elementos O Z ‘para esta análise, com base em controlos positivos e negativos, foram entre 0,62 e 0,67, enquanto que a relação sinal-fundo tinha cinco anos em ambos os casos. No entanto, uma escalada ~ duas vezes foi desencadeada por alguns SMIPs na fracção de células positivas NKX3.1, o resultado foi discretos quando comparado com inibidores de proteassoma e não será confirmada por immunoblotting. Além disso, uma vez que a expressão de NKX3.1 endógena foi avaliada em DU145, outra linha celular de cancro da próstata ter níveis muito baixos de NKX3.1, nenhum dos SMIPs obtido positive.Nutlin-3a

Embora os inibidores de proteassoma levou a um aumento na expressão de p27-luc, que foi prontamente perceptível por immunoblotting e ensaio de luciferase, nenhum dos SMIPs foram eficazes. Este resultado indica um nível específico de especificidade CellType de ações SMIP. Embora a estrutura centrada no celular materiais que robustamente modulados o teste endpoint- níveis de p27 nucleares comumente revelado – em células intactas, nossa tela piloto também sujeitos as deficiências desta abordagem, a saber, que os alvos moleculares de SMIPs permanecem não identificados que o ponto final de testes modulada é não necessariamente causal para os melhores ramificações móveis dos compostos identificados. Por exemplo, a nossa investigação interferência de RNA revelou que era necessário não p27 nenhum p21 por atraso G1 induzida SMIP no tecido LNCaP-S14. É impossível que a ineficiência do pequeno RNA de interferência mediada knockdown oculta este tipo de dependência de ações SMIP, uma vez que p27 e falta de p21 diminuiu a fracção de células em G1, assim, revelando que os ganhos de eficiência alcançados knockdown aqui eram funcionalmente consequente.

Além disso, p21 e p27 faixas em células knockdown SMIP-tratados foram, contudo, inferior ou igual aos níveis em células de controlo não tratados, indicando a ligeira acumulação dos CKIs descobertos em cima SMIP supervisão a knockdown células vai ser suficiente para resultar em uma do ciclo celular arrest.Two informações potencial poderia ser oferecido para racionalizar o dispensability de p21 e p27 por atraso G1 induzida SMIP induzida por SMIPs: primeiro, tem sido bem estabelecido que fibroblastos de rato embrionárias falta p27 e p21 estadia proficientes em dar uma resposta a sinais de espalhamento negativas com parada do ciclo celular porque as proteínas de bolso p107 e p130, que têm actividade CKI-se, compensar a sua perda do p27ANDp21. Em seguida, SMIPs induzida infra-regulação de vários bons reguladores do ciclo celular, incluindo ciclinas E, juntamente com um e CDK4, que foi totalmente preservada em cima p27 e p21 knock-down.UNC1215

Por isso, é concebível que o combinado effectation da ciclina CDK down regulation inibição /andCDK por proteínas de bolso e outros CKIs compõe cerca de atraso do ciclo celular SMIP mediada dentro da ausência de p27 e p21. Embora pareça os materiais identificados no monitor de preliminar de hoje causou p27 regulação positiva como um efeito secundário de atraso do ciclo celular, usando a acumulação de p27 nuclear como um endpoint testes prontamente permitiu a identificação de substâncias permeáveis ​​celulares com actividade antiproliferativa. Como eles causar atraso do ciclo celular e a apoptose em várias células de cancro da próstata diferentes no entanto, não em fibroblastos humanos normais significativamente, tanto selectividade de células de cancro SMIPs exposição. Além disso, eles consideraram um substituto rígida para o desenvolvimento de tumores in vivo e inibir a formação de colónias em agar mole, o que é realmente uma característica do fenótipo alterado de tecido de cancro.