Sumário
Apesar de ainda há muito a evidência anedótica e científica generalizados para ser entendido sobre a ligação de longa suspeita entre fatores psicológicos e susceptibilidade ao câncer. A pele é o local mais comum de câncer, sendo responsável por quase metade de todos os cânceres em os EUA, com cerca de 2-3 milhões de casos de câncer não-melanoma que ocorrem a cada ano em todo o mundo. Nossa hipótese é que um fenótipo comportamental de alta ansiedade, o stress-propenso resultaria em uma maior carga de estresse crônico, inferior protetora-imunidade e aumento da progressão do câncer de pele imuno-responsivo, carcinoma de células escamosas. camundongos SKH1 foram fenotipada como alta ou baixa ansioso no início do estudo e, posteriormente, expostos à luz ultravioleta-B (1 dose mínima para o eritema (MED), 3 vezes /semana, 10 semanas). As forças significativas deste modelo de câncer são que ele usa um normal, imunocompetentes, a estirpe não consanguíneos, sem cirurgia /injecção de linhas de células /células tumorais exógenos, e produz lesões que se assemelham a tumores humanos. Os tumores foram contadas por semana (resultado primário), e tecidos colhidos durante as fases precoce e tardia de desenvolvimento do tumor. Quimiocina /citocina gene-expressão foi quantificada por PCR, ajudante infiltrantes de tumor (Th), citolítica (CTL), e células (Treg) T reguladoras por imuno-histoquímica, nódulo linfático T e células B por citometria de fluxo, corticosterona e do tecido supra-renal e plasma vascular endotelial-growth factor (VEGF) por ELISA. camundongos de alta ansiosos mostrou uma carga tumoral maior durante todas as fases de desenvolvimento do tumor. Eles também mostraram maiores níveis de corticosterona (indicando maior carga estresse crônico), o aumento da expressão CCL22 e infiltração Treg (aumento recrutou-tumoral da imunossupressão), inferior CTACK /CCL27, IL-12 e IFN-γ gene-expressão e números mais baixos de tumor infiltrando Th e CTL (imunidade protetora suprimida), e as concentrações de VEGF mais elevadas (aumento tumor angiogênese /invasão /metástase). Estes resultados sugerem que os efeitos deletérios da alta ansiedade traço poderia ser: exacerbado por estressores de vida, acentuada pelo estresse de câncer de diagnóstico /tratamento e mediar a progressão do tumor aumentou e /ou metástase. Por isso, pode ser benéfico para investigar o uso de tratamentos de quimioterapia ansiolíticos compatível imediatamente após o diagnóstico de câncer, e durante tratamento de câncer /sobrevivência
Citation:. Dhabhar FS, Saul AN, Holmes TH, Daugherty C, Neri E , Heather JM, et ai. (2012) indivíduos de alto Ansioso mostram aumento Burden estresse crônico, diminuição da imunidade protetora, e aumentou o cancro progressão em um modelo de rato com carcinoma espinocelular. PLoS ONE 7 (4): e33069. doi: 10.1371 /journal.pone.0033069
editor: Pranela Rameshwar, da Universidade de Medicina e Odontologia de New Jersey, Estados Unidos da América
Recebido: 17 de outubro de 2011; Aceito: 03 de fevereiro de 2012; Publicação: 25 de abril de 2012
Direitos de autor: © 2012 Dhabhar et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. O financiamento para estes estudos foi fornecido pelo National Institutes of Health subvenção CA107498 (FSD). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
Vários estudos têm sugerido que as personalidades de stress-propenso e estilos de enfrentamento, e fatores como a ansiedade-traço que contribuem para o aumento do estresse, estão associadas com maior incidência de câncer, a progressão ou mortalidade [1] – [8]. No entanto, muitos estudos não conseguiram encontrar uma associação entre traços de personalidade relacionados com o stress ea incidência de câncer e /ou mortalidade [9] – [13]. Diferenças no momento da avaliação da personalidade em relação ao diagnóstico de câncer, as interações entre o tipo de personalidade, a gravidade estressor, e factores relacionados [14], [15], a heterogeneidade metodológica entre os estudos [16], e um foco em tumores immunoresistant em alguns estudos [17 ], são pensados para explicar a natureza ambígua de conclusões sobre fatores de personalidade e suscetibilidade ao câncer. É importante ressaltar que pacientes com câncer em diversas culturas consistentemente classificar o estresse como um fator importante que contribui para a sua doença [18] – [21] e vários estudos têm demonstrado que o estresse de longo prazo está relacionada ao aumento da incidência de tumores, progressão e metástase [22] – [29] (para revisão ver: [30]). À luz deste fundo foi investigada a associação entre fenótipos comportamentais relacionados à ansiedade e suscetibilidade ao câncer em condições controladas de laboratório e no contexto de um câncer de imuno-responsivo. Estudos anteriores utilizando o mesmo modelo de tumor descrito aqui, tinha mostrado que o stress crónico aumenta a susceptibilidade para o carcinoma de células escamosas (SCC) através da supressão de imunidade protectora e aumentando a células reguladoras /T supressoras dentro do microambiente do tumor [25]. A ansiedade pode ser definida como um aumento da sensibilidade e /ou reatividade a ameaças /estressores reais e fisicamente existentes, ou inexistentes, mas percebidas ou esperados. Porque é provável que um fenótipo comportamental high-ansioso, pode induzir maior estresse-reactividade e levar a um aumento da carga de estresse crônico ao longo do tempo, foi testada a
hipótese geral de que fenótipos comportamentais relacionados à ansiedade medidos no início do estudo (pré-câncer) estaria associado a índices fisiológicos de aumento de stress crónico, diminuição da imunidade protetora, e aumento da susceptibilidade a SCC induzido por UV
O modelo SCC aqui descrito tem várias vantagens:. que envolve um normal, imuno-competente , estirpe de ratinho não consanguíneos que não tenha sido geneticamente manipulada, não envolver cirurgia ou injecção de células tumorais exógenos ou de linhas de células, e permite a investigação da evolução no tempo naturalista de todas as fases de desenvolvimento de tumores [25] com lesões e as fases que se assemelham estreitamente humano SCC [31] – [33]. Importante, a relevância para a saúde pública destes estudos é realçado pelo fato de que a pele é o local mais comum de câncer em seres humanos [34], com uma estimativa de 2-3 milhões de casos de câncer de pele não-melanoma que ocorrem a cada ano em todo o mundo [35 ]. SCC é o segundo tipo mais comum de câncer nos Estados Unidos, com aproximadamente 700.000 casos diagnosticados e resultando em cerca de 2.500 mortes por ano [36]. Além disso, a radiação ultravioleta B (UVB) componente da luz solar (mesmo comprimento de onda, 290-320 nm, usado para induzir SCC no presente modelo) é um agente cancerígeno completo e é responsável pela maioria dos cânceres de pele não-melanoma [37], [38] . Importante, SCCs são imunogénicas e podem ser eliminados por respostas imunes mediadas por células endógenas [39] – [41], contudo, a exposição de UV suprime o tráfico de linfócitos e função das células T e NK [42], e inibe a imunidade anti-CEC [43 ] – [45], os quais podem habilitar tumores SCC para escapar depuração imune [25], [46]. À luz da importância da ansiedade que está sendo gerado durante o diagnóstico e tratamento do câncer, ea relevância para a saúde global e valor científico do modelo de cancro da pele em estudo, aqui vamos investigar endócrino (índices fisiológicos de carga estresse crônico), imunes (índices de protecção contra a função imune supressiva no microambiente tumoral), e tumor) mecanismos de promoção do crescimento (VEGF mediando os efeitos da alta em comparação com fenótipos comportamentais de baixa ansiosos sobre surgimento e progressão tumoral
resultados.
Classificação de Mice em Alta contra fenótipos de baixa ansiosos em linha de base
Foram utilizados dois testes etológicas estabelecidos de comportamento relacionados à ansiedade, o labirinto em cruz elevado (EPM) e da arena claro-escuro (LDA), a determinar o fenótipo de comportamento relacionadas com a ansiedade de cada rato [47] – [49] na linha de base, ou seja, antes da indução de tumores. Dois testes diferentes foram usados porque a ansiedade é um fenótipo comportamental complexa e queríamos examinar se diferentes dimensões da ansiedade (que são susceptíveis de ser evocado e quantificadas em diferentes arenas de teste) estaria associada a aspectos específicos da progressão do tumor e /ou tumor- função imune relevante. Além disso, o campo aberto Arena (OFA) foi utilizado para determinar o nível geral de actividade /locomoção como uma medida de controlo, para garantir que as relações observada usando o EPM ou medidas de ansiedade LDA não eram o resultado de diferenças inter-individuais na actividade global os níveis de [48], [50]. Os ratos foram classificados como alta ou baixa ansioso com base em uma média-split das pontuações para cada teste. As medianas resultantes e médias do grupo estão apresentados na Tabela 1. A diferença entre os ratos que mostra a elevada contra baixa fenótipo comportamental ansioso em cada teste foi altamente significativa (p = 0,0001) apenas quando os acima contra abaixo- mediana grupos eram comparação para o teste em que a divisão mediana foi baseado, indicando independência entre as medidas comportamentais.
Ratos de alta ansiosas mostram aumento Emergência e progressão tumoral
os ratos que mostraram uma alta fenótipo ansioso na linha de base (tal como medido pela EPM) exibiram uma maior carga tumoral durante todas as fases do desenvolvimento do tumor (Fig. 1): papiloma emergência e regressão (~weeks 11-19), a transição do papiloma ao SCC (20- ~weeks 25), e progressão SCC (~week 26 em diante). Curiosamente, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas nas contagens médias de tumor quando os ratos foram agrupados em alto contra baixa fenótipos ansiosos com base no seu comportamento na LDA. Usando distância total percorrida no OFA como medida de controle para as diferenças nos níveis de atividade globais entre ratos individuais, não foram encontradas diferenças nas contagens de tumor entre alto em comparação com baixa fenótipos atividade locomotora (p 0,1). Isto sugeriu que a relação observada entre fenótipo de alta ansioso e uma maior carga do tumor não é o resultado de diferenças na actividade locomotora geral, mas está relacionada com a ansiedade. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas na área do tumor média, ou tempo para a incidência de tumores de 50%, quando os ratos foram agrupados por alto em comparação com baixa fenótipos ansiosos, ou pelo alto versus atividade locomotora baixa (p 0,1). Isto sugeriu que, enquanto o fenótipo comportamental alta-ansioso estava associada com uma maior contagem de tumores, nenhuma associação foi detectado com o tamanho do tumor ou do tempo de incidência tumoral de 50%.
Em comparação com ratinhos de baixo-ansioso (barras brancas) camundongos alto ansioso (barras pretas) apresentaram maior média de contagem de tumor durante todas as fases do desenvolvimento do tumor: emergência papiloma e regressão (~weeks 11-19), a transição para SCC (~weeks 20-25), e progressão SCC (~week 26 em diante). Os dados são expressos como média ± SEM. Diferenças estatisticamente significativas entre as fases são indicadas (**
p Art 0,05; ***
p Art 0,01). Análise empregado um modelo linear generalizado para uma distribuição de Poisson em uma função de ligação logarítmica com provisão para superdispersão dos dados da área.
A avaliação quantitativa de tumores acima descrito foi complementada com exame histopatológico e identificação de características do tecido de tumores na semana 31. obtidos com ratos que foram sacrificados na semana 31 que apresentou um tumor a partir de todos os animais que tinham um tumor com um diâmetro 3 mm para a classificação histopatológica. Um total de dezoito tumores foram classificados. Em camundongos caracterizados como de alta ansioso (HiAnx) na EPM, um tumor aparente foi reclassificada como hiperplasia epidérmica focal, uma lesão precursora do papiloma. Dos tumores restantes, quatro eram papilomas, dois eram microinvasivo SCC (miSCC), e dois foram SCC totalmente invasivo. Em camundongos caracterizados como de baixa ansiedade (LoAnx) na EPM, cinco tumores foram classificados como papiloma, quatro como miSCC, e nenhum como SCC. Ratos caracterizado como HiAnx na LDA tinha quatro papilomas, quatro miSCC, e dois SCC. Dentre os tumores da amostra em camundongos caracterizados como LoAnx no LDA, um foi reclassificado como hiperplasia epidérmica focal, cinco eram papilomas, dois eram miSCC, e nenhum foi SCC. Por conseguinte, apenas os ratinhos caracterizado como HiAnx quer na EPM ou o LDA tinha SCC totalmente invasivo. Além disso, ambos os grupos de ratinhos HiANx tinha uma proporção mais elevada de miSCC invasiva ou SCC em comparação com os papilomas não-invasivos (≥50% dos tumores). Qualitativamente, estes resultados sugerem acelerada progressão do tumor em indivíduos de alto ansioso.
Efeitos de Alta contra fenótipos de baixa ansiosos sobre Gene quimiocinas e citocinas Expressão em UV a pele exposta e tumores induzidos por UV
Foram examinados os efeitos de alta em comparação com fenótipos comportamentais de baixa ansioso nos níveis médios de expressão do gene de quimiocinas e citocinas críticas que são conhecidos por ter (quimiocina importante de protecção cutânea atraindo células T (CTACK também conhecida como CCL27), interleucina (IL) – 12, o interferão gama (IFN-γ)) versus a promoção do tumor (CCL22, IL-10, IL-4) efeitos no contexto do CEC [25], [51]. Uma vez que a função biológica global é finalmente influenciado por proporções relativas dos factores contraditórios, também examinámos os efeitos do fenótipo ansiedade nas razões de protecção contra quimioquinas prejudiciais (CTACK /CCL22) e citocinas ((IL-12 + IFN-γ) /(IL -10 + IL-4)). Para avaliar a robustez dos resultados, cálculos de tamanho de efeito (de Cohen
d
) e análises de regressão multivariada foram realizadas para além de
t
-Testes. Portanto,
t
-test
valores p
com tamanho do efeito calculado como de Cohen
d
, e /ou regressão
valores p
com inclinação de regressão, são fornecido abaixo para todas as análises mostrando significância estatística (
p Art 0,05) ou tendência (
p Art 0,09). Importante, para todas as comparações em que uma das duas análises,
t
-teste ou inclinação da regressão, mostrou uma tendência estatística, a análise restantes apresentaram significância estatística, sendo as únicas excepções a expressão do gene em UV pele exposta na semana 17 para o IFN-γ e na semana 31 para os rácios de CTACK /CCL22 e (IL-12 + IFN-γ) /(IL-4 + IL-10), para os quais o
t
-test não estava pistas significativas ea regressão só mostrou tendências estatísticas
Gene expressão foi quantificado em pele exposta aos raios UV sem lesões visíveis nas semanas 17 e 31, a fim de examinar as mudanças pré-cancerosas (Fig. 2):. na semana 17 , ratos HiAnx apresentaram menores níveis de expressão do gene para CTACK (inclinação de regressão = -0.5,
p Art 0,05), IL-12 (
t
-test
p
0,05, o tamanho do efeito = 0,9; regressão de inclinação = -0.5,
p Art 0,09) e IFN-γ (
t
-test
p Art 0,09 , efeito size = 0,7) e maior expressão gênica de IL-4 (
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 0,8; regressão de inclinação = 0,5,
p
0,05) enquanto CCL22 e IL-10 os níveis de expressão de genes não foram detectavelmente diferente entre os dois grupos (Fig. 2). Na semana 31, UV pele exposta de ratos HiAnx apresentaram menores níveis de expressão do gene para CTACK (
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 0,6; inclinação de regressão = -0.4,
p Art 0,01), IL-12 (regressão inclinação = -0.4,
p Art 0,05) e IFN-γ (
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 0,7; inclinação de regressão = -0.5,
p Art 0,01). CCL22, IL-4, IL-10 e a expressão do gene na semana 31 não era detectável diferente entre ratos e HiAnx LoAnx, no entanto, os ratinhos HiAnx mostrou uma proporção menor de CTACK /CCL22 (inclinação da regressão = -0,2
P
0,09), e de protecção (IL-12 + IFN-γ) para prejudiciais (citocinas IL-10 + IL-4) (inclinação da regressão = -0,5,
P
. 0,09)
a expressão gênica em pele dorsal foi medida por PCR quantitativa nas semanas 17 e 31 em baixa (barras brancas) e alta (barras pretas) ratos ansiedade. Os níveis de ARNm de citocinas e quimiocinas que se sabe serem de protecção (CTACK, IL-12, e IFN-γ) ou prejudiciais (IL-4 e IL-10) no contexto de CAA foram quantificados. Níveis de expressão de ARNm normalizados para desidrogenase do gliceraldeído-3-fosfato (GAPDH) de mRNA são mostrados. Os dados são expressos como média ± SEM. Os resultados foram optimamente de Box-Cox transformadas antes da análise. Para cada resultado, as médias foram comparadas entre os grupos utilizando um dois-sample
t
-teste com ajuste Satterthwaite para variâncias desiguais. tendências estatísticas (*
p Art 0,09) e diferenças significativas (**
p Art 0,05) são indicados e tamanhos de efeito correspondentes são mencionadas no texto. Para todas as comparações, onde o
t
-test mostraram uma tendência estatística, análise de regressão mostrou significância estatística, sendo a única excepção a semana 17 IFN-γ a expressão do gene.
A expressão gênica foi quantificada em tumores na semana 31 (Fig. 3): Os tumores de camundongos HiAnx apresentaram níveis mais altos de expressão do gene CCL22 (
t-
test
p Art 0,09, o tamanho do efeito = 0,5; regressão inclinação = 0,4,
p Art 0,05), um rácio mais baixo de CTACK /CCL22 (
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 0,6; regressão declive = -0,3
P
0,05), e uma proporção mais baixa de protecção (IFN-γ IL-12 +) a prejudiciais (citocinas IL-10 + IL-4) (
t-
test
p Art 0,09, o tamanho do efeito = 0,8; regressão de inclinação = -0.5,
p Art 0,05). As diferenças na expressão genética entre os ratos e HiAnx LoAnx descritas nesta secção foram baseadas no fenótipo determinado pela ansiedade LDA, excepto para as diferenças nos níveis de IL-4 a expressão do gene que se basearam no fenótipo determinado pela ansiedade EPM.
a expressão do gene em tumores foi medida por PCR quantitativa na semana 31 em baixa (barras brancas) e alta (barras pretas) ratinhos de ansiedade. Os níveis de ARNm de citocinas e quimiocinas que se sabe serem de protecção (CTACK, IL-12, e IFN-γ) ou prejudiciais (IL-4 e IL-10) no contexto de CAA foram quantificados. Uma vez que a função biológica global é finalmente influenciado por proporções relativas dos factores contraditórios, também examinámos os efeitos do fenótipo ansiedade nos rácios de protecção em relação aos factores prejudiciais: CTACK /CCL22 e (IL-12 + IFN-γ) /(IL-10 + IL-4). Níveis de expressão de ARNm normalizados para desidrogenase do gliceraldeído-3-fosfato (GAPDH) de mRNA são mostrados. Os dados são expressos como média ± SEM. tendências estatísticas (*
p Art 0,09) e diferenças significativas (**
p Art 0,05) são indicados. Os resultados foram optimamente de Box-Cox transformadas antes da análise. Para cada resultado, as médias foram comparadas entre os grupos utilizando um dois-sample
t
-teste com ajuste Satterthwaite para variâncias desiguais.
Os tumores dos ratos de alta ansioso mostrar números mais baixos de protecção células T e os números mais altos de células T /supressor de regulação
Foram quantificados o número de tumor crítica infiltrando populações de linfócitos, que são conhecidos por ter (células auxiliares e T citolíticos) protecção importantes ou (células T reguladoras) nocivos efeitos em no contexto do CE em ratinhos LoAnx e HiAnx (Fig. 4). fotomicrografias representativas são também mostradas (Fig. 5). ratinhos HiAnx fenotipados como com base no comportamento no LDA mostrou menor número de tumores infiltrantes (células Th
T-
teste
P
0,07, tamanho do efeito = 0,6; inclinação da regressão = – 0,5,
p Art 0,05) e CTLs (
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 0,8), os números mais elevados de inclinação Tregs (regressão = 0,37,
p Art 0,09) e os rácios mais baixos de Th /Treg (
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 1,0; inclinação de regressão = – 0,5,
p Art 0,05), CTL /Treg (
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 0,7; regressão de inclinação = -0.4,
p Art 0,09), e (Th + CTL) /Treg (
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 1,1; inclinação de regressão = -0.6 ,
p Art 0,05). Isto sugere que o equilíbrio entre a imuno-protectora contra células supressoras imuno-reguladora /foi deslocado a favor da supressão mediada por Treg activa da imunidade anti-tumoral em ratinhos HiAnx.
infiltrado no tumor células T foram quantificados em baixa (barras brancas) e alto (barras pretas) de ansiedade ratos na semana 31. os números de células se infiltram no tumor que são conhecidos por serem de protecção (Th e CTL) ou prejudiciais (Treg) no contexto de CAA foram quantificados. Uma vez que a função biológica global é finalmente influenciado por proporções relativas de células contrariar, também examinámos os efeitos do fenótipo ansiedade nos rácios de protecção em relação aos factores prejudiciais: Th /Treg, CTL /Treg, e (TH + CTL) /Treg. O número de células positivas por campo padronizado foi contada por um observador cego. Cinco campos em 60x foram analisados por seção tumor manchado por mouse. Os dados são expressos como média ± SEM. tendências estatísticas (*
p Art 0,09) e diferenças significativas (**
p Art 0,05) são indicados. Os resultados foram optimamente de Box-Cox transformadas antes da análise. Para cada resultado, as médias foram comparadas entre os grupos utilizando um dois-sample
t
-teste com ajuste Satterthwaite para variâncias desiguais.
coloração imuno-histoquímica para CD4 (linha superior), CD8 ( linha do meio), e CD25 (linha de fundo) foi usado para enumerar (contagens mostrado na Fig. 4) do tumor infiltrado de células T a partir de baixo (coluna da esquerda) e alta (coluna da direita) ansiosas ratinhos na semana 31. a barra de escala indica 100 ^ m.
sentinela gânglios linfáticos de ratos de alta ansioso Mostrar uma proporção menor de CD4 + células T helper e uma maior proporção de células B
As percentagens relativas de Th (CD3 + CD4 + ), de CTL (T CD3 + CD8 +) e as células em nódulos linfáticos braquial esquerda e direita (2 linfonodos por ratinho) recolhidos na semana 31 B (B220 +) são mostrados na Tabela 1. Os gânglios linfáticos braquial foram examinados por serem representativos da linfa sentinela nodos que drenam o dorso, em que foram observadas a maioria dos tumores. gânglios linfáticos de ratos high-ansiosos, fenotipados com base no seu comportamento no LDA, mostrou uma menor percentagem de células Th (
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 0,7; inclinação de regressão = -0.5,
p Art 0,01) e maior porcentagem de células B (
t-
test
p Art 0,01, o tamanho do efeito = 0,8 ; regressão de inclinação = 0,6,
P
0,01) em comparação com os dos ratinhos de baixa ansioso. Não foram observadas diferenças detectáveis em percentagens de CTLs.
Ratos de alta ansioso expressam níveis mais elevados de total Adrenal e pico de estresse corticosterona
Foi investigada a relação entre alta versus baixa-ansioso fenótipo e estresse Reatividade do eixo hipotalâmico-pituitário-supra-renal (HPA), medido pela secreção de corticosterona no plasma, como um possível mecanismo de mediação dos efeitos de fenótipo ansiedade sobre a função imunitária e a susceptibilidade ao cancro. camundongos HiAnx, fenotipada com base no seu comportamento na EPM (mas não a LDA), apresentaram níveis de corticosterona adrenal totais mais elevados do que os ratos LoAnx (HiAnx = 98,7 ± 11,5 ug, LoAnx = 73,9 ± 9,4 ug,
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 0,6; regressão de inclinação = 0,3,
p Art 0,09). níveis de corticosterona no plasma estado de repouso não foi significativamente diferente entre ratos HiAnx e LoAnx. No entanto, quando exposto a um estressor aguda (0,5 h contenção), ratinhos HiAnx, fenotipados com base no seu comportamento no LDA (mas não o EPM), também apresentaram níveis elevados de corticosterona no pico de tensão em comparação com os ratinhos LoAnx (alto-ansioso = 62,3 ± 6,3 mg /dL, de baixo ansioso = 47,6 ± 8,2 mg /dL,
t-
test
p Art 0,05, o tamanho do efeito = 0,7). Tomados em conjunto, estes dados indicam que os ratos HiAnx podem ser cronicamente expostos a níveis mais elevados de corticosterona, com maior pico de corticosterona estresse sugerindo que os ratos de alta ansiosos eram propensos a montar uma maior resposta ao estresse estressores, tais como mudanças de gaiola ou interações sociais e com a moderada mais elevados totais níveis de corticosterona adrenais fornecendo mais evidências de um longo prazo ou aumento crônico na atividade do eixo HPA.
Ratos de alta ansioso expressam níveis mais elevados de fator de crescimento endotelial vascular (VEGF)
VEGF Tissue foi usado como um indicador de prognóstico para CEC [52], [53]. Nós investigamos a relação entre alta contra as concentrações fenótipo e VEGF baixo ansiosos dentro do microambiente do tecido de HiAnx contra ratos LoAnx. ratinhos HiAnx, fenotipados com base no seu comportamento no LDA (mas não o EPM), mostraram as maiores concentrações de VEGF em lesões cutâneas (diâmetro 2 mm), que representam uma transição de hiperplasia epidérmica de focagem para o verdadeiro papiloma e fazem parte do espectro de lesões que conduzem finalmente, a SCC [54], [55] (HiAnx = 76,0 ± 16,7 pg /ml, LoAnx = 45,1 ± 10,1 pg /ml,
t-
test
p
0,09, tamanho do efeito = 0,6). camundongos HiAnx também mostrou concentrações de VEGF mais elevados na pele exposta aos raios UV, onde não havia lesões visíveis (HiAnx = 29,9 ± 5,5 pg /ml, LoAnx = 20,0 ± 2,7 pg /ml,
t-
test
p Art 0,09, o tamanho do efeito = 0,6; regressão de inclinação = 0,5,
p
. 0,05)
Discussão
Numerosos estudos têm mostrado que o estresse-propenso personalidade e estilos de enfrentamento e fatores como a ansiedade-traço estão associados com maior incidência de câncer e /ou aumento da mortalidade [1] – [8], no entanto, outros estudos não encontraram associações entre traços de personalidade e incidência de câncer e /ou mortalidade [9] – [13]. comentários perspicazes sugerem que a natureza ambígua de conclusões sobre fatores de personalidade e suscetibilidade ao câncer são devidos ao calendário de avaliações de personalidade em relação aos diagnósticos de câncer; interações entre o tipo de personalidade, a gravidade estressor, e factores relacionados [14], [15]; heterogeneidade metodológica entre os estudos [16]; e um foco em tumores imuno-resistente, em alguns estudos [17]. O estudo descrito aqui investigada a associação entre a linha de base (pré-câncer) fenótipo ansiedade e suscetibilidade ao câncer em condições controladas de laboratório e no contexto de um tumor imuno-responsivo.
Fenótipo Ansiedade e carga tumoral
Nós testamos a hipótese de que os ratos que exibem um fenótipo comportamental alta ansioso no início do estudo seria mais suscetível a SCC induzido por UV em comparação com ratos que exibem um fenótipo de baixa ansioso. Apoiando esta hipótese, descobrimos que HiAnx ratos exibiram uma carga tumoral maior durante todas as fases do desenvolvimento do tumor (Fig. 1): emergência papiloma e regressão (~weeks 11-19), a transição do papiloma a SCC (~weeks 20-25) e progressão SCC (~week 26 em diante). Nós encontramos mais nenhuma associação entre o fenótipo ansiedade e tempo para aparecimento de tumores. Isto mostra que um fenótipo de alta ansiedade não apressar a incidência de tumores, mas está associada com aumento da contagem e progressão tumoral, uma vez tumores começam a surgir. Estes resultados sugerem que pode ser vantajoso, especialmente para pacientes de alto-ansiosos, para receber tratamento farmacológico ansiolítico comportamental e /ou quimioterapia compatível logo após o diagnóstico do cancro e durante e após o tratamento do cancro. Estes resultados estão de acordo com estudos elegantes em ratos que mostram que, um fenótipo de alta ansioso neophillic [56], ou os efeitos ansiogênicos e indutoras de stress-de isolamento social [57], pode contribuir para o aumento da suscetibilidade a tumores mamários.
quimiocinas e citocinas mediadores
a fim de identificar os mecanismos imunológicos que podem mediar diferenças na susceptibilidade do tumor entre ratos HiAnx e LoAnx, examinamos a expressão de genes de quimiocinas críticos e citocinas conhecidas para exercer proteção contra os efeitos nocivos no contexto da SCC. Factores susceptíveis de aumentar a imunidade protectora contra SCC foram CTACK (também conhecida como CCL27), uma quimiocina que é crucial para o recrutamento de células T-homing pele para os sítios de activação imunitária cutânea [58] – [60], e IL-12 e IFN- γ, as citocinas que são críticos para a iniciação e manutenção de imunidade [61], [62] mediada por células e anti-tumoral [63] – [67]. Os factores que são conhecidos para promover a progressão CEC e foram associadas com o mau prognóstico incluídos CCL22, uma quimiocina que atrai as células T reguladoras (Treg) que encerre a resposta imune anti-tumor [68] – [71], IL-10, uma imuno-reguladora /supressora de citoquinas [72] – [75], e IL-4, uma citoquina Th2 prototípico [76] – [79]. A expressão de genes foi quantificada na pele que era desprovido de lesões detectáveis, a fim de examinar as alterações precoces na imunidade cutânea, na ausência de tumores (Figura 2), bem como em tumores (Figura 3). Os resultados mostraram que a pele exposta aos raios UV, assim como tumores de ratinhos HiAnx expressaram níveis mais baixos de quimiocinas e citocinas de protecção do que os ratos LoAnx. Uma vez que as acções biológicas de quimiocinas e citocinas muitas vezes envolvem mudanças no equilíbrio entre factores contraditórios, nós também examinou os efeitos de alta contra fenótipo de baixa ansioso sobre a relação de proteção aos fatores nocivos. Os tumores dos murganhos mostraram HiAnx rácios mais baixos de CTACK /CCL22 e (IL-12 + IFN-γ) /(IL-10 + IL-4).
Tomados em conjunto, estes dados sugerem que o equilíbrio de quimiocina em tumores de ratinhos HiAnx é deslocado para CCL22, que atrai células /supressor T reguladoras que suprimem a imunidade anti-tumor, e para longe CTACK, que pode atrair protectora anti-tumoral t células
.
Do mesmo modo, o equilíbrio de citoquinas em murganhos HiAnx é deslocado para imuno-reguladora /supressora (IL-10) e tipo-2 (IL-4) citocinas e longe do tipo 1-citocinas como a IL-12 e IFN-
γ
que são conhecidos por proteger contra SCC
.
mediadores celulares Immune
Dadas as diferenças na expressão de quimiocinas e citocinas gene descrito na seção anterior, nós quantificados os efeitos de alta em comparação com o fenótipo baixo de ansiedade em tamanhos de populações de linfócitos infiltrados no tumor críticos que são conhecidos por terem efeitos protectores ou prejudiciais importantes no contexto da SCC (Fig. 4). fotomicrografias representativas são também mostradas (Fig. 5). Os tipos de células conhecidas para montar respostas imunitárias anti-tumor contra SCC incluídas as células T CD4 + T auxiliares (Th) e células CD8 + T citolíticos (CTL) [40], [80] – [85]. O tipo celular que se sabe favorecer a progressão do tumor por suprimir a imunidade anti-tumor, foi a + reguladora celular CD25 /T supressoras (Treg) [68] – [71], [86], [87]. Uma vez que as acções biológicas dessas subpopulações de células imunes freqüentemente envolvem mudanças no equilíbrio entre tipos celulares concorrentes, nós também examinou os efeitos de alta contra fenótipo de baixa ansiosos sobre os rácios de proteção para as células prejudiciais: Os resultados mostraram números mais baixos de se infiltrar em células Th , os números mais elevados de Tregs, e rácios mais baixos de CD4 /CD25, CD8 /CD25 e (CD4 + CD8) /CD25 em tumores de ratinhos HiAnx.
Isto sugere que o equilíbrio entre a imuno-protectora contra células supressoras /imuno-reguladora é deslocado em favor da supressão ativa da imunidade anti-tumor de proteção por Tregs nos ratos HiAnx.
Também examinamos