Abstract

Novas evidências sugerem que DNAM-1 (CD226) desempenham um papel importante no reconhecimento das células tumorais e sua lise por linfócitos T citotóxicos ( CTL) e células NK. Embora o ligando CD155 DNAM-1 é expressa ubiquamente em tecidos diferentes, muitos tumores humanos supra-regular significativamente a expressão de CD155; DNAM-1 em células NK e de CTL podem estar envolvidos na imunidade tumoral. No entanto, ao contrário daqueles em camundongos, tecidos humanos também expressam isoformas solúveis de CD155 (sCD155) que não possuem a região transmembranar. Aqui, mostramos que os níveis sCD155 foram significativamente mais elevados nos soros de 262 pacientes com pulmonar, gastrointestinal, da mama, e cancros ginecológicos que em soros de dadores saudáveis. Além disso, os níveis sCD155 foram significativamente maiores em pacientes com estágio inicial (estágios 1 e 2) câncer gástrico do que em doadores saudáveis, e foram significativamente maiores em pacientes com estágio avançado (estágios 3 e 4) a doença do que em pacientes em aqueles com início estágio da doença e os doadores saudáveis. Além disso, os níveis sCD155 diminuíram significativamente após a ressecção cirúrgica de cancros. Assim, o nível sCD155 no soro pode ser potencialmente útil como um biomarcador para o desenvolvimento e progressão do câncer

Citation:. Iguchi-Manaka A, Okumura G, Kojima H, Cho Y, Hirochika R, Bando H, et al. (2016) Aumento solúvel CD155 no soro de pacientes com câncer. PLoS ONE 11 (4): e0152982. doi: 10.1371 /journal.pone.0152982

editor: Hiroshi Shiku, Mie University Graduate School of Medicine, JAPÃO

Recebido: 24 de agosto de 2015; Aceito: 22 de março de 2016; Publicação: 06 de abril de 2016

Direitos de autor: © 2016 Iguchi-Manaka et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. Todos relevante os dados estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Esta pesquisa foi apoiada em parte por subvenções concedidas pelo Ministério da Educação, Cultura, Desporto, Ciência e Tecnologia do Japão (Grant número 26861038, 24249021 e 25114701 a AI-M, AS, e KS). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

vigilância imunológica de tumores suprime o desenvolvimento de câncer para proteger o hospedeiro. Os principais intervenientes da imunidade mediada por células para tumores, os linfócitos T citotóxicos (CTL) e células NK [1, 2], medeiam o reconhecimento do tumor e a activação através dos seus receptores de antigénios e uma variedade de adesão e moléculas co-estimuladoras [2, 3]. As interacções de receptores da superfície celular com os seus ligandos expressos em células de tumor induzir a actividade citotóxica das células NK e CTL contra tumores [4].

DNAM-1 (CD226) é um membro da superfamília das imunoglobulinas, e é expressa em NK células, células T, monócitos, macrófagos e plaquetas [5, 6]. Os seus ligandos em humanos e ratinhos são o receptor de poliovírus CD155 e CD112 seu membro da família (PPR-2 [família relacionados com PVR 2], também chamado Nectin-2) [7-9]. CD155 humano e CD112 são amplamente distribuídas em células epiteliais e endoteliais em muitos tecidos [10, 11]; designadamente, eles são sobre-expressos em vários tumores, incluindo o colorrectal [12, 13], gástricas [12], e cancros do ovário [14]; neuroblastoma [15]; leucemias mielóides [16]; mieloma múltiplo [17]; e melanoma [18]. As interacções entre CD155 e CD112 nas células tumorais e DNAM-1 sobre as células NK e T aumentam a citotoxicidade e a produção de citoquinas mediada por células [7, 8]; DNAM-1 é provavelmente envolvidos na imunidade contra CD155- e os tumores malignos que expressam CD112. Na verdade, num modelo de tumores induzidos quimicamente em ratinhos DNAM-1-deficiente, DNAM-1 é importante para a vigilância imunitária contra tumores que expressam CD155-[19]. Portanto, CD155 em tumores é crucial para a imunidade tumoral DNAM-1-mediada.

No entanto, para além de CD155 ligado à membrana (mCD155, CD155α), tecidos humanos (ao contrário dos ratinhos) expressam CD155 solúveis (sCD155 ) (CD155β e CD155γ) codificado por isoformas de splicing de

CD155

que falta a região transmembranar [20, 21]. Aqui, nós examinamos os níveis séricos de sCD155 em 262 doentes com cancros variáveis ​​e mostrar que sCD155 pode ser útil como um biomarcador para o desenvolvimento e progressão do câncer.

Materiais e Métodos

As linhas celulares

Foram utilizados os seguintes linhas de células humanas obtidas a partir de ATCC: HeLa (carcinoma cervical), HOS (osteossarcoma), RD (rabdomiossarcoma), U87MG (glioma), Jurkat (leucemia de células T), e Colo 205 (carcinoma colorectal) . MethA (sarcoma induzido por metilcolantreno de BALB /c mouse) foi fornecido pelo Dr. Eiichi Nakayama (Universidade de Okayama).

Amostras

As amostras de tecido foram obtidas de pacientes com câncer primário submetidos à ressecção cirúrgica da Universidade de Tsukuba Hospital, Japão. As amostras de soro foram obtidas de pacientes com câncer primário da Universidade de Tsukuba Hospital e Ibaraki Hospital Central da Prefeitura, Japão, e de voluntários saudáveis. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes e voluntários saudáveis. Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética da Universidade de Tsukuba e do Hospital Central da Prefeitura de Ibaraki (Número de aprovação 531-5 e 307). estágio da doença foi classificada de acordo com a União Internacional de Controle do Câncer (UICC) TNM Classificação de tumores malignos.

Ratos

camundongos BALB /c foram adquiridos de Charles River (Yokohama, Japão). Todos os ratos foram alojados e foram criados em condições livres de patógenos específicos no Centro de Recursos Animais da Universidade de Tsukuba. ratinhos experimentais foram utilizados a 7-10 semanas de idade. Todos os experimentos usando camundongos foram aprovados pela Comissão em Experimentação Animal da Universidade de Tsukuba (Número de aprovação 09-390 e 10-237) e realizada de acordo com as orientações da Comissão em Experimentação Animal da Universidade de Tsukuba.

PCR

O ARN total foi extraído a partir de linhas de células e tecidos com reagente Isogen (Nippon Gene). Para RT-PCR, utilizou-se-High Capacity cDNA Transcrição Reversa Kits (Applied Biosystems). A análise de PCR de

CD155

variantes de splicing foi realizada, como previamente descrito [21].

Quantitative real-time PCR

O ARN total foi extraído a partir de tecidos usando o reagente Isogen ( Nippon Gene). análise de qRT-PCR de

CD155

variantes de splicing foi realizada com Ensaios de Expressão Gênica TaqMan (Applied Biosystems) e Applied Biosystems 7500 Rápido Real-Time PCR System. Foram utilizados os seguintes Ensaios de Expressão Gênica TaqMan: Hs1050633_m1 (

CD155α

), Hs1050636_m1 (

CD155γ

) e Hs99999903_m1 (

ACTB

). Para

CD155β

, utilizou-se mercadorias de TaqMan Gene Expression Ensaios com os seguintes iniciadores e repórter: iniciador directo 5′-AAAGAGGGACCTCCCAGTGA-3 ‘, iniciador inverso 5′-GAATAGGAGACATGCCCATTAGCT-3′, 5’-e repórter CACTCAGGTACAGAGCATG- 3 ‘. Ao utilizar um Agilent Bioanalyzer 2100, foi analisada a qualidade do ARN total por qRT-PCR para um número de integridade do ARN 7. Todos os valores foram determinados em triplicado.

ELISA para humana solúvel CD155

níveis sCD155 em soros foram medidos por ELISA sanduíche usando o mouse anti-humana CD155 mAb (TX24) e coelho anti-humano CD155 Ab policlonal (pAB) na forma de captura e de detecção de Abs, respectivamente, seguido de IgG ligado a HRP anti-coelho (GE Healthcare) e substrato fluorogénico QuantaBlu peroxidase (Pierce Biotechnology). placas pretas de 96 poços (Greiner Bio-One) foram revestidas com mAb de murganho anti-humano CD155 (TX24, 2 ug /tampão de bloqueio ml, 100 ul /poço) para a captura durante a noite a 4 ° C, bloqueadas com tampão de bloqueio (10% FBS, 200 uL /​​poço) durante 1 h à temperatura ambiente, e lavou-se três vezes com tampão de lavagem (0,05% de Tween 20). amostras de proteína CD155-Fc humano de fusão (como padrões) e de soro foram colocadas em placas a 100 uL /​​poço, incubou-se durante 1 h à temperatura ambiente, e lavou-se com tampão de lavagem. Após a incubação sob as mesmas condições, com 100? L de anticorpo de coelho anti-humano CD155 Pab (5 ug /ml em tampão de bloqueio), as placas lavadas foram incubadas sob as mesmas condições, com 100 pL de anti-IgG de coelho-HRP (1: 2000 em lavar tampão), lavou-se, e feito reagir com 100 uL de solução de trabalho QuantaBlu (Pierce Biotechnology) durante 30 min à temperatura ambiente. Nós parou as reacções com 100 uL de QuantaBlu solução de paragem (Pierce Biotechnology) e medida a unidade de fluorescência relativa (RFU) de cada poço a comprimentos de onda de 320 nm para excitação e 420 nm para emissão utilizando um leitor de Spectra Max M2e (Molecular Devices). Todos os valores foram determinados em triplicado. O ratinho anti-humano de mAb CD155 (TX24) e proteína de fusão de Fc-CD155 humano foram gerados no nosso laboratório, como descrito anteriormente [8]. O CD155 pAb de coelho anti-humano foi gerado no nosso laboratório por métodos padrão.

Criação de MethA transfectante que expressa sCD155 rato

O ADNc que codifica a região extracelular de CD155 de rato foi subclonado no P3 × FLAG vector de expressão -CMV-13 (Sigma-Aldrich) e transduzido para as células para gerar Metha transfectante que expressa estavelmente sCD155 marcado com FLAG, utilizando DMRIE-C o reagente de transfecção (Invitrogen). O transfectante foi selecionado pelo G418 (Sigma-Aldrich) e passadas na cavidade peritoneal de camundongos.

ELISA para CD155-3 rato × proteína de fusão flag

sCD155 marcada com Flag em ascite de rato e no soro foram medidos por ELISA em sanduíche utilizando um rato anti-CD155 mAb (TX56) e de ratinho anti-FLAG BioM2 mAb (Sigma-Aldrich) como de captura e de detecção de mAb, respectivamente, seguido de estreptavidina-HRP (GE Healthcare) e QuantaBlu Fluorogênico substrato de peroxidase (Pierce). placas pretas de 96 poços (Greiner Bio-One) foram revestidas com rato anti-CD155 mAb (TX56, 2 ug /ml em tampão de bloqueio (10% de FBS em PBS), 100 ul /poço) durante a noite a 4 ° C, tratada com o tampão de bloqueio (200 ul /poço) durante 1 h à temperatura ambiente, e lavou-se três vezes com um tampão de lavagem (0,05% de Tween 20). As amostras foram colocadas em placas a 100 uL /​​poço, incubado durante 1 h à temperatura ambiente, e lavada com o tampão de lavagem. Após a incubação sob as mesmas condições, com 100 ul de anti-FLAG BioM2 (Sigma-Aldrich, 1 ug /mL de tampão de bloqueio), as placas foram incubadas sob as mesmas condições com 100 ul de estreptavidina-HRP (GE Healthcare, 1: tampão de 2,000 lavar ), lavou-se, e feito reagir com 100 uL de solução de trabalho QuantaBlu (Pierce Biotechnology) durante 30 min à temperatura ambiente. Depois de parar a reacção com 100 uL de solução de paragem QuantaBlu (Pierce Biotechnology), medimos unidades de fluorescência relativa de cada poço a comprimentos de onda de 320 nm para excitação e 420 nm para emissão usando um espectros M2e Max (Molecular Devices). Todos os valores foram determinados em triplicado. Rato anti-CD155 mAb (TX56) foi gerada em nosso laboratório como descrito anteriormente [8].

O crescimento do tumor ensaio

Os ratinhos foram inoculados por via subcutânea na parte de trás com 8 × 10

4 células sCD155-Metha. Os ratinhos foram monitorizados para o tamanho do tumor (o comprimento (L) e (S) dimensões curtos), usando compassos de calibre de uma vez por semana, e os volumes dos tumores foram calculados pela equação: volume = (L × S

2) /2, como previamente descrito [22]. Os ratos foram sacrificados por CO2 ou anestesia após o final do experimento.

Estatísticas

As análises estatísticas foram realizadas utilizando o teste de Mann-Whitney U bicaudal eo teste de duas caudas t de Student .

resultados

a expressão de CD155α e CD155β em tecidos tumorais foi maior do que em tecidos não-tumorais

Embora sCD155 é altamente expresso em cancros colo [12], a sua perfil de expressão em outros tipos de cancro não é clara. Por RT-PCR, analisou-se a expressão de

CD155

ARNm em várias linhas de células de tumor do colo do útero e primário, ovariano, e cancro do endométrio; todas as linhas celulares e câncer expressa tanto ligada à membrana (

CD155α

) e solúvel (

CD155β

e

CD155γ

)

CD155

mRNA (Fig 1). Em seguida, por quantitativa PCR em tempo real (qRT-PCR), comparou-se a expressão de

CD155

isoformas entre colorectal, gástrico, e cancros da mama e dos seus tecidos não tumorais adjacentes; as expressões de

CD155α

e

CD155β

, mas não

CD155γ

, foram significativamente maiores nos cancros do que nos tecidos não tumorais (P 0,05) (Fig 2).

o PCR foi realizado utilizando os conjuntos de iniciadores localizados de cada lado dos locais de splicing diferentes. Três bandas de tamanhos previstos (α: 273 pb, p: 138 pb, y: 114 pb) são observados em produtos de PCR. para ARNm ligado à membrana (α) e solúvel

CD155

(β,

γ

) foi expressa por várias linhas celulares de cancro humanas (A) e do colo do útero, ovário e tecidos de cancro do endométrio (B ).

tumoral e tecidos adjacentes não tumorais foram tomadas a partir de amostras de ressecção cirúrgica de colorretal (adenocarcinoma, n = 9), gástrico (adenocarcinoma, n = 4), e da mama (carcinoma ductal invasivo, n = 3) tipos de câncer. qRT-PCR de

CD155

variantes de splicing de ARN foi realizada, e foi calculada a alteração de expressão de dobragem relativa do tecido de tumor em relação ao tecido não-tumoral adjacente. A expressão de ligada à membrana (α) e solúvel (β)

CD155

ARN nos tecidos de tumor foi significativamente maior do que a dos tecidos não tumorais (P 0,05).

níveis sCD155 foram maiores em soros de pacientes com câncer do que nas dos doadores

saudável

uma vez que a expressão de

sCD155

em tecidos de câncer foi regulada, estabelecemos um sanduíche de ELISA para medir sCD155 (S1 fig) e quantificado sCD155 nos soros de 262 doentes com vários cancros, incluindo o pulmão, esófago, estômago, colo-rectal, de duto biliar, pâncreas, da mama, do ovário, do endométrio, e cancros cervicais (Tabela 1). Em comparação com dadores saudáveis ​​(n = 60), os soros dos doentes com cancro tinham níveis sCD155 significativamente maiores (média = 15,6 ng /mL e 28,3 ng /mL, respectivamente, P 0,0001) (Tabela 1, Figura 3A), que estavam não afectada pela idade ou sexo do paciente (dados não mostrados). A curva ROC ilustra o poder do nível sCD155 para discriminar entre pacientes com câncer e doadores saudáveis; o valor para a área sob a curva foi de 0,718 (Fig 3B).

(A) solúvel CD155 níveis no soro de doadores saudáveis ​​(n = 60) e pacientes com cancro (n = 262) foram analisados ​​por ELISA sanduíche . Em comparação com dadores saudáveis, os soros de pacientes com cancro tinham níveis significativamente mais elevados sCD155 (p 0,0001). Barra vermelha: média, preto bar: SD. (B) Receiver operating characteristic-curva que ilustra o poder do nível CD155 solúvel para discriminar entre dadores saudáveis ​​e pacientes com câncer.

Em comparação com aqueles em amostras de controlo saudáveis, os níveis sCD155 em soros de pacientes com cada tipo de cancro excepto cancro cervical foram significativamente maiores (pulmão: P 0,05, esofágica: P 0,001, gástrica: P 0,0001, colorrectal: P 0,001, bílis-adesiva: P 0,0001, pancreático: P 0,0001, mama: P 0,05, do ovário: P 0,01, do endométrio: P 0,01) (Tabela 1, Fig 4A). Notavelmente, em comparação com os doadores saudáveis, pacientes com estágio inicial (fases 1 e 2) câncer gástrico tinham níveis significativamente mais elevados sCD155 (P 0,01). Além disso, os níveis sCD155 foram significativamente maiores em pacientes com estágio avançado (estágios 3 e 4) de câncer gástrico do que em pacientes em estágios iniciais (P 0,05) e controles saudáveis ​​(P 0,001) (Fig 4B). Embora os níveis de sCD155 não foram alteradas ou mesmo aumentada em alguns pacientes após ressecção cirúrgica de cancros e isto pode ser dependente de cada doente com cancro diferente, a análise estatística para a população total demonstrou que os níveis de sCD155 foram significativamente menores (P 0,05) (Figura 4C )

(a) níveis solúvel CD155 em soros de acordo com os vários tipos de câncer (pulmão:. n = 52, esofágico: n = 8, gástrica: n = 49, colorectal: n = 12, de duto biliar : n = 25, pancreático: n = 18, da mama: n = 32, ovário: n = 23, do endométrio: n = 16, do colo do útero: n = 15) analisados ​​por ELISA em sanduíche. Barra vermelha: média, preto bar: SD. (B) os níveis de solúvel CD155 em soros de pacientes com câncer gástrico estratificados por estágio da doença. Fases 1 2: n = 24, estágios 3 4: n = 25. (C) os níveis de solúvel CD155 em soros de pacientes com câncer submetidos à cirurgia (n = 73) foram analisados ​​para o câncer antes e depois. nível CD155 solúvel diminuiu significativamente após a operação. plot Red: média, média pré-operatória: 26,529 ng /mL, média pós-operatória: 22,390 ng /mL, P 0,05. dias pós-operatórios: 69,30 ± 61,95

níveis sCD155 em soros eram dependentes de carga tumoral em um modelo de rato

Com base nos resultados descritos acima, a hipótese de que os níveis de sCD155 no soro. de câncer pacientes associar com a carga tumoral. Para abordar esta hipótese, foram transfectadas linha celular de fibrossarcoma MethA, o qual expresso apenas mCD155 endógena, com um vector de retrovírus contendo ou cDNA que codifica a porção extracelular de CD155 de rato ou com um vector de controlo simulado. Nós inoculado os transfectantes (sCD155-Metha ou Mock-Metha) na cavidade peritoneal de camundongos e, 10 dias depois, recolhido ascite. Para quantificar o nível sCD155, nós estabelecemos um sistema de ELISA. Embora sCD155 foi dificilmente detectada nas ascites de ratos que tinham sido inoculados com Mock-MethA por ELISA, foi detectada uma quantidade significativa de sCD155 nas ascites de ratos que tinham sido inoculados com sCD155-MethA (Figura 5A). Estes resultados demonstraram que sCD155-MethA produzida sCD155

in vivo

. então nós inoculados subcutaneamente ratinhos com sCD155-MethA e medidos ambos os níveis séricos sCD155 e tamanho do tumor. Observou-se que os níveis de sCD155 nos soros foram correlacionados com sCD155-MethA tamanho do tumor (Fig 5B). Estes resultados sugerem que os níveis séricos sCD155 associar com a carga tumoral.

(A) MethA transfectante secretoras sCD155 (sCD155-MethA) ou proteína de controlo (Mock-MethA) foram inoculados na cavidade peritoneal e, em seguida, foi recolhida ascite. níveis sCD155 em ascites de ratos que tinham sido inoculados com estas transfectantss foram medidos por ELISA. ratinhos (B) BALB /c foram inoculados subcutaneamente com sCD155-MethA transfectante. níveis tamanho do tumor e sCD155 no soro foram medidos e foi calculado o coeficiente de correlação.

Discussão

Embora sCD155 foram identificados há 25 anos [20], pouco se sabe sobre a sua expressão e função. Aqui, mostramos que a expressão de sCD155 (

CD155β

), bem como mCD155 (CD155

um

) ARNm em tecidos de tumor foi significativamente mais elevada do que nos tecidos não tumorais. Além disso, os pacientes com vários tipos de cancros mostraram níveis significativamente mais elevados de sCD155 soro, em comparação com amostras de controlo saudáveis. Além disso, os níveis de sCD155 em soros foram correlacionados com a progressão da doença em doentes com cancro gástrico e o tamanho do tumor em ratinhos. Os nossos resultados sugerem que os níveis sCD155 nos soros de pacientes com cancro são possivelmente dependente carga tumoral. relatório anterior mostrou que a sobre-regulação de CD155 de rato é mediado por via de sinalização de Raf-MEK-ERK-AP-1 [23], sugerindo que a expressão de ambos mCD155 e sCD155 é sobre-regulada por esta via também no ser humano, embora mais estudos são necessários para determinar como sCD155 é regulada em cancros. No entanto, os nossos resultados sugerem que o nível sCD155 soro é potencialmente útil como um biomarcador para a progressão do cancro.

Embora mCD155 expressa em tumores foi pensado para ser envolvidos na imunidade tumoral mediada DNAM-1-, resultados contraditórios têm sido relatados . Por exemplo, a sobreexpressão de mCD155, tal como determinado por imuno-histoquímico utilizando anticorpo anti-CD155, no adenocarcinoma de pulmão e melanoma foi correlacionada com um mau prognóstico [24, 25]. No entanto, estes estudos não discriminar entre mCD155 e sCD155. Neste estudo, nós mostramos que a expressão de ambos mCD155 (

CD155α

) e sCD155 (

CD155β

) foram regulados positivamente em cancros, incluindo cancros colo-rectal, gástrico e da mama, em comparação com não-câncer tecidos. Embora, devido ao número limitado de cada tipo de câncer, não foi possível avaliar a correlação entre os níveis de sCD155 expressão (

CD155β

) mRNA em tecidos de câncer ou níveis de CD155 soro e progressão da doença e prognóstico, níveis mais elevados de sCD155 no soro foi associado com estágio avançado de câncer gástrico e tamanho do tumor em ratos.

relatórios anteriores demonstraram o papel da forma solúvel de receptores de membrana na evasão tumor. moléculas ligadas a membranas, tais como NKG2D ligandos MHC de classe I-relacionada molécula (MIC) e proteínas UL16 de ligação (ULBPs) e Fas, que estão envolvidas em células NK e a citotoxicidade mediada por CTL contra tumores, têm sido mostrados para ser lançado como solúvel formas no soro de vários pacientes com câncer [26-30]. Ao contrário de CD155, MIC e ULBPs solúveis são gerados a partir de tumores por derramamento proteolítica [26, 31, 32]. Os tumores podem escapar da vigilância imunológica NKG2D mediada por vários mecanismos; um deles é que o MIC solúvel regula negativamente a expressão NKG2D [31, 33]. relatório anterior mostrou que altos níveis de ULBP2 solúvel no soro foram associados com pior prognóstico da doença em pacientes com melanoma [27], sugerindo que ULBP2 solúvel está envolvido no tumor evasão imune.

Em contraste com ligantes NKG2D, o significado funcional de sCD155 na imunidade tumoral tem permanecido obscura. Estudos recentes revelaram que DNAM-1 ações da CD155 ligando com imunor células T com Ig e domínios ITIM (TIGIT) ou CD96 [34, 35]. CD96-reticulação com a proteína de fusão Fc-CD155 ligado à placa inibiu a produção de IFN

γ

por células NK [36]. Além disso, ratinhos deficientes em CD96-mostrou diminuição da metástase experimental de tumores [36], o que sugere que CD96 e DNAM-1 se opõem uma à outra na imunidade tumoral. Da mesma forma, TIGIT tem um efeito oposto ao DNAM-1 na imunidade tumoral [37, 38]. Para esclarecer o significado funcional de sCD155 na imunidade tumoral, mais estudos são necessários como a interação de sCD155 com a sua activação (DNAM-1) e receptores (CD96 e TIGIT) inibidores e sua sinalização através destes ativar e receptores inibitórios são regulados.

Informações de Apoio

S1 Fig. Estabelecimento de ELISA em sanduíche para sCD155.

(A) curva padrão de proteína de fusão CD155-Fc humano. (B) Num placa de 12 poços, 1 × 10

6 HeLa foram cultivadas por 1 mL de meio; sobrenadantes de cultura foram coletadas após 24 e 48 h para detecção da proteína CD155 solúvel

doi:. 10.1371 /journal.pone.0152982.s001

(EPS)

Reconhecimentos

Agradecemos Tochihara S e Nomura Y do auxílio da secretaria.