Abstract

Fundo

para investigar o significado preditivo da

KRAS

,

BRAF, PIK3CA

estado mutacional,

AREG- EREG

expressão de mRNA, a expressão da proteína PTEN e erupção cutânea em câncer colorretal metastático (mCRC ) pacientes tratados com cetuximab quimioterapia contendo resgate.

Métodos

Os tumores primários de 112 pacientes com CCRm foram analisados. O pior de toxicidade cutânea durante o tratamento foi registrado.

Resultados

KRAS

,

BRAF

e

PIK3CA

mutações estavam presentes em 37 (33%), 8 (7,2%) e 11 (9,8%) casos, respectivamente, PTEN foi perdida em 21 (19,8%) casos,

AREG

e

EREG

foram sobre-expressos em 48 (45%) e 51 (49%) casos. Em toda a população do estudo, o tempo para a progressão do tumor (TTP) e sobrevida global (OS) foi significativamente menor nos pacientes com

KRAS

(

p = 0,001

e

p

= 0,026, respectivamente) ou

BRAF

(

p = 0,001

e

p Art 0,0001, respectivamente) tumores mutantes, regulação negativa da

AREG

(

p = 0,018

e

p

= 0,013, respectivamente) ou

EREG

(

p = 0,002

e

p = 0,004

, respectivamente) e grau 0-1 erupção cutânea (

p Art 0,0001 e

p Art 0,0001, respectivamente). Em

KRAS

pacientes wt TTP e OS foi significativamente menor nos pacientes com

BRAF

(

p = 0,0001

e

p Art 0,0001, respectivamente) tumores mutantes, regulação negativa da

AREG

(

p = 0,021

e

p

= 0,004, respectivamente) ou

EREG

(

p

= 0,0001 e

p Art 0,0001, respectivamente) e grau 0-1 erupção cutânea (

p Art 0,0001 e

p Art 0,0001, respectivamente). TTP foi significativamente menor nos pacientes com

PIK3CA

mutações (

p

= 0,01) ou perdido PTEN (

p

= 0,002). A análise multivariada revelou

KRAS

(hazard ratio [HR] 4.3,

p Art 0,0001),

mutação BRAF

(HR: 5,1,

p

0,0001),

EREG

baixa expressão (HR: 1,6,

p

= 0,021) e ausência de erupção cutânea grave /moderada (HR: 4,0,

p

0,0001) fatores prognósticos independentes para diminuição da TTP. Da mesma forma,

KRAS

(HR 2.9,

p

= 0,01),

mutação BRAF

(HR: 3,0,

p

= 0,001),

EREG

baixa expressão (HR: 1,7,

p

= 0,021), absecence de erupção cutânea grave /moderada (HR: 3,7,

p Art 0,0001) ea presença de tumores undifferantited (HR: 2,2,

p

= 0,001) foram reveladas como fatores prognósticos independentes para diminuição OS

Conclusões

Estes resultados sublinham que

KRAS-BRAF.

mutações e

EREG

expressão pode ser usada como biomarcadores para selecionar mais pacientes em tratamento anti-EGFR

Citation:. Saridaki Z, Tzardi M, Papadaki C, Sfakianaki M, Pega F , Kalikaki A, et al. (2011) Impacto da

KRAS, BRAF, PIK3CA

Mutações, PTEN,

AREG, EREG

Expressão e Pele Rash em ≥2

nd Linha Cetuximab-Based Therapy de colorretais pacientes com câncer. PLoS ONE 6 (1): e15980. doi: 10.1371 /journal.pone.0015980

editor: Meenhard Herlyn, Wistar Institute Programa, United States |

Recebido: 23 Setembro, 2010; Aceito: 01 de dezembro de 2010; Publicação: 20 de janeiro de 2011

Direitos de autor: © 2011 Saridaki et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Dr. Z. Saridaki é um destinatário de uma Associação de Creta for Biomedical Research (CABR) bolsa de pesquisa. Nenhum atuais fontes de financiamento externas deste estudo

Conflito de interesses:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Apesar dos progressos alcançados na gestão de metastático câncer colorretal (mCRC) ao longo dos últimos anos, a doença continua sendo um grande problema de saúde pública no mundo ocidental com uma estimativa de 146.970 novos casos de CRC e 49,920 mortes em 2009 nos Estados Unidos [1].

dois anticorpos monoclonais alvo EGFR (anti-EGFR MoAbs), tanto por ligação ao domínio extracelular, e, portanto, conduz à inibição da sua sinalização a jusante, o quimérico cetuximab IgG1 moAb e o completamente humanizado panitumumab IgG2 Moab, introduziu prática clínica no CCRm configuração e têm provado proporcionar um benefício clínico em pacientes pré-tratados modesto, quer utilizado sozinho ou em combinação com quimioterapia [2] – [5]. No entanto, desde o início tornou-se claro que nem todos os pacientes derivar um benefício a partir da incorporação destes agentes para as combinações de tratamentos; estudos retrospectivos, de fato, não randomizados [6] – [11], bem como análise retrospectiva de estudos prospectivos randomizados [12] – [16] demonstraram que a presença de

KRAS

mutações foram preditores de resistência a anti- a terapia de EGFR MoAbs e foram associados a um pior prognóstico e menor sobrevida. Com base nesse conhecimento, um tumor primário de

KRAS

estado mutacional agora é obrigatório para o tratamento da doença metastática com um Moab (agência europeia de medicamentos anti-EGFR – EMEA-HC-741 e HC-558 e US Food and Drug Administration – FDA Aplicação n.º (BLA) 125084 e No. (BLA) 125.147)

No entanto, nem todos os pacientes com

KRAS

WT tumores beneficiar de anti-EGFR tratamento MoAbs, significado. que os determinantes genéticos adicionais de resistência existir [7], [9], [17] – [19]. Com efeito, a partir de três estudos retrospectivos CCRm esporádicos [20] – [22],

BRAF V600E

mutação foi mostrado para identificar um subgrupo ( 10%) dos pacientes que não só apresentam resistência ao anti-EGFR terapia MoAbs, mas, é também caracterizada por prognóstico desfavorável em particular, independentemente da administração do tratamento [20] – [22]. Além disso, embora não seja totalmente claro ainda,

PIK3CA

tumores -mutant parecem derivar pouco ou nenhum benefício a partir de anti-EGFR tratamento MoAbs [20], [23] – [26].

Além

KRAS-BRAF-PIK3CA

estado mutacional, epirregulina EGFR (

EREG

) e ampiregulin (

AREG

) expressão dos ligantes em tumores primários CRC foi mostrado para prever significativamente o resultado clínico em pacientes

KRAS

WT CCRm tratados com cetuximab, indicando EGFR-driven ligando autócrino oncogênico sinalização [27], [28]. Além disso, PTEN (fosfatase e homólogo tensina) a expressão da proteína, e especificamente a sua perda, parece estar associado num certo número de estudos com resistência ao tratamento com anti-EGFR tratamento MoAbs [21], [29] – [31]. sobrevida livre de progressão, além disso, de um ponto de vista clínico, o único parâmetro que tem sido constantemente associada a uma elevada probabilidade de resposta, prolongada (PFS) e mediana Sobrevida global (MOS) para o tratamento anti-EGFR MoAbs é o desenvolvimento de pele rash [2], [5], [32].

os parâmetros clínicos parecem ser inadequadas para a seleção dos pacientes, mas, análises ‘biomarcadores já foram incorporados no tratamento de pacientes com CCR. O objetivo do presente estudo foi determinar e investigar a relevância clínica de todos os biomarcadores conhecidos simultaneamente,

KRAS

exão 2,

BRAF V600E

,

PIK3CA

exão 9 e 20 estado mutacional em conjunto com

AREG

,

EREG

expressão de mRNA, PTEN expressão da proteína imuno-histoquímica, bem como, o desenvolvimento erupções cutâneas, em doentes com CCRm tratados com cetuximab contendo salvamento quimioterapia combinada.

materiais e Métodos

projeto estudo populacional e paciente

cento e doze pacientes consecutivos, com confirmação histológica mCRC e material tumoral disponíveis para a análise molecular, que foram tratados com cetuximab quimioterapia contendo salvamento no Departamento de Oncologia médica do Hospital Universitário de Heraklion (Creta, Grécia) entre 1/2005 – 12/2008, foram inscritos. O estudo foi aprovado pelos Comitês de Ética e científica da University Hospital Geral de Heraklion e todos os pacientes deram o seu consentimento informado por escrito para a utilização do material de tecido para pesquisa translacional.

avaliação dos pacientes foi realizado no início e de quatro em quatro ciclos de quimioterapia. estado da doença foi codificado, sem o conhecimento da análise laboratorial.

selecção Tissue, DNA e RNA de extracção

fixado em formalina, (FFPE) secções de tumores embebidos em parafina foram revisadas por um patologista ( MT) para confirmar o diagnóstico e definir áreas enriqueceu-tumorais para dissecção. Dez secções seriadas de 5 um de espessura foram coradas com vermelho rápido nuclear (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EUA) e raspe dissecção sob um microscópio binocular foi realizada para as amostras com células tumorais ≥80%; para as amostras com 80% de células malignas, com a microdissecação microdissector piezoeléctrico Eppendorf (Eppendorf, Hamburgo, Alemanha) foi realizada. extracção de ADN foi realizada com a utilização do ADN completa Epicentre® Biotechnologies MasterPure ™ e Kit RNA purificação de acordo com as instruções do fabricante (Epicentre, Madison, WI, EUA), depois as células cancerosas isoladas foram lisadas em tampão contendo proteinase K a 60 ° C durante 72 h. Para extracção de RNA, as células cancerosas foram re-suspensas em 400 ul de tampão de lise de ARN suplementado com 300 mg de proteinase K (Qiagen, Valencia, CA, EUA) e incubou-se a 60 ° C durante 16 horas até que o tecido estava completamente solubilizado. O ARN foi purificado por meio de Trizol LS (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) e, subsequentemente, tratado com ADNase (DNΑ- livre, Ambion, Austin, TX, EUA), a fim de evitar a contaminação do ADN genómico e armazenado a -80 ° C até usado.

KRAS Comprar e análise mutacional PIK3CA

KRAS Comprar e análise mutacional PIK3CA foi realizada pelo seqüenciamento Sanger após a amplificação PCR de KRAS exão 2 e PIK3CA exons 9 e 20. As condições de PCR com iniciadores conjuntos que foram relatados anteriormente [22].

análise mutacional BRAF

O V600E

mutação BRAF

foi detectado por PCR em tempo real utilizando o método de discriminação alélica, como descrito anteriormente [33], [34]. Em resumo, o ADN extraído a partir de células tumorais foi amplificado com o uso de um conjunto de iniciadores e duas sondas de hidrólise no prisma 7900T Sequence Detection System ABI (AB; Applied Biosystems, Forest City, CA; EUA). As duas sondas de hidrólise foram rotulados a 5 com Vic e fluoróforos FAM repórteres para o peso e o alelo mutante, respectivamente. O 2.3 software SDS foi utilizado para a análise dos resultados.

AREG

e

EREG

expressão de mRNA

O SuperScript III transcriptase reversa (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) foi utilizado para preparar cDNA a partir de 50 ng de ARN total para cada um dos genes analisados ​​como descrito anteriormente [35]. quantificação cDNA relativa para

AREG, EREG

e ambos

β-actina

e

PGK

como genes de referência interna foi feito usando o Prism 7900HT Sistema de Detecção de Sequência ABI (AB), tal como descrito anteriormente [35]. Os iniciadores e conjuntos de sondas foram projetados usando software Primer Express 2.0 (AB), de acordo com a Ref Seq NM_001657.2 para

AREG Comprar e NM 001.432,2 para

EREG

(http: //www. ncbi.nlm.nih.gov/LocusLink). A sequência dos iniciadores 5 e marcado corante fluorescente repórter sondas ‘(6FAM) para todos os genes de referência e de destino são mostrados na Tabela 1.

Relativa quantificação de expressão de genes foi realizada de acordo com o método comparativo utilizando Ct

β-actina

e

PGK

como controlos endógenos e controlos de ARN comerciais (Stratagene, La Jolla, CA, EUA) como calibradores. Os resultados finais foram determinados como se segue: 2

– (ΔCt amostra-ΔCt calibrador), onde ôc

valores T do calibrador e de amostra foram determinadas subtraindo a C

valor T do gene alvo a partir da média valor de ambos os genes de referência. Em todas as experiências, triplica única com um desvio-padrão (DP) do valor de Ct 0,25 foram aceites. Além disso, a contaminação do DNA genômico de cada amostra foi excluída por transcrição não-reverso do RNA [35].

expressão da proteína PTEN

três a 4-

μ

foram seleccionados m secções de tecido de tumor de espécimes embebidos em parafina a partir de cada paciente para a coloração de PTEN IHC utilizando o anticorpo monoclonal 17.A rato (diluição 1:25, Neomarkers; ThermoFisher Scientific Inc, Fremont, CA), como descrito anteriormente [28], [36]. Após desparafinização e hidratação de secções, antígenos foram desmascarados pelo calor em tampão de EDTA. A imunocoloração foi realizada utilizando o UltraVision LP Grande Volume Sistema de Detecção de AP Polymer (Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA). As lâminas de controlo negativo foram preparados omitindo o anticorpo primário. cancros da próstata e células endoteliais foram utilizados como controlos positivos internos e externos, respectivamente.

PTEN coloração era principalmente citoplasmática. Conforme descrito anteriormente [28], a intensidade foi pontuada de acordo com um sistema de quatro níveis: 0, sem coloração; 1, fraco; 2, moderada; e 3, forte. Um, dois ou três pontos adicionais foram atribuídos, se a percentagem de positivos foi 25%, 25-50% ou 50%, respectivamente. Os espécimes com uma pontuação acumulada de ≥4 foram caracterizados como positivos [28].

Desenho do estudo e análise estatística

O presente estudo foi uma análise retrospectiva com o objetivo de explorar o valor preditivo dos biomarcadores extensas análise na evolução de pacientes com mCRC tratados com cetuximab mais quimioterapia como tratamento de resgate. Todas as biópsias disponíveis do tumor primário com mais de 100 células por secção foram incluídos na análise. RT-qPCR análise resultou em valores que foram expressas como proporções entre duas medições absolutas (gene de interesse: média de genes de referência interna). análise CART foi utilizada para a estimativa dos pontos de corte de

AREG

e

EREG

expressão de mRNA, a fim de classificar os casos em grupos de um dependente (TTP e MOS) variável. As amostras com a expressão de ARNm superior ou igual ao ponto de corte foram consideradas as amostras com expressão elevada, enquanto que aqueles com valor abaixo da mediana como amostras com baixa expressão. As associações entre o

KRAS, BRAF

,

PIK3CA

estado de mutação,

AREG

e

EREG

expressão expressão de mRNA e PTEN IHC com características basais foram avaliados usando o o teste exato de Fisher para variáveis ​​categóricas ou de regressão logística para as variáveis ​​contínuas. O teste exato de Spearman foi utilizado para avaliar a correlação entre o

AREG

e

EREG

expressão de mRNA. Tempo para a progressão do tumor (TTP) e sobrevivência global (OS) foram medidos a partir da data do cetuximab contendo iniciação linha de tratamento para a primeira documentação radiográfica de progressão da doença ou morte, respectivamente. As curvas de Kaplan-Meier foram usados ​​para descrever a proporção de pacientes que permaneceram livres de eventos ao longo do período de acompanhamento. As associações entre fatores prognósticos e TTP ou OS foram examinadas utilizando modelos de regressão de riscos proporcionais de Cox. Todos os relatados

p

-Valores são duas faces e não ajustados para testes múltiplos.

Resultados

A demografia dos doentes

O estado mutacional de

KRAS

exão 2,

BRAF

exão 15, e

PIK3CA

exons 9 e 20 foi determinada em todos os 112 pacientes consecutivos com mCRC enquanto.

AREG

e

EREG

expressão de mRNA foi determinado em 106 e 105 pacientes para os quais o material tumor estava disponível, respectivamente, enquanto que a expressão de PTEN foi avaliada em 106 pacientes. Todos os pacientes foram tratados com cetuximab em combinação com quimioterapia (73% em combinação com o irinotecano, 27% com oxaliplatina) como tratamento de resgate (Tabela 2). Sessenta e seis (59%) pacientes tinham recebido o tratamento na nd configuração linha 2

e os restantes 46 (41%) como 3

rd linha de tratamento. Não houve paciente que recebeu os EGFR anti-MoAbs no 1

configuração de linha de st. características da doença foram típica para mCRC no mundo ocidental; idade média dos pacientes foi de 66 anos e 60% eram do sexo masculino (Tabela 2). Os PFS mediana de 1

linha de tratamento st foi de 8,9 meses (IC 95% 8,1-9,9) eo tempo médio de recidiva a linha de tratamento anterior até que a administração cetuximab foi de 1,1 meses (IC 95% 0,7-1,8).

status e expressão mutacional valores resulta

KRAS

mutações foram detectadas em 37 (33%),

BRAF

mutações em oito (7,2%) e

PIK3CA

mutações em 11 (9,8%, 8 no exão 9 e 3 no exão 20) tumores primários, respectivamente.

KRAS Comprar e

BRAF

mutações eram mutuamente exclusivas, que, três tumores realizada ambos

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações.

AREG

e

EREG

foram sobre-expressos em 48 (45%) e 51 (49%) pacientes, respectivamente, ao passo que, PTEN foi marcado como negativo (ou seja, perda de função) em 21 (19,8 %) pacientes (Figuras 1A e 1B). Quando

PIK3CA

mutações e expressão de PTEN foram analisados ​​em conjunto, ativação da via (definida como perda de PTEN ou

PIKECA

mutação) foi detectada em 25 (23,5%) pacientes. A tendência para a diminuição da incidência de

foi observada KRAS

mutações em tumores do reto (

p

= 0,097) desde 31 dos 83 (37%) tumores localizados no cólon e seis dos 29 ( 20%) tumores localizados no reto abrigava um

KRAS

mutação. Não houve correlação entre a presença de

KRAS

mutações com sexo dos pacientes, idade ( 70 anos de idade contra a ≤70 anos de idade), fase de diagnóstico, grau histológico, estado mucinoso, perda de PTEN e

AREG Network –

EREG

expressão (todo o

p

-Valores 0,05). Além disso, observou-se uma correlação estatisticamente significativa entre a presença de

BRAF

mutações eo grau histológico (bem /moderado, contra indiferenciada) (

p

= 0,049) e

EREG

downregulation mRNA (

p

= 0,013). Não houve correlação entre a presença de

BRAF

e

PIK3CA

mutações com sexo dos pacientes, idade ( 70 anos de idade contra a ≤70 anos de idade), fase de diagnóstico, localização do tumor , estado mucinoso, perda de PTEN e

expressão AREG

(em ambos os casos, tudo

p

-Valores 0,05)

Painel a:. Amostra de um adenocarcinoma diferenciado moderada de os dois pontos marcados como PTEN positivo (x100) Painel a:. Amostra de um adenocarcinoma diferenciado moderada do cólon pontuada como PTEN negativo (x100)

Impacto de valores de estado e de expressão de mutação sobre o resultado do salvamento terapêutica com cetuximab

resultados em toda a população dos pacientes (Tabela 3).

Tabelas 3 e 4 resumem o impacto das alterações genéticas sobre o resultado do tratamento de resgate contendo cetuximab. O TTP mediano de todo o grupo de pacientes foi de 4,9 meses (IC 95% 4,1-5,7) e os correspondentes mediana de sobrevida global (OS) 14,5 meses (IC95% 10,0-18,9). TTP e OS foram significativamente menores nos pacientes cujos tumores transportados

KRAS

mutações (3,1 vs. 6,4 meses,

p

= 0,001 e 10,6 vs 16,3 meses,

p

= 0,026, respectivamente) (Figura 2A e 2B). Da mesma forma, TTP e OS foram significativamente menores nos pacientes cujos tumores transportados

BRAF

mutações (2,1 vs. 5,2 meses,

p

= 0,001 e 4,3 vs 15,1 meses,

p

0,0001, respectivamente) (Figura 3 e 4). Não houve correlação significativa em termos de TTP de acordo com a

PIK3CA

estado mutacional ou expressão de PTEN em todos os pacientes tratados (4,9 vs. 5. sete meses,

p

= 0,427 e 5,2 vs. 6,03 . meses,

P

= 0,102, respectivamente) (Figura 4A e 4B); Da mesma forma, não houve diferença em termos de OS mediana entre pacientes com

PIK3CA

mutante (13,6 meses) e peso (15,0 meses) tumores primários (

p

= 0,44; Figura 5A), como bem como entre pacientes com (15,1 meses) perdido (14,3 meses) ou normal função de PTEN (p = 0,82; Figura 5B). No entanto, quando

PIK3CA

expressão status e PTEN mutacional foram levados em consideração em conjunto, ativação da via através de

PIK3CA

mutações e /ou PTEN perda foi correlacionado com uma tendência para a diminuição da TTP em todos os pacientes (3,8 vs. 5,0 meses,

p

= 0,051) (Figura 4E), enquanto não houve diferença na sobrevida média (13,9 vs 14,5 meses,

p

= 0,878) (Figura 5E)

Painel a:. Tempo para progressão tumoral (TTP) Painel B: Median sobrevida global (oS)

Painel a:. Tempo para progressão tumoral (TTP), no população dos pacientes inteiros. Painel B: Median sobrevida global (OS) na população Painel C inteiros dos pacientes: Hora de progressão tumoral (TTP) em pacientes com

KRAS

tumores primários wt. Painel D: Median sobrevida global (OS) em pacientes com

KRAS

tumores primários wt

Painel A:. Acordo com a

PIK3CA

status de mutações em toda a pacientes ‘população. Painel B: de acordo com a expressão de PTEN em toda a população dos pacientes. Painel C: de acordo com o status de ativação do eixo PIK3-PTEN (

PIK3CA

status de mutações e expressão de PTEN) em toda a população dos pacientes. Painel D: de acordo com a

PIK3CA

status de mutações em pacientes com

KRAS tumores primários wt

. Painel E: de acordo com a expressão de PTEN em pacientes com

KRAS tumores primários wt

. Painel F: de acordo com o status de ativação do eixo PIK3-PTEN (

PIK3CA

status de mutações e expressão de PTEN) em pacientes com

KRAS

tumores primários wt

Painel A. : de acordo com

PIK3CA

status de mutações em populações inteiras dos pacientes. Painel B: de acordo com a expressão de PTEN em toda a população dos pacientes. Painel C: de acordo com o status de ativação do eixo PIK3-PTEN (

PIK3CA

status de mutações e expressão de PTEN) em toda a população dos pacientes. Painel D: de acordo com a

PIK3CA

status de mutações em pacientes com

KRAS tumores primários wt

. Painel E: de acordo com a expressão de PTEN em pacientes com

KRAS tumores primários wt

. Painel F: de acordo com o status de ativação do eixo PIK3-PTEN (

PIK3CA

status de mutações e expressão de PTEN) em pacientes com

KRAS

tumores primários wt

Uma correlação altamente significativa entre

AREG

e

foi observada EREG

expressão de mRNA (Spearman ρ

2 = 0,736,

p 0,001

). Em todo o grupo de pacientes,

AREG

superexpressão mRNA foi significativamente correlacionada com o aumento da TTP e OS (5,0 vs. 3,8 meses,

p

= 0,018 e 20,2 vs 10,7 meses,

p

= 0,013, respectivamente]) (Figuras 6A e 6B). Além disso,

EREG

superexpressão mRNA também foi significativamente correlacionada com o aumento da TTP e OS (6,1 vs. 3,6 meses,

p

= 0,002 e 17,6 vs 10,7 meses,

p

= 0,004, respectivamente) (Figuras 7A e 7B)

Painel a:. Tempo de progressão tumoral (TTP), em toda a população dos pacientes. Painel B: Median sobrevida global (OS) na população Painel C inteiros dos pacientes: Hora de progressão tumoral (TTP) em pacientes com

KRAS

tumores primários wt. Painel D: Median sobrevida global (OS) em pacientes com

KRAS

tumores primários wt

Painel A:. Tempo para progressão tumoral (TTP) em toda a população dos pacientes. Painel B: Median sobrevida global (OS) na população Painel C inteiros dos pacientes: Hora de progressão tumoral (TTP) em pacientes com

KRAS

tumores primários wt. Painel D: Median sobrevida global (OS) em pacientes com

KRAS

tumores primários wt

Tabela 3 e Figuras 8A e 8B demonstram as diferenças de TTP e OS de acordo com a

KRAS-BRAF

estado mutacional e

AREG

expressão. Mostra-se que o

KRAS-BRAF

WT e

AREG

perfil superexpressão foi correlacionada significativamente com o aumento da TTP e OS comparação com qualquer outra combinação. Da mesma forma, as Figuras 8C e 8D e Tabela 3 ilustram as diferenças em TTP e OS de acordo com a

KRAS-BRAF

estado mutacional e

EREG

expressão; novamente, o

KRAS-BRAF

WT e EREG perfil superexpressão foi correlacionada significativamente com o aumento da TTP e OS comparação com qualquer outra combinação

Painel A:. Tempo para progressão tumoral (TTP) de acordo com

KRAS-BRAF

status de mutações e

AREG

expressão de mRNA. Painel B: Median sobrevida global (OS) de acordo com a

KRAS-BRAF

status de mutações e

AREG

expressão de mRNA. Painel C: Hora de progressão tumoral (TTP) de acordo com a

KRAS-BRAF

status de mutações e

EREG

mRNA. Painel D Median sobrevida global (OS) de acordo com

KRAS-BRAF

status de mutações e

EREG

mRNA.

Finalmente, correlacionou o impacto da pele cetuximab induziu erupção cutânea com o resultado do tratamento. Pacientes com (grau 2-3) erupção cutânea grave ou moderada da pele apresentou significativamente maior TTP (7,5 meses) em comparação com aqueles com leve (grau 1) (4,5 meses;

p Art 0,0001) e nenhuma erupção cutânea (2,3 meses,

p Art 0,0001), bem como o aumento OS (24,1 vs. 13,2 meses,

p Art 0,0001 e vs. 4,9 meses,

p

0,0001) (Tabela 3 e Figuras 9A e 9B)

Painel a: Tempo de progressão tumoral (TTP) de acordo com a pior nota erupção cutânea desenvolvido durante o tratamento com cetuximab + quimioterapia.. Painel B: Median sobrevida global (OS) de acordo com a pior nota erupção cutânea desenvolvido durante o tratamento com cetuximab + quimioterapia

Resultados no

população dos pacientes KRAS

WT (Tabela. 4)

Quando os doentes só

KRAS

casos WT foram analisados ​​cujos tumores levou o

BRAF

mutação teve ainda mais significativamente menor TTP e oS (TTP:. 2.1 vs. 6.4 meses,

p Art 0,0001; oS: 4,3 vs. 16,3 meses,

p Art 0,0001) (Figura 3C e 3D), em comparação com os resultados em toda a população. Além disso, quando apenas o

KRAS

casos WT foram consideradas, diminuição da TTP foi significativamente associada com a presença de

PIK3CA

mutação (4,3 vs. 6,4 meses,

p

= 0,01) (Figura 4C) e a regulação negativa de PTEN (3,7 vs. 5,0 meses,

P

= 0,002) (Figura 4D). No entanto, neste grupo específico de doentes com

KRAS

WT tumores, nenhuma correlação significativa foi encontrada no sistema operacional médio entre pacientes com ou sem

PIK3CA

mutações (13,5 vs 16,3 meses, respectivamente; p = 0,345) ou aqueles com PTEN regulados negativamente ou funcional (15,3 vs 14,5 meses, respectivamente; p = 0,862) (Figuras 5C e 5D). Mas, em pacientes

KRAS

WT quando

PIK3CA

estado mutacional e expressão de PTEN foram levados em consideração em conjunto, uma diminuição significativa TTP foi observado com a ativação da via através de

PIK3CA

mutações e /ou perda de PTEN, em comparação com a sua presença inactivada com peso

PIK3CA

e /ou PTEN funcional (3,8 vs. 6,4 meses,

p

= 0,001) (Figura 4F); em contrapartida, essa correlação não poderia ser revelado em termos de OS mediana (13,9 vs 16,2 meses;

p

= 0,987). (Figura 5F)

KRAS

pacientes WT,

AREG

superexpressão mRNA foi significativamente correlacionada com o aumento da TTP e OS (5,8 vs. 4,3 meses,

p

= 0,021 e 23,2 vs 10,7 meses,

p

= 0,004, respectivamente) (Figuras 6C e 6D), bem como,

EREG

ARNm sobre-expressão (7,0 vs. 3,8 meses,

P

= 0,0001 e 20,2 vs 10,5 meses,

p

. 0,0001, respectivamente) (Figuras 7C e 7D)

uni e multivariada análise

quanto TTP estava em causa, a análise univariada (Tabela 3 e 4) demonstraram associações significativas com: i)

KRAS

mutações (

p

= 0,001); ii)

BRAF

mutações (

p

= 0,001); iii)

AREG

expressão de mRNA (

p

= 0,018); iv)

EREG

expressão de mRNA (

p

= 0,002) e v) o desenvolvimento de erupções cutâneas graves moderado (

p Art 0,0001). Além disso, TTP em

KRAS

pacientes wt foi significativamente correlacionada com

PIK3CA

mutação (

p

= 0,01), expressão de PTEN (

p = 0,002

) e a

PIK3CA

-PTEN ativação do eixo (

p

= 0,001). No que diz respeito OS estava em causa a análise univariada (Tabela 3 e 4) demonstraram associações significativas com: i)

KRAS

mutações (

p

= 0,026); ii)

BRAF

mutações (

p Art 0,0001); iii)

AREG

expressão de mRNA (

p

= 0,013); iv)

EREG

expressão de mRNA (

p

= 0,004) e v) o desenvolvimento de erupções cutâneas graves moderado (

p Art 0,0001). Finalmente, a diferenciação do tumor (tumores indiferenciados) foi significativamente correlacionada com a diminuição OS mediana (Hazard Ratio: 1,9;

p

= 0,003)

Na análise multivariada,

KRAS

(HR 4.3,

p Art 0,0001),

BRAF

(HR 5.1,

p Art 0,0001) mutação e baixa

EREG

expressão de mRNA (HR 1.6,

p

= 0,021) surgiram como fatores independentes associados com reduzida TTP. Além disso, a ausência de (grau 2-3) erupção cutânea grave e moderada surgiu, assim, como um fator prognóstico independente para diminuição da TTP (HR 4.0,

p Art 0,0001) (Tabela 5). Além disso,

KRAS

(HR 2.9,

p

= 0,01),

BRAF

(HR 3.0,

p

= 0,001) mutação e baixa

EREG

expressão de mRNA (HR 1.7,

p

= 0,021) surgiram como fatores independentes associados com OS reduzida. Além disso, a diferenciação do tumor grau 3 surgiu, assim, como um fatores prognósticos independentes para OS reduzida (HR 2.2,

p

= 0,001). Além disso, a ausência de grave e moderada (grau 2-3) erupções cutâneas emergiu como um fator prognóstico independente para diminuição OS (HR 3.7,

p Art 0,0001, respectivamente). (Tabela 5)

Discussão

na sequência da descoberta de

KRAS

mutações em associação com anti EGFR-MoAbs resistência, o

KRAS

caracterização mutacional de tumores CCRm é, atualmente , pré-formada na base de rotina antes de qualquer decisão de tratamento. Embora a presença de

KRAS

mutações é um biomarcador preditivo específico para a falta de eficácia anti-EGFR MoAbs [6] – [9], [14], [37] não há evidência convincente de que eventos genéticos adicionais estão envolvidos neste processo, uma vez que cerca de metade do

KRAS

pacientes wt são resistentes a um tal tratamento [38]. Além disso, vários biomarcadores foram propostos em associação com

KRAS

mutações como marcadores preditivos para a eficácia dos MoAbs anti-EGFR, incluindo

BRAF

[19], [22] ou

PIK3CA

mutações [21], EGFR ligantes superexpressão [23], [27], a expressão de PTEN proteína [28] e EGFR copiar números [10], [11]. No presente estudo avaliou a importância preditiva de outras mutações comuns observados em CRC em conjunto com expressão de proteínas e EGFR ligantes PTEN (

EREG

e

AREG)

mRNA expressão, bem como o impacto da erupção cutânea em uma coorte de pacientes com mCRC tratados com anti-EGFR mais quimioterapia como tratamento de resgate. Para o melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro estudo que combina todos estes parâmetros juntos. características do paciente, a incidência de mutações e os regimes de tratamento foram todos típico para CCRm [22], [37];