentração de CA ( 1 ug /ml) reduziu significativamente a viabilidade celular e proliferação. Por isso, os nossos dados indicam que a capacidade supressora imune descrito por CA é devido à sua capacidade para reduzir a viabiltiy de células imunes em concentrações mais elevadas do que 1 ug /ml.
. PBMC humanas, células B. THP-1, Jurkat E6-1 C. e D. Raji foram incubadas com concentrações crescentes de CA na presença (barras negras) ou ausência (barras brancas) de LPS. As células viáveis foram detectadas utilizando um ensaio baseado em tetrazólio. As barras representam os dados de uma de três experiências independentes realizadas em triplicado. Dados apresentados como média ± SD, * p . 0,05, em relação ao controle amostras
cinamaldeído em vez afeta as células T do que as células B
Em uma próxima etapa, foi investigada a susceptibilidade de células B e T em PBMC-preparativos para o CA através de citometria de fluxo. PBMC foram coradas para CD3 (receptor de células T) como um marcador para as células T, CD20 (antigénio de linfócito B), como um marcador de células B e para o marcador de apoptose Anexina V. início Como representado na Fig. 4, a concentração acima de 1 ug /ml de CA levou a apoptose de ambas as células T (Fig. 4A) e células B (Fig. 4B) de uma forma dependente da dose, enquanto que o carregamento com concentrações mais baixas não conseguiu alterar o número de células. O tratamento com concentrações elevadas de Ca (5 e 10 ug /ml) aumentou o número de células T apoptóticas até 8 vezes, enquanto que aumento de células B apoptóticas era de 3,5 vezes em comparação com controlos não tratados.
PBMC humanas foram incubadas com CA e coradas para CD3, CD20 e AnnexinV e analisadas por citometria de fluxo. Os dados de três experiências independentes são apresentados como média ± SD de AnnexinV positiva A. células CD3 + e B. CD20 + células.
Discussão
CA tem sido atribuído muitas propriedades farmacológicas, tal como sendo anti-inflamatórios, anti-ulcerogénica, antipirético, antimicrobiana, anti-diabético, mas também ter actividade anti-tumor [39]. Nós destinados a investigar estas propriedades benéficas prodigiosas proclamadas em maior detalhe, em particular com o foco para compreender seu impacto em células do sistema imunológico e avaliando assim a sua possível contribuição indireta para a progressão do câncer. O cancro é definido como o crescimento descontrolado de células malignas, o que é causado em 90-95% por factores ambientais, tais como poluentes, dieta, exposição ao sol, infecções, inactividade física e obesidade, e apenas em 5-10% pode ser ligado a genética defeitos [41]. A probabilidade de desenvolver cancro aumenta com a idade e tem sido associada com uma diminuição da vigilância imunológica nos idosos [42]. Na verdade, o microambiente do câncer é muito imunossupressora e, portanto, de reactivação e modulação do sistema imune é o principal objetivo de vacinas contra o câncer [43]. regimes imunomoduladores oferecem uma abordagem atraente como muitas vezes eles têm menos efeitos secundários do que os fármacos quimioterapêuticos existentes. A este respeito, o bloqueio do antigénio CTLA4 inibitório sobre as células T com anticorpos anti-CTLA4 conduz à activação de células T [44], [45] e foi provado para levar a benefícios significativos de sobrevivência em dois randomizado de fase III ensaios em doentes com melanoma avançado, enfatizando a importância da ativação imune no câncer [46], [47].
Assim, investigou-se a capacidade de imunomoduladores da CA em células do sistema imunológico imortalizadas e primário. Na primeira abordagem, foi investigado o seu impacto sobre a activação de NF-kB, uma vez que o NF-kB é activado constitutivamente num número de hematológicas e tumores sólidos e é um dos principais factores de transcrição relacionados com o cancro progressão [48], a inibição da apoptose, invasão de tecidos e metástases [49]. Assim, a inibição do NF-kB em células malignas é considerada benéfica. Fomos capazes de reproduzir os dados da literatura, que a activação de NF-kB de monócitos estimuladas por LPS imortalizadas é inibida pela adição de CA em concentrações acima de 8 uM [36] – [40], mas é interessante observou-se um aumento significativo na NF- kB activação quando foram usadas concentrações mais baixas de CA. Nós, assim, a hipótese de que um tumor micro-ambiente imunossupressor pode ser moldado quando o CA poderia ser aplicado em concentrações suficientemente elevadas. Por outro lado CA de baixa concentração, o que é conseguido por o consumo moderado de canela, activa ainda mais o sistema imunológico, embora não suficiente, para a luta contra os tumores de crescimento rápido. Por isso o consumo moderado de alimentos contendo CA em vez parece ser um profilático, em vez de um meio terapêutico. Importantemente, os nossos dados indicam que doses elevadas podem ainda ser contra-indicada.
No que diz respeito a sua biodisponibilidade cinamaldeído e o seu álcool, bem como derivado de ácido são rapidamente absorvidos a partir do intestino, metabolizada e excretada, principalmente na urina, o que parece ser independente da dose (até 250 mg /kg), espécie e sexo. As concentrações sanguíneas de cinamaldeído a seguir à administração intravenosa de 5,15, ou 25 mg /kg em ratos F344 macho e fêmea redução de uma forma bifásica [50], [51]. A fase inicial está correlacionado com o rápido aparecimento de ácido cinâmico no sangue, em que 37-60% estimado do cinamaldeído é oxidado ao ácido cinâmico em 30 min. A segunda fase, com uma meia-vida de 1,7 horas se a hipótese de que uma libertação de cinamaldeído a partir de aductos de proteína formado durante a fase inicial [52]. Em um estudo recente a administração oral de CA resultou numa biodisponibilidade de 20% [53]. Além disso, em um relatório semelhante após a administração oral, a concentração de cálcio no sangue mostraram-se 1 ug /ml de [52] ou superior a 10 ug /ml para o ácido cinâmico [54] e mantida durante 24 h, apesar da sua relativamente curta meia-vida biológica de 1,7 h.
Assim, alta concentração local de cinamaldeído e seus derivados são realizáveis
in vivo
após a ingestão e pode exercer um efeito imuno-supressor sustentado.
em nossa próxima abordagem, mais focado sobre as qualidades imuno-supressora de cinamaldeído, investigando o seu impacto sobre a secreção de citocina em PBMC primários activados com LPS. Em linha com a supressão da via de NF-kB, foi observada uma regulação negativa dependente da concentração dos mediadores inflamatórios e de regulação de TNF-α, IL10 e nenhum ser implicada no desenvolvimento e progressão de cancros diferentes [55], [56]. No entanto, o declínio proeminente na secreção de mediador de células imunitárias primárias após incubação com o CA sugeriu que isto pode ser devido a alterações na taxa metabólica. Com efeito, os nossos dados demonstram claramente que a AC conduz a uma redução acentuada da viabilidade celular de imortalizada, bem como células imunitárias primárias. A análise adicional da população de células imunitárias em seres humanos revelou que em particular as células T foram mais proeminentemente susceptíveis à apoptose induzida por CA do que as células B. Os resultados obtidos são altamente relevante, uma vez que os linfócitos T citotóxicos permanecem potentes mediadores da imunidade anti-tumoral e infiltração do tumor por células T tem sido mostrado para ser um bom factor de prognóstico em ovário, cólon, mama, renal, da próstata e cancros cervicais [43] . Além disso, há dois
in vivo
estudos, utilizando extrato de canela como um agente terapêutico câncer. Eles reportam o crescimento do tumor reduzido de melanoma de ratinho, ao alimentar extracto de canela em grandes doses (400 ng /g de peso corporal) durante 20 a 30 dias [37], [57] para ratinhos. No entanto, eles também demonstraram uma diminuição severa dos órgãos do sistema imunológico secundário, como o baço e nódulos linfáticos [28]. Nestes estudos são usadas doses muito elevadas de CA, considerando que a CA é conhecido por ter uma baixa toxicidade com uma dose letal de baixo (LDlow) por aplicação parentérica de 200 ug /g de peso do corpo [58]. A redução observada de células de crescimento rápido, como células do sistema imunológico e câncer pode, portanto, ser a característica geral da baixa toxicidade descrito da CA.
Em contraste, as preocupações cancerígenos foram aumentou Mereto et al [59], que propôs cinnamaldehyde como um promotor fraco da carcinogênese hepática devido ao seu potencial para ser clastogénico e sua capacidade de induzir micronúcleos em fígado de rato
in vivo
. Existem também um relato de caso humano, o que associado a formação de carcinoma oral após o consumo de até cinco pacotes de chiclete de canela mascar um dia em um não-fumante de 24 anos de idade [60].
Mesmo assim, em um estudo NTP dois anos conduzido em ratinhos e ratos, em que até 200 mg /kg de peso corporal de CA, foram alimentados, e que correspondem à concentração máxima de não-um nível de efeito adverso observado, para NOAEL longo efeitos a longo prazo, não há sinais de neoplasia foram observados [61]. O estudo destaca o fato de que o consumo de CA podem não ser cancerígenos quando a quantidade ingerida é moderado.
Em um CA nível molecular como um aldeído possuindo α, substituintes olefínicos p-insaturados é conhecida por formar adutos com tiol-grupos celulares mais notavelmente com sulfidrilos não proteicos, tais como a cisteína e a glutationa via adição nucleofílica ao β-carbono [62]. Assim, por células do antioxidante glutationa privando, as células são limitados na sua capacidade para neutralizar os radicais livres e os compostos reactivos de oxigénio. Mais importante, esgotando células glutationa-níveis também tem um grave impacto em seu ferro-metabolismo, o que acaba por resultar na morte das células [63]. Além disso, é conhecido por agir sobre as proteínas da membrana de plasma, como o receptor transiente potencial da subfamília canal de catião Um membro 1 (TRPA1) [64], um sensor para a irritantes ambientais, frio e esticar e em TLR4, impedindo a sua oligomerização RST4 mediante LPS-estimulação , mas não por segmentação moléculas de sinalização a jusante [40]. As consequências de inibir TLR4-oligomerização são, portanto, o comprometimento da activação de NF-kB e secreção subsequente de citocinas. De acordo com os nossos dados, mostramos aqui que não apenas as células cancerosas, mas em células imunes específicas são muito sensíveis à CA levando a inibição do NF-kB por meio da estabilização da membrana celular e prevenir a RST4 oligomerização, bem como inibir a activação adicional da imune células e liberação de citocinas. Além disso, CA apoptotosis induzida nos linfócitos, muito provavelmente por células de glutationa privando.
Uma vez que o objectivo da terapia imunitária do cancro não é para suprimir o sistema imunológico, mas a re-activar as células em repouso por modulação, que é actualmente aplicada com sucesso ao utilizar anticorpos anti-CTLA4, uma abordagem mais diferenciada para o uso de AC tem de ser preconizada para o tratamento anti-cancro, especificamente, uma vez que tem um efeito supressor imunitário pronunciada em células T, incluindo a população de células T efectoras.
os nossos dados indicam que o consumo moderado de CA é benéfico para o sistema imunitário nos organismos saudáveis, mas que o CA-tratamento em doses elevadas pode ser apenas benéfico quando se lida com cancro a partir de células hematopoéticas, como linfoma e leucemia, onde o sistema imunitário sistema já é suprimida e que representam os cancros mais comuns da infância. No entanto, o tratamento de outros tipos de células com Ca, a qual re-activação do sistema imunitário é altamente desejada, e.g. carcinomas, sarcomas ou tumores de células germinativas (ovário ou câncer testicular) pode contradizer sua aplicação.
Reconhecimentos
Gostaríamos de agradecer Ms. Anna Willensdorfer para excelente assistência técnica.