Abstract

Fundo

O câncer de próstata (PCA) é o câncer mais comum entre os homens no oeste países. Enquanto a vigilância activa é cada vez mais utilizada, a maioria dos pacientes são actualmente tratados com prostatectomia radical. A fim de evitar um excesso de tratamento, existe uma necessidade indiscutível de biomarcadores fiáveis ​​para identificar os casos potencialmente agressivos e letais. proteínas de filamento intermediário nucleares chamados laminas desempenhar um papel na organização da cromatina, a expressão do gene celular e rigidez. A expressão de lamina A está associada com mau prognóstico no câncer colorretal, mas até à data o valor prognóstico das laminas não foi testado em outros tumores sólidos.

Métodos

Nós estudamos a expressão de diferentes lamins com imuno-histoquímica em um material de tissue microarray de 501 pacientes CaP submetidos à prostatectomia radical e dissecção de linfonodos. Os pacientes foram divididos em duas categorias de coloração (baixa e alta expressão). A correlação de expressão lamina com variáveis ​​clínico-patológicas foi testado e a associação do estado lamina com recorrência bioquímica (BCR) e sobrevida específica da doença (DSS) foi ainda analisada.

Resultados

expressão baixa de lamina a associada a positividade do linfonodo (p 0,01), mas não com outras variáveis ​​clínicas e baixa expressão tinha uma associação limítrofe independente significativa com DSS (HR = 0,4; IC95% 0,2-1,0; p = 0,052). Da mesma forma, a baixa expressão lamina C associado com pior sobrevida (HR = 0,2; IC95% 0,1-0,6; p = 0,004). expressão Lamin B1 não se associou com variáveis ​​clínico-patológicas, mas de alta expressão previu independentemente BCR na análise multivariada de regressão de Cox (HR = 1,8; IC95% 1,1-2,9; p = 0,023). Baixa expressão de B2 lamin correlacionada com a positividade do linfonodo (p 0,01) e previu DSS desfavorável. (HR = 0,4; IC95% 0,2-1,0; p = 0,047)

Conclusões

Estes resultados sugerem papéis diferenciais para lamins na progressão CaP. quantidades reduzidas de lamin A /C e risco de aumento de B2 para metástases em linfonodos e doenças específicas de morte, possivelmente, através do aumento da deformabilidade nuclear enquanto a alta expressão de lamina B1 prevê a recorrência da doença

Citation:. Saarinen I, Mirtti T, Seikkula H , Boström PJ, Taimen P (2015) Roles preditivos diferenciais de A- e B-Type laminas nucleares na Prostate Cancer progressão. PLoS ONE 10 (10): e0140671. doi: 10.1371 /journal.pone.0140671

editor: Pavel Strnad, RWTH Aachen, Alemanha |

Recebido: 22 de julho de 2015; Aceito: 29 de setembro de 2015; Publicação: 15 de outubro de 2015

Direitos de autor: © 2015 Saarinen et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seu arquivo de Informações de Suporte

Financiamento: o trabalho foi apoiado pelo seguinte:. Foundation Päivikki e Sakari Sohlberg, https://www.pss-saatio.fi/, PT; Sigrid Juselius, https://www.sigridjuselius.fi/foundation/, PT; O finlandês Fundação Médica, https://www.laaketieteensaatio.fi/, PT; e no Distrito Hospital do Sudoeste da Finlândia, https://www.vsshp.fi/en/Pages/default.aspx, PT. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de próstata (PCA) é a neoplasia maligna mais comum entre os homens e uma notável desafio de saúde pública nos países ocidentais. Nos Estados Unidos, mais de 230 000 novos casos e 29 000 mortes relacionadas ACP foi prevista para ser diagnosticado em 2014 [1]. Os principais fatores de risco para CaP incluem idade, história familiar positiva e raça Africano-Americano [2]. A maioria dos doentes são actualmente tratados com prostatectomia e /ou radioterapia, enquanto radical de vigilância activa pode ser benéfica para pacientes de baixo risco. Na maioria dos casos, a doença é local e apenas ~ 7% de doentes tratados com a prostatectomia radical (RP) morrem de CaP durante um acompanhamento de 15 anos [3]. Além disso, parece claro que o tratamento de câncer de baixo grau (escore Gleason 6 ou abaixo) não confere qualquer benefício de sobrevivência quando comparado a outras causas de morte. O uso de antígeno específico da próstata (PSA) revolucionou o diagnóstico da ACP durante os últimos 25 anos e, mais recentemente rastreio PSA sistemática foi mostrado para diminuir a mortalidade relacionada-PCA [4]. No entanto, o PSA não tem a especificidade para detectar cancros clinicamente significativas e a desvantagem é over-diagnóstico de câncer que não têm efeito sobre a qualidade ea expectativa de vida se não tratada [5]. Isto por sua vez conduz a excesso de tratamento com potenciais efeitos laterais. A fim de evitar o excesso de tratamento, há uma necessidade indiscutível de biomarcadores confiáveis ​​para identificar os casos potencialmente agressivos e letais das que permanecem local.

lamins nucleares são proteínas do tipo V filamento intermediário (IF). Eles são os principais componentes da lâmina nuclear, uma malha fibrosa de proteínas que está subjacente à membrana nuclear interior [6]. Laminas são divididos em dois subgrupos, A-tipo e do tipo B laminas. Um único gene,

LMNA

, codifica lamins todos do tipo A, que incluem Lamin A, lamin C, a C2 isoforma lamin específicas do testículo e menor AΔ10 isoforma lamina. Os principais lamins do tipo B, lamin B1 e B2 lamina, são codificados por dois genes (

LMNB1

e

LMNB2

, respectivamente) [7]. Além disso, um B3 lamina específico de células germinativas é gerado a partir de

LMNB2

através de splicing alternativo [8]. Pelo menos uma lamina do tipo B é expresso em todas as células de metazoários, enquanto laminas do tipo A são expressos principalmente em células diferenciadas [7].

As laminas têm múltiplas funções no núcleo da célula. Eles proporcionam um suporte mecânico para o núcleo e desempenham um papel na replicação e reparação do ADN, transcrição, organização da cromatina e regulação de genes [7]. Numerosas mutações no

LMNA

causar um grupo de doenças ou distúrbios humanos herdados comumente chamado os laminopatias. Estes incluem, por exemplo, miopatias cardíaco e esquelético, lipodistrofia, neuropatia periférica e doença do envelhecimento prematuro conhecido como síndrome de progeria [9]. Enquanto a patobiologia fundamental destas doenças é principalmente mal compreendida, anormalidades de forma nuclear (por exemplo, hérnias e lobulações) são comumente relatados em células que transportem mutações de lamina associado à doença. Curiosamente, as mudanças morfológicas semelhantes do núcleo são frequentemente observadas em células cancerosas, incluindo as células CaP [10]. Portanto, é possível que a expressão alterada e as modificações em lamins contribuir transformação maligna em células de câncer [11].

Apenas alguns estudos retrospectivos têm comprovado a associação entre a expressão lamin alterada e evolução de pacientes. No estágio I-III de câncer colorretal (CRC), os pacientes com tumores que expressam lamina A aumentou significativamente o risco de morrer de CRC quando comparados a pacientes com lamina A tumores negativos [12]. Baseado em

in vitro

estudos, os autores concluíram, ainda, que este é devido ao aumento da motilidade celular, invasão e haste fenótipo celular como promovido pela lamin A /C. Pelo contrário, Correia et al. relatou que a perda de lamin A /C no estágio II-III de câncer de cólon está associada a recorrência da doença [13]. Em nodal difuso inativação linfoma de grandes células B do gene lamin A /C por CpG promotor ilha hipermetilação está associada a menor sobrevida [14].

O papel das laminas em CaP foi estudado mais recentemente. Utilizando espectrometria de massa (MS) e imuno-histoquímica, Skvortsov et ai. relataram a diminuição da expressão de lamina A em baixo grau (Gleason 6) tumores relativo para amostras emparelhadas de tecido histologicamente normal, enquanto um aumento da expressão foi detectada em alto risco (Gleason 8) tumores [15]. Além disso, a lamina A /C é sobre-expresso na frente invasiva de tecido CaP e promove o crescimento celular, migração e invasão através da via PI3K /AKT /via PTEN sob condições de cultura [16]. A expressão das laminas do tipo B, por outro lado, é aumentada no tecido da próstata cancerosa e correlaciona-se fortemente com a classificação de Gleason [17]. A análise MS sugere ainda que a lamina B1 é hiperfosforilada, em células PC-3 independentes de androgénio [18]. Curiosamente, regiões cromossómicas associadas ao risco de CaP localizar a microdomínios B deficientes em lâmina nuclear (LDMD) que exibem diminuição da transcrição do gene (10). Embora a natureza destas estruturas é actualmente incerto, a frequência de LDMDs correlaciona-se com a agressividade CaP linha celular, motilidade celular e de Gleason de grau [10]. Em resumo, lamins sofrer alterações significativas durante a transformação maligna, mas até o momento não está claro se qualquer uma dessas alterações tem valor preditivo no APC, especialmente no câncer de alto grau.

No presente estudo, estudamos a expressão de diferentes lamins em CaP em detalhe usando tissue microarray (TMA) material de cobertura mais de 500 pacientes tratados com prostatectomia radical e dissecção de linfonodos. Nossos resultados mostram que a diminuição da expressão de lamins Um tipo está associado a risco elevado de metástases em linfonodos e morte específica doença, enquanto a expressão aumentada de lamina B1 está associado a BCR e disseminação local. Além disso, a baixa expressão lamin B2 previu maior risco de mortalidade CaP. Nós também discutir os potenciais mecanismos biológicos celulares e sua importância para a estratificação de risco clínico.

Materiais e Métodos

O material tecidular

embebidos em parafina formalina material de tecido fixado a partir de 501 pacientes operados com prostatectomia radical e linfadenectomia pélvica limitada no Hospital Central da Universidade Turku entre janeiro de 2000 e setembro de 2005 foram utilizados para a construção dos blocos de TMA como descrito anteriormente [19]. Em resumo, 3-12 (mediana 3,0) núcleos adjacentes de 1 mm de diâmetro, foram obtidos a partir da lesão de carcinoma índice que foi considerado o mais significativo (com base no padrão de Gleason, o volume da lesão do cancro e ou extensão /extra-prostática ). Além disso, um núcleo a partir de tecido da próstata benigna histologicamente foram obtidas a partir do mesmo paciente. Estes núcleos de tecido foram transferidos dos blocos dador até ao receptor blocos TMA que continham um total de 63 núcleos por bloco, incluindo tecidos de controle de fígado normal. Todos os casos nos blocos finais TMA foram classificados com base na Sociedade Internacional de Urologia Patologia atualizado de sistema de graduação de Gleason [20]. No momento da cirurgia, sem o consentimento foi obtido dos participantes para este estudo específico. Na época do estudo, o uso de material de tecido e os dados clínico-patológicos e acompanhamento correspondentes foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital Distrital do Sudoeste da Finlândia (130/180/2008) ea Autoridade Nacional de Bem-Estar e Saúde (Valvira 394 /05.01.00.06 /2009) de acordo com a legislação nacional. As informações do paciente foi anónimos e de-identificados antes da análise.

Os dados clínicos

Nenhum dos pacientes recebeu a privação de andrógeno ou radioterapia antes ou imediatamente após a cirurgia. O acompanhamento foi realizado por exame retal e medição PSA pós-operatório pelo menos três vezes digitais durante o primeiro ano após a cirurgia e, pelo menos uma vez por ano durante os anos seguintes. Dos 501 pacientes, 158 (31%) tiveram uma recorrência bioquímica (BCR) definido como o nível de PSA de 0,2 mg /L ou acima após a cirurgia.

A encenação da APC foi realizada de acordo com a OMS pTNM sistema de classificação [21]. 28 pacientes (4,4%) morreu de CaP durante o follow-up, enquanto 39 (7,8%) morreram de outras causas. Devido ao longo intervalo de tempo entre as operações, o escore clínico inicial de cada paciente Gleason (GS) foi reavaliado pelo patologista geniturinário experiente acordo com os critérios do sistema de classificação atuais Gleason [20] usando seções hematoxilina-eosina dos espécimes de prostatectomia radical originais. Esta pontuação foi utilizado na análise de sobrevivência e é apresentado na Tabela 1.

A imuno-histoquímica e microscopia

Para realizar imunohistoquímica avaliação (IHC), parafina foi removido primeiro com xileno e os cortes foram reidratadas com a série graduada de álcool. Todos os anticorpos foram testados em blocos de teste TMA da próstata antes do uso em material final TMA, a fim de optimizar a diluição e o pré-tratamento mais adequado. desmascaramento epitopo foi realizada por microondas as lâminas de tecido, quer em tampão Tris-HCl (pH 9; lamina B1, B2 e C anticorpos) ou tampão à base de citrato (pH de 6; lamina A anticorpo) durante 10 min. Os anticorpos primários utilizados foram monoclonal de ratinho anti-lamina A (1: 1000, clone 133A2, Abcam), anticorpo policlonal de cabra anti-lamina B1 (1: 4000, C-20, Santa Cruz), anticorpo monoclonal anti-lamina B2 (1: 500, LN43, Abcam) e soro policlonal de coelho anti-C lamina (1: 150, RALC, Novus). Devido à variação na coloração entre diferentes manchas de anticorpo lamina C, 199 pacientes apenas coradas com o mesmo adesivo foram incluídos na análise estatística final. As colorações foram realizadas usando a máquina de coloração Ventana automatizado e os anticorpos primários foram detectados com Vectastain anti-murganho ou anticorpos secundários conjugados com HRP anti-cabra. As lâminas foram contrastadas com hematoxilina e observado com Olympus BX60 microscópio (Olympus Optical Co., Ltd., Tóquio, Japão).

Os slides TMA foram classificados visualmente para as classes IHC, sem o conhecimento das características clínico-patológicas do pacientes. As intensidades de coloração de cada núcleo foram classificados como 0 (nenhuma coloração específica em células de carcinoma, a coloração intensa em glândulas benignas e células estromais), 1 (baixa intensidade de coloração lâmina nuclear em células de carcinoma, de coloração mais intensa nas glândulas benignas ou células do estroma), 2 (intensidade moderada e a lâmina claramente visível em células de carcinoma, ainda uma coloração mais intensa nas glândulas benignas e células estromais) ou três (alto intensidade de coloração lâmina equivalente a, ou superior a intensidade de glândulas normais e células de estroma). Os pacientes cujo tecido amostras foram coradas mal (com base nos controles internos) ou separada das lâminas durante o processo de coloração foram excluídos da análise. Os valores de intensidade média de 3 ou mais núcleos de carcinoma foram determinados para cada paciente e, eventualmente, os pacientes foram dicotomizados em baixo (IHC grau 0 e 1) e alto (graus IHC 2 e 3) expressão de grupos para análise estatística (exceto para lamin B1 e C, ver Tabela 2). Dicotomização foi baseada na distribuição de diferentes subgrupos para cada coloração lamina, a fim de ter grupos comparáveis ​​com número suficiente de doentes (ver Tabela 2).

A análise estatística

A análise estatística foi realizada com SPSS 20 (IBM). As correlações entre as variáveis ​​clínicas e biomarcadores foram analisados ​​por meio do teste do qui-quadrado. A correlação entre a expressão da lamina significativo no tecido da próstata benigna e cancerosa dos mesmos pacientes foram analisados ​​com o teste-t de amostras independentes. O método de Kaplan-Meier, teste log-rank e Cox modelo de regressão de riscos proporcionais foram utilizados para analisar a associação de intensidade de coloração para o resultado. Para as análises de resultados, o tempo de sobrevivência de BCR-livre foi calculada a partir do dia da cirurgia para o dia de detecção de PSA de 0,2 ug /L ou superior. O tempo de sobrevida específica da doença foi calculado a partir da data da cirurgia até a data da última visita de acompanhamento ou morte.

As análises de sobrevivência foram realizadas para toda a coorte (exceto para lamin C, ver acima) e para uma subpopulação de alto risco, incluindo doentes com GS 7-10 tumores. Todos os testes estatísticos foram em frente e verso e os valores de p ≤0.05 foram considerados estatisticamente significativos.

Resultados

A fim de estudar se a expressão de diferentes lamins está associada a CaP progressão bioquímica e sobrevivência específica da doença (DSS), material de TMA contendo, pelo menos, em triplicado amostras cancerosas e uma amostra morfologicamente benigna de 501 pacientes com CaP operados radicalmente foi corado com anticorpos de detecção diferentes laminas (a, C, B1 e B2) e as intensidades de coloração foram comparados com as variáveis ​​clínico-patológicos. Os dados demográficos dos pacientes estão apresentados na Tabela 1. Na análise de estimativa de Kaplan-Meier, as conhecidas características clinicopatológicas, tais como altas GS e PSA pré-operatório, categoria T, extensão extraprostática (EPE) e vesícula seminal invasão (SVI) foram estatisticamente significativamente associada com BCR indicando que nossa coorte é altamente representativo para testar a correlação entre as proteínas de interesse e o resultado do paciente (dados não mostrados). Da mesma forma, as altas GS, categoria T, margem cirúrgica positiva, EPE, SVI e linfonodo positivo (LN) previu reduziu o tempo para a morte específica da doença (dados não mostrados). Na análise de regressão de Cox multivariada, que teve outros marcadores prognósticos em conta, altos GS, PSA pré-operatório e T-categoria foram preditores independentes de BCR (Tabela 3), enquanto altos GS, T-categoria e positividade LN previu a morte de PCA (Tabela 4).

Além de toda a coorte do estudo, uma subpopulação de pacientes com GS 6 tumor foi analisado separadamente

Além de toda a coorte do estudo, uma subpopulação de pacientes com GS 6. do tumor foi analisado separadamente.

lamina a coloração com um anticorpo específico mostrou que lamina a é expresso em ambas as células basais e epiteliais luminais das glândulas prostáticas normais e é enriquecido na região lâmina nuclear como esperado (Fig 1A ). No entanto, não houve diferenças significativas na intensidade de coloração entre carcinomas de pacientes individuais (de grau 0 a 3). As intensidades média de coloração de núcleos de células de carcinoma foram significativamente maiores quando comparado ao epitélio normal em amostras benignas dos mesmos pacientes (-amostras pareadas t-teste, média de intensidades de coloração +/- SEM 1,97 +/- 0,03 e 1,45 +/- 0,03 para o carcinoma e benigna, respectivamente, p 0,001). Low lamina A expressão (grau 0-1) foi estatisticamente significativamente associados com a positividade do linfonodo (teste Pearson Qui-quadrado, p = 0,009), mas não há outras variáveis ​​clinicopatológicas testados. Na análise de estimativa de Kaplan-Meier, não houve correlação entre a expressão da lamina A e BCR (dados não mostrados). Quando DSS foi usado como um ponto final, uma tendência entre o baixo lamina A expressão e mau resultado foi visto em toda a população, mas essa diferença não mostrou significância estatística (Fig 1B; p = 0,27). No entanto, na subpopulação de GS 6 tumores com comportamento potencialmente agressivo, baixa lamina A expressão foi estatisticamente significativamente associada com mau resultado (Fig 1C; p = 0,044). Estes resultados sugerem que a quantidade diminuída de lamina A pode promover a invasão linfovascular e progressão da doença potencialmente metastático.

(A) Exemplos representativos de lâminas coradas para TMA lamina A com imuno-histoquímica. imagens de baixa e alta de campo de energia de ambos os tumores de baixo e alto expressam são mostrados. análise (B-C) de Kaplan-Meier mostra uma tendência entre o baixo lamina A expressão e pobres DSS em todo o grupo (B; p = 0,27). No entanto, na subpopulação de pacientes com Gleason 6 tumores, não existe diferença estatisticamente significativa. (C; p = 0,044)

Lamin C é outro importante lamina A-tipo codificado por

LMNA

através de splicing alternativo. Esta isoforma é 92 aminoácidos mais curto que transporta lamina A e uma cauda C-terminal única que é removido da pré-lamina A durante modificação pós-tradução. A coloração com anticorpo lamina C (detecção do domínio cauda C-terminal específico lamina C só) mostrou que a lamina C é expresso de forma semelhante e presente na lâmina nuclear em ambas as células epiteliais basais e luminais normais, bem como na maioria dos (mas não todos) carcinomas com baixa intensidade (S1A FIG) a moderada. Um t-teste emparelhado demonstraram que as intensidades de coloração média para lamina C foram significativamente mais elevadas em amostras de carcinoma (1,30 +/- 0,06) em relação ao epitélio normal (1,04 +/- 0,05, p = 0,001). Não houve correlação entre a expressão da lamina C e variáveis ​​clinicopatológicas (dados não mostrados). Na análise de Kaplan-Meier, não foi encontrada correlação entre a expressão lamina C e BCR (dados não mostrados) semelhante ao lamin A. Houve uma tendência entre undetectably baixa expressão lamina C (grau 0) e DSS menos favorável quando os pacientes com toda a Gleason diferentes grupos foram estudados (Fig S1B; p = 0,14). Além disso, no GS 6 subpopulação os pacientes com tumores negativos lamina C (grau 0) tinham significativamente maior risco de morrer de PCA (S1C Fig; p = 0,009). Estes resultados sugerem que a lamina A e C, ambos produzidos a partir de

gene LMNA

, pode ter efeitos biológicos semelhantes na transformação maligna de CaP.

A expressão de B1 lamina é geralmente detectada em todos os eucariotas células e sua perda tem consequências graves durante a embriogênese como destacado com anormalidades do desenvolvimento do pulmão e cerebrais e morte perinatal início em

LMNB1

knockout ratinhos [22]. No nosso material, todas as amostras histologicamente benignos mostrou ligeira a moderada intensidade de coloração para lamin B1. Todas as amostras de carcinoma foram lamina B1 positiva, bem como (Fig 2A), mas 65% dos carcinomas apresentaram expressão elevada (grau 3) da lamina B1. Teste-t emparelhado revelou que não era significativamente mais lamina B1 coloração em carcinomas relativamente a amostras normais (benignos 2,7 +/- 0,03 vs. 1,7 +/- 0,03, p 0,001). Nenhuma correlação significativa foi encontrada entre a expressão lamin B1 e variáveis ​​clinicopatológicas testados. Na análise de Kaplan-Meier, elevada expressão de B1 foi lamina associado com BCR em toda a coorte (Figura 2B; p = 0,038) e na subpopulação de GS 6 (p = 0,034, dados não mostrados). No entanto, não houve correlação entre a expressão da lamina B1 e DSS em qualquer toda a coorte (Fig 2C; p = 0,55) ou na subpopulação de pacientes com GS 6 tumores (p = 0,57, dados não apresentados). Na análise de regressão multivariada Cox alta lamin expressão B1 permaneceu um preditor independente de BCR em toda a coorte quando ajustado para PSA pré-operatório e grau de Gleason (HR 1,8; IC95% 1,1-2,9, p = 0,023; Tabela 3). Estes resultados sugerem que a alta expressão de lamina B1, por razões desconhecidas, aumenta o risco de CaP reincidência, mas não tem nenhum efeito significativo na sobrevivência CaP.

(A) Os exemplos representativos de lâminas TMA coradas para lamin B1 com imuno-histoquímica. imagens de baixa e alta de campo de energia de ambos os tumores de baixo e alto expressam são mostrados. análise (BC) de Kaplan-Meier indica que a alta lamin expressão B1 prevê menor tempo de BCR em toda a coorte (B; p = 0,038), mas não tem nenhuma correlação com DSS (C; p = 0,55)

Lamin B2 foi expresso em todas as glândulas prostáticas normais e malignos (Figura 3A). No entanto, semelhante a outros laminas, não foi estatisticamente significativamente mais elevada intensidade de IHC B2 lamina nas glândulas cancerosas relativos às glândulas normais benignos (1,74 +/- 0,03 vs. 1,48 +/- 0,03, p 0,001). Baixa expressão lamin B2 foi associada com linfonodo positivo (qui-quadrado; p = 0,005) e houve uma tendência entre a expressão B2 baixo lamina e a categoria T (p = 0,076) e EPE (p = 0,098). Na análise de Kaplan-Meier, não houve correlação entre a expressão da lamina B2 e BCR (dados não mostrados). No entanto, quando DSS foi usado como um ponto final, houve uma tendência entre baixa expressão lamin B2 e pobres DSS em toda a coorte (Fig 3B; p = 0,099) e uma significância estatística limítrofe em GS 6 subpopulação (Fig 3C; p = 0,051). Estes resultados mostram que a lamina B1 e B2 lamina prever o resultado diferente no APC, que pode ser devido a diferenças de funções em células cancerosas da próstata.

(A) Exemplos representativos de lâminas coradas para TMA B2 lamina com imuno-histoquímica. imagens de baixa e alta de campo de energia de ambos os tumores de baixo e alto expressam são mostrados. análise (B-C) de Kaplan-Meier mostra uma tendência entre baixa expressão lamin B2 e DSS encurtado em toda a coorte (B; p = 0,099). Na subpopulação de pacientes com escore de Gleason 6 tumores, análise de Kaplan-Meyer falhar ligeiramente para mostrar diferença estatisticamente significativa, mas uma tendência forte é visto (C; p = 0,051).

Discussão

As laminas nucleares são altamente conservadas entre espécies e análise filogenética sugere que eles representam os antepassados ​​de toda IF família de proteínas [23]. Existem evidências de que lamins não só apoiar forma física do núcleo, mas também contribuir várias funções nucleares fundamentais como a organização do genoma e transcrição através de interações com cromatina e múltiplos fatores de transcrição [7]. Disfunção nesses mecanismos podem ter efeitos deletérios

in vivo

como evidenciado por várias doenças humanas hereditárias devido a mutações de lamina [9]. No entanto, o papel e as alterações de lamins em doenças malignas são menos bem compreendidos.

No presente estudo foi investigada a expressão de diferentes lamins em APC e seu uso potencial na estimativa de resultado para o paciente usando um extenso material TMA e um detalhado os dados do paciente clínico com um tempo médio de follow-up de mais de 8 anos. Embora a expressão de todos os principais lamins foi detectado no epitélio da próstata, a análise estatística revelou algumas mudanças interessantes que são relevantes à luz dos recentes

in vitro

descobertas sobre a função lamina. Swift et al. demonstraram que a quantidade de lamina A e a proporção de A e B do tipo correlaciona-se com laminas rigidez do tecido (por exemplo, músculo tem mais do que uma lamina cérebro) para estabilizar o núcleo e cromatina de stress físico [24]. Além disso, os baixos níveis de lamins um tipo de aumentar a deformabilidade nuclear e melhorar a migração de células através de constrições microfluídicos

in vitro

[25] e

in vivo

em um modelo de tumor do rato [26]. Isto é consistente com os nossos resultados mostrando que quantidades reduzidas de lamina A /C estão associadas com metástases nos linfonodos e DSS desfavorável, presumivelmente devido a um aumento da invasão linfovascular. A associação entre o baixo lamina A expressão e DSS desfavorável foi estatisticamente significativa na análise de Kaplan-Meier realizados em pacientes com potencialmente agressiva GS 6 da doença (Fig 1C). No entanto, na análise de regressão de Cox multivariada, que tem igualmente em outras variáveis ​​clinicopatológicas em conta, lamina A um pouco não atingiu significância estatística (p = 0,052, Tabela 4), sugerindo que não é um marcador preditivo independente diferente da lamina B1. Os dados de outros sugerem que a lamina A é sobre-expresso na frente invasiva em APC e pode aumentar a migração e invasão local, [16]. Se este fosse o caso, seria de esperar que os níveis de expressão elevados de lamin A /C correlacionam com BCR, mas não fomos capazes de confirmar tal fenômeno. Estas diferenças podem ser, pelo menos em parte, devido à variação na amostragem. Apesar do fato de que obtivemos três amostras em triplicado do tumor índice, esses núcleos de tecido representam os níveis de expressão do tumor gerais e não foram intencionalmente direcionados para áreas de frente invasiva.

Os resultados deste e de outros estudos sugerem que as mudanças na expressão lamina e seu impacto sobre a biologia do tumor e resultado clínico podem ser complexas e específicas do órgão. Anteriormente o valor prognóstico da lamins na progressão do cancro foi estabelecida em câncer colorretal (CRC), onde lamina A expressão prediz pior evolução quando comparado com lamina A cancros negativos [12]. No entanto, pouco se sabe sobre o papel prognóstico do lamins em outros tumores sólidos e os nossos resultados sugerem papel oposto de lamina A na progressão PCA (Fig 1C). Uma diferença fundamental entre estes dois tipos de adenocarcinomas é que 30% de CRCs estavam virtualmente desprovidas de lamina A [12], mas, pelo menos, alguns lamina A expressão foi detectada em todas as APCs incluídas no presente estudo. Os resultados a partir de

In vitro

estudos sugerem que o silenciamento de lamina A pode, na verdade, sensibilizar as células para reduzir o stress mecânico e a sobrevivência das células [26]. Portanto, a presença de lamina A em CRC pode mecanicamente proteger as células cancerosas que migram e reduzir a morte de células tumorais quando comparada a lamina A tumores negativos ao passo que no caso de CaP moderadamente baixa quantidade de lamina A pode, simultaneamente, proporcionar uma deformabilidade nuclear ideal e uma protecção suficiente contra estresse mecânico em células invasoras.

a e do tipo B lamins têm papéis diferenciados em células normais. Enquanto laminas do tipo A são expressos principalmente em células terminalmente diferenciadas, uma ou ambas as laminas do tipo B são expressos em todas as células animais. Ratos falta lamina B1, B2 lamina ou ambos têm defeitos no pulmão e no desenvolvimento do cérebro e estes ratinhos morrem ao nascer sugerindo uma função essencial do desenvolvimento [22]. Curiosamente, o aumento da produção de um lamina do tipo B não resgatar a perda de outro tipo-B lamina lamina indicando que B1 e B2 têm também funções celulares diferenciais [27]. Da mesma forma, nossos resultados sugerem papéis diferenciais para lamin B1 e B2 na progressão CaP. tecidos CaP continha significativamente mais do que B1 lamina tecidos benignos dos mesmos pacientes. expressão B1 lamina elevados associados com BCR em todo o grupo, bem como no GS 6 subpopulação (Figura 2B), e na multivariada de Cox análise de regressão lamina B1 apareceu um factor de risco independente para BCR (Tabela 3). No entanto, não houve correlação estatisticamente significativa entre a expressão lamin B1 e DSS (Fig 2C e Tabela 4). Embora o nosso grupo é relativamente grande, é importante notar que apenas 4,4% dos pacientes morreu de CaP durante o follow-up, enquanto 31% mostraram BCR. Na maioria dos casos, o último pode ser devido a tumor residual mínimo local que não tem nenhum impacto sobre DSS após a terapia de radiação de salvamento [28]. Portanto, a alta expressão B1 lamina é mais provável promover o crescimento e /ou a proliferação local, em vez de permitir que o comportamento metastático através da invasão linfática. Em apoio a este, um estudo recente mostrou que a redução moderada da lamina B1 no cancro da progressão do ciclo celular de células atrasos [29]. Além disso, o silenciamento de lamina B1 em células de pulmão diplóides normais WI-38 faz com que a senescência replicativa enquanto que a sobre-expressão aumenta a taxa de proliferação [30]. Coradeghini et ai. relataram anteriormente que a expressão lamina B1 correlaciona-se com a GS e poderia ser utilizado como um biomarcador na diferenciação do tumor e o prognóstico [17]. Não fomos capazes de confirmar a correlação com a GS, mas ainda mais importante, os nossos resultados sugerem claramente que lamin B1 é um preditor independente que poderia ser usado para determinar o risco de crescimento e proliferação local.

Pouco se sabe sobre o papel da B2 lamina e sua associação com o câncer.