Abstract

O câncer de próstata é o câncer mais comum em homens, ea maioria dos pacientes têm doença localizada na altura do diagnóstico. No entanto, 4% já apresentam doença metastática. transição epitelial-mesenquimal é um processo fundamental na carcinogénese que tem sido mostrado para ser envolvidos na progressão do cancro da próstata. O principal evento em transição epitelial-mesenquimal é a repressão da E-caderina por fatores de transcrição, mas o processo também é regulada por microRNAs. O objetivo deste estudo foi analisar a expressão gênica e microRNA envolvidos na transição epitelial-mesenquimal no câncer de próstata localizado e linhas de células de câncer de próstata metastático e correlacionar com os achados clínico-patológicos. Foram estudadas 51 amostras de tecido fresco congelado de pacientes com câncer de próstata localizado (PCA) tratados por prostatectomia radical e três linhas de células de câncer de próstata metastático (LNCaP, DU145, PC3). A expressão de genes de 10 e 18 miARNs foram avaliados por PCR em tempo real. Os pacientes foram divididos em grupos de acordo com a pontuação de Gleason, estágio patológico, PSA pré-operatório, recorrência bioquímica e grupo de risco para a correlação com os achados clínico-patológicos. A maioria dos casos de CaP localizada apresentaram um fenótipo epitelial, com sobre-expressão de E-caderina e subexpressão dos marcadores mesenquimais. MiRNA-200 membros da família e miRNAs 203, 205, 183, 373, e 21 foram sobre-expressos, enquanto miRNAs 9, 495, 29b, e 1 foram underexpressed. níveis de miRNAs 200b, 30a Low-expressão, e 1 foram significativamente associados com o estágio patológico. menor expressão de miR-200b também foi associado com uma pontuação de Gleason ≥8 ea sobrevida livre de recidiva bioquímica mais curto. Além disso, foram observados níveis de miR-30A e de alta expressão de vimentina e níveis TWIST1 baixa expressão no grupo de alto risco. Comparado com o tumor primário, linhas de células metastáticas mostraram níveis de expressão significativamente mais elevados de miR-183 e TWIST1. Em resumo, miRNAs 200b, 30a, 1 e 183 e os genes TWIST1 e vimentina pode desempenhar um papel importante na progressão do câncer de próstata e pode eventualmente tornar-se importantes marcadores prognósticos

Citation:. Katz B, Reis ST, Viana NI, Morais DR, Moura CM, Dip N, et al. (2014) Estudo de Viabilidade da expressão gênica e microRNA Relacionado a transição epitelial-mesenquimal no câncer de próstata. PLoS ONE 9 (11): e113700. doi: 10.1371 /journal.pone.0113700

editor: Aamir Ahmad, Faculdade de Medicina da Wayne State University, Estados Unidos da América

Recebido: 21 de julho de 2014; Aceito: 28 de outubro de 2014; Publicação: 19 de novembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Katz et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pela FAPESP (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo) sob o protocolo número 2012 /50094-9. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de próstata (PCA) é um dos tumores mais comuns em homens, e é responsável por 29% de todos os cânceres diagnosticados recentemente [1]. Após a aprovação do teste de PSA, a maioria dos pacientes apresentam com PCA localizada, mas 4% já têm a doença metastática no momento do diagnóstico [1]. Actualmente, as características clínico-patológicas como estadiamento, escore de Gleason (GS), e os níveis de PSA são bons marcadores prognósticos [2] e são usados ​​para tomar decisões de tratamento; No entanto, eles não são suficientemente precisos para discriminar entre tumores que permanecerão indolente e aqueles que mais tarde irá avançar para se tornar metastático. De fato, as características biológicas únicas e origens genéticas heterogêneas da ACP [3] pode limitar a eficácia dos parâmetros clínico convencionais como marcadores preditivos. Por estas razões, os biomarcadores moleculares têm sido cada vez mais investigada para ajudar a compreender e prever o comportamento do cancro.

O epitelial-mesenquimal-a transição (EMT) é um processo biológico inversa que desempenha um papel na invasão e metástase durante a carcinogénese. adesão célula-célula epitelial é diminuída, e as células adquirem um fenótipo de fibroblastos altamente móveis em forma de fuso e uma maior capacidade de migração e invasão [4]. A principal característica da EMT é silenciamento transcricional da caderina-E [5], [6], que é controlada pelos reguladores de transcrição

ZEB1

,

ZEB2

,

SNAI1

(caracol),

SNAI2

(Slug), e

TWIST1

[5], [7], [8]. Além disso, há também a regulação positiva de marcadores de mesenquimais, tais como vimentina e N-caderina, um processo que é conhecido como caderina comutação [9].

Os papéis dos genes relacionados com a EMT em CaP não são completamente compreendidos, e estudos anteriores descrevem a perda de e-caderina [10] seguido de um aumento da expressão de N-caderina, da caderina-11 e vimentina [9] na análise imuno-histoquímica. Os níveis de expressão

ZEB1

, um regulador crucial da EMT na APC, estão relacionados com a GS [11], e Behnsawy et al propuseram o uso de perfis de expressão gênica EMT como marcadores de recorrência bioquímica após prostatectomia radical [ ,,,0],12].

MicroRNAs (miRNAs), uma nova classe de não codificação, RNAs reguladores, têm sido mostrados para participar em muitos processos relacionados com o desenvolvimento e progressão do cancro, incluindo EMT [13]. Um dos principais envolvidos na miARNs EMT é a família de miR-200, que é um indutor potente de diferenciação epitelial. Este grupo é composto por miR-200a, miR-200b, miR-429, miR-200c, e miR-141, que são geradas a partir de duas transcrições. Os três primeiros são derivados a partir de um cromossoma, enquanto que os dois últimos são derivados de cromossoma 12. Os membros deste grupo são altamente relacionados em sequência, indicando que eles provavelmente alvo complemento semelhante de RNAs mensageiros [14].

Entre os alvos da família miR-200 são ZEB1 e ZEB2 [15] – [17]. miR-200 membros inibir a expressão de ZEB ao nível pós-transcricional por ligação a locais alvo altamente conservadas nas suas 3’UTRs [18], [19]. Curiosamente, miR-200 membros são alvos de transcrição de

ZEB1

e

ZEB2

. A ligação funcional estreita entre os factores zeb e a família de miR-200 em um ciclo duplo-negativo feedback é conhecido como o ciclo ZEB /miR-200 realimentação [18], em que a activação de um grupo afecta negativamente a expressão da outra grupo. Dependendo dos sinais extracelulares, este circuito pode passar de um lado para o outro lado e estabilizar quer o fenótipo epitelial ou mesenquimal. Outros miRNAs também foram mostrados para participar na EMT, visando

SNAI1

(miR-29b, miR-30a, miR-34a) [20], [21], e

SNAI2

(miR -34a, miR-1, miR-200b) [22], [23]. No entanto, poucos estudos avaliaram miRNAs envolvidos na EMT em CaP.

Nosso objetivo é decifrar o papel dos genes e miRNAs relacionadas com a EMT em CaP para identificar um perfil que define o comportamento CaP.

materiais e Métodos

A seleção dos pacientes

Cinquenta e um pacientes que clinicamente localizada cancro da próstata e submetidos à prostatectomia radical entre 2000 e 2002 foram selecionados. Todos os pacientes foram tratados pelo mesmo cirurgião (MS), e todas as amostras patológicas foram analisados ​​pelo mesmo uropathologist (KRML). Os pacientes foram acompanhados por um período de tempo médio de 63.06 meses

O grupo controle foi composto por dez amostras de pacientes que se submeteram à cirurgia para a hiperplasia benigna da próstata, e teve volume da próstata. 50 cm

3 em ultra-sons, os níveis de PSA. 2,5 ng /ml, e não de malignidade no espécime patológicas

amostras de tecido da próstata

Todas as amostras de CaP fresco congelado foi obtido a partir de nosso biobank próstata, e consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes. Este estudo foi aprovado pelo conselho institucional de ética (CAPPesq – Comissão de Ética do Pará Análise de Projetos de Pesquisa) com o número 5907. Os tumores fresco congelado originado de espécimes de prostatectomia radical, e um 1 cm

3 fragmento foi isolado a partir da área suspeita e imediatamente congelados instantaneamente a -80 ° C. O restante tecido foi fixada em formalina a 10%, rotineiramente processadas, e corados com hematoxilina e eosina para exame histológico. As amostras foram posteriormente revistos e classificadas de acordo com o sistema de graduação de Gleason modificados [24], eo palco foi determinada após TNM 2010.

As linhas celulares

O cancro da próstata linhas de células LNCaP, DU145, e PC3 foram obtidas a partir da American Type Culture Collection (ATCC). LNCaP, DU145 e PC3 foram mantidas em RPMI, DMEM e meio MEM (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA), respectivamente. Todos os meios foram suplementados com soro fetal bovino a 10% e uma solução /antimicótico a 1% de antibióticos (Sigma, St. Louis, MO, EUA), e as culturas foram incubadas a 37 ° C numa atmosfera de 5% de CO

2 .

ARN e o isolamento e amplificação de miARN

RNA e miARN foram isoladas a partir de tecidos da próstata e linhas celulares utilizando o estojo Ambion miRvana (Austin, TX, EUA) de acordo com o protocolo do fabricante. O ADNc foi gerado a partir de ARN e de miARN utilizando um kit TaqMan de ARN Transcrição Reversa TaqMan e MicroRNA Transcrição Reversa Kit, respectivamente. Para a amplificação do gene e miARN, um kit TaqMan Reagente foi usado com o rápido em tempo real do sistema de PCR 7500 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). As reações foram realizadas em duplicata, e

B2M

(β-2-microglobulina) e RNU-48 foram usados ​​como controles endógenos para genes e miRNAs, respectivamente.

níveis de expressão gênica e miRNA foram obtido por quantificação relativa usando o

-ΔΔct o método 2. A fórmula utilizada é ΔΔCT = DCT

1- DCT

2, onde DCT

1 = CT do (amostra de tumor) alvo – CT da média do controlo endógeno (amostra de tumor), e DCT

2 = TC da média dos controlos normais (tecido benigna da próstata) – CT da média do controlo endógeno (tecido benigna da próstata). Para a avaliação das linhas de células metastáticas, a “controlo” (DCT

2) foi considerado como sendo os tumores PT2. O resultado final foi obtido pela aplicação da

-ΔΔct o método 2. Apreciação maior ou menor do que 1 foram considerados para indicar a sobre-expressão ou subexpressão, respectivamente. Todos os valores foram normalizados relativamente aos valores normais de controle, que foram representados como um valor de 1.

Gene e miRNA selecção

A escolha de miRNAs e genes avaliados neste estudo foi baseado em sua papel no processo de TEM em vários tipos de cancro. Foi realizada uma pesquisa bibliográfica através do PubMed e Web of Science usando os termos “transição epitelial-mesenquimal”, “câncer” e “miRNA”. Com base nos dados publicados na literatura, foram selecionados 18 miRNAs que tiveram como alvo os genes mais importantes envolvidos na EMT. Os dados são apresentados na Tabela 1.

Análise Estatística

Para comparar as características clínico-patológicas entre os pacientes com PCA localizada, os pacientes foram divididos em grupos com base em suas GS (GS ≤6 vs GS ≥8), fase patológica (pT2 pT3 vs), PSA pré-operatório ( 10 vs ≥10 ng /mL), e a ausência ou presença de recorrência bioquímica, definido como PSA ≥0,02 ng /mL. Os pacientes também foram classificados em grupos de baixo risco e doença de alto risco de acordo com a presença de qualquer característica desfavorável. Neste cenário, os valores da expressão no tecido do tumor foram comparados com aqueles no tecido da próstata benigna.

Para a avaliação dos tumores metastáticos, três linhas de células metastáticas de CaP foram analisadas em conjunto e designado como o grupo metastático. Os níveis dos genes e miRNAs entre o grupo de células e tumores pt3 expressão foram comparados em relação aos tumores pt2, que foram considerados o grupo “controle”. A ideia era de que a fase patológica pode representar uma evidência prática de EMT, e utilizando este método, que se poderia avaliar que os marcadores EMT estão envolvidos na progressão de um tumor localizado para metástase.

O U Mann-Whitney e os testes t foram usados ​​para comparar os GS, estágio patológico, os níveis de PSA pré-operatório, recorrência bioquímica, e grupos de risco. A distribuição de genes e os níveis de expressão de miARN foi inclinado, e os dados foram transformados para log-análise. As curvas de Kaplan-Meier foram construídas para analisar a sobrevida livre de recidiva bioquímica. A significância estatística em todos os testes, conforme avaliado pelo cálculo dois lados

P

-Valores, foi fixado em . 0,05

Resultados

Os dados do paciente

A idade média dos pacientes era 65 anos. A média e o GS medianos foram de 7,3 e 7, respectivamente. Vinte e dois pacientes (43%) foram estádio pT2, e 29 (57%) pacientes eram estágio pT3. Dezessete (33%) pacientes tiveram recorrência bioquímica em um período médio de acompanhamento de 63.06 meses. Os dados são apresentados na Tabela 2.

miRNA e perfil de expressão gênica em localizada CaP

miRNAs 200a, 200b, 200c, 429, 141, 205, 203, 21, 183, e 373 foram sobre-expresso em 35 (69%), 47 (92%), 38 (74%), 39 (77%), 42 (82%), 44 (86%), 38 (74%), 51 (100 %), 38 (74%), e 33 (64%) amostras, respectivamente. miARNs 1, 29b, 9, e 495 foram underexpressed em 41 (80%), 41 (80%), 36 (71%), e 42 (82%) das amostras, respectivamente. miARNs 34a, 155, 30a, e 10b mostram um padrão de expressão variável: miR-34a e miR-155 foram underexpressed em 55% e 57% das amostras, respectivamente, e miR-30a e miR-10b foram sobre-expresso em 51% das amostras (Tabela S1 no arquivo S1).

E-caderina foi sobre-expresso em 50 casos (98%). A genes N-caderina,

TGFB1

, e

ZEB1

foram underexpressed em 36 (71%) pacientes, enquanto

SNAI2

e vimentina foram underexpressed em 42 (82%) e 41 (80%) pacientes, respectivamente.

ZEB2

,

SNAI1

, e

PDGFD

mostrou padrões variáveis ​​de expressão. Por outro lado,

TWIST1

era o único gene induzida por EMT mostrou que a sobre-expressão na maioria dos casos (73%) (Tabela S1 S1 do ficheiro).

miARNs e genes associados com características clinicopatológicas

Tabelas 3 e 4 ilustram os dados relativos miRNA e expressão genética em relação às características clínico-patológicas, respectivamente. Os baixos níveis de miR-200b, o miR-30a, e miR-1 foram associados com a doença pT3. Dos 18 miRNAs estudados, três foram significativamente underexpressed na doença pT3 (miR-200b – 7,73 vs 23,86,

P

= 0,02; miR-30a – 1,73 vs 3,79,

P

= 0,048; e miR-1-0,72 vs 1,97,

P

= 0,04). No entanto, em relação aos genes, não foi possível encontrar qualquer associação entre a sua expressão e estágio patológico.

Foi avaliada a associação de GS com os miRNAs excluindo GS 7 por causa de seu comportamento incerto. Quinze pacientes (29%) tinha um GS ≤6 e 23 (45%) tinha um GS ≥8. Descobrimos que a expressão de miR-200b foi significativamente menor nos pacientes com um GS ≥8 quando comparados com pacientes com um GS ≤6 (6,94 vs 18,67,

P

= 0,035). Não foi encontrada associação entre o GS e os outros miRNAs e genes.

Quando os pacientes foram agrupados de acordo com baixo risco e doença de alto risco, a doença de alto risco tinham níveis significativamente mais baixos de miR-30a (1,70 vs 6,37,

P

= 0,039). Também altos níveis de vimentina e

TWIST1

foram significativamente associados com doença de alto risco (0,27 vs 0,90,

P

= 0,017; 1,81 vs 8,89,

P

= 0,018) .

Devido à associação significativa entre miRNAs 200b, 30a, e 1 com estágio patológico e seu potencial como marcadores prognósticos, foi realizada uma análise de sobrevivência. A análise de Kaplan-Meier revelou que os pacientes com baixos níveis de miR-200b tiveram sobrevida livre de recidiva bioquímica significativamente menor (

P

= 0,049) (Figura 1).

Os pacientes com expressão de miR-200b níveis ≤14.690 mostrou sobrevida livre de recidiva bioquímica significativamente menor.

Além disso, o miR-183 e

TWIST1

níveis de expressão foram significativamente maiores em linhas celulares de CaP metastático em comparação com os níveis em pacientes com a doença pT3 e tumores de alto grau (Tabela S2 no arquivo S1). Em linhas de células, os níveis de miR-183 e TWIST1 foram 2,64 e 3,54, respectivamente, enquanto que nos tumores PT3, os seus níveis foram 40,41 e 14,45, respectivamente, (

P

= 0,009 e

P =

0,049, respectivamente).

Discussão

a importância da EMT na carcinogénese tem sido extensivamente estudada nos últimos anos, e agora é considerado um dos principais mecanismos responsáveis ​​pela progressão do tumor e disseminação metastática. Nosso estudo teve como objetivo avaliar o significado dos padrões de vários miRNAs e genes envolvidos na EMT em espécimes clínicos de câncer de próstata localizado e em linhagens de células metastáticas de expressão. Os nossos resultados são resumidos na Figura 2, que mostra os principais miARNs e genes envolvidos na EMT na progressão da APC e o seu possível mecanismo de acção.

os níveis de expressão de miARN 200b, 30a e uma queda quando o adquire tumorais características de alta qualidade, enquanto os níveis de aumento TWIST1 e Vimentin expressão. Quando o tumor se torna metastático, um aumento nos níveis de miR-183 e TWIST1 expressão é observada. As linhas tracejadas indicam os genes onde estes miARNs ou genes podem actuar, com base em dados publicados anteriormente.

BR

= Biochemical Recorrência.

Nós mostramos que miR-200b, miR-30a e miR-1 foram significativamente underexpressed em tumores não-confinado ao órgão e podem constituir interessante fatores prognósticos. Um estudo recente fortalece os nossos achados, mostrando que miR-200b e miR-1 induzir mesenquimal-epitelial (MET) em células de camundongo e PCA humana e são reguladores importantes na tumorigênese prostática e progressão do tumor [23].

miR-200b foi sobre-expresso em espécimes APC, e este achado está de acordo com estudos anteriores da ACP [25], [26]. Os membros da família de miR-200 são os mais importantes envolvidos miARNs em EMT [27], e os estudos em células de CaP têm mostrado que o miR-200b inibe EMT, crescimento, metástase e [23], [28]. Nossa hipótese é que o miR-200b tem o maior potencial para se tornar um marcador de prognóstico, porque menor expressão de miR-200b foi significativamente associada com uma alta GS, doença pT3 e sobrevida livre de recidiva bioquímica mais curto. O papel de miR-200b tem sido descritos em outros tumores, e a sua infra-regulação está relacionado com o estádio avançado da doença [29] e sobrevivência global mais curta [30] – [32]. Similar aos nossos achados, Barron et al descobriram que os níveis de miR-200a foram reduzidas em pacientes que recaíram estudando a expressão de miR-200a no tecido embebido em parafina fixado em formol de pacientes com a doença pT3 [33], apoiando o potencial de miR-200 familiares como um marcador de recorrência bioquímica.

estudos anteriores indicam que a regulação negativa de miR-200 pode contribuir para a progressão de CaP [15] [34]. Xu et al observada uma redução de 80% nos níveis de miR-200b em células LNCaP castrados quimicamente através de sequenciação de ARN [35]. Emergentes evidência apoia a participação de processos de EMT na desregulamentação do andrógeno sinalização eixo, mas os dados ainda são controversos. Zhu e Kyprianou observado que os andrógenos induzem padrões independentemente EMT dentro de células cancerosas da próstata, resultando em mudanças substanciais na invasão celular e motilidade [36]. O receptor de androgénio activado (AR) foi recentemente mostrado para promover a activação de EMT através da supressão da expressão de E-caderina nas células de cancro da mama [37]. Por outro lado, Sun et al descobriram que a privação de andrógeno provoca EMT in vivo e aquisição de recursos mesenquimais [38].

Este é o segundo estudo relativo miR-1 e prognóstico em CaP. Hudson et al anteriormente descobriu que baixos níveis de miR-1 expressão foram associados com recorrência bioquímica no início CaP [39]. Agora que mostrou que o miR-1 foi regulada negativamente no tumor primário em relação ao tecido da próstata benigna, e foi significativamente reduzida na doença não-confinado ao órgão. Pensa-se que o miR-1 regula Slug [23], através de metilação e acetilação de histona [39] e também tendo como alvo genes relacionados com a proliferação, migração e invasão [40], desempenha um papel importante na EMT em CaP.

os dados sobre o papel do miR-30a em CaP são escassas e contraditórias. Em nosso estudo, miR-30a mostrou um padrão variável de expressão. miR-30a foi descrita como estando regulada negativamente no estudo realizado por Porkka et al [41], enquanto Carlsson et al relataram a regulação positiva deste miARN [42]. Recentemente, Kao et al mostraram que o gene relacionado com o ETS (

ERG

), que é o oncogene mais frequentemente sobre-expressa em APC, é um alvo directo de miR-30 e que a sobre-expressão de miR-30 em células de CaP suprime fenótipos EMT e inibe a migração celular e invasão [43]. miR-30 da família também inibe a migração celular, invasão e metástase

in vitro

em outros tumores, como de pulmão, mama e câncer hepatocelular [21], [44] – [46], visando

SNAI1

[21], [44] e Vimentin [45], [46]. Neste estudo, a relação observada entre a diminuição da expressão de miR-30, fase patológica avançada, e doença de alto risco confirma miR-30 como um supressor de tumor miARN no CaP. Cheng et al observaram que os baixos níveis de miR-30a foram preditores de palco e linfonodo avançada metástase em câncer de mama invasivo [45]. Wang et al mostrou que baixos níveis de expressão de miR-30a foram significativamente associados com uma maior incidência de trombo tumor veia porta no carcinoma hepatocelular [46].

Em relação aos genes, observou-se a sobre-expressão de E-caderina em praticamente todos os casos, ea maioria dos marcadores mesenquimais, incluindo N-caderina,

TGFB1

,

ZEB1

, vimentina, e

SNAI2

, foram reprimidos. Este perfil de expressão gênica sugere fortemente que localizada CaP mantém o fenótipo epitelial apesar de diferenciação do tumor e aumentar palco. No entanto,

TWIST1

foi sobre-expresso em 73% dos casos.

TWIST1

é um fator de transcrição hélice-alça-hélice que ativa EMT através da inibição indirecta da caderina-E [47].

TWIST1

tem sido mostrado para ser sobre-expresso em CaP em ensaios de imuno-histoquímica e correlacionam-se positivamente com o GS [48], [49]. É interessante que um gene com tanta importância na EMT e com valor prognóstico em PCA é sobre-expressos em tumores localizados. A sobre-expressão precoce de

TWIST1

pode ser atribuída à sua regulação pelo gene

NKX3-1

[50], um supressor de tumor que foi encontrado para ser underexpressed nos estágios iniciais da ACP [51 ], [52]. No entanto, a regulação positiva precoce de

TWIST1

não parece ser suficiente para iniciar o processo de EMT. De acordo com a Casas et al,

TWIST1

induz

SNAI2

para promover EMT [53], mas o esgotamento dos

SNAI2

bloqueia completamente a capacidade de

TWIST1

para suprimir a e-caderina e induzir EMT.

Temos demonstrado que altos níveis de

TWIST1

, bem como Vimentin, estão significativamente associados com os pacientes no grupo de alto risco e

TWIST1

também foram significativamente mais elevados nas linhas de células metastáticas. Em um estudo recente, Behnsawy et al [12] mostraram que os níveis de expressão elevados

TWIST1 Comprar e Vimentin avaliada por imuno-histoquímica é um fator independente relacionado à sobrevida livre de recidiva bioquímica mais curto, sugerindo que estes genes podem ser potenciais marcadores de recorrência após a prostatectomia radical bioquímica.

TWIST1

parece desempenhar um papel em várias etapas de EMT, e o seu papel na progressão de CaP [49]. No estudo de Kwok et ai,

TWIST1

expressão foi maior em tecidos derivados de lesões metastáticas a partir de ossos e dos gânglios linfáticos [48]. O papel de

TWIST1

nesta etapa posterior de EMT pode ser explicado pela activação do seu alvo, o miR-10b. miR-10b não só reprime a caderina-E [54], mas também inibe a tradução da proteína HOXD10, permitindo a expressão do produto de gene pró-metastática,

RhoC

[55].

observamos, também, que os níveis de expressão de miR-183 eram significativamente mais elevados no grupo metastático. Ueno et al observaram que os níveis de expressão mais elevados de miR-183 foram significativamente associados com maior PSA, maior palco e sobrevivência global mais curto após a prostatectomia radical, mas seu comportamento em PCA é absolutamente controversa alguns mostrando que miR-183 promove a migração e invasão [56] – [58], enquanto outros indicam que inibe a migração, invasão e metástase [59] – [61]. Alguns alvos de miR-183 foram propostas,

DKK3

,

SMAD4

[56],

EGR1

e

PTEN

[57], que se transforma miR-183 de um miARN dependente do contexto. Com base em nossos resultados e de acordo com estudos prévios da literatura, acreditamos que miR-183 actua como um oncomiR em APC, eo mecanismo pode envolver

PTEN

que está relacionada com a progressão CaP e desenvolvimento de metástases [62 ]. Ding et al também mostraram que concomitante

PTEN

e

SMAD4

inactivação no epitélio prostático é capaz de produzir um fenótipo invasivo e metastático totalmente penetrante CaP em ratos [63].

em conclusão, é importante entender que a progressão influências EMT tumor em diferentes etapas através de vários marcadores. Aqui, descrevemos um estudo abrangente de miRNAs e genes relacionados com a EMT em APC e descobriu que os níveis de miR-200b, miR-30a, miR-1, expressão

TWIST1 Comprar e Vimentin poderia ser usado na tomada de decisões tornando os processos relacionados aos tratamentos primários ou adjuvante no futuro.

Informações de Apoio

arquivo S1.

arquivo combinado de apoiar mesas. Tabela S1: Os níveis de expressão de genes de miARN e cada caso em relação a amostras BPH. Tabela S2: Os níveis de expressão de miRNAs e genes em tumores pt3 e em linhas celulares (em relação aos tumores Pt2)

doi: 10.1371 /journal.pone.0113700.s001

(DOCX)