Abstract

De acordo com a teoria de células-tronco cancerosas (CSCs), tumores malignos podem ser heterogêneas em que uma pequena população de CSCs conduzir a progressão do câncer. Por causa de suas capacidades intrínsecas, CSCs podem sobreviver a uma variedade de tratamentos e, em seguida, levar à resistência à terapêutica e recorrência do câncer. CSCs pancreáticos têm sido relatada como sendo responsável pelos comportamentos malignos do cancro do pâncreas, incluindo supressão de protecção imunitária. Assim, o desenvolvimento de estratégias imunológicas para erradicar CSCs pancreáticos podem ser de grande valor para o tratamento de câncer de pâncreas. Neste estudo, foram enriquecidos CSCs pancreáticos através da cultura de células Panc-1 sob condições de formação de esferas. Panc-1 CSCs expressos baixos níveis de HLA-ABC e CD86, tal como medido por análise de citometria de fluxo. Descobrimos ainda que os CSCs Panc-1 modular a imunidade por inibição da proliferação de linfócitos, que é promovida pela f ito-hemaglutinina (PHA) e anticorpos monoclonais anti-CD3. As células dendríticas derivados de monócitos (DCs) foram acusados ​​de totais lisados ​​gerados a partir de Panc-1 CSCs obtidos a partir esfera tumor cultura. Após a co-cultura com os linfócitos em diferentes proporções, as Panc-1 CSCs lisados ​​modificados DC eficazmente promoveu a proliferação de linfócitos. A eficiência de activação atingiu 72,4% e 74,7% nas proporções de 01:10 e 01:20 com linfócitos. Os linfócitos activados segregados níveis elevados de IFN-γ e IL-2, que são fortes citocinas antitumorais. Além disso, Panc-1 CSCs lisados ​​modificado DC induziu efeitos citotóxicos significativos de linfócitos em Panc-1 e células parentais CSCs Panc-1, respectivamente, como mostrado por ensaio de lactato desidrogenase (LDH). Nosso estudo demonstra que o desenvolvimento da vacina baseada em CSCs é uma estratégia promissora para o tratamento de câncer de pâncreas

Citation:. Yin T, Shi P, Gou S, Shen Q, Wang C (2014) As células dendríticas carregadas com o pâncreas células-tronco cancerosas (CSCs) Lisados ​​Induzir antitumoral Immune Killing efeito in vitro. PLoS ONE 9 (12): e114581. doi: 10.1371 /journal.pone.0114581

editor: Jingwu Xie, da Escola de Medicina da Universidade de Indiana, Estados Unidos da América

Recebido: 31 Julho, 2014; Aceito: 11 de novembro de 2014; Publicação: 18 de dezembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Yin et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel

Financiamento:. Este estudo foi apoiado por subsídios da National Science Foundation Natural da China (No. 30.801.100)

CONFLITO DE INTERESSES:. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes.

Introdução

o câncer de pâncreas é uma das neoplasias mais letais do sistema digestivo, que classifica como a principal causa de morte relacionada ao câncer nos países desenvolvidos. Nos últimos anos, a incidência de cancro do pâncreas e da morte relacionada é cada vez maior nos países em desenvolvimento, ao passo que o prognóstico da maioria dos pacientes com câncer de pâncreas não melhorou ao longo dos últimos trinta anos. A maioria dos pacientes com câncer pancreático perdeu oportunidade para ressecção cirúrgica, devido ao fato de estágio avançado da doença no momento do diagnóstico, e resistência intrínseca ou adquirida à quimioterapia ou radioterapia, que é uma característica típica de câncer pancreático [1]. Assim, é urgente para explorar novas estratégias de intervenção direcionados para o tratamento de câncer de pâncreas.

As células-tronco cancerosas (CSCs) são uma subpopulação de células tumorais que possuem fortes habilidades de auto-renovação e de diferenciação para conduzir carcinogênese e progressão de Câncer. Recentemente, o CD44 + CD24 + ESA + CSCs pancreáticas foram confirmados possuir um aumento potencial tumorigénico, e são responsáveis ​​pelo comportamento maligno de câncer pancreático [2]. erradicação completa destes CSCs podem dar esperança como uma nova estratégia terapêutica para o tratamento de câncer de pâncreas. No entanto, a capacidade anti-apoptótico é uma das características importantes para os CSCs em vários tipos de tumor, resultando em morte ineficaz na quimioterapia e radioterapia padrão [3] – [4]. Os CSCs remanescente pode assim tornar-se a origem de recorrência e a fonte da falha do tratamento.

imunoterapia do cancro da ativa as respostas imunes antitumorais do paciente de rejeitar células de tumores malignos. CSCs expressam certos biomarcadores que tenham antigenicidade distinta, que podem induzir respostas imunes específicas [5] – [6]. CSCs foram mostrados para ser reconhecido e eliminado pelas células CD8 + T citolíticos [7]. Além disso, foi demonstrado que a imunidade contra intrínseca CSCs podem ditar curso progressão do cancro [6]. Assim, é uma estratégia atractiva para induzir respostas imunes contra os CSCs pancreáticas para o tratamento de cancro pancreático. DC são células de apresentação de antigénio potentes e desempenham um papel fundamental na indução de respostas imunitárias primárias contra antigénios associados a tumores. Um certo número de estratégias têm sido desenvolvidas para modificar as DCs com antigénios específicos de tumor para gerar respostas imunes antitumorais. Fraco tumoral modificada para o antigénio da vacina DC pode provocar respostas imunes antitumorais fortes in vitro e in vivo [8]. Neste estudo, nós modificamos DCs com antigénios CSCs de pâncreas, e investigou o efeito de eliminação das respostas imunes induzidas pela CSC-DC em CSCs pancreáticas in vitro.

Materiais e Métodos

declaração Ética

o uso de seres humanos foi especificamente aprovado pela Comissão de Pesquisa Clínica Ética do hospital União, Tongji Medical College, HUST. As amostras de sangue foram obtidas a partir de dadores saudáveis. Todos os voluntários tinham conhecido e concordaram que o sangue ia usar para a pesquisa científica. Todos os participantes assinaram um termo de consentimento informado por escrito antes de doar o sangue.

cultura celular

A linha de células de câncer pancreático Panc-1 foi cultivada em Dulbecco Modified Eagle Medium suplementado com soro fetal bovino a 10% ( Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), penicilina (100 U /ml) e estreptomicina (100 U /ml) a 37 ° C incubadora com 5% de CO

2. A condição de cultura para células de cancro do pâncreas para formar esferas de tumor em suspensão foi descrito anteriormente [9]. Resumidamente, as células individuais dissociadas enzimaticamente foram diluídas para uma densidade de 10

3 células /mL em meio de formação de esfera (SFM). As células foram passadas a cada 10 a 14 dias e novamente plaqueadas em SFM. Os aglomerados esféricos de células cultivadas nestas condições foram nomeados Panc-1 CSCs. SFM utilizado foi DMEM-F12 suplementado com 10 ng /, 20 ng /fator mL de crescimento de fibroblastos factor de base (Peprotech) mL de crescimento epidérmico (Peprotech), 5 ug /ml de insulina, 2,75 ug /ml de transferrina, 2,5 ng /ml de selenito de sódio (Sigma), e 0,4% de albumina de soro bovino (Amresco).

Preparação de ligado de células de tumor

células de cancro pancreático (Panc-1 esfera, Panc-1) foram incubadas com 0,01% de EDTA -solution durante 5 min. Depois de lavar duas vezes em PBS, as células foram ressuspensas em meio isento de soro. As suspensões de células foram congeladas a -80 ° C e descongeladas por quatro ciclos de congelamento-descongelamento. Após a remoção de detritos em bruto, os lisados ​​foram centrifugados durante 10 min a 300 g gravidade. Os sobrenadantes foram recolhidos e as concentrações de proteínas dos lisados ​​foram determinadas por ensaio da Bio-Rad (Bio-Rad, Munique, Alemanha).

Preparação de células de cancro do pâncreas lisados ​​modificados DC

mononucleares do sangue periférico células (PBMC) a partir de dois doadores saudáveis ​​foram isoladas por centrifugação Ficoll em gradiente de densidade. As PBMC foram cultivadas em meio RPMI 1640 fornecido com 10% de soro nas placas de cultura para a adesão a 37 ° C com 5% de CO

2, durante duas horas. As células não aderentes foram removidas e cultivadas em meio contendo 10 U /ml de IL-2 para a geração adicional de a população de linfócitos. As células aderentes foram colhidas e cultivadas na presença de GM-CSF (Genzyme, 100 ng /ml) e IL-4 (Genzyme, 100 ng /ml) durante 6 dias a 37 ° C, 5% de CO2. Em seguida, as células foram incubadas com lisados ​​de células do cancro do pâncreas (esfera Panc1 e Panc-1) a uma concentração de 100 ug para cada 2 × 10

5 DC durante 24 horas. Subsequentemente, as DCs foram activadas com TNF-α (20 ng /ml) durante 24 horas.

análise fenotípica Imunológicos

citometria de fluxo foi realizada para detectar os fenótipos imunitárias de células dendríticas e do tumor. Anticorpos incluem anti-HLA-DR-FITC, anti-HLA-ABC-FITC, anti-HLA-DQ-PE, anti-CD80-FITC, anti-CD54-FITC, anti-CD1a-FITC, e anti-CD86-PE , (eBioscience). FITC-IgG e PE-IgG foram utilizados como controlos internos. Para a coloração, 5 × 10

5 células foram plaqueadas em 96 poços da placa de U (Corning, EUA) e incubados com 5 uL de cada um dos anticorpos a 4 ° C durante 30 minutos. Após lavagem com PBS, as células foram recolhidas a 1000 g durante 5 minutos gravidade. Em seguida, as células foram ressuspensas em 300 ul de PBS e submetido a análise de citometria de fluxo.

Inibição de células de cancro do pâncreas na proliferação de linfócitos

Panc-1 CSCs foram colhidas como células estimuladoras. Depois de ser pré-tratadas com mitomicina C (25 ug /ml), as células estimuladoras foram co-cultivadas com a 1 × 10

6 /ml de linfócitos não aderentes (reactores) a uma razão de 01:10, na presença de PHA (Sigma) ou anticorpos monoclonais anti-CD3 (OKT3, eBioscience). Em seguida, 20 ul de 5 ug /mL de 3- (4, 5-dim ethylthiazol-2-il) -2, 5- difenil-2H – brometo de tetrazólio (MTT) (Sigma) foi adicionado a cada poço. Após incubação durante 4 h, o sobrenadante foi substituído por 150 ul de dimetilsulfóxido (Sigma). A absorção (A) foi lida a 570 nm utilizando um espectrofotómetro. A taxa relativa de proliferação celular foi calculada como se segue: (A-B) /(C + D) x 100%. (A) grupo experimental: Panc-1 CSCs + linfócitos + PHA /OKT3; (B) controlo positivo: linfócitos + PHA /OKT3; (C) controlo em branco: Panc-1 CSCs + PHA /OKT3. Os experimentos foram realizados em triplicado.

efeito ativador de Panc-1 CSCs modificada DC na proliferação de linfócitos

Para investigar a capacidade de Panc-1 CSCs modificados DC para ativar a proliferação de linfócitos, diferente grupos de DC (Panc-1 CSC-DC, DC) foram colhidas como células estimuladoras. Após pré-tratamento com mitomicina C (25 ug /mL, Roche), as células estimuladoras foram co-cultivadas com 1 × 10

6 /ml de linfócitos alogénica não aderente (reactores) em placas de 96 poços em racios variando entre 1: 10 a 1:20 e foram cultivadas a 37 ° C, 5% de CO

2 durante 96 h. Os linfócitos cultivados sozinhos sem estimular foram definidos como controles. Em seguida, 20 ul de 5 mg /mL de 3- (4, 5-dim ethylthiazol-2-il) -2, 5- difenil-2H – brometo de tetrazólio (MTT) (Sigma) foi adicionado a cada poço. Após incubação durante 4 h, os sobrenadantes foram substituídos por 150 ul de dimetilsulfóxido (Sigma). A absorção (A) foi lida a 570 nm utilizando um espectrofotómetro. O número relativo de linfócitos após a activação foi calculada como: Um experimento /A × 100% de controlo. A taxa de proliferação celular foi calculada como: (Uma experiência de controlo) /A × 100% de controlo. As experiências foram realizadas em triplicado.

detecção de citocinas por Elisa ensaio

Para determinar a capacidade de estimulação de células dendríticas na activação dos linfócitos, os sobrenadantes de linfócitos foram colhidas 72 h depois de ter sido estimuladas com DC , e as concentrações de IFN-γ, IL-2, IL-10 foram medidos por kit ELISA da R D de acordo com a orientação do fabricante. Os resultados foram obtidos usando um espectros otómetro de microplacas. As experiências foram realizadas em triplicado.

Ensaio de citotoxicidade

Os Panc-1 CSCs lisados ​​modificados DC e as células dendríticas primitivas (1 × 10

5 /ml) foram cultivadas a uma razão de 1:10 com linfócitos durante 5 dias. As células não aderentes foram recolhidas e contadas como células efectoras. As células de cancro pancreático foram plaqueadas em placas de 12 poços a uma densidade de 1 x 10

5 /ml cada. As células efectoras foram co-cultivadas com células de cancro do pâncreas em proporção diferente, durante 20 h em 37 ° C, 5% de CO

2 incubadora. O sobrenadante isento de células foi recolhido e analisado por um kit de libertação de LDH não-radioactivos de acordo com as instruções do fabricante. A actividade LDH das células efectoras foi apenas detectada como controlos, e as actividades de LDH em diferentes grupos reaccionais em relação ao grupo de controlo foram calculados como a citotoxicidade de diferentes DCs. Os experimentos foram realizados em triplicado.

Análise Estatística

Os dados foram expressos em média ± DP. As diferenças estatísticas entre os diferentes grupos foram avaliados utilizando o teste t de Student. Todas as análises foram realizadas usando SPSS 18.0 software. P 0,05 foi considerado significativo

Resultados

cultura pâncreas CSCs e

formadoras de esfera

As habilidades de formação de esfera de células cancerosas em meio livre de soro têm sido muito utilizados para. enriquecer as células estaminais semelhante. A relação entre a esfera formando capacidades em meio isento de soro e a propriedade de células estaminais de Panc-1, células de cancro do pâncreas foram testados nos estudos anteriormente [9], [10]. Nossos estudos preliminares descobriram que as células Panc-1 pode se propagar para formar esferas com propriedades de células-tronco. Além disso, essas células estaminais semelhante mostrou um aumento de resistência à quimioterapia e um aumento da capacidade de migração. Neste estudo, foram coletadas as CSCs Panc-1 cultivadas sob meio livre de soro para um estudo mais aprofundado da estratégia morte imunológica (Fig. 1).

O fenótipo imunológico de células Panc-1 esfera

Detectamos a expressão de moléculas imunológicas em Panc-1 esfera por métodos FACS. Como mostrado na Fig. 2, Panc-1 expressa esfera baixos níveis de HLA-ABC e CD80 em comparação com células Panc-1. Nós não encontrou qualquer diferença entre Panc-1 e Panc-1 esferas sobre outros marcadores moleculares imunes, incluindo HLA-DR, HLA-DQ, CD86 e CD1a. A baixa expressão de marcadores moleculares do sistema imunológico em Panc-1 esfera indica que a capacidade estimulante baixo de CSCs no sistema imunológico.

Exemplo representativo de análise FCM mostrou que MHC I e CD80 foram humildes expressa em Panc-1 CSCs comparação com células Panc-1. Não foram encontradas diferenças significativas para outras moléculas imunes, incluindo CD86, HLA-DR, HLA-DQ, CD86 e CD1a. A expressão de CD80 e HLA-ABC em Panc-1 CSCs estão representados por uma linha a cheio. A expressão de CD80 e HLA-ABC em células Panc-1 estão representados por uma linha pontilhada

Efeito de células de cancro do pâncreas sobre a proliferação de linfócitos

CSCs têm sido relatados para modular imunológico e induzem a supressão imunológica através de vários mecanismos. Para determinar se os CSCs pancreáticos modulam a activação de linfócitos, os efeitos de Panc-1 CSCs na proliferação de linfócitos promovido por PHA ou anticorpos monoclonais anti-CD3 foram ensaiadas pelo ensaio de MTT. Panc-1 esferas foram co-cultivadas com o linfócito. Os anticorpos monoclonais de PHA ou o anti-CD3 foram usadas para activar a proliferação de linfócitos. Os resultados mostraram que a proliferação de linfócitos activados por PHA ou anticorpos monoclonais anti-CD3 foi inibida na presença de CSCs pancreático em comparação com os controlos (Fig. 3).

Os linfócitos foram estimulados a proliferar com PHA ou anti- anticorpos monoclonais CD3. Panc-1 CSCs foram co-cultivadas com linfócitos numa proporção de 01:10, na presença de PHA ou anticorpos monoclonais anti-CD3. Linfócitos estimulados com PHA ou anticorpos monoclonais anti-CD3 apenas foram definidas como controle. ensaio MTT indicaram que promoveu a proliferação de linfócitos por PHA ou anticorpos monoclonais anti-CD3 foi inibida na presença de Panc-1 CSCs.

A capacidade estimulante de lisados ​​CSCs modificado CC na proliferação de linfócitos

Para determinar o efeito de lisados ​​CSCs modificada-DC na proliferação de linfócitos, diferente proporção de DC (Panc-1 CSC DC e DC primitiva) foram co-cultivadas com linfócitos. Os efeitos de activação diferente de CC sobre a proliferação de linfócitos foram demonstrados pelo método de MTT. A proliferação de linfócitos foi demonstrado com a observância a OD570 nm. Como mostrado na Fig. 4, DC carregadas com lisados ​​de pâncreas CSCs provocou forte proliferação de linfócitos (Fig. 4A). O efeito de activação diferente DC em linfócitos podem ser reflectida pela taxa de proliferação de linfócitos, e o efeito activador de Panc-1 esfera lisados ​​carregado DC em linfócitos atingiu 72,4% e 74,7% na proporção de 1:10 e 1:20, ao passo que o a proliferação de linfócitos activados por DC só atingiu 17,5% e 14,6% (Fig. 4B).

diferentes DCs (Panc-1 CSC DC, DC) foram co-cultivadas com linfócitos (reactores) em placas de 96 poços em diferentes proporções (01:10, 01:20). Os linfócitos em cultura sozinha foram definidos como controlos. Após 96 h, o número relativo de células foi calculado como absorvância por métodos MTT. As experiências foram realizadas em triplicado. A. O número relativo de linfócitos após a estimulação pode ser reflectido por absorvância. Panc-1 CSCs modificados DC estimulou a proliferação mais forte de linfócitos em comparação com os grupos de DC. B. Os efeitos de activação de DCs em linfócitos pode ser refletido pela taxa de proliferação de linfócitos. Os Panc-1 CSCs lisados ​​modificados CC alcançada uma taxa significativa a proliferação de linfócitos alta em comparação com grupos de DC.

lisados ​​pâncreas CSCs modificado CC provocou secreção de IFN-y IL-2 e IL-10 em linfócitos

para determinar a activação de linfócitos por pâncreas CSCs modificado CC, foram detectados os citocinas secretadas pelas células T de acordo com os materiais e métodos. DC pulsadas com lisados ​​de células de cancro pancreático secreção induzida por citocina de Th1 IFN-γ, IL-2 e a citocina de Th2 IL-10. Os nossos resultados mostraram que a regulação para cima de IFN-γ foi especialmente significativa para a esfera Panc-1 modificado CC, e a secreção de IFN-γ aumentada para 5,03 vezes quando comparada ao grupo CC primitivo. A secreção de IL-2 aumentou para 2,28 vezes quando comparada ao grupo CC primitivo (Fig. 5). Enquanto isso, o de citocinas associadas a Th2 IL-10 também aumentou em Panc-1 CSCs antigénio carregado DC. A quantidade de IL-10 no sobrenadante aumentada até 7,3 vezes em lisados ​​Panc-1 esfera modificado CC em relação à primitiva DC, mas significativamente menor do que a da citocina Th1 associada (Fig. 5).

diferentes DCs foram co-cultivadas com 1 × 10

6 /linfócito ml em placas de 96 poços. Os sobrenadantes de linfócitos foram colhidas 72 h depois de ter sido estimuladas com DC, e as concentrações de IFN-γ, IL-2, IL-10 foram medidos por ensaio ELISA. Pancreático CSCs lisados ​​modificados DC provocou secreção significativa de IFN-γ, IL-2 e IL-10 em linfócitos.

pâncreas CSCs modificada DC induzida efeito letal forte em CSCs pancreático

ainda comparou o efeito de morte específica de linfócitos activados por CSCs pancreáticas modificada DC. linfócitos autólogos estimulados com CSC-DC foram recolhidas e co-cultivadas com Panc-1 CSCs em proporção diferente. O efeito de morte especifica foi detectada por métodos de HDL. Os linfócitos activados por DC carregado com Panc-1 CSCs detritos mostrou efeito significativo matança em Panc-1 CSCs em comparação com DC controla a proporção diferente (Fig. 6). Além disso, verificou-se que primitivas lisados ​​celulares Panc-1 DC carregado provocou um efeito de morte mais fraco em Panc-1 em comparação com os CSCs Panc-1 CSCs lisados ​​modificados DC (Fig. 7A). No entanto, Panc-1 CSCs modificados DC provocou efeitos de matar comparáveis ​​tanto em Panc-1 CSCs e células Panc-1. Embora os efeitos de morte eram mais fraca em Panc-1 de células em comparação com Panc-1 DC, não houve diferença significativa entre a Panc-1 e DC-1 Panc CSC- DC (Fig. 7B). Este efeito de eliminação foi especialmente significativa em menor proporção de 1:10 e 1:20 com linfócitos.

Diferentes DCs foram co-cultivadas a uma razão de 1:10 com linfócitos durante 5 dias. As células não aderentes foram recolhidas e contadas como células efectoras. Os efectores (1 × 10

6 células) foram co-cultivadas com as células de cancro do pâncreas em proporção diferente, durante 20 h a 37 ° C em 5% de CO

2 incubadora. O sobrenadante isento de células foi recolhido e analisado por ensaio de LDH. Os Panc-1 CSCs lisados ​​modificados DC mostrou efeito letal mais forte em Panc-1 CSCs comparados com os controles.

Diferentes DCs (Panc-1DC, Panc-1CSC DC) foram co-cultivados em uma proporção de 1:10 com linfócitos durante 5 dias. As células não aderentes foram recolhidas e contadas como células efectoras. Os efectores (1 × 10

6 células) foram co-cultivadas com as células de cancro do pâncreas (Panc-1, Panc-1) CSCs em proporção diferente, durante 20 h a 37 ° C numa incubadora de CO2 a 5%. O sobrenadante isento de células foi recolhido e analisado por ensaio de LDH. A. Os Panc-1 CSCs lisados ​​modificados DC mostraram efeitos matando mais fortes em Panc-1 CSCs comparação com Panc-1 lisados ​​modificados DC. B. Panc-1 CSCs lisados ​​modificados DC teve efeitos matança comparáveis ​​em células Panc-1 em comparação com Panc-1 vacina DC.

Discussão

CSCs têm sido notórios por sua resistência à terapia e pode ser a causa de recidiva de tumores malignos, como relatado anteriormente [10] – [11]. Desenvolvimento de imunidade anti-tumoral pode, assim, ser uma abordagem eficaz alternativa para erradicar CSCs pancreáticas. Infelizmente, CSCs podem violar a vigilância imunológica do organismo por meio de vários mecanismos. CSCs têm sido relatados para ser imunogénico fraco. Ohlfest et al relataram que as células humanas CD133 + gliomas expressam baixos níveis de ligandos de activação de células assassinas naturais (NK) do MHC I ou. Baixa expressão dessas moléculas estimulantes do sistema imunológico pode ajudar os CSCs gliomas para fugir da adaptável e ataques imune inata [12]. Consistentemente em nosso estudo, citometria de fluxo revelou que CSCs pancreáticas expressam baixos níveis de HLA-ABC e CD80. Baixa expressão de moléculas do MHC pode enfraquecer a identificação do antigénio CSCs pelo sistema imunitário do organismo humano. Baixa expressão de CD80 pode conduzir à anergia imune [13]. As características imunológicas observadas sugeriu baixo imunológico estimulando habilidades de CSCs pancreáticas para o sistema imunológico. CSCs também foram relatados para modular respostas imunes. Heimberger et al relatou que CSCs contribui evasão imunológico através de indução de células T reguladoras e secretando moléculas imunossupressoras específicas [14], [15]. Também foi relatado que o melanoma maligno células iniciando pode modular a resposta imune anti-tumor através de células Treg inibição da activação de células T e induzir a [14]. O nosso estudo mostrou que a activação de linfócitos estimulada por PHA ou anticorpos monoclonais anti-CD3 foi inibida na presença de Panc-1 esfera. Isto indicou que os CSCs pancreáticas podem ter características imunossupressores. Quebrar a tolerância imunológica de CSCs pancreáticas e a indução de respostas imunes contra os CSCs podem ser estratégias eficazes e promissoras para eliminar CSCs.

DC são células profissionais de apresentação de antigénio que desempenham um papel fundamental na indução de condução e de respostas imunitárias primárias , tornando-os como um alvo essencial na geração de imunidade terapêutica contra o cancro [16]. Modificação de DCs com o antigénio tumoral pode induzir a activação das células T e a resposta imunitária anti-tumoral. vacinação baseada em DC representa uma estratégia promissora e poderosa para induzir imunidade antitumoral para tratamento de câncer. Geração de DC carregadas com antigénios associados CSCs pode apresentar um método novo e valioso para desencadear a resposta imune para erradicar CSCs. Tinha sido relatado que citotóxica dos linfócitos T contra CSCs pode ser induzida por fusão de CSCs com DC ou transfecção de ARNm CSCs em células dendríticas [17] – [18]. Neste estudo, nós cobrado DC com pancreático detritos CSCs. Após co-cultura com linfócitos, este DC modificada ativa e estimula a proliferação de linfócitos e secreção de INF-γand IL-2. A sobre-regulação de IFN-γ, que é um forte anti-tumoral citocina, foi especialmente significativa. Entretanto, descobriu-se que a citocina de Th2 associada IL-10 aumentou também após a estimulação DC. IL-10 é uma citoquina imunossupressora potente que inibe a activação de células T. Embora a sobre-regulação de IL-10 foi muito mais baixa em comparação com a citoquina Th1 associada, a inibição da IL-10 pode aumentar a resposta imune contra os CSCs.

O nosso estudo revelou que mais de linfócitos activados por Panc-1 CSCs lisados modificada DC mostraram efeitos significativos de matar, tanto em Panc-1 e Panc-1 CSCs. Além disso, o efeito de morte em Panc-1 CSCs provocada por Panc-1 CSC-DC foi mais forte, em comparação com Panc-1 DC. Considerando-se que o cancro do pâncreas é resistente a terapias quase todos actualmente disponíveis, e a resistência à terapêutica pode ser atribuída a CSCs. Desenvolvimento de imunoterapia para CSCs pâncreas torna-se uma abordagem promissora para o tratamento do cancro pancreático num futuro próximo.

Até o momento, o isolamento de CSCs pancreático foi conseguido principalmente através de seleção de célula específica de superfície dependente do marcador. marcadores de superfície celular relatados incluem CD44, CD24, CD133, ESA, e outros para CSCs pancreáticas [2], [19]. No entanto, os CSCs pancreáticas seleccionados através desses marcadores de superfície celular podem ser heterogéneos, uma vez que nenhum destes marcadores parecem caracterizar selectivamente uma população pura das CSCs [20] – [21]. Por outro lado, o cultivo de esferas CSCs no sistema de cultura condicionado de células estaminais podem ser uma outra abordagem para enriquecer CSCs pancreáticas. No estudo atual, nós enriquecido CSCs pancreáticas usando o sistema de esfera cultura não aderente. Os detritos da esfera celular foi usado para carregar DC e recolher CSCs modificados DC. A reação imune induzida por uma tal abordagem pode ter como alvo directamente a maioria da população CSCs pancreáticas.

Em resumo, os nossos resultados mostraram que a terapia imune à base de DC pode ser uma estratégia ideal para eliminar CSCs pancreáticas. Este tratamento imunológico pena maior desenvolvimento promissor considerando a resistência intrínseca das CSCs pancreáticas às terapias existentes.

Os autores declaram que não há conflito de interesses no que respeita à publicação deste artigo.