Abstract
carcinoma de células renais (CCR) é o mais mortal de malignidades urológicas. A doença metastática afeta um terço dos pacientes no momento do diagnóstico com um outro terço doença metastática desenvolver após a cirurgia extirpative. Heterogeneidade na evolução clínica garante prever a metástase é notoriamente difícil, apesar do uso rotineiro de parâmetros clínico-patológicos prognósticos na estratificação de risco. Com maior entendimento das vias envolvidas na patogénese da doença, um número de biomarcadores foram mostrados para ter significado prognóstico, incluindo Ki67, p53, receptor do factor de crescimento endotelial vascular-1 (VEGFR1) e ligando D (VEGFD), caracol e lesma. análise de caminho anterior tenha sido de estudo do tumor primário, com pouca atenção para os tumores metastáticos que são o foco de terapias moleculares direcionados. Como tal, neste estudo um tissue microarray de 177 pacientes com tumor primário renal, trombo tumoral veia renal e /ou metástases RCC foi criado e utilizado com Automated Análise Quantitativa (AQUA) de imunofluorescência para estudar o significado prognóstico destes marcadores em localmente doença avançada e metastático. Além disso, esta permitiu a avaliação da expressão diferencial de proteínas, os tumores primários, trombo tumoral e metástases veia renal. Os resultados demonstram que os parâmetros clínico-patológicos continuam a ser os mais significativos preditores de sobrevida específica do câncer; no entanto, alta VEGFR1 ou VEGFD pode prever a sobrevida específica por câncer pobres na análise univariada para a doença localmente avançada e metastático. Houve significativamente maior expressão de Ki67, p53, VEGFR1, lesma e CARACOL nas metástases em comparação com os tumores primários e trombos tumor veia renal. Com a excepção do p53, estas diferenças na expressão da proteína não ter sido mostrado anteriormente em RCC. Isto confirma a importância da proliferação, angiogênese e epitelial para mesenquimal na patogênese e metástase do CCR. É importante ressaltar que este trabalho destaca a necessidade de uma análise mais aprofundada via de tumores metastáticos para superar a resistência aos medicamentos e desenvolvimento de novas terapias
Citation:. Laird A, O’Mahony FC, Nanda J, Riddick ACP, O’Donnell M, Harrison DJ, et al. (2013) a expressão diferencial de prognósticos proteômica Marcadores em Tumor Primário, venoso tumor trombo e metastático renal tecido canceroso celular e correlação com o resultado do paciente. PLoS ONE 8 (4): e60483. doi: 10.1371 /journal.pone.0060483
editor: Bin He, Baylor College of Medicine, Estados Unidos da América
Recebido: 31 de dezembro de 2012; Aceito: 26 de fevereiro de 2013; Publicação: 05 de abril de 2013
Direitos de autor: © 2013 Laird et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. O trabalho do autor AL é financiado pelo Royal College of Surgeons de Confiança de Edimburgo Robertson, The Melville Confiança para o Programa de Patologia cuidado e cura do câncer e o Farmacologia Clínica Medical Research Conselho escocês e. O trabalho de autores FCO, JN, ACPR, DJH e GDS acima mencionados é financiado pelo cientista Escritório Chefe, conceder número ETM37, e apoiado por Ciências Scotland Saúde Chief Scientist Financiado ea Medicina Cancer Cancer Research Centre UK Experimental. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
câncer de células renais (RCC) é responsável por 2,5% de todos os cânceres de adultos, mas é a mais letal de todas as malignidades urológicas. Um terço dos pacientes com CCR apresentam com doença metastática (CCRm). Enquanto a cirurgia extirpative destina-se a ser curativa em aqueles com doença localizada, uma outra 30-40%, eventualmente desenvolve metástases distantes [1], [2], [3]. No momento, não somos capazes de prever com precisão aqueles pacientes que irão recaída, devido à história natural altamente variável da doença.
Após a cirurgia, uma série de nomograms prognósticos têm sido propostos para prever a recorrência da doença. Estes incluem tipicamente TNM e grau de Fuhrman, bem como marcadores de sangue de status de desempenho e de soro (hemoglobina, cálcio, lactato desidrogenase, plaquetas, neutrófilos e proteína C-reactiva) para uma maior ou menor grau, [4], [5], [6 ], [7]. Essas variáveis clínico-patológicas são amplamente utilizados na prática clínica para estratificação de risco de recorrência e planejamento follow-up. Apesar disso, nenhum destes modelos são 100% precisas. Na tentativa de melhorar a estratificação de risco do paciente, e melhor prever a recorrência da doença e mortalidade associadas, muitos têm investigado o papel dos biomarcadores de prognóstico [8], [9]. Os marcadores de EMT, lesma e do caracol, têm sido relatados a ter importância preditivo e prognóstico na RCC [10], [11]. No entanto, mais notavelmente, Klatte
et ai
conduzido um estudo elegante de proteínas-chave na patogénese RCC utilizando a técnica de TMA para mostrar Ki67, p53, receptor do factor de crescimento vascular endotelial 1 (VEGFR1) e o ligando do factor de crescimento endotelial vascular D (VEGFD) foram associados com sobrevida livre de doença (DFS) em RCC localizada [12]. Este painel de marcadores combinados, foi capaz de prever melhor DFS em comparação com variáveis padrão. Um nomograma prognóstico foi construída combinando estes marcadores com variáveis clínico-patológicas, pela primeira vez, mostrando uma precisão preditiva melhorada. Apesar disso, não foi adoptado o uso rotineiro destes marcadores na clínica.
Uma melhor compreensão das bases moleculares da RCC tem não só a descoberta de biomarcadores avançado, mas também avançou no tratamento de carcinoma de células renais metastático (CCRm) com o desenvolvimento de terapias moleculares orientadas. A descoberta mais importante tem sido a identificação de mutações no gene von Hippel-Lindau (VHL) em células claras RCC hereditária (ccRCC) e até dois terços dos casos esporádicos [13]. Isto conduz à activação da via de hipoxia e a subsequente sobre-regulação de moléculas associadas a hipoxia ou seja, factores de crescimento endotelial vascular (VEGF) e os factores de crescimento derivados de plaquetas. Estas descobertas resultou na utilização clínica de anticorpos monoclonais de VEGF (bevacizumab) e inibidores multi-alvo de tirosina quinase (sunitinib e sorafenib em mRCC). Além disso, a compreensão da função do alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) via no CCR deu origem ao uso clínico de inibidores da mTOR, temsirolímus e everolimus. Apesar da melhora significativa na eficácia em comparação com as imunoterapias, o padrão de ouro para o tratamento da anterior mRCC, resistência a estas terapias moleculares continua a ser um problema significativo [14], [15], [16].
Grande parte do conhecimento desta base molecular da RCC foi descoberto através do estudo do tumor renal primária, com pouca análise das diferenças entre o tumor primário e as metástases. Recentemente, Gerlinger
et ai relataram que a assinatura genética do tumor primário pode não reflectir que a metástase de [17], no entanto, há pouco estudo dessas diferenças ao nível da proteína. expressão Lee
et al
relatam aumento da Bcl-2 [18] e Schultz
et al
mostraram maior expressão de pAKT, PS6, 4EBP1 e cMyc e menor expressão de PTEN na RCC metastático em comparação com tumores primários [19]. É provável que a chave para compreender o desenvolvimento de resistência e de tratamentos mais eficazes, é um estudo aprofundado dos tumores metastáticos, como o objectivo do tratamento consiste em reduzir a carga de tumor metastático. Além disso, tumor primário RCC tem uma predileção para envolver o sistema venoso (veia renal, veia cava inferior e átrio direito), este trombo tumor venoso (VTT) é potencialmente um meio termo entre o fenótipo do tumor primário e metastático.
a imuno-histoquímica (IHQ) é uma ferramenta fundamental na patologia molecular utilizada para auxiliar o diagnóstico e prognóstico em RCC. No entanto, IHC é subjetiva e apenas semi-quantitativa. O desenvolvimento de Automated Análise Quantitativa (AQUA) de imunofluorescência permite precisos e sensíveis na localização de proteínas in situ e quantificação, o que temos refinado para uso em RCC [11]. Resumidamente, este envolve a coloração de imunofluorescência para a proteína alvo e para criar uma máscara de tumor epitelial, permitindo a diferenciação do tumor do estroma, e sub-localização de núcleos e do citoplasma. Há subsequente captura de imagem digital e análise automática das imagens para dar pontuações contínuas para expressão de destino. Esta técnica permite uma maior objectividade e precisão de quantificação de proteínas e prognostication oferecido por Klatte e colegas. Neste estudo pretendemos usar AQUA immunoflurescence para avaliar a expressão da proteína diferencial dos marcadores prognósticos relatados no tumor primário, VTT e metástases em RCC e determinar o seu papel prognóstico em localmente avançado e /ou carcinoma de células renais metastático primário.
pacientes e Métodos
Estudo da População
os pacientes que tiveram carcinoma primário de células renais e /ou veia renal ou inferior trombo da veia cava e /ou distante RCC metástases no momento da cirurgia ou em uma tarde data foram identificados a partir de uma base de dados compilada prospectivamente. amostras de tumores de formalina parafina fixos embutidos (FFPE) foram identificados a partir de 177 destes pacientes submetidos a nefrectomia radical entre 1983 e 2010, no Departamento de Urologia, Edimburgo. Sempre que possível, o consentimento informado por escrito foi adquirida para uso do excedente de tecido com a exigência de diagnóstico e ligados anónimos os dados do paciente. A aprovação ética de usar esses tecidos arquivados foi concedida pelo Comitê de Lothian Regional Ethics (08 /S1101 /41 e 10 /S1402 /33). A aprovação ética 08 /S1101 /41 permite a distribuição de amostras de FFPE e dados anónimos ligados associados a partir do arquivo de Patologia para a investigação sem o consentimento, que foram recolhidos para fins de diagnóstico antes de setembro de 2006. A via de diagnóstico para essas amostras de tecido foi agora concluído e as amostras arquivadas são excedente para este processo. tecido adicional após 2006 foi recolhido e liberado para uso sob a aprovação ética 10 /S1402 /33, que é Tissue Research Banco aprovação ética realizada pelo SAHSC recursos biológicos, em nome do NHS Lothian. Esta aprovação aplica os princípios da “declaração de posição sobre arquivos de diagnóstico liberação do tecido para a pesquisa ‘declaração conjunta da Human Tissue Authority (HTA) e do Serviço de Ética Nacional de Pesquisa (NES), de Julho de 2009 para a utilização dessas amostras. Todos estadiamento patológico foi relatado usando a classificação TNM de 2002 [20]. Se causas de morte não estavam disponíveis em notas clínicas estes foram obtidas no Serviço de Registro Geral da Escócia.
Tissue Microarray (TMA) Construção
Estas amostras de tecido foram utilizados para construir uma TMA [21 ]. Um mínimo de três núcleos replicadas representativas, 0,6 mm de diâmetro, a partir do tumor primário de cada paciente, VTT e metástases foram tomadas após revisão e marcação da hematoxilina e eosina lâminas coradas e blocos por um patologista consultor. adequada dos tecidos não estava disponível a partir de todos os tumores primários e metástases. No total, 1980 núcleos foram tomadas e distribuiu mais de 12 slides a partir dos 177 pacientes que representam 163 tumores primários, 103 VTTs e 69 metástases. Isto incluiu 29 pacientes com apenas tumores primários; 79 com pareados VTTs primárias e; 24 emparelhadas com tumores primários e metástases, VTTs; 31 com tumores primários combinados e metástases e 14 pacientes com metástases incomparáveis somente.
Imunofluorescência
lâminas TMA foram de-encerado em xileno e depois re-hidratadas em diluir sequencialmente soluções de etanol. A recuperação de antígenos foi realizada por aquecimento das lâminas numa panela de pressão durante 5 minutos em Tris-EDTA pH9,0 ou citrato de sódio pH 6,0. A actividade da peroxidase endógena foi bloqueada por tratamento as lâminas em peróxido de hidrogénio a 3% durante 10 minutos e a ligação não específica por incubação reduzida em bloco de proteína livre de soro (Dako, X0909) durante 10 minutos. As lâminas foram incubadas com o anticorpo alvo primário, para a proteína de interesse, durante 1 hora à temperatura ambiente. Os anticorpos primários são detalhados na Tabela 1. Em seguida, as lâminas foram incubadas durante a noite a 4 ° C com os anticorpos apropriados para definir a máscara do tumor. Estes eram pan-caderina (sinalização celular, 4068, 1:100) quando se utiliza um anticorpo primário de coelho ou uma combinação de pan-caderina (Sigma-Aldrich, C1821, 1:750) e CK5 /6/8/18 (Novocastro, 6003168, 1:100) quando se utiliza um anticorpo primário do rato [11]. As lâminas foram então incubadas durante 1,5 horas com 555 de anticorpo conjugado com Alexa Fluor (Invitrogen A21422 e A21428, 1:25) e rábano anticorpo espinha dorsal de polímero de dextrano-decorado com peroxidase (EnVision, Dako). As lâminas foram depois incubadas durante 10 minutos com Cy5-Tyramide (HistoRx, AQUAntiplex tubo M, 01:50), a qual activada a peroxidase de rábano e permitiu a visualização do anticorpo primário. DAPI (4 ‘, 6-diamidino-2-fenilindole, Invitrogen, P36931) contracoloração foi usada para visualizar os núcleos. Um núcleo representativo é visto na Figura 1.
núcleo TMA representativas mostrando coloração citoplasmática verde com uma combinação de citoqueratina e pancadherin (A), de coloração nuclear com DAPI azul (B), coloração com vermelho do alvo (C, neste caso VEGFR1) e todos os três compartimentos combinados (D). avaliação quantitativa e localização do compartimento de expressão alvo é medido através do cálculo da soma de intensidade de pixel alvo dividida pela área do compartimento e normalizado para o tempo de exposição.
Automated Análise Quantitativa
imagens monocromáticas de cada núcleo TMA foram capturados em 20 × objetivo utilizando um Olympus AX-51 epifluorescência microscópio (Olympus, Pensilvânia, EUA). Se o epitélio composta inferior a 5% da área total do núcleo, o núcleo foi excluído da análise. imagens digitais de alta resolução foram analisadas pelo software AQUAnalysis (HistoRx, Conneticut, EUA), para determinar a expressão da proteína alvo global e nos compartimentos citoplásmicos e nucleares através do cálculo da soma de intensidade de pixel alvo dividido pela área do compartimento e normalizada para o tempo de exposição .
Análise estatística
pontuações AQUA compartimento apropriado foram normalizados pela média de centragem para cada TMA para permitir comparações inter-TMA e, em seguida, a pontuação média do tecido retirado de núcleos em duplicado. X-azulejo era usado para determinar o ponto de corte para a definição de expressão alta e baixa proteína no tumor primário, para a análise de Kaplan Meier [22]. sobrevida específica do câncer (CSS) foi determinada por análise de Kaplan-Meier e as comparações feitas pelo teste de log-rank. significado preditivo da expressão da proteína e fatores clínico-patológico para CSS foi determinada usando análise de regressão univariada e multivariada Cox. Correlação da expressão da proteína com fatores patológicos padrão foi avaliada com análise de correlação de Pearson. A expressão diferencial de proteínas entre o tumor primário, trombo tumoral veia renal e tecido metastático foi avaliada usando o teste de Mann-Whitney. A análise estatística foi realizada utilizando PATAS versão 18.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA), p 0,05 foi levado para indicar significância
Resultados
As características clínico-patológicas associadas ao. primário RCC dos pacientes são mostradas na Tabela 2. a idade mediana dos pacientes era de 64 anos e do sexo masculino para o rácio do sexo feminino foi 1.5:1. Não houve diferença significativa na lateralidade de tumores e o tamanho médio do tumor foi de 8,7 cm (intervalo: 1,5-16 cm). A maioria dos tumores (n = 138; 88%) eram celular histologicamente clara, enquanto 14 (9,8%) foram papilar e os restantes eram outros subtipos mais raros. A maioria dos casos foram patológica estágio T3b (n = 107, 73,4%). 29 (15,8%) casos foram patologicamente nódulo positivo no momento da nefrectomia e 13 (7,1%) pacientes tinham confirmado metástases no momento do diagnóstico inicial.
Ki67 e p53 não foi identificado acima dos níveis de fundo em 35,8% (n = 59) e 1,2% (n = 2) de CCRs primário, respectivamente. Caso contrário, a expressão da proteína de outros marcadores foi identificado em todos os tumores. A avaliação da relação entre a expressão da proteína no tumor primário e parâmetros patológicos padrão revelou aumento da expressão de Snail correlacionada com a fase avançada patológico do tumor (p = 0,001) e aumento do diâmetro máximo do tumor (p = 0,048). VEGFR1 alta e VEGFD foram associados com o subtipo de células não-claro (p = 0,017 e p = 0,018, respectivamente).
Por outro lado, a alta VEGFR1 na máscara completa do tumor, mas não no compartimento citoplasmático localizada, foi correlacionada com doença positiva nó (p = 0,005). Não houve outras correlações significativas entre a expressão da proteína avaliada e as variáveis clínico-patológicas padrão.
Avaliação da expressão da proteína diferencial entre o tumor primário, VTT e as metástases não revelou nenhuma diferença significativa entre o tumor primário e VTT, mas aumentou significativamente expressão nas metástases em comparação com o primário e VTT para Ki67, p53, VEGFR1, caracol e espaçador (Figuras 2, 3, 4, 5, 6). Dados de sobrevivência precisas estava disponível para 132 pacientes. O tempo médio de acompanhamento foi de 58 meses. subgrupo histológico não influenciou significativamente CSS na análise de Kaplan Meier; no entanto, o estágio do tumor patológico (fase pT), Fuhrman grau e doença positiva nó no momento do diagnóstico fez prever CSS (figuras 7, 8, 9, 10). Análise de sobrevivência dos marcadores proteomic revelou alta VEGFR1 e VEGFD para ser associado com significativamente menor CSS (figuras 11 12). Não houve diferença significativa no CSS com Ki67, p53, Caracol e nível de expressão lesma. A mediana, previu 5 e 10 anos de sobrevivência para as variáveis patológicas e marcadores proteomic são detalhados nas Tabelas 3 e 4, respectivamente.
aumento significativo da expressão de Ki67 nuclear mostrado nas metástases comparada com a VTT e tumor primário, mas nenhuma diferença na expressão entre o tumor primário e a VTT.
aumento significativo da expressão de p53 nuclear mostrado nas metástases comparada com a VTT e tumor primário, mas não houve diferença na expressão entre o tumor primário e a VTT.
aumento significativo da expressão de VEGFR1 citoplasmática mostrado nas metástases comparada com a VTT e tumor primário, mas não houve diferença na expressão entre o tumor primário e a VTT.
aumento significativo da expressão de Snail nuclear mostrado nas metástases comparada com a VTT e tumor primário, mas não houve diferença na expressão entre o tumor primário e a VTT.
aumento significativo da expressão da pastilha nuclear mostrado nas metástases comparada com a VTT e tumor primário, mas não houve diferença na expressão entre o tumor primário eo VTT.
não houve diferença significativa na CSS é mostrada entre células claras (n = 111) e papilar RCC (n = 11) tumores.
CSS foi estatisticamente diferente com base no estágio do tumor patológico na análise de Kaplan Meier. 122 pacientes foram incluídos nesta análise (7 pT estágio 1, 13 pT estágio 2, 99 pT estágio 3 e 3 pT estágio 4), outros foram excluídos devido acompanhamento ou patologia dados incompletos. Isso mostra CSS mais pobre com a piora estágio do tumor patológico no momento do diagnóstico.
Isso mostra CSS estatisticamente diferente com base no grau de Fuhrman. 89 pacientes foram incluídos nesta análise (1 grau 1, grau 2 35, 38 graus 3 e 15 grau 4), outros foram excluídos devido acompanhamento ou patologia dados incompletos. Há CSS mais pobres para a classe 1, com CSS indistinguíveis de grau 3 e 4, e CSS mais favorável para grau 2.
status do nó positiva ao diagnóstico tem significativamente pior do que a doença CSS negativo nó.
expressão alta VEGFR1 no tumor primário está relacionada com significativamente pior do que o CSS baixa expressão VEGFR1.
expressão alta VEGFD no tumor primário está relacionada com significativamente pior do que o CSS baixo VEGFD expressão.
Essas variáveis que foram significativas na análise de Kaplan Meier foram avaliadas com análise de regressão multivariada de Cox, e as variáveis clínicas de status de grau e nó Fuhrman permaneceu significativa, enquanto na fase pT , VEGFR1 e VEGFD não eram de forma independente de prognóstico (Tabela 5).
Discussão
Este novo estudo demonstrou aumento significativo da expressão de Ki67, p53, VEGFR1, lesma e caracol em uma metástase , em comparação com o tumor primário e o trombo tumoral venosa. Além disso, a expressão do tumor primário e de VEGFR1 VEGFD pode ser utilizado para prever as diferenças significativas na sobrevivência específica do cancro em carcinoma de células renais avançado. Enquanto VEGFR1 e VEGFD foram significativas na análise univariada, não pôde ser mostrado significado prognóstico independente superior de estes marcadores mais parâmetros padrão clínico-patológicas em análise multivariada.
Para o nosso conhecimento, esta é a maior série relatada de primário e amostras de RCC metastático utilizado para construir um TMA para análise comparativa de proteína, e é o único estudo para avaliar o VTT a um nível molecular. Além disso, a utilização de Aqua imunofluorescência permite a quantificação de proteína mais exacta e objectiva, uma melhoria sobre outros trabalhos publicados estudar a expressão da proteína usando a técnica de TMA. No entanto, reconhecemos este tecido único e difícil de adquirir definir ainda representa uma pequena coorte. Isto pode dar origem a erros de tipo II como resultado de um estudo de fraca potência. Em particular, isto pode ter impedido diferenças significativas entre a expressão do tumor primário e VTT proteína a ser detectada e o potencial de subestimar o significado prognóstico destes marcadores e indicadores de prognóstico patológicos conhecidos, especialmente na análise multivariada. Os marcadores escolhidos foram baseadas no significado prognóstico previamente documentado, implicando a sua importância na patogénese CCR, no entanto, seria importante para o futuro, para realizar uma avaliação imparcial em larga escala de proteínas para avaliar a dimensão da diferença entre RCC primário e metastático. No entanto, as diferenças significativas na expressão de proteínas de marcadores chave entre o tumor primário e de metástases foi demonstrado pela primeira vez.
A diferença na expressão de Ki67 entre lesões primários e metastáticos foi estudado num número de cancros, incluindo mama , do cólon, do estroma gastrointestinal (GIST) e cancro da bexiga, com resultados contrastantes. Em mama e cancro colo-rectal, maior expressão de Ki67 em tumores primários comparada com nodais e metástases do fígado, respectivamente, foi mostrado [23], [24], [25], [26]. No entanto, em GIST e tumores da bexiga, assim como outros estudos de carcinoma da mama e colo-rectal, o inverso ou nenhuma diferença na expressão tem sido demonstrada [27], [28], [29], [30]. Os resultados do presente estudo demonstraram um aumento significativo na expressão de Ki67 em tecido RCC metastático em relação ao RCC primária e VTT, sugerindo-se regulação da proliferação, o que não tem sido relatado previamente. Outros, contudo, ter a expressão do p53 diferencial no CCR primário e metastático, [31], [32], [33]. Devido à semi-vida prolongado de p53 mutante em comparação com a p53 do tipo selvagem, mutante, em vez de tipo selvagem de p53 é detectada com imuno-histoquímica [33]. O nosso trabalho confirmou que o aumento da expressão da p53 mutante em RCC metastático mostrado anteriormente, implicando inactivação de p53 na progressão da doença.
Este estudo também demonstrou pela primeira vez, o aumento da expressão de VEGFR1 metastático em relação ao primário e tecido VTT RCC. VEGF é uma proteína de sinalização importante envolvido na angiogênese e linfangiogênese [34], os processos-chave no crescimento e disseminação do câncer; características de câncer [35]. A regulação para cima de VEGF através da indução da via de hipoxia com mutação do gene VHL é bem aceite na patogénese de ccRCC e levou ao êxito do desenvolvimento de terapias moleculares no tratamento de carcinoma de células renais. No entanto, o VEGF e o diferencial de expressão de VEGFR no CCR primário e metastático previamente não foi estudado, apesar das metástases RCC ser o alvo de inibidores de VEGF. Aumento de VEGF (VEGFR em vez de) os níveis de ARNm foram vistos nas metástases do fígado em comparação com tumores colorectais primários [36], enquanto que não houve diferença na expressão da proteína do VEGF ou VEGFR1 no melanoma e metástases emparelhados foi relatada [37]. Nossos resultados confirmaram a expressão aumentada de VEGFR1 no RCC metastático, implicando a regulação da angiogênese e linfangiogênese, e apoiar o uso de terapias de VEGF-alvo em doença metastática.
Ativação invasão e metástase é outra marca registrada de câncer [35] e epitelial para mesenquimal (EMT) é pensado para ser um processo importante no presente, em que um processo de desenvolvimento fisiológico é invertida. Sarcomatoid desdiferenciação é visto no CCR [38], [39], e este pode ser um exemplo de EMT fenotípica observada pelo patologista. Mostrámos significativamente maior expressão de proteínas tanto lesma e caracol em carcinoma de células renais metastático, em comparação com os tumores primários, bem como uma correlação entre aumento da expressão de Snail e o aumento do tamanho do tumor e avançando fase pT. Esta apoia o desenvolvimento de um fenótipo de EMT em um nível molecular na RCC patogênese.
Este trabalho até agora indicou proteínas-chave pode ser importante na patogênese da RCC e mostrado diferenças significativas na expressão da proteína em primária e VTT carcinoma de células renais em comparação com os depósitos metastáticos. Nós a hipótese de que o VTT seria um processo intermediário entre o primário e as metástases, mas foram incapazes de demonstrar isso com as proteínas avaliadas. Isto pode ser como um resultado de um certo número de factores. Em primeiro lugar, tal como anteriormente indicado esta continua a ser uma amostra relativamente pequena, e como tal podem ser de fraca potência. É possível que as proteínas estudadas não são essenciais para a extensão do primário invasivo numa VTT. No entanto, seria de esperar que intuitivamente marcadores de proliferação, angiogénese e EMT estar envolvidos em tal processo. Finalmente, temos de aceitar que um tumor que migra, se adapta e cresce em um novo ambiente é diferente de um tumor que invade localmente, e que o VTT pode ser mais representativa de uma extensão do tumor primário.
Como bem como a expressão da proteína diferencial, que teve como objetivo avaliar o significado prognóstico destes marcadores em RCC avançado. Encontramos fatores patológicos padrão continuam a ser as variáveis mais significativas na previsão de sobrevida específica por câncer. doença nodal a apresentação tenha sido mostrado para ser prognóstico em ambas as doenças de outra forma localizada e doença metastática independente de outros factores de prognóstico [40], [41], [42]. Nós confirmamos a importância deste achado patológico no estudo atual, onde o envolvimento nodal positivo tem a maior taxa de risco (2.7) na análise multivariada para CSS.
grau de Fuhrman também foi encontrado para ser significativo em uni e multivariada análise. grau de Fuhrman é baseado na avaliação do tamanho nuclear, pleomorfismo nuclear, e proeminência nucleolar [43] e ao mesmo tempo seu significado prognóstico em papilar e chromophobe RCC é debatido [44], foi claramente demonstrado que é importante na ccRCC [43], [ ,,,0],45], [46], [47]. Em nossa análise, Fuhrman grau 1 teve a pior prognóstico e este é provavelmente devido ao pequeno tamanho da amostra, enquanto a doença de grau 2 tinha prolongou significativamente CSS comparação com grau 3 e 4, que eram indistinguíveis. O CSS comparável de paciente com Fuhrman grau 3 e 4 da doença pode ser o resultado de outros fatores de confusão; no entanto, não existe actualmente preocupação em relação intra e inter-patologista variabilidade comunicação de grau de Fuhrman [44] o que levou a Sociedade Internacional de Urologia Patologia (ISUP) recomendando a substituição Fuhrman classificação com sistema de ISUP nucleolar de classificação, com base exclusivamente no tamanho nucleolar conforme descrito no Fuhrman, mas sem os problemas de confusão e confusas de tamanho e forma nuclear.
estágio patológico do tumor foi significativa na análise de Kaplan Meier, mas não análise multivariada. O pequeno tamanho da amostra de etapas que não pT3, ea natureza de alto risco da coorte, selecionados por causa do envolvimento da veia renal e /ou metástases simultâneas ou subsequentes, têm impedido a identificação do papel prognóstico do estágio do tumor claramente identificada na doença localizada [4 ], [37], [45], [46]. O pequeno tamanho da amostra da RCC de células não-clara também pode ter impedido qualquer diferença significativa na CSS a ser identificados com base na subtipo histológico (provavelmente erro tipo II), embora tenha havido uma clara tendência de baixa CSS com ccRCC.
o significado prognóstico da expressão Ki67 e p53 tem sido amplamente estudado em RCC. O marcador de proliferação, Ki67, tem sido mostrado para ser associado com maior grau nuclear e pior prognóstico em ccRCC localizada [12] e mRCC [48]. No entanto, outros estudos em RCC localizada falharam em demonstrar o significado prognóstico independente do Ki67, em grande parte por causa de sua estreita associação com o grau do tumor eo estágio [49], [50]. Nosso estudo da localmente avançado e metastático RCC, embora mostrando uma tendência de pior prognóstico na maior expressão Ki67, não conseguiu demonstrar qualquer diferença significativa no CSS com base na expressão Ki67. Da mesma forma, o significado prognóstico da p53 em RCC também é debatido [32], [50], [51], [52], [53], [54], [55], [56] e, em nossa coorte nenhuma diferença em CSS foi observada entre alta e baixa expressão. estudos de expressão de genes em RCC têm mostrado uma assinatura EMT para ser associado com prognóstico pobre [57], [58]. Apesar desses achados, a avaliação quantitativa de caracol e lesma proteínas-chave no EMT, não mostraram qualquer diferença significativa na CSS.
expressão de VEGF também tem sido investigado em RCC por outros e encontrado para ser prognóstico. Em particular, VEGFR1 foi encontrado para ser associado com pior evolução no RCC localizada [12], e nosso estudo confirmou que este na análise univariada na doença avançada. Outros sugeriram baixo VEGFD a ser associado com pior prognóstico [1], [12], no entanto, temos visto o inverso na doença avançada com pior prognóstico associado com maior VEGFD no tumor primário e propomos este é susceptível de ser o resultado de a regulação da linfangiogênese. No entanto, a perda de significado destes marcadores na análise multivariada pode ser como um resultado da própria papel do VEGF na linfangiogénese discutido.