Sumário
sinalização Wnt é bem conhecida por desempenhar um papel importante na regulação do desenvolvimento, a proliferação celular e diferenciação celular em uma ampla variedade de normal e tecidos cancerosos. Apesar da riqueza de conhecimento sobre quando e onde vários
WNT
genes são expressos e eventos a jusante sob o seu controlo, não é surpreendentemente pouca evidência de como eles são regulados publicado. Recentemente, relatou que Wnt7a aberrante é observada em carcinomas do ovário seroso, e Wnt7a é o único ligando acelerar a progressão do tumor de ovário através CTNNB1 (β-catenina) /TCF sinalização na ausência de mutações CTNNB1. No presente estudo, relatamos que
Wnt7a
é um alvo direto de
miR-15b
no câncer de ovário. Nós mostramos que um repórter luciferase contendo o sítio de ligação putativo da
miR-15b
no
Wnt7a
3′-UTR foi significativamente reprimido pela
miR-15b
. A mutação do local de ligação putativo de
miR-15b
na actividade de luciferase
Wnt7a
3′-UTR restaurado. Além disso,
miR-15b
foi capaz de reprimir o aumento dos níveis de atividade TOPFLASH por Wnt7a, mas não as provocadas por S33Y. Além disso,
miR-15b
dose-dependente diminuiu
expressão Wnt7a
. Quando avaliamos o impacto prognóstico da
Wnt7a
e
miR-15b
expressão usando conjuntos de dados TCGA, uma correlação significativa inversa em que de alta expressão de
Wnt7a
e baixa-expressão de
miR-15b
foi associada com taxas reduzidas de sobrevivência de pacientes com câncer ovariano. O tratamento com decitabina dose-dependente aumentou
miR-15b
expressão e silenciamento de
DNMT1
significativamente aumentada
miR-15b
expressão. Estes resultados sugerem que
Wnt7a
é pós-transcricionalmente regulados pelo
miR-15b
, o que poderia ser regulada por hipermetilação do promotor, potencialmente através DNMT1, no cancro do ovário.
Citação: MacLean JA II, Rei ML, Okuda H, Hayashi K (2016) Wnt7a regulamento, miR-15b do cancro do ovário. PLoS ONE 11 (5): e0156109. doi: 10.1371 /journal.pone.0156109
editor: Kwong-Kwok Wong, da Universidade do Texas MD Anderson Cancer Center, United States |
Recebido: 21 de março de 2016; Aceito: 09 de maio de 2016; Publicado em: 19 de maio de 2016
Direitos de autor: © 2016 MacLean et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Data Availability:. Todos relevante os dados estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação
Financiamento:.. Este trabalho foi financiado pelo National Institutes of Health CA179214
CONFLITO dE iNTERESSES:. os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
MicroRNA (miRNAs) são pequenos RNAs não-codificadores que regulam a expressão de genes por silenciamento mRNA pós-transcricional. Os processos regulados por miARNs envolvem uma variedade de vias biológicas, e a sua desregulação é uma característica comum de cancro humano [1-3]. A família miR-15 inclui seis membros altamente conservadas,
miR-15a
,
miR-15b
,
miR-16-1
,
miR-16 2
,
miR-195 Comprar e
miR-497
, que estão agrupados em três cromossomos diferentes [4, 5]. O
miR-15a /16-1
cluster, foi originalmente relatado como o alvo de 13q14 deleções ou downregulation na leucemia linfocítica crónica (LLC) [6]. Especificamente,
miR-15a
e
miR-16-1
regular directamente
BCL2
, que é um oncogene anti-apoptótica [7], e, por conseguinte, actuam como supressores tumorais por indução de apoptose [8]. Outros estudos têm mostrado que
miR-15a
e
miR-16-1
atuar como supressores de tumor putativos alvejando
BCL2
,
BMI1 CCND1
,
MCL1
e
Wnt3a
na LLC, melanoma, bem como cancros do cólon, bexiga, ovário e próstata [4, 9, 10]. O
miR-15b
/
miR-16-2
cluster, que está localizado em 3q25, também foi relatado para agir de supressão do tumor, orientando
BCL2
,
BM1
,
CCND1
e
SUZ12
[11-13]. Redução da
miR-15b
foi observada em CLL, melanoma, câncer de língua gástrica e resistente à quimioterapia, bem como as células-tronco do câncer [11-15]. Supressão de
miR-15b
e
miR-16-2
promove patogênese de células B [11]. Assim, os alvos diretos dos membros da família miR-15 são susceptíveis de ser oncogenes críticos.
Temos recentemente relataram que a regulação positiva de Wnt7a (exclusivamente entre os 19 ligantes WNT) resulta em desenvolvimento acelerado e progressão do câncer de ovário (OVCA), e desempenha um papel fundamental na progressão tumoral mediada pelo Wnt7a /CTNNB1 via [16, 17] sinalização. Os nossos estudos indicam ainda que
FGF1
é um alvo a jusante de sinalização directa de Wnt7a /CTNNB1, e que esta via tem potencial como um alvo terapêutico OVCA [16]. Um dos nossos resultados mostraram claramente que a alta expressão de
Wnt7a
e
FGF1
foram correlacionados em OVCA, especialmente em carcinomas serosos, e pior sobrevida geral do paciente [16]. Assim, Wnt7a codifica um factor oncogénico potente de relevância para OVCA. No entanto, ainda não sei a resposta para o porquê Wnt7a torna-se especificamente sobre-expressos em OVCA serosa.
No presente estudo, relatamos que Wnt7a abundante, presente em OVCA, é pós-transcricionalmente regulada por
miR-15b
. Em apoio do seu papel na inibição de câncer, pacientes OVCA tiveram taxa de sobrevida global pobres no grupo com alta expressão de
Wnt7a
e baixa expressão de
miR-15b
. Além disso, nossos resultados indicam que modula DNMT1
miR-15b
transcrição através de metilação do promotor.
Materiais e Métodos
Reagentes e plasmídeos
O 3′- UTR segmentos da endógena
Wnt7a
gene e sua forma mutante foram amplificados por PCR e subclonado no vector de PMIR-REPORT (Thermo Fisher) usando os locais de restrição Spel e HindIII para gerar pMIR-
Wnt7a
e pMIR-
Wnt7a
mutação 3′-UTR contendo plasmídeos. Decitabina (5’aza-2’desoxicitidina, aka: 5-aza-2′-dC),
mir
Vana miRNA mimic (controle negativo e hsa-miR-15b-5p), DNMT1 siRNAs, pré construções de expressão de miR-15b e dual luciferase Reporter Assay System foram adquiridos da Cayman Chemical, Thermo Fisher, Qiagen, Sistema de Biociências e Promega, respectivamente.
As linhas celulares
OVCAR3, OVCAR5, SKOV3 e ES2 células foram adquiridos a partir da American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, EUA). células OVCAR4 foram dotados de Dr. Joanna Burdette (Universidade de Illinois em Chicago). Kuramochi, OVKATE OVSAHO e foram adquiridos a partir do banco de células JCRB (Osaka, Japão). células SKOV3.ip1 foram adquiridos a partir do banco de células da Universidade do Texas MD Anderson Cancer Center. Todas as células foram autenticadas pela análise curta em tandem repeat (STR) e passadas dentro de 6 meses a contar da recepção. Todas as células foram testadas por rotina para a proliferação celular e a incorporação de BrdU, bem como contaminação por micoplasma. Todas as linhas de células exibiram morfologia semelhante, as taxas de crescimento característicos, e manteve-se negativo para contaminação por micoplasma em todos os experimentos. células OVCAR4, Kuramochi, OVKATE OVSAHO e foram cultivadas em RPMI 1640 com FBS a 10% e penicilina /estreptomicina, e outras células foram cultivadas em DMEM com 10% de FBS, glutamina 2 mM e penicilina /estreptomicina. Todas as linhas celulares foram cultivadas numa incubadora humidificada a 37 ° C e constante de 5% de CO
2.
quantitativa PCR em tempo real (qPCR) ensaio
O ARN total foi extraído a partir de células , e o ADNc foi sintetizado a partir de ARN total utilizando o High-Capacity cDNA de transcrição reversa Kit da Thermo Fisher. a expressão do gene relativa foi determinada por SYBR Green (Bio Rad) a incorporação utilizando um Bio-Rad myCycler como descrito anteriormente [18]. Micro RNA foi extraído a partir de células utilizando um estojo de isolamento de miARN Ligação pura (Thermo Fisher), e o ADNc foi sintetizado utilizando o kit de miScript II RT (Qiagen). miARN expressão relativa foi determinada pelo kit de miScript SYBR Green PCR (Qiagen), e miR-15b e iniciadores específicos SNORD68 (Qiagen). Uma tabela de oligonucleótidos utilizados para cada gene é apresentada na Tabela S1.
Ensaios
proliferação celular e adesão
proliferação celular, ensaios de adesão e migração foram realizadas seguindo os métodos descritos anteriormente [16, 17] . Para avaliar a proliferação celular, as células foram semeadas em placas de 24 poços, e contadas 24, 48 e 72 horas por Condessa II FL automatizada celular Contador (Thermo Fisher) com exclusão de azul de tripano. Para avaliar a adesão de células, as células foram semeadas em placas de 24 poços e colhidas após 4 h de incubação.
Análise estatística
Todos os dados experimentais foram submetidos a ANOVA de um factor e as diferenças entre as médias individuais eram testado por um teste de múltipla gama Tukey usando Prism 5.0 (GraphPad). dados QPCR foram corrigidos para diferenças de carregamento de amostras usando o RPL19
dados como covariável. Testes de significância foram realizados utilizando os termos de erro apropriadas de acordo com a expectativa dos quadrados médios para erro. Um valor-p de 0,05 ou menos foi considerado significativo. Os dados são apresentados como médias com erro padrão da média (SEM). O método de Kaplan-Meier foi utilizado para calcular as taxas de sobrevivência e foi avaliada pelo teste de log-rank usando um conjunto de dados TCGA, TCGA-OV que continha 554 tumores ovarianos primários com conjuntos de dados preenchidos, foi selecionado para análise de sobrevivência.
resultados
expressão Wnt7a em células OVCA dependendo da formação genética ou características
Quando se reportou o significado clínico da Wnt7a durante a transformação maligna de OVCA, nossos resultados mostraram que
Wnt7a
foi altamente expressa em carcinomas serosos, o subtipo mais comum /agressivo de OVCA [16, 17]. Assim, Wnt7a aberrante poderia ser induzida por herança genética anormal ou correlacionada com personagens agressivos em OVCA. Quando examinámos
Wnt7a
níveis de expressão em células OVCA, abundante
Wnt7a
( 1000 vezes) foi observado em células serosas OVCA invasivos ou de alto grau (SKOV3.ip1, Kuramochi, e OVCAR4 OVSAHO, S1 Fig). Nota: as células Kuramochi, OVCAR4 OVSAHO e foram recentemente confirmados como linhas de células de alta qualidade serosas OVCA por perfis genómico [19]. células SKOV3.ip1 possuem características altamente invasivo e metastático como estas células são isoladas a partir de ascites fluidos [20]. células ES2, OVCAR3 e OVCAR5 possuem perfis genômicos que são parcialmente semelhantes a tumores OVCA serosa.
Wnt7a é um alvo direto de miR-15b
Foram examinados activação da transcrição da
Wnt7a
promotor usando ensaios de repórter de luciferase, no entanto, a nossa eliminação análises não revelaram quaisquer locais críticos ou potenciais reguladores dentro de uma distância de 10 kb para cima ou para baixo-stream do
promotor Wnt7a
(dados não mostrados) . Por isso, submeteu o
Wnt7a
3′-UTR a uma análise in silico usando 3 algoritmos diferentes (TargetScan, PicTar e Miranda) para identificar sequências de correspondência de sementes de miRNA putativos. Todos os três motores de busca detectado
miR-15a
,
miR-15b Comprar e
miR-195 sequências de ligação de consenso
(Fig 1A) na 3’UTR do
Wnt7a
(Fig 1B). A seguir, avaliou o impacto prognóstico da
Wnt7a
e /ou
miR-15b
expressão usando conjuntos de dados TCGA (número total paciente é 554). Enquanto a alta expressão de
miR-15b
(n = 278) apresentaram bom prognóstico (P = 0,0394) em comparação com baixa expressão de
miR-15b
(n = 276),
Wnt7a
não mostraram qualquer correlação (high-expressão de Wnt7a, n = 279 vs baixo = expressão de Wnt7a, n = 275, P = 0,2364). A correlação significativa inversa em que de alta expressão de
Wnt7a
e de baixa expressão de
miR-15b
(n = 147 vs n = 146 de baixa expressão de
Wnt7a
e de alta expressão de
miR-15b) foi associado com taxa de sobrevivência reduzido de pacientes com câncer ovariano por teste de log-rank (P = 0,0297, Fig 1C). NOTA: de alta expressão de
Wnt7a
/
miR-15b
n = 132 e baixa expressão de
Wnt7a
/
miR-15b
n = 129 não foram incluídos na análise de correlação inversa. No entanto, nenhuma correlação inversa foi observada entre
Wnt7a
e
miR-15a
ou
miR-197
(dados não mostrados). Portanto, nós nos concentramos em
miR-15b Compra de análises posteriores. Além disso, examinamos a correlação inversa entre a
BCL2
e
miR-15b
, como
BCL2
é um dos alvos conhecidos de miR-15 da família e age como um oncogene. No entanto, não houve associação significativa entre a
BCL2
e
foi observada miR-15b
relativa à taxa de sobrevivência de pacientes com câncer ovariano usando conjuntos de dados TCGA-OV (P = 0,2760), sugerindo que o
Wnt7a
é um alvo crítico mais relevante da
miR-15b
com respeito a OVCA.
(a) previsão de Bioinformática da interação miRNA com seqüências sem sementes do 3′-UTR de
Wnt7a
utilizando três algoritmos diferentes. (B) Esquema do putativo
miR-15b
sequência de ligação no
Wnt7a
3′-UTR. (C)
Wnt7a
ou
BCL2
e
miR-15b
expressão inversamente correlacionado com a sobrevivência calculada com conjuntos de dados TCGA-OV (total n = 554, alta
Wnt7a Twitter /
miR-15b
, n = 132; alta
Wnt7a
/baixa
miR-15b
, n = 147; baixo
Wnt7a
/high
miR-15b
, n = 146; baixo
Wnt7a
/
miR-15b
, n = 129) pelo método de Kaplan-Meier usando Prism 5.0. O P-valor foi determinado pelo teste de classificação de comprimento.
Nós usamos TargetScan 7.0 [21], para identificar
miR-15b
locais alvo dentro do
Wnt7a
3′-UTR e encontrou um putativo
site de miR-15b
de ligação (Fig 1B). Para examinar se
miR-15b
liga-se a esta sequência, as células OVCA foram transfectadas com plasmídeo PMIR-REPORT contendo o sítio de ligação putativo da
miR-15b
no
Wnt7a
3′-UTR, e
mir
Vana miARN mímico (controlo negativo ou de miR-15b), e em seguida, a actividade repórter da luciferase foi medida (Fig 2A). A actividade da luciferase foi significativamente reprimido pela
miR-15b
comparado com o controle negativo. No estudo anterior, mostramos que Wnt7a ativa a via de sinalização CTNNB1 canônica [16, 17]. A fim de determinar se
miR-15b
inibe a ação de Wnt7a, examinamos CTNNB1 atividade transcricional mediada com construção repórter TOPFLASH (Fig 2B). Descobrimos que
miR-15b
reprimida significativamente a actividade repórter TOPFLASH. Quando a actividade foi aumentada pela TOPFLASH Wnt7a ou S33Y mutado CTNNB1 (um controlo positivo estabelecida para a activação do repórter TOPFLASH) em células ES2, que modesto ou indetectavelmente possuem Wnt7a endógeno,
miR-15b
foi capaz de reprimir aumentou níveis de atividade TOPFLASH por Wnt7a, mas não as provocadas por S33Y (Fig 2B). Além disso, a mutação do sítio de ligação putativo da
miR-15b
no
Wnt7a
3′-UTR (5’TGCTGCT3 ‘para 5’TaaTGCT3’) restabeleceu a actividade luciferase anteriormente reprimida por
miR-15b
(Fig 2C). Em apoio a estas conclusões,
miR-15b
dose-dependente diminuiu
Wnt7a
níveis de mRNA em células OVCA (Fig 3). Estes resultados sugerem que
Wnt7a
expressão é regulada diretamente pelo
miR-15b
em OVCA. Porque
BMI1
e
BCL2
têm sido relatados como genes alvo de
miR-15b
no câncer [12, 13], os seus níveis de mRNA em OVCA foram também examinados. Enquanto
miR-15b
foi capaz de diminuir
BCL2
,
BMI1
não foi regulamentada pelo
miR-15b
em células OVCA.
(a) repórter luciferase do
Wnt7a
3′-UTR em células SKOV3.ip1 e OVSAHO 48 horas após a transfecção de
miR-15b
ou controle negativo mímica. Diferentes letras denotam actividade repórter que têm estatisticamente significativa (P 0,05) as diferenças de actividades médias. análise repórter (B) em células TOPFLASH SKOV3.ip1 OVSAHO e 48 horas após a transfecção de
miR-15b
ou mimetizador de controle negativo (esquerda). análise TOPFLASH repórter em células ES2 48 horas após a transfecção de
miR-15b
mímica, Wnt7a ou S33Y com controles negativos (simulação ou pcDNA3.1, à direita). (C) Análise de repórter luciferase do
Wnt7a
3′-UTR, mutação do
Wnt7a
3′-UTR ou vetoriais PMIR-REPORT em células SKOV3.ip1 e OVSAHO 48 horas após a transfecção de
miR-15b
ou mímica controle negativo.
Os dados foram ajustados para nível de 1 de fundo no que diz respeito a controlar os níveis. Letras diferentes indicam transcritos que têm estatisticamente significativa (p 0,05). Diferenças nos níveis de expressão médios
miR-15b inibe a proliferação celular e adesão
O papel da
miR- 15b
como um supressor de tumor foi caracterizado, como perda de
miR-15b
em ratos leva ao desenvolvimento de malignidade de células B [11], e a sobre-expressão de
miR-15b
suprime divulgação metástase utilizando xenoenxertos de cancro da língua [12]. No presente estudo,
miR-15b
células OVCA superexpressão foram tempo-dependente menos proliferativa (Fig 4A), e reduziu a adesão celular (Fig 4B), indicando que
miR-15b
também atua como supressor de tumor em OVCA.
(a) a proliferação celular ou (B) a adesão tanto com
miR-15b
expressar ou células controle.
miR-15b é regulada pelo promotor hipermetilação
Os nossos resultados atuais sugerem que a expressão abundante de
Wnt7a
é provável induzida devido à regulação negativa da
miR-15b
. O impacto prognóstico dos pacientes OVCA com correlação inversa da
Wnt7a
e
miR-15b
apoiar ainda mais essa hipótese. Portanto, foi testada a possibilidade de que
miR-15b
pode ser regulada em OVCA através hipermetilação do promotor. O tratamento com um inibidor de DNMTs, 5-aza-2’dC, dependente da dose, aumentou
miR-15b
expressão e diminuiu
expressão em células Wnt7a
OVCA (Figura 5A). Quando examinamos os níveis de três isoformas DNMT ativos de expressão (
DNMT1
,
DNMT3A
e
DNMT3B
) em 5-aza-2’dC (5 M) tratados OVCA As células, apenas a
DNMT1
foi reduzida em células SKOV3.ip1 e OVCAR4 (Fig 5B), indicando que DNMT1 poderia ser funcional para metilar
miR-15b
. Na verdade, silenciamento de
DNMT1
significativamente aumentada
expressão de miR-15b
em células OVCA (Fig 5C), sugerindo que o
miR-15b
é potencialmente regulada para baixo, especialmente em células de alta Wnt7a-expressando, por hipermetilação do promotor via DNMT1 em OVCA.
(a) 5-aza-2′-dC tratamento induz
miR-15b
expressão (à esquerda) e diminui
Wnt7a
expressão (à direita) em células OVCA. As células foram tratadas com 5-aza-2′-dC, durante 3 dias, e
miR-15b
ou
Wnt7a
foi avaliada por qPCR em comparação com 0 controle? M (definido como nível de fundo 1 em cada célula). Diferentes letras denotam transcritos que têm estatisticamente significativa (P 0,05) as diferenças nos níveis médios de expressão. (B)
DNMT1
,
DNMT3A
e
DNMT3B
níveis de expressão foram avaliadas em células OVCA após 5-aza 2′-DC-(5 M) de tratamento durante 3 dias . (C) os níveis de expressão
DNMT1
(superior) e
miR-15b
(parte inferior) foram avaliadas em células OVCA transfectadas com DNMT1 siRNA 1-4, DNMT1 siRNA misturar ou controle de corrida. Letras diferentes indicam transcritos que têm estatisticamente significativa (P 0,05). Diferenças nos níveis de expressão médios
Discussão
sinalização WNT é bem conhecida por desempenhar um papel importante na biologia do câncer [22 ]. Enquanto CTNNB1 é o mediador chave da sinalização de Wnt, demonstrámos que é o único Wnt7a ligando activador CTNNB1 sinalização intacta /TCF (isto é, dentro de células sem activação por mutação de CTNNB1), especialmente o subtipo seroso OVCA [16, 17]. Apesar da riqueza de conhecimentos sobre a expressão de vários ligantes WNT e eventos a jusante sob o seu controlo, não é surpreendentemente pouca evidência de como
WNT
genes são regulados publicado, e por que alguns membros estão regulada em tipos específicos de tumores. Recentemente,
Wnt3a
, que promove tumorigênese via proliferação celular acelerado e invasão [23], é encontrado para ser regulada directamente pela
miR-15a /16-1
cluster, e upregulation de
Wnt3a
é inversamente correlacionada com a diminuição da
miR-15a
e
miR-16-1
em tumores de próstata avançados [10]. No presente estudo, os programas de sementes de correspondência de bioinformática identificaram três membros miR-15 da família altamente conservadas,
miR-15a
,
miR-15b
e
miR-195
, que poderia ser reguladores críticos da
Wnt7a
. No entanto, nem
miR-15a
nem
miR-195
exibiu correlação inversa significativa com
Wnt7a
nos conjuntos de dados de sobrevivência do paciente OVCA. Assim,
Wnt7a
expressão é mais provável que dependem de regulamentação por
miR-15b
em OVCA.
trabalhos anteriores em CLL demonstrou a actividade supressora de tumores do
miR-15a /16-1
cluster é dependente de repressão da
BCL2
[8].
BCL2
também tem sido relatada como um alvo direto de
miR-15b
usando um modelo de células cancerosas gástricas resistentes aos medicamentos [13]. tem sido caracterizada-se que
miR-15b /16-2 camundongos knockout
desenvolver doença maligna de células B, enquanto BCL2 levemente sobre-regulada em células B de knockout ratinhos [11]. Nossos resultados mostraram que
miR-15b
reprimida
BCL2
expressão em células OVCA. No entanto, nenhuma correlação inversa entre o
BCL2
e
miR-15b
foi observada na análise de sobrevida do paciente em OVCA. Estes resultados sugerem que a regulação da BCL2 por
miR-15b
tem menos impacto sobre tumorigênese de ovário.
As ações de
miR-15b
como um supressor de tumor foram claramente demonstrados na patogénese de células-B na LLC [11]. Além disso, a sobre-expressão de
miR-15b
inibe a disseminação de metástases através de transição epitelial-mesenquimal no modelo de xenoenxertos de células de câncer de língua quimiorresistentes [12]. Regulação negativa do
miR-15b
ocorre em células-tronco de câncer de mama, e superexpressão de
miR-15b
inibe o seu crescimento e diferenciação [15]. A inibição da proliferação de células de segmentação de ciclina D1, e a indução de apoptose por
miR-15b
também foram relatados [11-14, 24]. Nossos resultados mais apoio
‘s função supressora de tumores miR-15b
e adicionar inibição da proliferação celular OVCA e adesão celular à sua lista de tumores relevantes.
No presente estudo, mostramos que 5-aza-2′-dC, um inibidor da actividade DNMT, a expressão aumentada de
miR-15b
. Da mesma forma, diminuição
DNMT1
foi observado pelo tratamento de 5-aza-2′-DC, e silenciamento de
DNMT1
aumentou
miR-15b
em células OVCA. níveis DNMT1 aumento foram relatados em OVCA, com menor expressão no estágio primário I /II tumores e expressão de pico ocorrem na fase III /IV [25]. mediada por DNMT1 hipermetilação do promotor induz a redução da E-caderina e progride recurso invasivo da OVCA [26]. Há um relatório com a análise da correlação entre a alteração no número de cópias no local cromossômica de
miR-15b
e as mudanças no
miR-15b
estado de metilação do promotor de mama, ovário, cabeça e pescoço , pulmão e cancro do rim usando conjuntos de dados TCGA [27]. Este grupo encontrou correlação significativa entre o
miR-15b
expressão e copiar número variação para aqueles loci, bem como entre
miR-15b
de expressão e de metilação níveis nos tipos de câncer relevantes e os dados agrupados de todos os tipos de câncer. Nota: estão disponíveis para o câncer de ovário em TCGA (somente expressão e número de cópias alteração) Não há dados de metilação. Além disso, a região promotora de
miR-16-2
, que está presente em conjunto com um
miR-15b
localizado no cromossoma 3q25, é metilado na policitemia vera células CD34 + [28]. Embora a regulação epigenética da
miR-15b
em OVCA continua a ser investigado, DNMT1 pode ser um dos reguladores para suprimir
miR-15b
.
Em resumo, descobriu que
Wnt7a
está diretamente regulada pela
miR-15b
em OVCA. Como Wnt7a ativa o crescimento e progressão tumoral em OVCA através do Wnt7a /CTNNB1 via de sinalização [16, 17], a regulação negativa da
miR-15b
permite aberrante
Wnt7a
expressão é apoiar ainda mais o impacto da Wnt7a e seus mecanismos em OVCA.
Informações de Apoio
S1 Fig. . Dados relativos
Wnt7a
expressão foi avaliada por qPCR em células OVCA
são expressos como vezes acima dos níveis de expressão ES2, que foram o próximo plano de fundo e arbitrariamente definido como 1.
doi: 10.1371 /revista. pone.0156109.s001
(EPS)
S1 Table. Primers para qPCR
doi: 10.1371 /journal.pone.0156109.s002
(PDF)
Reconhecimentos
Agradecemos ao Dr. Manjeet Rao (The University of Texas Health Science Center em San Antonio) para fornecer vector PMIR-RELATÓRIO e Dr. Joanna Burdette (Universidade de Illinois em Chicago) para fornecer as células OVCAR4.