Abstract
A uroquinase receptor do ativador do plasminogênio (uPAR) tem sido proposto como um potencial factor de prognóstico para câncer colorretal (CRC) a sobrevida do paciente. No entanto, a expressão CRC uPAR permanece controversa, especialmente em relação tipos de células, onde uPAR é sobre-expressos (por exemplo, o epitélio (uPAR
E) ou células-associados do estroma (uPAR
S)) e relevância prognósticos associados. Neste estudo, os dois anticorpos específicos do epitopo anti-uPAR monoclonais (MAbs) poderiam discriminar expressão do uPAR
E de uPAR
S e foram usados para examinar essa associação com a sobrevivência das fases B e câncer retal C (RC) pacientes. Usando imunohistoquímica, MAbs # 3937 e R4 foram usadas para discriminar uPAR
E de uPAR
S, respectivamente, nas regiões frontal central e invasivos de 170 fase B e 179 espécimes fase C RC. As análises de regressão de Kaplan-Meier e Cox foram usadas para determinar a associação com a sobrevivência. uPAR expressão ocorreu em ambos os compartimentos epiteliais e estromais com expressão diferencial observada em muitos casos, indicando uPAR
E e uPAR
S ter diferentes funções celulares. Nas regiões centrais e invasivos frontais, uPAR
E foi negativamente associado com a sobrevivência fase B geral (HR = 1,9; p = 0,014 e HR = 1,5; p = 0,031, respectivamente) que reproduzem os resultados de estudos anteriores. uPAR
S na frente invasiva foi associada com maior sobrevida fase C (HR = 0,6; p = 0,007), refletindo estudos que demonstram que a acumulação peritumoural macrófago está associada com maior sobrevida. Este estudo demonstra que diferentes epitopos uPAR deve ser considerada como sendo expressos em diferentes tipos de células durante a progressão do tumor e em diferentes fases de RC. Entender como uPAR
E e uPAR
S expressão afeta a sobrevivência está previsto para ser um marcador de prognóstico clínico útil de estágios B e C RC
Citation:. Ahn SB, Chan C, Dent DE, Mohamedali Um, Kwun SY, Clarke C, et ai. (2015) epitelial e estromal celular uroquinase do ativador do plasminogênio Receptor Expressão diferencialmente se correlaciona com a sobrevida no câncer retal Fases B e C Os doentes. PLoS ONE 10 (2): e0117786. doi: 10.1371 /journal.pone.0117786
Editor do Academic: Anthony Federação das Índias Ocidentais Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG
Recebido: 15 Setembro, 2014; Aceite: 31 de dezembro de 2014; Publicação: 18 de fevereiro de 2015
Direitos de autor: © 2015 Ahn et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel
financiamento: Este estudo foi apoiado com financiamento da concessão projeto de pesquisa a partir do NHMRC (# 1010303), Câncer Conselho NSW (RG10-04 RG08-16), e uma subvenção Universidade Macquarie MQSN. ; e apoiada através do Australian School of Medicine Avançado (ASAM), da Universidade Macquarie, Concord Repatriação Hospital Geral de Diagnóstico de Patologia, MQ BioFocus e Centros de Investigação Frontiers biomoleculares. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
Conflito de interesses:. Este estudo recebeu financiamento do Cancer Council NSW. Isto não altera a adesão dos autores para PLOS ONE políticas em dados e materiais de compartilhamento.
Introdução
Dados recentes da Organização Mundial de Saúde indica câncer colorretal (CCR) é a terceira neoplasia maligna mais comum (~ 1,36 milhões de casos em todo o mundo em 2012), com uma mortalidade de mais de 50% [1]. A principal causa de morte relacionada com cancro é metástase. estadiamento clínico-patológico de CRC demonstra uma queda dramática na sobrevivência entre as fases B e C, correspondendo a ausência contra presença de metástases em linfonodos [2]. Apesar da importância clínica, os mecanismos moleculares subjacentes a metástase não são ainda completamente caracterizados e desenvolvimento de novas estratégias direccionadas para contrariar a metástase permanecem ainda desconhecidos.
O plasminogénio activação proteolítica cascata é um de um número de processos biológicos fundamentais implicado no cancro invasão celular e metástase. Estes incluem a degradação da matriz extracelular (ECM), permitindo descolamento de células tumorais a partir do local de origem e a penetração da membrana basal, a activação do factor de crescimento e de sinalização intracelular [3]. A proteína de membrana ancoradas-glycosylphosphatidylinositol chamado receptor ativador do plasminogênio uroquinase (uPAR) é central para esta cascata. uPAR é uma proteína tri-domínio (ou seja, D1, 2 e 3), que forma um receptor de espessura luva de dedos semelhantes a proporcionar um bolso central para a ligação do seu ligando cognato de protease, activador de plasminogénio de urocinase (uPA) [4]. Estudos iniciais centrada na regulação da proteólise (isto é, plasminogênio e ativação MMP), embora uPAR. Mais recentemente, demonstrou-se que até 42 proteínas (9 extracelular e 33 parceiros interactuantes laterais) supostamente interagir com uPAR [5]. A forma de uPAR envolve uma grande superfície externa oposta que é sugerido para facilitar a interacção /s, com muitas destas proteínas acessórias [4]. Esta grande repertório de interacções sugere que uPAR evoluiu um complexo mecanismo de regulação para controlar a proteólise, a migração celular, a proliferação, a sinalização celular e outros aspectos do comportamento das células. Na verdade, na última década, a evidência mostrou extensa uPAR está implicada na adesão celular, proliferação, migração, remodelação de tecidos e na regulação das vias de sinalização (por exemplo, MAP quinase, as vias Ras) [3]. Estas são características importantes não só de vias de desenvolvimento onipresentes, mas também a metástase do câncer
uPAR expressão em vários tipos de câncer tem sido extensivamente estudada ao longo das últimas duas décadas, como refletido por . 800 uPAR publicações no domínio da oncologia [6 ]. No entanto, a expressão de uPAR no microambiente do cancro permanece controverso, em particular no que diz respeito ao tipo de célula /s em que uPAR é sobre-expresso (por exemplo, expressão de uPAR em epitélios (uPAR
E) ou células associado de estroma (uPAR
S)) [6,7]. Associação entre uPAR e câncer foi reconhecido pela primeira vez em 1991 [8]. Desde então, vários estudos avaliaram os níveis de uPAR
E e uPAR
S em vários tipos de câncer usando uma ampla gama de anticorpos [6,7]. No entanto, tem havido resultados conflitantes. Especificamente no CRC, Pyke
et ai., Descobriram que uPAR foi fortemente expresso em macrófagos infiltrantes tumorais, neutrófilos e eosinófilos (usando imuno-histoquímica (IHC)), mas apenas fracamente a moderadamente expresso nas células tumorais neoplásicas (utilizando anticorpos monoclonais anticorpos (mAbs) contra os clones humanos uPAR R2 e R4) [9]. Mais tarde, outro estudo relatou que a expressão uPAR ocorreu principalmente no epitélio do tumor em vez de estroma (usando o anti-uPAR mAb # 3937) [10]. Apesar desta aparente contradição, ambos os estudos concordou uPAR foi altamente expressa no microambiente tumoral e foi concentrada a frente invasiva do tumor. Outros estudos sobre uPAR
E e uPAR
S no CRC [6,7,11-17] geralmente aceite que a alta uPAR
E é independente e negativamente relacionada à sobrevida do paciente [11,12,15]. SeeToo
et al
. [12] sugeriu que uPAR (expressa principalmente no epitélio) é um preditor independente de metástases hepáticas e de sobrevida global do paciente pós CRC ressecção. Em acordo, um estudo mais recente mostrou significativamente elevados uPAR em tumores CRC na infiltração margens do tumor, que foi associado com pior sobrevida [15]. No entanto, os dados sobre uPAR
S na CRC são contraditórios em termos de associação sobrevivência. Tem sido sugerido que os macrófagos, os quais são uma das principais fontes de uPAR em estroma, desempenham um papel na prevenção de metástases haematog�ea [16]. Além disso, foi observada uma associação inversa entre metástase hepática CRC e uPAR tumor primário expressão do estroma [18]. Embora não correlacionar diretamente uPAR
S com a sobrevida do paciente, é bem conhecido que os pacientes de CRC com metástase hepática têm a sobrevivência significativamente menor do que aqueles sem. Em contraste, um relatório recente sugeriu que tanto uPAR
E e uPAR
S foram negativamente associado com a sobrevida do paciente global CRC, bem como com a sobrevida livre de doença (DFS) [17]. No entanto, apenas uPAR
S foi independentemente associada com DFS na análise multivariada. Colectivamente, propomos que estas observações são incompatíveis, devido à utilização de Mabs específicos com diferente especificidade de epítopo de uPAR uPAR quando está envolvida em interacções de proteína específicas de células. Na verdade, a maioria uPAR
E ou uPAR
Estudos S foram realizadas com um único MAb e, portanto, só irá detectar específica uPAR domínio /s. Estudos anteriores demonstraram que uPAR pode estar presente em qualquer um de comprimento total, formas solúveis do domínio e /ou clivados e estes podem ser diferencialmente expressar epítopos identificados por MAbs específicos [19]. Além disso, alguns epítopos podem ser mascarado quando uPAR interage com proteínas acessórias. Portanto, para examinar precisamente a relevância prognóstica de uPAR em câncer, MAbs detecção de epítopos principais diferentes expressas em determinados tipos de células deve ser aplicado a amostras de tecidos patológicos idênticos.
Neste estudo, tendo em conta as questões relacionadas com a expressão uPAR em tipos de células diferentes, medimos especificamente uPAR
e e uPAR
S através de uma coorte (n = 349) dos não-metastático (estágio B) e cancro rectal espécimes nodal-metastático (estágio C) (RC). Dois disponível comercialmente específicos do epitopo anti-uPAR MAbs # 3937 (para uPAR
E) e R4 (para uPAR
S) foram utilizados para sondar secções seriadas de micromatrizes de tecidos (TMA) RC. Dentro de cada amostra, uPAR
E e uPAR
S foram medidos na região central, a frente tumor invasivo e mucosa não-neoplásica adjacente. O objetivo foi avaliar a associação entre as medidas uPAR e características patológicas do tumor e sobrevida global dos pacientes.
Materiais e Métodos
coorte do paciente e do tumor caracterização
Os dados foram atraídos a partir de um registro prospectivo de ressecções câncer colorretal consecutivos que foi iniciado em 1971 em Concord Hospital, um hospital de referência terciária pública em Sydney, Austrália e contém, operativo, patologia, terapia adjuvante clínica detalhada e informações de acompanhamento [20,21]. Todas as ressecções foram realizadas por cirurgiões colorretais especializados utilizando uma técnica padronizada [22]. Ressecções para câncer retal entre 1988 e 2001 inclusive foram selecionados para análise e todos os pacientes não-falecido foram acompanhados por um período mínimo de cinco anos. Somente adenocarcinomas foram incluídos no registro. Onde vários tumores estavam presentes, apenas a lesão mais avançado estágio foi incluído. Os pacientes foram excluídos se tivessem câncer colorretal anterior, doença inflamatória do intestino ou polipose adenomatosa coli. O reto foi definida como incluindo a junção retossigmoide mas excluindo o canal anal. Mais de 90% dos espécimes foram examinados de acordo com um protocolo padrão [2] por um único patologista (R.C. Newland), que também analisou o restante. O tamanho do tumor foi medido como sendo a maior dimensão de superfície e blocos foram utilizados para demonstrar a penetração máxima do tumor directa da parede intestinal. blocos adicionais foram tomadas para demonstrar a relação entre o tumor e qualquer estrutura de tecido aderente ou, bem como linhas de ressecção e a superfície serosa livre. invasão venosa, avaliada pela hematoxilina e eosina, foi registrado como envolvimento de veias grossas ou de paredes finas, seja dentro ou fora da parede do intestino. Quando a dúvida existia quanto ao facto de a estrutura envolvida era uma veia, um resultado negativo foi registrado. Um nó de linfa apical foi definido como o nó de mais proximal encontrado dentro de 1 cm, a ligadura navio no ápice do pedículo vascular. Os tumores foram histologicamente classificados como malignidade baixa, média-, ou de alto grau. Grau foi avaliado tendo em conta o grau de diferenciação e anaplasia, a natureza da margem do tumor (ou empurrando infiltrante) e a presença e a proeminência da invasão vascular. Em tumores avançados calculou-se a proporção de gânglios linfáticos envolvido como uma percentagem do número total de nós colhidas. Antes de 2002, mais de 90% dos espécimes foram relatados em ou revisado por um único patologista (R.C. Newland). Todos os recursos de patologia analisados foram procurados em cada amostra e sua presença ou ausência registrada explicitamente. Não houve dados perdidos em qualquer variável. Os tumores foram classificados de acordo com o sistema australiano Staging Clinico-Patológico (SACP) para CRC [2]. Os quatro principais fases de este sistema (A, B, C, D) são directamente equivalentes às fases principais (I, II, III, IV) do sistema pTNM [23], mas, mais importante, ACPS difere em que todas as lesões com tumor macro- ou microscópica em qualquer margem de ressecção são codificados como fase de registro D. o CRC em Concord Hospital é realizado com a aprovação do Comitê de South Western Area Sydney Saúde Ética (CH62 /6/2011-136), com o consentimento por escrito de acordo com as exigências da Tissue Act NSW Humano 1983 e da Declaração de NHMRC Nacional de Conduta Ética em Pesquisa em Seres Humanos de 2007. o estudo também foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Macquarie Humano (# 5201100858).
construção TMA
parafina fixado em formalina-embedded TMA foram construídos utilizando um Advanced Tissue Arrayer ATA-100 (Chemicon, Temecula, CA, EUA). A partir de blocos de parafina tecido de câncer retal originais, núcleos (1,5 mm) foram retiradas de áreas morfologicamente representativos selecionados da região central do tumor (evitando superfícies luminais), a frente invasiva do tumor e mucosa histologicamente normal (1-2 cm a partir da margem do tumor ) e vestiu em blocos de parafina de destinatários recém-feitos.
IHC
seções TMA foram preparadas e processadas simultaneamente com os mesmos lotes de anticorpos e reagentes, e coloração foi realizada em um único laboratório de patologia clínica em uma única execução de todas as amostras. Dois específicas do epítopo murino anti-humano uPAR MAbs, # 3937 (American Diagnostica Inc. (ADI), Greenwich, CT, EUA) e R4 (Dako, Glostrup, Dinamarca), foram usadas para a IHQ. A coloração foi realizada com um sistema de detecção de IHC por base um polímero num Bond-Max Autostainer (Leica Biosystems, Melbourne, Austrália), como descrito [24], com algumas modificações. Para # 3937 coloração MAb, sem recuperação antigênica foi realizada e 3.33μg /ml de # 3937 foi aplicada a seções TMA. Para a coloração R4 MAb, de proteinase K (Leica Microsystems) foi usada para a recuperação de antigénio, a concentração de R4 sendo 10 ug /ml. As lâminas de controlo negativo foram incubados com o isotipo de IgG1 (R D Systems, Minneapolis, EUA) utilizando os mesmos métodos de recuperação de antigénio e concentrações utilizadas para ambos os anticorpos primários
IHC avaliação
intensidades de coloração para. tanto MAbs foram avaliadas independentemente por dois avaliadores (SBA, CC), que foram cegados ao estado clinico-patológico dos pacientes. Pontuação foi realizada separadamente para a região central, dianteira tumor invasivo e adjacente mucosa não-neoplásica: 0 = Nenhum, 1 = fraco 2 = moderado e 3 = forte coloração. A taxa de concordância entre os dois avaliadores em todo o grupo de amostras foi de mais de 95% e qualquer desacordo /s foram resolvidas por re-exame conjunto dos dados, discussão e re-avaliação das pontuações. Se a intensidade da coloração foi heterogênea em qualquer núcleo de tecido único, a intensidade de coloração predominante foi gravado.
variável e resultados de acompanhamento do paciente
tempo de sobrevivência global foi medida a partir da data da ressecção cirúrgica a data de morte, com tempos de censura para os pacientes perdidos para follow-up ou que permaneceram vivos no estudo atento. Os pacientes foram acompanhados anualmente até a morte ou até 31 de dezembro de 2011. O protocolo de acompanhamento tem sido descrito em outros lugares [22].
Análise Estatística
O teste exato de qui-quadrado de teste χ² ou Fisher foram utilizados para examinar significância estatística das diferenças de proporções. O Wilcoxon pares combinados assinado teste fileiras foi utilizado para comparar as distribuições de uPAR
E e uPAR
S de frequência entre a região central e dianteira tumor invasivo. Comparações de tempo de sobrevivência global entre os estratos de expressão e co-variáveis uPAR foram feitas com o método de Kaplan-Meier e teste log-rank e também de regressão de Cox eo teste de Wald. co-variáveis contínuas e multi-categoria foram dicotomizados em pontos de corte convencionais ou não apropriadas. Como o estágio clinico-patológico é o mais forte preditor do prognóstico, associações com sobrevida global foram examinados para as fases B e C separadamente, bem como para as fases combinadas, a fim de identificar quaisquer diferenças nos efeitos de uPAR
E e uPAR
S entre as fases. O nível de significância estatística bicaudal foi p≤0.05 com intervalos de confiança para o nível de 95%. As análises foram realizadas com SPSS versão 20 (IBM Australia Limited)
Resultados
Entre Janeiro de 1988 e Dezembro de 2001 não eram 782 ressecções câncer retal.; 206 para a fase B e 251 para o tumor fase C. espécimes de ressecção para 77 (31 a partir da fase B e 46 da fase C) não deu material de arquivo suficientes ou adequados para a construção TMA. A 175 fase restantes B e 205 espécimes fase C produziu resultados informativo IHC que variou por etapa, local e para uPAR
E, uPAR
expressão S e uPAR
PT (peritumoural uPAR). Depois de excluir aqueles sem IHC informativo, restavam 170 pacientes com estágio B e 179 com tumores estágio C para os quais os dados estavam disponíveis em pelo menos um dos central ou frontal uPAR
E, uPAR
S ou uPAR
PT. As características clínicas e patologia destes pacientes são mostradas na Tabela 1. Para as fases B e C separadamente e para as avaliações uPAR separadamente foram comparados pacientes que tiveram um resultado TMA /IHC com os que não têm um resultado no que diz respeito às variáveis na Tabela 1 e foram encontrados apenas três diferenças estatisticamente significativas (dados não mostrados), a partir do qual concluímos que os pacientes com resultado TMA /IHC quais analisamos para este estudo não diferir materialmente dos pacientes excluídos que não tinham resultado TMA /IHC. Em quadros seguintes o número de pacientes analisados variam de acordo com o número de pessoas que tiveram de ser excluídas por causa da falta resultados IHC.
Detecção e comparação de uPAR
E e uPAR
S em RC
o principal objetivo do presente estudo foi correlacionar uPAR
e e uPAR
S com a sobrevida dos pacientes em estágios B e C RC. Para alcançar este objectivo, inicialmente determinou a localização e expressão níveis de uPAR
E e uPAR
S em tecidos RC usando dois específicos do epitopo anti-uPAR MAbs # 3937 e R4. Estes MAbs foram escolhidos desde # 3937 e # 3936 (ambos de ADI) foram os mais comuns MAbs disponíveis comercialmente usados para uPAR
Detecção E, e R4 R2 (de Dako e /ou colaboradores no Finsen Laboratory) foram mais comumente usado para diferenciar uPAR
S [6,7,9,10]. MAb # 3936 também foi testado para detectar uPAR
E em nosso estudo: no entanto, não foram capazes de otimizar um método de recuperação antigênica confiável para a detecção consistente de uPAR
E usando este MAb. Especificamente Acm # 3936 deu elevada coloração de fundo ou sem coloração, dependendo dos métodos de recuperação de antigénio utilizado e, mais importante ainda, um controlo de isotipo (IgG2a) também fracamente coradas do RC TMA (dados não mostrados). MAb de controlo de isotipo para # 3937 e R4 (isto é, IgG 1) foram também testados com métodos de recuperação de antigénio relevante e não foi observada nenhuma ligação não específica (dados não mostrados). R2 não foi utilizado neste estudo.
IHC demonstraram que MAb # 3937 coradas principalmente os epitélios RC e coradas algumas células fracamente associada ao estroma. Por outro lado, R4, foi confinada principalmente às células do estroma associado a RC com coloração epitelial muito fraca (Fig. 1). É importante ressaltar que em muitos casos padrões de coloração diferencial de # 3937 e R4 foram observadas utilizando cortes seriados da mesma TMA, indicando que uPAR
E e uPAR
S foram diferencialmente expressos. Por exemplo, em alguns casos, uPAR foi sobre-expresso em ambos os epitélios e estroma (Fig 1a . 1b), e em outros casos uPAR foi fracamente expresso no epitélio mas fortemente expressa no estroma (figura 1C . 1d). O oposto também foi observada (ou seja, alta uPAR
E com fraca uPAR
S; A Fig. 1e 1F). Para comparar a distribuição entre uPAR
E e uPAR
S, os níveis de expressão foram avaliados com base em intensidades de coloração (Fig 2a . 2b), tanto para a frente tumor central e invasivo. No tumor central, 33% (89/268) núcleos de tecido tinha aproximadamente igual expressão do uPAR
E e uPAR
S, 48% (128/268) apresentaram maior expressão do uPAR
E e 19% (51/268) apresentaram maior expressão do uPAR
S. proporções comparáveis foram observadas na frente invasiva do tumor, onde 31% (106/338) tinha semelhante uPAR
E e uPAR
S expressão, 41% (137/338) tiveram maior uPAR
E e 28% ( 95/338) teve maior uPAR
S
Imagens em linhas (isto é, (a), . (b) ou (c) (d) ou (e) (f) ) são os mesmos núcleos de tecido de cortes seriados do tissue microarray. (A) (B) representam forte expressão de ambos uPAR
E e uPAR
S. (acampamento; (D) exemplificam expressão parcial de uPAR
E e forte uPAR
S, respectivamente. Por outro lado, (e), (F) mostram forte uPAR
E e parcial uPAR
S, respectivamente
acentuação peritumoral de uPAR (ie, uPAR
PT;. Expressão uPAR em células associadas ao estroma e concentrada em torno do epitélio do tumor) representada em (C), coradas com R4.
uPAR em tecidos RC foi altamente expressa em frente do tumor invasivo em comparação com a região central de ambos os locais epiteliais e do estroma, consistente com outros tipos de cancro [6,7]. A Wilcoxon pares combinados assinado fileiras teste mostrou que intensidade de coloração de ambos uPAR
E e uPAR
S foi significativamente maior na frente invasiva em comparação com a localização central do tumor (uPAR
E, n = 255, p 0,001; uPAR
S, n = 257, p . 0.001)
acompanhamento do paciente
no final do estudo (Dezembro de 2011), dos 363 pacientes que tiveram um informativa resultado TMA /IHC em uPAR
e ou uPAR
S, 243 foram mortos, 111 foram seguidos por entre 103 e 246 meses (mediana 171 meses) e 9 tinham sido perdidos para follow-up após uma média de 56 meses. Dos pacientes falecidos, 117 morreram de CRC, 117 de outras causas e 9 de causas desconhecidas.
uPAR
E e sobrevivência nos tumores estádio B
Região Central. Para estágios B e C combinada, mais forte uPAR
E coloração foi associado com pior sobrevida (p = 0,004). No entanto, quando estratificada por etapa, esta associação persistiu fortemente para a fase B (p = 0,002), mas desapareceu para a fase C (p = 0,589). Isto indica que a relevância prognóstica de uPAR
E foi confinado para encenar pacientes B. Portanto, somente a associação entre uPAR
E e sobrevivência de pacientes em estágio B foi analisada ainda mais. Como não houve diferença na sobrevida significativa entre os fracos e moderados categorias de coloração, estas foram combinadas para formar uma única categoria “intermediária”. A sobrevivência foi significativamente inferior no grupo intermediário que o grupo negativo (p = 0,035), mas não foi significativamente diferente entre os grupos intermediários e fortes (p = 0,206). Assim, estes foram combinados em um único positiva uPAR
grupo E. A análise de Kaplan Meier mostrou que os pacientes no uPAR
grupo positivo E experimentou sobrevida global significativamente mais pobres do que aqueles no grupo negativo uPAR
E (Fig 3a;. p = 0,006). A análise multivariada demonstrou que uPAR
E no tumor central era um indicador de prognóstico negativo independente de sobrevida global em pacientes estágio B RC após ajuste para outras variáveis de prognóstico (HR 1,9 [IC 95% 1,1-3,1] Wald-p 0,014) ( tabela 2)
em pacientes, fase b, (a):. sobrevida global foi significativamente reduzida com uPAR
e positivo na região central do tumor (n = 125) e (b): com uPAR forte
E na frente invasiva de tumores (n = 168). Em pacientes em estágio C, (C): forte uPAR
S na frente invasiva do tumor (n = 179) foi significativamente associada com a sobrevivência global mais longa. (D): uPAR positiva
PT na frente invasiva do tumor (n = 179) também foi significativamente associada à sobrevida global mais
frente invasiva.. Para estágios B e C combinada, não houve associação significativa entre uPAR
E e sobrevida global (p = 0,179). Pacientes com tumores estágio C não teve associação (p = 0,848), mas o
p
-valor aproximou significância na fase B (p = 0,087). No caso de o último resultado era uma função do pequeno número de amostras em algumas categorias, os dados foram reexaminados através da combinação de coloração negativa, fraca e moderada, como a sua associação com a sobrevida global não diferiram significativamente (p = 0,294). A análise de Kaplan Meier de uPAR
expressão E no grupo combinado mostrou que os pacientes com forte expressão de uPAR
E tiveram uma sobrevida significativamente mais pobres (p = 0,017) (Fig. 3b). Este persistiu após análise multivariada o ajuste para outras variáveis de prognóstico (HR [IC 95% 1,1-2,3] 1,5 Wald-p 0,031) (Tabela 2).
uPAR
S na frente invasiva e sobrevivência no estágio tumores C
Avaliação da expressão uPAR em células associadas ao estroma RC empregadas duas abordagens diferentes. Em primeiro lugar, em geral, a intensidade da coloração estromal foi pontuada como 0, 1, 2 e 3 (Fig. 2b), da mesma maneira como uPAR
E. Em segundo lugar, a presença de acentuação peritumoural (uPAR
PT; uPAR expressão no estroma, mas concentrada em torno das células tumorais) foi comparada com a sua ausência (Fig 2c.)
Região Central.. A sobrevida global não foi significativamente relacionado com uPAR
S quer para as fases B e C combinada (p = 0,492), fase B isoladamente (p = 0,071) ou estágio C isoladamente (p = 0,436). A presença ou ausência de uPAR
PT no tumor Central não mostrou associação significativa com a sobrevida do paciente.
frente invasiva. uPAR
S não foi significativamente associada à sobrevida global para os estágios combinados B e C (p = 0,226) ou estágio B isoladamente (p = 0,641). No entanto, dentro estágio C, houve uma tendência geral para o aumento da sobrevivência como uPAR
S expressão progrediu de negativo para forte (p = 0,015). Não houve significância sobrevida entre negativa e moderada, enquanto que houve uma diferença significativa entre moderada e forte (p = 0,031). Portanto negativo para a coloração moderada foram combinadas em uma única categoria e comparado com forte expressão. Strong uPAR
expressão S foi significativamente associada com a sobrevivência global mais longa (Fig 3c;. P = 0,009). Após o ajuste para outras variáveis de prognóstico essa diferença persistiu (HR [IC 95% 0,4-0,9] 0,6 Wald-p = 0,007) (Tabela 3). Além disso, o grupo C paciente palco com uPAR
PT presente na frente invasiva de tecidos tumorais também mostraram um tempo de sobrevivência maior em comparação com os pacientes sem uPAR
PT (Fig 3d;. P = 0,017) na análise multivariada (HR 0.7 [IC 95% 0,5-0,9] Wald-p 0,016) (Tabela 3).
uPAR nos tecidos da mucosa adjacentes não neoplásicas
Para epitélios expressão uPAR na non adjacente tecidos da mucosa -neoplastic (n = 312), 36 casos demonstraram forte expressão uPAR (19 em fase B e 17 no estágio C), 58 casos tinham expressão moderada (28 em fase B e 30 na fase C), 81 casos tiveram fraca expressão (41 na fase B e 40 no estágio C) e 137 casos foram negativos (68 na fase B e 69 em estágio C). Na fase B, não houve associação entre a intensidade da coloração e sobrevivência (p = 0,700), durante a fase C não houve diferença na sobrevida entre negativa, fraca e intermédia. A única associação significativa foi mais longa sobrevivência para forte do que para negativo (p = 0,018), mas, como esta foi baseada em apenas 17 casos com coloração forte, parecia anômala e pode ser um erro de tipo 1 decorrente deste pequeno número. expressão uPAR no estroma era quase ausente, com expressão negativa em 320 casos (156 em estágio B e 164 na fase C) e só expressão moderada em 9 casos (6 no estágio B e 3 na fase C), insuficientes espécimes expressão uPAR estavam disponíveis para uma análise estatística abrangente.
Discussão
Embora a relevância prognóstica de uPAR em câncer tem sido extensivamente estudada, discrepâncias significativas tornaram muito do trabalho inconclusivos. Duas grandes questões continuam por resolver: em primeiro lugar, a discrepância em relação aos tipos de células, onde uPAR é sobre-expressos (ou seja, uPAR
E ou uPAR
S), e em segundo lugar, a relevância prognóstica de uPAR em diferentes tipos de células e diferentes estágios de a progressão do tumor. Neste estudo, trataram o primeiro paradoxo, demonstrando que a expressão de uPAR em diferentes tipos de células pode ser detectada usando dois específicos do epitopo anti-humano uPAR MAbs # 3937 e R4. Estes anticorpos delineadas entre uPAR
E e uPAR
S expressão em tecidos de RC, que mostra a expressão do antigénio pode ser diferencialmente detectado em diferentes tipos de células e localização dos tumores nos mesmos tecidos RC. Após um exame de uPAR
E e uPAR
S de 349 estágio B ou tecidos C RC, fomos capazes de decifrar a segunda controvérsia, revelando que elevada uPAR
E, tanto na região central e dianteiro tumor invasivo negativamente correlacionada com sobrevida global estágio B, enquanto elevada uPAR
S na frente invasiva favoravelmente correlacionada com sobrevida global estágio C.
o reconhecimento dos diferentes uPAR epitopos por anticorpos diferentes é um fator importante a ser considerado, não apenas para a detecção em diferentes tipos celulares, mas também para a determinação do potencial relevância prognóstico clínico de uPAR. Existem vários anticorpos anti-uPAR policlonais (pAb) e MAbs de que têm sido desenvolvidos e estudados extensivamente em aplicações clínicas [6]. Destes, MAbs # 3937 (como # 3936) e R4 (como R2) são mais frequentemente usado para uPAR
E e uPAR
Detecção S, respectivamente, e estar no centro dos resultados díspares obtidos por diferentes laboratórios. Vários factores podem explicar a especificidade destes anticorpos diferentes, o principal sendo a ligação a diferentes epítopos “” disponíveis que reflictam potencialmente diversos papéis de uPAR em cada tipo de célula. Como uPAR tem 42 parceiros conhecidas interagem [5], é também possível que os epitopos de anticorpos podem ser mascarados por outros parceiros interactuantes uPAR em diferentes tipos de células. A natureza multifuncional da uPAR é uma função da sua interactoma [3,5], e, por conseguinte, uPAR detectada por diferentes AcM específicos do epítopo pode ter diferentes parceiros interactuantes, o que pode reflectir funções diferentes em tipos de células discretas. Este conceito é apoiado pelo facto de a população de uPAR solúvel (suPAR) em tipos específicos de células mostrou padrões de coloração diametralmente alterados refletem diferenças funcionais, como um resultado de variações estruturais [25].