Abstract

CA125 como um biomarcador de câncer de ovário é ineficaz para a população em geral. O objetivo deste estudo foi avaliar imunoensaio baseado em talão multiplexado de múltiplos marcadores biológicos associados ao câncer de ovário como transtirretina e apolipoproteína A1, juntamente com CA125, para melhorar a identificação e avaliação de prognóstico do câncer de ovário. Medimos os níveis séricos de CA125, transtirretina, e apolipoproteína A1 a partir do soro de 61 indivíduos saudáveis, 84 pacientes com doença ovariana benigna, e 118 pacientes com cancro do ovário, utilizando um sistema de ensaio multiplex líquido, Luminex 100. Os resultados foram então analisados ​​de acordo a saudável e /ou benigno versus indivíduos com cancro do ovário. Quando CA125 foi combinado com os outros biomarcadores, a sensibilidade e especificidade global foram significativamente melhorados na curva ROC, mostrou que 95% e 97% de sensibilidade e especificidade, respectivamente. A 95% de especificidade para todas as fases da sensibilidade aumentada para 95,5% em comparação com 67% para CA125 sozinho. Durante a fase I + II, a sensibilidade aumentou de 30% para CA125 sozinho para 93,9%. Durante a fase III + IV, os valores correspondentes foram de 96,5% e 91,6%, respectivamente. Além disso, as três biomarcadores eram suficientes para a separação máxima entre noncancer (grupo saudável mais benigna) e a fase I + II ou todas as fases (I-IV) da doença. A nova combinação de transtirretina, e apolipoproteína A1 com CA125 melhorou tanto a sensibilidade e a especificidade do diagnóstico do cancro do ovário em comparação com os de biomarcadores individuais. Estes achados sugerem o benefício da combinação desses marcadores para o diagnóstico de câncer de ovário

Citation:. Imunoensaios Kim YW, Bae SM, Lim H, Kim YJ, Ahn WS (2012) Desenvolvimento de Multiplexed Bead-Based para a detecção de início de carreira cancro do ovário Usando uma combinação de marcadores biológicos. PLoS ONE 7 (9): e44960. doi: 10.1371 /journal.pone.0044960

editor: Jose Luis Perez-Gracia, Clínica Universidade de Navarra, Espanha |

Recebido: 11 de março de 2012; Aceito: 10 de agosto de 2012; Publicação: 10 de setembro de 2012

Direitos de autor: © Kim et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O estudo foi apoiada pela Fundação Nacional de Pesquisa da Coreia (NRF), Seul, República da Coreia (Grant # 5-2011-A0154-00119). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o cancro do ovário tem uma maior proporção de letalidade-a-caso que qualquer outra malignidade ginecológica, uma vez que tende a ser complexa por sintomas e doenças diagnosticadas do que outros, o que resulta na grande maioria dos pacientes com cancro do ovário diagnosticado sendo em fases metastático avançado (fase III /IV) [1] – [3]. A taxa de sobrevida em 5 anos de pacientes com câncer em estágio precoce varia de 50-95%, mas apenas cerca de 20% de todos os casos relatados são capturados nas fases iniciais; a taxa de sobrevida em 5 anos é de aproximadamente 11% quando detectado em estágios avançados (III /IV) [4] – [6]. Por conseguinte, muitos esforços têm sido focados na identificação de biomarcadores de diagnóstico para a detecção precoce do cancro do ovário [7], [8]. Um método de detecção robusta com base em perfis moleculares para o cancro do ovário ainda não foi estabelecida, porque a doença apresenta alterações metabólicas, devido à presença do tumor e as possíveis variações genéticos que afectam a química do sangue durante o curso da progressão do tumor [9].

o 125 ensaio (CA125) antígeno do câncer é o biomarcador clínico mais utilizado para o câncer de ovário [10]. No entanto, CA125 tem provado ser um mau biomarcador de diagnóstico de tumores, porque lhe falta de sensibilidade e especificidade para o cancro do ovário precoce (apenas 23% no estádio I do cancro do ovário, em contraste com mais do que 80% em cancro avançado do ovário) [11]. Ele é elevada acima dos níveis de referência em apenas 50% da doença clinicamente detectável fase inicial, e não é raro elevados em pacientes com doenças do ovário benignos [12], [13]. Além disso, os níveis de CA125 são falsamente elevados em mulheres grávidas e mulheres com patologias detectáveis ​​intraperitoneal [14] – [16]. Por conseguinte, têm sido feitas tentativas para combinar ou substituir CA125 com outros marcadores, e os investigadores avaliaram a capacidade de alguns marcadores estabelecidos para melhorar a identificação e prognóstico de cancro do ovário [12], [17], [18], indicando assim que o adição de um ou vários marcadores para CA125 melhoraria o desempenho de diagnóstico e prognóstico se a sensibilidade foi melhorada sem perda de especificidade. No entanto, porque a medição da concentração sérica de cada biomarcador putativo com ELISAs individuais requer um tempo considerável, os custos e volumes de amostras, novos métodos ou tecnologias para multiplexação deve ser desenvolvida.

O sistema baseado no talão Luminex é um automatizado plataforma de ensaio de elevado débito que fornece multiplexação numa fase de solução, o que resulta em ela ser particularmente flexível e não destrutivo para análise de proteínas. A utilização de anticorpos de detecção marcados com biotina e estreptavidina-R-ficoeritrina permite a quantificação das reacções de antigénio-anticorpo que ocorrem na superfície da microesfera através da medição da intensidade de fluorescência relativa. Portanto, o sistema é capaz de medir até 100 analitos simultaneamente, em um volume de amostra pequena (menos de 50 ul), indicando métodos multivariados que utilizam um painel de biomarcadores para prever pontos finais clínicos específicos de interesse.

neste estudo, foi tentada a medir três marcadores séricos de cancro do ovário, CA-125, transtirretina, e apolipoproteína A1, utilizando um sistema de imunoensaio baseado em grânulo multiplex, e avaliado o efeito combinado das três biomarcadores para o diagnóstico do cancro do ovário em comparação com os de os marcadores individuais sozinho.

declaração de Ética Materiais e Métodos

Todos os pacientes envolvidos no estudo tinham assinado uma declaração de consentimento declarando que os espécimes pacientes podem ser utilizados para fins científicos intenções. As amostras foram obtidas a partir de pacientes no Departamento de Obstetrícia e Ginecologia, em concordância com os procedimentos aprovados pelo Institutional Review Board da Universidade Católica da Coreia (07BR212).

Pacientes e amostras

Todos os pacientes foram inscritos no Hospital da escola católica Médico St. Mary durante o período de janeiro de 2001 a julho de 2007, de acordo com os procedimentos aprovados pelo Institutional Review Board da Universidade Católica da Coreia. Este estudo foi baseado em análises de soro coletadas de 118 pacientes com câncer de ovário, 84 com doença benigna, e 61 fêmeas saudáveis. As amostras de soro foram recolhidas de doentes antes da cirurgia, e, em seguida, incubadas durante 30 min à temperatura ambiente, seguido por centrifugação a 3000 rpm, durante a separação. O soro foi armazenado a -70 ° C até serem usadas em experiências; congelamento e descongelamento frequente foram evitadas. Os estágios e graus de tumores de pacientes com câncer de ovário foram atribuídos de acordo com as orientações fornecidas pela Federação Internacional de Ginecologia e Obstetrícia (FIGO), e os grupos inscritos foram divididos de acordo com a idade.

Conjugação de primária anticorpos com microesferas

Três tipos diferentes de microsferas (1 × 10

6 microesferas para cada anticorpo, Biosource, Camarillo, CA) foram preparadas em cada tubo, e foram então ressuspensas bem em vórtice e sonicação, seguido por centrifugação durante 2 min a 8000 rpm. Os sobrenadantes foram descartados, e as pelotas foram salvos e lavou-se uma vez com 100 ul de solução salina. Oitenta ul de 100 mM de fosfato de sódio monobásico (pH 6,2, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), 10 ul de 50 mM de sulfo-NHS (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) e 10 uL de EDC 50 mM (Pierce Biotechnology) foram adicionados, e a solução foi então incubada durante 20 min a temperatura ambiente. Após centrifugação (8000 rpm, 2 minutos), os sedimentos foram salvos e lavou-se duas vezes com 250 ul de 50 mM de MES (pH 5,0, Sigma-Aldrich). Após a remoção do sobrenadante, 500 ul de MES foi adicionada a cada tubo, incluindo diferentes microesferas. Após a adição de 0,5 ^ g de cada anticorpo [anti-CA125 (Fitzgerald Industries International, Inc., Concord, MA), anti-transtirretina (Abcam), e anti-apolipoproteína A1 (Fizgerald Industries International, Inc.)] em cada tubo , os tubos foram incubados durante 2 h num agitador, que foi protegido da luz. Após a incubação, as microesferas ligadas a anticorpo foram sedimentadas por centrifugação durante 2 min a 8000 rpm, e 500 ul de tampão BSA a 1% foi então adicionada. Após incubação adicional durante 30 minutos à temperatura ambiente, as microesferas foram lavadas duas vezes com tampão de BSA a 1% e, em seguida, armazenada a 4 ° C sob protecção da luz.

biotinas etiquetagem dos anticorpos secundários

para biotinas rotulagem sobre os anticorpos secundários, um kit de marcação de biotina (Alpha Diagnostics International Inc., de San Antonio, TX) foi usada de acordo com o protocolo do fabricante. Resumidamente, a biotina foi adicionado a uma razão de 1:10 (biotina: anticorpo). Após incubação durante 1 h à temperatura ambiente sob protecção contra a luz, a diálise foi realizada com solução salina tamponada com fosfato (PBS).

A análise de amostras por sistema de matriz líquido multiplex, Luminex 100

O soro a partir de indivíduos saudáveis ​​e pacientes com cancro do ovário foram diluídas para 1:100 num tampão incluindo 1% de BSA (Sigma-Aldrich) e 0,05% de Tween 20 (Sigma-Adrich). Cinquenta ul de cada soro diluído foram plaqueadas numa placa de filtro de 1,2 mm (96 cavidades), para que 2.500 grânulos de cada microesfera ligada ao anticorpo foram adicionadas em 50 ul. Após incubação durante 2 h à temperatura ambiente sob protecção contra a luz, elas foram lavadas duas vezes com tampão PBS incluindo 0,05% de Tween 20. Cem uL de 0,4 ug de estreptavidina-R-ficoeritrina (Sigma-Aldrich) foi adicionada a cada poço, e em seguida, as placas foram incubadas durante 30 min, seguido por duas lavagens com PBS contendo 0,05% de Tween 20. a identificação das microesferas ligadas a anticorpos e a triagem de microesferas de antigénio-anticorpo-ligadas foram realizadas usando Luminex 100 (Luminex Corp, Houston, TX) de acordo com o protocolo do fabricante. Os intervalos de concentração de cada antigénio para curvas padrão foram 10-250 U /ml para CA125, 0,1-100 ug /ml para transtirretina, e 0,5-50 ng /ml para a apolipoproteína A1. Os dados foram analisados ​​pelo programa BeadView (Upstate, Charlottesville, VA).

A análise estatística

O teste de análise de variância (ANOVA) foi utilizada para avaliar a significância estatística das diferenças entre o saudável indivíduos e pacientes com câncer de ovário. SigmaPlot (v12.0, Systat, Chicago, IL) e SAS (v9.1, SAS Institute, Cary, NC, EUA) foi utilizado para a análise estatística para determinar a sensibilidade, especificidade e o operador receptor característica (ROC) ( OBSERVAÇÃO em S1 Arquivo).

critérios OBSERVA

a descrição do cumprimento das Recomendações Relato de tumor marcador prognóstico estudos (Observação) [19] critérios para estudos de biomarcadores é fornecida em S1 arquivo.

resultados

Os níveis séricos de marcadores tumorais de ovário no controle saudável, benigna, e grupos de câncer de ovário

As características dos pacientes e os níveis séricos de marcadores de cancro do ovário são apresentados na Tabela 1 . Concentração de marcadores biológicos, tais como CA125, transtirretina, e apolipoproteína A1 no soro de indivíduos saudáveis, os pacientes benignas, e pacientes com cancro do ovário foi simultaneamente medida com um sistema de matriz líquido multiplex utilizando micro-esferas revestidas com anticorpos de captura e anticorpos marcados com biotina contra cada um dos os marcadores tumorais e estreptavidina-R-ficoeritrina. Os níveis séricos de CA125 era significativamente mais elevada em pacientes com cancro do ovário do que em indivíduos saudáveis ​​e pacientes benignas, enquanto que os níveis de transtirretina e apolipoproteína A1 foram menores em pacientes de cancro do ovário (Fig. 1a). Em primeiro lugar, foram comparados os níveis séricos destas três marcadores tumorais de acordo com as fases de tumor (Fig. 1B). Os níveis séricos de CA125 foram gradualmente elevada com o estágio do tumor. Além disso, tanto a transtirretina e apolipoproteína A1 foram significativamente aumentados em indivíduos saudáveis. Em seguida, buscou-se comparar os níveis séricos de três marcadores tumorais de acordo com os tipos histológicos de câncer de ovário (Fig. 1C). O nível sérico de CA125 foi o mais elevado tipo serosa comparados com os de outros tipos.

(A) controles saudáveis, doença do ovário benignos e pacientes com câncer ovariano (B) estágios tumorais em pacientes com câncer ovariano (C) diferentes subtipos histológicos em pacientes com câncer de ovário. valor de P ao longo de um grupo indica a significância estatística das diferenças entre cada grupo e controlos saudáveis. Cada assuntos de câncer de ovário foi comparado com controles saudáveis. N, controles saudáveis; BE, doença ovariana benigna; C, de células claras; E, endometrioid; G, granulosa celular; H, mucinoso; S, serosa; O, outra.

Comparação da sensibilidade e especificidade entre três marcadores tumorais sozinho e da combinação de três marcadores para o diagnóstico de câncer de ovário

Depois, nós comparamos a sensibilidade e especificidade entre cada marcador sozinho e os três marcadores em combinação, a fim de diagnosticar o câncer de ovário usando análise de receiver operating characteristic (ROC). Neste estudo, foram utilizados os valores de corte de 35 U /ml, 100 ng /ml e 500 ng /ml para CA125, transtirretina, e apolipoproteína A1, respectivamente, para uma melhor precisão de diagnóstico para as amostras testadas aqui. Ao usar esses valores de corte, fomos capazes de minimizar os índices de resultados falso-positivos e falso-negativos na diferenciação dos pacientes benignos de pacientes com câncer de ovário. As sensibilidades e especificidades para discriminar entre o cancro do ovário e doença benigna estão apresentados na Figura 2. A sensibilidade e especificidade dos marcadores individuais com CA125, transtirretina, e apolipoproteína A1 foram de 77,4% e 70,8%, 69,7% e 63,6%, e 60,2% e 56,9%, respectivamente (Fig. 2A). A sensibilidade e especificidade dos marcadores individuais para a fase inicial (fases I e II) foi de 51,6% e 51,2%, 61,2% e 59,2%, e 51,3% e 54,6%, respectivamente (Fig. 2B). E a sensibilidade e especificidade dos marcadores individuais para em estágio final (estágios III e IV) foram 93,4% e 84,3%, 74,9% e 68,2%, e 58,4% e 55,1%, respectivamente (Fig. 2C). Ao visão simples das curvas, o poder discriminatório na Fig. 2A é modesta, mas melhor para CA125, na Fig. 2B, muito fraco para todos os biomarcadores com alguma preferência de TTR, e na Fig. 2C, claramente mais forte para CA125 seguido de TTR e inútil para ApoA1.

As curvas mostradas foram obtidos através do processamento quantificados dados brutos por SigmaPlot 12,0 versão do software e da sensibilidade /valores de especificidade foram previstos a partir da área sob as curvas e os dados calculados. curvas ROC para CA125, transtirretina, e apolipoproteína A1 sozinho: (A) pacientes benignos versus pacientes com câncer de ovário; (B) pacientes benignos versus pacientes com estágios I e II câncer de ovário; (C) pacientes benignos versus pacientes com estágios III para o câncer de ovário IV.

Quando CA125 foi combinado com os biomarcadores (transtirretina e apolipoproteína A1), a sensibilidade global e especificidade para discriminar entre câncer de ovário e saudável indivíduos foram significativamente melhorados na curva ROC (Fig. 3A-C). Os três biomarcadores (CA125, TTR e Apo-A1) pacientes significativamente distintos com câncer de ovário fase inicial de indivíduos saudáveis. A 95% de especificidade para todas as fases da sensibilidade aumentada para 95,5% em comparação com 67% para CA125 sozinho. Durante a fase I + II aumentou a sensibilidade de 93,9% a partir de 30% para CA125 sozinho. Durante a fase III + IV foram os valores correspondentes, respectivamente, 96,5% e 91,6%, sugerindo que o painel de três biomarcador classificados cânceres em estágio inicial, com sensibilidade de 94% a 95% de especificidade, que foi significativamente maior do que sozinho CA125. A sensibilidade e especificidade global para discriminar entre o cancro do ovário e doença ovariana benigna foram ligeiramente melhorado em fase única I + II grupo de doentes, mostraram que 61,6% e 58% de sensibilidade e especificidade, respectivamente (Fig. 3D-F). Na figura, é evidente que a diferença entre o CA-125 e o painel para saudáveis ​​vs. total e fase I + II do cancro do ovário é altamente significativa (P 0,0001), mas negligenciável para vs saudável fases III + IV cancro (P = 0,043); Em contraste para a diferenciação mais importante entre benigna versus cancro do ovário, a diferença entre CA125 e o painel está em falta para benigna versus total e fase I + II do cancro do ovário e bastante melhor para benigna versus fase III + IV do cancro do ovário (P = 0,045). À medida que a discriminação mais importante é geralmente postulada entre um grupo maligno e seu grupo doença benigna diferencialmente relevante, torna-se claro que a diferença entre CA125 e o painel é ligeiramente melhor para benigna vs estágios III + IV.

As curvas apresentados foram obtidos através do processamento quantificados dados brutos por SAS 9.1 versão do software e da sensibilidade /valores de especificidade foram previstos a partir da área sob as curvas e os dados calculados. curvas ROC para sozinho CA125 e o painel de três biomarcadores: (A) controles saudáveis ​​versus pacientes com câncer de ovário. A diferença global em AUC entre o painel de três biomarcador e CA125 sozinho foi estatisticamente significativa (P 0,0001); (B) controles saudáveis ​​versus pacientes com estágios I e II do cancro do ovário (P 0,0001); (C) controles saudáveis ​​versus pacientes com estádios III para o câncer de ovário IV (P = 0,043); (D) pacientes benignos versus pacientes com câncer de ovário. (P = 0,49); (E) pacientes benignos versus pacientes com estágios I e II do cancro do ovário (P = 0,19); (F) pacientes benignos versus pacientes com estágios III para o câncer de ovário IV (P = 0,045).

Os três biomarcadores foram suficientes para a separação máxima entre o grupo saudável, mais benigno e fase I + II ou todas as fases (I-IV) (Fig. 4). Os grupos combinados de pacientes saudáveis ​​e benignos foram testados por análise ROC contra total e fase I + I ou estágio III + IV grupos de câncer de ovário, estimando uma mistura entre a Fig. 3A-C e 3D-F resultados. De facto, o teste de AUC para diferenças significativas entre CA125 e o painel de três biomarcador mostra nenhuma diferença em relação fases III + IV e as diferenças significativas claras mas modesto em comparação com o total (P = 0,012) e as fases I + II do cancro do ovário (P = 0,014) .

curvas ROC para sozinho CA125 e o painel de três biomarcadores: (a) controles saudáveis, mais pacientes benignos versus pacientes com câncer de ovário. (P = 0,012); (B) controles saudáveis, mais pacientes benignos versus pacientes com estágios I e II do cancro do ovário (P = 0,014); (C) controles saudáveis, mais pacientes benignos versus pacientes com estágios III para o câncer de ovário IV (P = 0,52).

Validação

Para confirmar se essa combinação é a mais alta precisão dos multivariada algoritmos de classificação, foram utilizados painéis de dois biomarcadores (CA125 além de transtirretina, CA125 além de apolipoproteína A1, e transtirretina mais apolipoproteína A1). A sensibilidade geral e especificidade destes painéis de dois biomarcadores não foram melhorados para discriminar entre o cancro do ovário e indivíduos saudáveis ​​em comparação com o painel de três biomarcador na curva ROC (Fig. 5A-C), sugerindo que o painel de três biomarcador mostrou a mais alta precisão, enquanto os painéis de dois biomarcadores mostraram tendências semelhantes com o painel de três biomarcadores entre um grupo maligno e seu grupo de doença benigna (Fig. 5D-F). E o painel de três biomarcador foi suficiente para a separação máxima entre o grupo saudável, mais benigno e fase I + II ou todas as fases (I-IV) (Figura S1).

curvas ROC para CA125 sozinho, o dois e três painéis -biomarker: (a) Os controlos saudáveis ​​versus pacientes com câncer de ovário; (B) controles saudáveis ​​versus pacientes com estágios I e II câncer de ovário; (C) controles saudáveis ​​versus pacientes com estádios III para o câncer de ovário IV; (D) pacientes benignos versus pacientes com câncer de ovário; (E) pacientes benignos versus pacientes com estágios I e II câncer de ovário; (F) pacientes benignos versus pacientes com estágios III para o câncer de ovário IV.

Começando com uma população de pacientes com câncer ovariano, foi utilizada amostragem aleatória simples estratificada sem substituição. Para a validação, 50% destes doentes estavam a ser utilizado como um conjunto de treino para determinar a vantagem da combinação destes marcadores para o diagnóstico do cancro do ovário. A parte restante dos pacientes serviu como o conjunto de validação para validar independentemente a utilidade deste biomarcador. Os conjuntos de treino e de validação foram muito semelhantes no que diz respeito às características dos pacientes. No conjunto de treinamento, a sensibilidade global e especificidade de painel de três biomarcador apresentou a maior precisão, enquanto os painéis de dois biomarcadores mostraram tendências menos sensível do que o painel de três biomarcador na curva ROC (Figura S2, S3, S4). No conjunto de validação, o painel de três biomarcador apresentou a maior precisão (Figura S5, S6, S7).

Para ver se essa combinação dá o maior poder de classificação em algoritmos de classificação multivariada, utilizou-se quatro biomarcador painel (CA125 além de transtirretina mais apolipoproteína A1 além de hemoglobina). A sensibilidade geral e especificidade destes painel de quatro biomarcador não foram melhorados para discriminar entre o cancro do ovário e indivíduos saudáveis ​​(e /grupo ou benigna), em comparação com o painel de três biomarcador na curva ROC (Figura S8-S9), o que sugere que o painel de três biomarcador é suficiente para a separação máxima entre (grupo e /ou benigna) saudável e fase I + II ou todas as fases (I-IV). Tomados em conjunto, o painel de três biomarcador pode ser um biomarcador poderosa para diagnóstico de câncer de ovário.

Discussão

convencionais ferramentas de rastreio de cancro do ovário são ineficazes para a população em geral [3]. O marcador mais estudado para o cancro do ovário, CA-125, é uma proteína que é encontrada em níveis na maioria das células de cancro do ovário que são elevados em comparação com as células normais e um marcador potencialmente útil para o diagnóstico e prognóstico após o tratamento de cancro do ovário, mas CA125 é expresso em única 50-60% dos pacientes com doença em estágio inicial, e também é freqüentemente aumentada em mulheres com doenças benignas do ovário [20] – [22]. Devido aos pontos vulneráveis ​​de CA125, como um biomarcador de cancro do ovário [23], combinando um ou mais de outros marcadores tumorais com CA125 pode melhorar a sensibilidade e especificidade do diagnóstico de cancro do ovário ou a detecção precoce de tais cancros [9]. Assim, esforços consideráveis ​​foram mobilizados para obter um mínimo valor preditivo positivo (VPP) de 10% e uma especificidade de mais de 99% como um ovário teste de rastreio eficaz do cancro [24], [25]. Em 2009, um teste clínico (OVA1) foi aprovado pela FDA. O teste baseou-se na estimativa dos níveis de cinco proteínas (transtirretina, apolipoproteína A1, transferrina, microglobulina beta-2, e cancerosas com o antigene 125) no sangue, o qual foi, em seguida, combinadas num único pontuação, que variam de 0 a 10, usando um algoritmo original (OvaCalc). Enquanto não existem estudos publicados para OVA1 [26], foi relatado que o desempenho do algoritmo OvaCalc mostrou 92,5% de sensibilidade, especificidade 43,0%, 41,9%, valor preditivo positivo, e 92,9% de valor preditivo negativo. E entre os 96 pacientes com diagnóstico de câncer epitelial de ovário, OvaCalc designado todos, mas um como de alto risco. Mas não foi relatado quantas mulheres com condições de ovário benignos foram incorrectamente classificados como de alto risco para a doença maligna, mas este número é presumido ser considerável. Além de atualmente evidências suficientes (por exemplo insuficientes evidências publicadas), o teste não é aprovado como uma triagem para câncer de ovário em estágio inicial e pode levar a uma maior quantidade de resultados falso-positivos, como uma ferramenta de triagem [26]. Assim, são necessários mais estudos para melhorar a especificidade e sensibilidade dos biomarcadores combinados em ambos os ensaios clínicos retrospectivos e prospectivos como uma ferramenta de triagem. Alguns dos resultados dos testes foram publicados [23]. No entanto, até à data nenhum teste de despistagem atingiu características de desempenho adequados para serem usados ​​como uma ferramenta valiosa para a detecção de câncer de ovário fase inicial. Neste estudo, avaliou-se uma nova combinação de três biomarcadores conhecidos de cancro do ovário, CA-125, transtirretina, e apolipoproteína A1, numa tentativa para melhorar a sensibilidade de CA125, que mostra que a transtirretina e apolipoproteína A1 foram aumentou a sensibilidade e especificidade do CA125 no câncer de ovário fase inicial. Enquanto transtirretina e apolipoproteína A1 têm sido usados ​​várias vezes como potenciais biomarcadores de câncer de ovário [23], [27], o painel de três biomarcador foi recentemente avaliada utilizando nossa população coreana. Além disso, este estudo eficazmente apresentados a validação do uso de um sistema de ensaio de líquido em multiplex para a detecção simultânea de vários marcadores para o diagnóstico do cancro do ovário. O ponto de corte de 35 U /ml para CA125 que usamos é geralmente aceito como normal [28].

A transtirretina tem sido usado como um biomarcador para o status malnutritional e inflamação, doenças agudas e crônicas, mas pós-traducionais formas modificadas têm também foi avaliado como parte de um painel de biomarcadores para a detecção precoce de câncer de ovário [29] – [31]. O nível sérico de transtirretina de comprimento completo foi sub-regulada entre os pacientes com mais tarde fase do cancro do ovário em relação ao que em controlos saudáveis ​​e pacientes com colo-rectal, da mama, ou cancro da próstata. Identificou-se que a correspondente ao pico a m /z 12,8 kD, uma forma truncada da transtirretina mostraram uma falta de aminoácidos N-terminais de dez. Em adição às mutações no nível da proteína, a TTR existe em isoformas diferentes [32]. Recentemente, uma variante truncada de transtirretina em conjunto com a apolipoproteína A1 e um tecido conjuntivo III, proteína de activação foram descritos como um painel eficiente de novos biomarcadores para a detecção do cancro do ovário epitelial fase precoce em mulheres [23].

apolipoproteína A1 é a componente proteico principal das lipoproteínas de alta densidade (HDL) no plasma [33]. Mostrou-se que a concentração de apolipoproteína A1 no sangue é reduzida em diferentes tipos de cancro [34]. A apolipoproteína A1 foi identificado como um biomarcador potencial de cancro do ovário, cancro colo-rectal, doença pulmonar obstrutiva crónica e cancro pancreático [29], [35], [36]. No entanto, também foram relatadas observações controversas incluindo a regulação positiva de apolipoproteína A1 numa variedade de tumores malignos do ovário, do fígado, da mama [37]. Recentemente, apolipoproteína A1 foi mostrado para aumentar a sensibilidade de CA125 para a detecção do cancro do ovário epitelial fase precoce e sugeriu um promissor agente terapêutico para o tratamento do cancro do ovário [23], [38]

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No entanto, quando aplicados individualmente , os marcadores estudados não superaram CA125 em suas sensibilidades e especificidades no diagnóstico de câncer de ovário. A combinação de marcadores individuais foi tentada por outros investigadores como uma estratégia para melhorar a taxa geral de detecção do cancro do ovário [23], [39] – [41]. Aqui, aplicou-se a combinação dos dois marcadores séricos com CA125, e compararam as sensibilidades e especificidades entre o painel de três marcadores e cada marcador isoladamente. Os resultados da análise da curva ROC mostram que a combinação de três biomarcadores que teve uma muito maior sensibilidade sobre o que de cada biomarcador sozinho. O painel de três biomarcador classificados cânceres em estágio inicial com 93,9% de sensibilidade e de estágio avançado cancros com sensibilidade de 96,5% a 95% de especificidade. Nós também adicionamos hemoglobina, um dos nossos marcadores biológicos publicou recentemente [42], no painel para confirmar se essa combinação dá o maior poder de classificação. Mas, o painel de quatro biomarcador (CA125 além de transtirretina mais apolipoproteína A1 além de hemoglobina) não melhorou a sensibilidade global e especificidade para discriminar entre câncer de ovário e indivíduos saudáveis ​​(e /grupo ou benigno), em comparação com o painel de três biomarcador na curva de ROC. Assim, independentemente da hemoglobina, o painel de três biomarcador foi suficiente para a separação máxima entre noncancer (grupo saudável mais benigna) e fase I + II ou todas as fases (I-IV) da doença. A sensibilidade e especificidade deste painel para a fase I + II são comparáveis ​​aos resultados obtidos com um painel de quatro biomarcador seleccionado a partir de 96 antigénios candidatos medidos por imunoensaios com técnicas multiplex [43]. Seu painel de biomarcadores classificou corretamente 67% das lesões benignas como noncancer. Outro estudo demonstrou a utilidade clínica de um marcador tumoral CA125 /HE4 combinada para a discriminação de tumores ovarianos benignos e malignos com sensibilidade de 76,4% na% de especificidade 95 [44]. A alta especificidade e aumentos correspondentes na sensibilidade para o painel de três biomarcadores tem mérito em ensaios de rastreio do cancro do ovário. Foi, no entanto, relataram que para a população em geral, o PPV de um painel de 6-marcador (leptina, prolactina, OPN, IGF-II, MIF, CA-125), medida por um sistema de imunoensaio baseado em grânulo multiplex será de 6,5% , indicando que 14 das 15 mulheres com um resultado positivo iria experimentar resultados de testes falso-positivos [45].

Existem várias limitações que precisam ser abordadas com respeito à presente estudo. Em primeiro lugar, uma descrição mais clara da população tais como a idade e distribuição racial, estado nutricional, presença de carcinomatose peritoneal e ascite, presença de doença infecção, exclusão de doença auto-imune ou mais doenças malignas (tais como cancros do ovário metastático do sistema gastrointestinal) pode ser muito importante para a avaliação dos níveis de biomarcadores [46] – [49]. Em segundo lugar, a variação biológica natural de certos marcadores e variação biológica ao longo do tempo também deverá ser considerada como a variabilidade associada poderiam induzir um número de erros de medição por ensaio de resultados falsos-positivos [50], [51]. Por exemplo, a variação inerente biológica intra-individual em CA125 foi maior do que na pré-menopausa em mulheres na pós-menopausa [52]. E mesmo em um estudo de caso-controle multi-center, pode haver diferenças de concentração de biomarcadores. A 4 marcador de painel (apolipoproteína A1 + transtirretina + inter-α-tripsina inibidor IV + CA125), por exemplo, diferenças de concentração exibiram entre a descoberta de biomarcadores e conjunto de validação independente [17]. Foi aceite que pode haver diferenças demográficas e epidemiológicas, e protocolos de processamento de amostras diferenças entre hospitais, levando a resultados diferentes. Assim, é necessário um modelo para estimar componentes analíticos e biológicos de variação de marcadores.