Abstract

O comum -652 6N del variante no

CASP8

promotor (rs3834129) tem sido descrita como um fator de risco de baixa penetrância putativo para diferentes tipos de câncer. Em particular, alguns estudos sugerem que o alelo excluído (del) foi inversamente associado com o risco de CRC, enquanto outras análises não confirmaram isso. Assim, para entender melhor o papel dessa variante do risco de desenvolver CRC, foi realizado um estudo de caso-controle multi-centric. No estudo, a variante -652 6N del foi genotipados em um total de 6.733 casos CRC e 7.576 controles recrutados por seis centros diferentes, localizadas em Espanha, Itália, EUA, Inglaterra, República Checa e Holanda colaborando com o consórcio internacional COGENT (colorretal genética do câncer). A análise indicou que rs3834129 não foi associada a risco de CRC no conjunto de dados completo. No entanto, o del alelo foi sub-representados em um conjunto de casos com história familiar de CRC (por modelo alelo OR = 0,79, IC 95% = 0,69-0,90) sugerindo que este alelo pode ser um fator de proteção contra o CRC familial. Uma vez que este estudo caso-controle multicêntrico foi realizado em um tamanho de amostra muito grande, forneceu esclarecimentos robusta do efeito do rs3834129 sobre o risco de desenvolver CRC em caucasianos

Citation:. Pardini B, Verderio P, Pizzamiglio S, Nici C, Maiorana MV, Naccarati A, et al. (2014) Associação entre CASP8 -652 6N Del Polimorfismo (rs3834129) e Colorectal Cancer Risk: Resultados de um estudo multicêntrico. PLoS ONE 9 (1): e85538. doi: 10.1371 /journal.pone.0085538

editor: Qing-Yi Wei, Cancer Institute, Duke, Estados Unidos da América

Recebido: 27 de setembro de 2013; Aceito: 04 de dezembro de 2013; Publicação: 21 de janeiro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Pardini et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Para todos coortes: Este trabalho foi apoiado por BM1206 Acção COST. coorte espanhol: Os autores são sinceramente grato a todos os pacientes que participaram deste estudo que foram recrutados em 25 (EPICOLON 1) e 14 (EPICOLON 2) hospitais espanhóis como parte do projeto EPICOLON. Os autores também estão em dívida com a Unidade de Genômica do Institut d’Investigacions Biomèdiques agosto Pi i Sunyer para ajuda técnica. O trabalho foi realizado (em parte) no Koplowitz Centro de Esther, Barcelona. SCB é apoiado por um contrato com o Fondo de Investigación Sanitaria (CP 03-0070 para SCB). Networked Centro de Investigação Biomédica de hepática e Doenças Digestivas e do Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Raras são financiados pelo Instituto de Salud Carlos III. Este trabalho foi financiado por doações do Fondo de Investigación Sanitaria /FEDER (08/0024, 08/1276, PS09 /02368, 11/00219, 11/00681), Instituto de Salud Carlos III (Acción Transversal de câncer), Xunta de Galicia (07PXIB9101209PR), Ministerio de Ciencia e Innovación (SAF2010-19273), Asociación Española contra el Câncer (Fundação Científica y Junta de Barcelona), Fundació Olga Torres (SCB e CRP), FP7 chibchas Consortium (SCB e A. Carracedo). coorte italiano: Os autores agradecem a todos os indivíduos que concordaram em participar do estudo. Os autores também agradecer o pessoal do Banco de Tecidos Fondazione Istituto di Ricovero e Cura uma carattere Scientifico Istituto dei Tumori para coleta de amostras e todos os patologistas por sua contribuição e colaboração. coorte americano: Kentucky cancro do cólon genética Estudo Epidemiologia é suportado pelo National Institutes of Health conceder R01CA136726 a LL. coorte Inglês: Financiamento de base para o Wellcome Trust Centre para Genética Humana foi fornecido pelo Wellcome Trust (090.532 /Z /09 /Z). coorte Checa: Agência de Grant da República Checa (GACR) [CZ: GACR: GA P304 /10/1286 e P304 /12/1585] e por Prvouk-P27 /LF1 /1 de Ministério de Educação, Juventude e Desporto, República Checa (Primeira Faculdade de Medicina da Universidade Charles, em Praga, República Checa como um receptor). coorte holandês: holandês Cancer Society, conceder KWF-UL-2010-4656. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:. PP é um editor académico na PLoS ONE, mas isso não altera os autores a adesão a todas as políticas Revista de dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

Carcinogênese é caracterizada pela alteração dos processos normais designados para manter a estabilidade do genoma. A apoptose é o mecanismo mais importante da morte celular programada, responsável pela remoção segura de células danificadas antes de anormalidades do genoma pode ser replicado e mais spread. enzimas caspases são essenciais na regulação e na execução da maior parte das vias de morte celular apoptótica. Em particular, a caspase-8 (

CASP8

) é um leitor de crucial no controlo da apoptose de linfócitos T por meio de morte celular induzida por activação [1] e, simultaneamente, uma homeostase fisiológica dos linfócitos T é um aspecto fundamental na imuno-vigilância das células cancerosas.

Um polimorfismo consiste na eliminação de seis nucleotídeos na região promotora de

CASP8

, e referido como -652 6N del (rs3834129), tem sido descrita como sendo muito comum em várias populações [2]. Esta supressão de seis nucleótidos foi mostrado para destruir um elemento de ligação de proteína estimuladora 1 na região reguladora do promotor que provoca uma diminuição

CASP8

transcrição e, eventualmente, uma reduzida apoptose de linfócitos T antitumoral [2]. Assim, rs3834129 foi postulada para afetar a resposta imune anti-tumoral durante o início ou progressão do câncer e, consequentemente, considerada como um fator genético potencialmente associados com o risco de câncer. Neste contexto, o polimorfismo foi testado num estudo de controlo de casos e a do alelo foi mostrado estar associado com um efeito protector em vários tipos de cancro, incluindo CRC, na população chinesa [2]. Dois estudos posteriores investigaram o efeito do rs3834129 em casos de teste CRC e controles de etnia mista e caucasianos, mas não conseguiu confirmar a associação [3], [4]. Uma meta-análise destes três estudos indicaram que, sob um modelo dominante, a del alelo foi associado com um risco significativamente reduzido de CRC com odds ratio (OR) = 0,89, intervalo de confiança de 95% (CI) = 0,83-0,96 [5 ]. No entanto, um estudo mais recente não incluídos na meta-análise acima, mais uma vez não conseguiu revelar uma associação entre rs3834129 e risco de CRC em chinês [6].

Assim, no presente estudo buscou para a prova mais robusta, se rs3834129 pode ser um fator de risco CRC em um estudo de caso-controle, com base em seis grupos recrutados em centros localizados em Espanha, Itália, EUA, Inglaterra, República Checa e Holanda e colaborar dentro do COGENT (genética câncer colorretal) consórcio [7 ].

Materiais e Métodos

coortes de caso-controle

o COGENT (genética câncer colorretal) consórcio foi criada em 2007 com o objetivo principal estudar a susceptibilidade genética para a CRC no de forma colaborativa. O consórcio consistiu em mais de 20 grupos de investigação na Europa, Austrália, Américas, China e Japão a trabalhar activamente na genética CRC e com experiência englobando epidemiologia genética, genética estatística, mapeamento de genes, biologia, genética molecular, patologia e diagnóstico e manejo clínico da CRC [8]. Manter seus principais objetivos, o consórcio já evoluiu para uma iniciativa mais estruturada denominada “Estudos de cooperação na susceptibilidade hereditária para câncer colorretal” (EuCOLONGENE – https://www.eucolongene.eu). No presente estudo, rs3834129 foi testado como fator de risco genético para CRC em seis grupos que compreendem 6.733 casos e 7.576 controles.

1. coorte espanhol. Casos e controles foram recrutados através do Consórcio EPICOLON que é baseado em um estudo prospectivo, multicêntrico e pesquisa epidemiológica de base populacional sobre a incidência e as características do CRC na população espanhola [9]. Resumidamente, os casos foram selecionados como pacientes com

de novo

histologicamente confirmado diagnóstico de adenocarcinoma colorretal. Os critérios de exclusão eram formas CRC hereditários, tais como câncer hereditário não-polipose colorretal (HNPCC) e polipose adenomatosa familiar (FAP) e uma história pessoal de doença inflamatória intestinal. Os controles foram a partir do banco de DNA Nacional espanhol e foram confirmados para não ter câncer ou história de neoplasia e sem história familiar de CRC. Todos os casos e controles eram de etnia caucasiana. 2. coorte italiano. Casos e controles foram recrutados como descrito por [10]. Resumidamente, os casos eram indivíduos consecutivos afetadas com CRC, que passou por uma cirurgia na Fondazione IRCCS Istituto Nazionale Tumori, em Milão (INT). Os controles foram doadores de sangue recrutados através do Serviço Imunohematologia e Medicina Transfusional da INT a Associazione Volontari Italiani Sangue Comunale em Milão. Todos os casos e controles eram de etnia caucasiana. 3. coorte americana (Kentucky, EUA). Casos e controles foram recrutados como descreveu recentemente [11]. Resumidamente, os casos de câncer de cólon incidente foram identificados através do Registro de Câncer Kentucky. controles populacionais foram recrutados através da marcação aleatória dígitos de acordo com os seguintes critérios: ser pelo menos 30 anos de idade ou mais e sem história pessoal de câncer diferente de câncer de pele. Para ambos os casos e controles, critérios de exclusão foram doenças inflamatórias intestinais, FAP e HNPCC. A maioria dos participantes eram caucasianos (93,7%). 4. coorte Inglês. Casos (CRC ou adenomas significativas) e controles foram recrutados através de Colorectal Tumor Gene Identificação (Corgi) consórcio como descrito anteriormente [12]. Resumidamente, os casos tinham pelo menos um parente de primeiro grau afetado pelo CRC. Os controles eram cônjuges ou parceiros não afetadas pelo câncer e sem uma história pessoal e familiar de neoplasia colorretal. Uma única probando de cada família foi incluído neste estudo. formas CRC hereditários, tais como, síndrome do HNPCC /Lynch ou portadores bi-alélicas mutação MutYH foram excluídos. Todos os casos e controles eram de etnia caucasiana. 5. coorte República Checa. Casos e controles foram recrutados como descrito anteriormente [13]. Em resumo, todos os casos havia confirmado histologicamente CRC e foram consecutivamente apurado através dos departamentos oncológicas. Controles ou eram voluntários em hospitais com resultados negativos colonoscopia ou doadores de sangue coletadas de um centro de doadores de sangue em Praga. Todos os casos e controles eram de etnia caucasiana. 6. Dutch Cohort. Casos e controlos foram recrutados como previamente descrito [14]. Resumidamente, a maioria dos casos foram recrutados através do departamento de genética clínica. Todos os casos foram diagnosticados com CRC e teve início precoce e /ou história familiar positiva para CRC. Conhecidas síndromes de polipose dominantes, foram excluídos síndrome HNPCC /Lynch ou portadores bi-alélicas mutação MutYH. Uma única probando de cada família foi incluído neste estudo. Os controles foram doadores de sangue saudáveis ​​da região do sudoeste dos Países Baixos. Todos os casos e controles eram de etnia caucasiana.

Para cada grupo, o número de casos e controles incluídos no estudo e seus dados de sexo e idade são apresentados na Tabela 1. Todos os indivíduos participantes do estudo assinaram termo de consentimento para a utilização das suas amostras biológicas para fins de investigação. Este estudo foi aprovado pelas seguintes instituições: Clinical Ética em Pesquisa e Comitês de Pesquisa do Hospital Clínic de Barcelon (coorte espanhol); Comissão de Ética da Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori, Milão, Itália (coorte italiano); Institutional Review Boards da Universidade de Kentucky, Lexington, Case Western Reserve University Hospitals /Universidade de Cleveland e University of Southern California, EUA (coorte americano); Southampton e Comissão de Ética do Sul-Oeste Hampshire Research (Inglês cohort); Comissão de Ética do Instituto de Medicina Experimental, e Comissão de Ética do Instituto de Medicina Clínica e Experimental e Hospital Thomayer, Praga, República Checa (República Checa coorte); Médica Comissão de Ética do Centro Médico da Universidade de Leiden, Holanda (protocolo P01.019) (coorte holandês).

A genotipagem

O DNA genômico foi isolado a partir de linfócitos de sangue periférico usando procedimentos padrão. As amostras de ADN a partir de casos e controlos foram aleatoriamente alíquota em placas de 96 poços. A genotipagem do rs3834129 foi realizada utilizando o ensaio Taqman (Life Technologies /Applied Biosystems, EUA) no espanhol, italiano, EUA e coortes holandesas e utilizando o ensaio de Kaspar (K-biociência, UK) nas coortes Inglês e República Checa . As amostras em duplicado (5%), nem controles de modelo em cada placa, e teste de equilíbrio de Hardy-Weinberg foram utilizados como testes de controle de qualidade.

A análise estatística

Dentro de cada grupo, uma regressão logística análise [ ,,,0],15] foi realizada para comparar a frequência de genótipos de

CASP8

rs3834129 em casos e controles. Estimou-se o odds ratio (OR) e seu intervalo de relação de 95% de confiança (IC), considerando em cada idade modelo logístico e sexo como co-variáveis ​​de ajuste. Quatro modelos diferentes ( “três genótipos”, dominantes, recessivos e por alelo) foram realizadas para cada coorte separada e considerando todos os indivíduos juntos. Neste caso, a variável com a indicação da coorte e o termo de interacção entre esta variável e o genótipo foram incluídos no modelo logístico para além do variáveis ​​genótipo, idade e sexo. Os desvios dos freqüências genotípicas nos controles das esperadas sob Hardy-Weinberg (HWE) foram avaliados dentro de cada coorte, bem como considerando todos os indivíduos por meio do teste do qui-quadrado de Pearson. Todas as análises estatísticas foram realizadas com o software SAS. (Versão 9.2; SAS Institute Inc. Cary, NC):

Resultados e Discussão

Neste estudo, analisamos a distribuição rs3834129 genótipo em um total de 6.733 casos e 7.576 controles de seis coortes, todos da etnia caucasiana. As distribuições de genótipos nos controles foram consistentes com HWE em todos os grupos e entre eles as frequências do alelo del foram semelhantes nos controles (variação: 0,45-0,52). Foi realizada uma análise global para comparar a frequência de genótipos de

CASP8

rs3834129 em casos com CRC e em controles saudáveis. Como nos dados controles holandeses sobre sexo e /ou idade estavam faltando (Tabela 1), esta coorte foi excluído da análise total e um total de 6.148 casos e 7.217 controles foram consideradas. Todos os grupos foram baseadas em incidentes /casos consecutivos, com excepção para a coorte de Inglês que foi baseado em casos familiares. Portanto, nós também realizada uma análise global adicional excluindo a coorte Inglês e teste de um total de 4.572 casos e 6.450 controles. Em ambas as análises o termo de interação entre a coorte e do genótipo não foi estatisticamente significativa e também as RUP derivadas dos diferentes modelos genéticos implementadas não foram estatisticamente significativas (dados não mostrados).

Além disso, avaliou-se o efeito de rs3834129 sobre o risco de CRC em cada coorte. As estimativas ou foram ajustados para sexo e idade, com a única exceção da coorte holandesa, os resultados são apresentados na Tabela 2. As RUP dos diferentes modelos implementados (três genótipos, dominantes, recessivos e per-alelo modelo) em grande parte confirmou os resultados da análise global sendo não estatisticamente significativa em cada coorte, com a única exceção de um Inglês. As RUP em amostras de caso-controle familiares da Inglaterra foram estatisticamente significativas (por modelo alelo OR = 0,79, 95% CI = 0,69-0,90), indicando o del alelo pode ser um fator de proteção contra o câncer familial. Este resultado pode ser explicado considerando que os casos familiares, em relação ao incidente /casos consecutivos, pode ser uma melhor recurso para o teste de associação, uma vez que está prevista para ser enriquecido por factores de risco genéticos, ou, inversamente, privados de factores com um efeito protector.

Para nosso conhecimento, este é o maior análise testando a associação entre rs3834129 e risco de CRC em caucasianos e os nossos dados fornecem a evidência mais forte e inequívoca medida que o rs3834129 não é um fator de risco CRC neste grupo étnico. Enquanto nossa análise estava em andamento, outros estudos apareceram, mostrando resultados inconsistentes. De um lado, a falta de associação foi encontrada no caso de controle de análises baseadas em populações gregas e chinesas [16], [17]; do outro lado, uma meta-análise, com base em três estudos de mistura de etnias, e um estudo adicional separada em chinês mostrou um efeito moderadamente protecção do del alelo [18], [19]. Nossas descobertas em caucasianos, no que diz respeito ao efeito protetor putativo detectado em chinês-que tem de ser confirmada por mais estudos pode ser explicada maiores por variantes associadas ao risco adicional em articulação com rs3834129 e com uma frequência diferente em diferentes origens genéticas étnicos. Especificamente, o del alelo rs3834129 tem uma frequência de 0,48 controle em nosso estudo, enquanto nós derivada uma frequência de 0,20-0,25 nos controles chineses [2], [6], [16], [18].

conclusão, embora mais estudos são necessários para confirmar o efeito protetor do alelo del observamos em casos de CRC familiares com história familiar, o nosso estudo fornece evidências robustas indicando o rs3834129 não é um fator de risco para CRC em caucasianos.

Agradecimentos

os membros do EPICOLON Consortium (Gastrointestinal Oncology Group da Gastroenterological Association espanhol) são: Hospital 12 de Octubre, Madrid: Juan Diego Morillas (coordenador local), Raquel Muñoz, Marisa Manzano, Francisco Colina, José Díaz , Carolina Ibarrola, Guadalupe López, Alberto Ibáñez; Hospital Clínic, de Barcelona: Antoni Castells (coordenador local), Virgínia Piñol, Sergi Castellví-Bel, Francesc Balaguer, Victoria Gonzalo, Teresa Ocaña, María Dolores Giráldez, Maria Pellisé, Anna Serradesanferm, Leticia Moreira, Miriam Cuatrecasas, Josep M. Piqué; Hospital Clínico Universitario, Zaragoza: Ángel Lanas (coordenador local), Javier Alcedo, Javier Ortego; Hospital Cristal-Piñor, Complexo Hospitalar de Ourense: Joaquin Cubiella (coordenador local), M

a Soledad Díez, Mercedes Salgado, Eloy Sánchez, Mariano Vega; Parc de Salut Mar, Barcelona: Montserrat Andreu (coordenador local), Anna Abuli, Xavier Bessa, Mar Iglesias, Agustín Seoane, Felipe Bory, Gemma Navarro, Beatriz Bellosillo; Josep M

a Dedeu, Cristina Álvarez, Marc Puigvehí; Hospital San Eloy, Baracaldo e Hospital Donostia, CIBERehd, Universidade do País Basco, San Sebastián: Luis Bujanda (coordenador local) Ángel Cosme, Inés Gil, Mikel Larzabal, Carlos Placer, María del Mar Ramírez, Elisabeth Hijona, Jose M. Enríquez- Navascués, Jose L. Elosegui; Hospital Geral Universitário de Alicante: Artemio Payá (EPICOLON I coordenador local), Rodrigo Jover (EPICOLON II coordenador local), Cristina Alenda, Laura Sempere, Nuria Acame, Estefanía Rojas, Lucía Pérez-Carbonell; Hospital Geral de Granollers: Joaquim Rigau (coordenador local), Ángel Serrano, Anna Giménez; Hospital General de Vic: Joan Saló (coordenador local), Eduard Batiste-Alentorn, Josefina Autonell, Ramon Barniol; Hospital Geral Universitário de Guadalajara e Fundación para la Formación e Investigación Sanitarias Murcia: Ana María García (coordenador local), Fernando Carballo, Antonio Bienvenido, Eduardo Sanz, Fernando González, Jaime Sánchez, Akiko Ono; Hospital Geral Universitário de Valencia: Mercedes Latorre (coordenador local), Enrique Medina, Jaime Cuquerella, Pilar Canelles, Miguel Martorell, José Ángel García, Francisco Quiles, Elisa Orti; CHUVI-Hospital Meixoeiro, Vigo: EPICOLON I: Juan Clofent (coordenador local), Jaime Seoane, Antoni Tardío, Eugenia Sanchez. EPICOLON II M

a Luisa de Castro (coordenador local), Antoni Tardío, Juan Clofent, Vicent Hernández; Hospital Universitário alemães Trias i Pujol, Badalona e Seção de Doenças Digestivas e Nutrição da Universidade de Illinois em Chicago, IL, EUA: Xavier Llor (coordenador local), Rosa M. Xicola, Marta Piñol, Mercè Rosinach, Anna Roca, Elisenda Pons, José M. Hernández, Miquel A. Gassull; Hospital Universitário Mútua de Terrassa: Fernando Fernández-Bañares (coordenador local), Josep M. Viver, Antonio Salas, Jorge ESPINOS, Montserrat Forné, Maria Esteve; Hospital Universitário Arnau de Vilanova, Lleida: Josep M. René (coordenador local), Carmen Piñol, Juan Buenestado, Joan Viñas; Hospital Universitário de Canarias: Enrique Quintero (coordenador local), David Nicolás, Adolfo Parra, Antonio Martín; Hospital Universitário La Fe, em Valência: Lidia Argüello (coordenador local), Vicente Pons, Virginia Pertejo, Teresa Sala; Hospital Sant Pau, Barcelona: Dolors Gonzalez (coordenador local) Eva romana, Teresa Ramon, Maria Poca, M

a Mar Concepción, Marta Martin, Lourdes Petriz; Hospital Xeral Cies, Vigo: Daniel Martinez (coordenador local); Fundacion Publica Galega de Medicina Xenomica (FPGMX), CIBERER, Genomic Medicine Group-Universidade de Santiago de Compostela, Santiago de Compostela, Galiza, Espanha: Ángel Carracedo (coordenador local), Clara Ruiz-Ponte, Ceres Fernández-Rozadilla, M

a Castro Magdalena; Hospital Universitário Central de Astúrias: Sabino Riestra (coordenador local), Luis Rodrigo; Hospital de Galdácano, Vizcaya: Javier Fernández (coordenador local), Jose Luis Cabriada; Fundación Hospital de Calahorra (La Rioja) La Rioja: Luis Carreño (coordenador local), Susana Oquiñena, Federico Bolado; Hospital Royo Villanova, Zaragoza: Elena Peña (coordenador local), José Manuel Blas, Gloria Cena, Juan José Sebastián; Hospital Universitario Reina Sofía, Córdoba: Antonio Naranjo (coordenador local)

.