Abstract

Fundo

A superexpressão de RRM1 e RRM2 tem sido associada com a resistência à gemcitabina. BRCA1 superexpressão aumenta a sensibilidade ao paclitaxel e docetaxel. Temos retrospectivamente examinou o efeito de RRM1, RRM2 e expressão BRCA1 sobre o resultado de gemcitabina e docetaxel no cancro do pulmão de não-pequenas células avançado pacientes (NSCLC).

Metodologia e principais conclusões

Tumor As amostras foram coletadas de 102 pacientes com NSCLC avançado sem quimioterapia anterior tratados com gemcitabina e docetaxel como parte de um ensaio clínico randomizado. RRM1, RRM2 e os níveis de ARNm de BRCA1 foram avaliados por PCR quantitativa e correlacionados com a resposta, tempo para a progressão e sobrevivência. Como os níveis de BRCA1 aumentado, a probabilidade de resposta aumentou (Odds Ratio [OR], 1,09:

p

= 0,01) e o risco de progressão diminuída (hazard ratio [HR], 0,99;

p

= 0,36). Como os níveis de RRM1 e RRM2 aumentou, a probabilidade de resposta diminuída (RRM1: OR, 0,97;

P

= 0,82; RRM2: OR, 0,94;

P

0,0001) e o risco de progressão aumentada (RRM1: HR, 1,02;

p

= 0,001; RRM2: HR, 1.005;

p

= 0,01). Uma interação observada entre BRCA1 e RRM1 permitiu que os pacientes devem ser classificados em três grupos de risco de acordo com as combinações de níveis de expressão de genes, com tempos até à progressão de 10,13, 4,17 e 2,30 meses (

p

= 0,001). baixa expressão BRCA1 foi o único fator significativamente associado com maior tempo de progressão em 31 pacientes recebendo terapia de segunda linha baseada em cisplatina.

Conclusões

A expressão de mRNA de BRCA1, RRM1 e RRM2 é potencialmente uma ferramenta útil para a seleção de pacientes com NSCLC para a quimioterapia e garante individualizado uma investigação mais aprofundada em estudos prospectivos

Citation:. Boukovinas I, Papadaki C, Mendez P, Taron M, Mavroudis D, Koutsopoulos a, et al. (2008) Tumor BRCA1, RRM1 e mRNA RRM2 níveis de expressão e resposta clínica ao Primeiro-Line gemcitabina e docetaxel em não-pequenas células do pulmão pacientes com câncer. PLoS ONE 3 (11): e3695. doi: 10.1371 /journal.pone.0003695

editor: Torbjorn Ramqvist, Karolinska Institutet, na Suécia

Recebido: 02 de junho de 2008; Aceito: 21 de outubro de 2008; Publicação: 11 de novembro de 2008

Direitos de autor: © 2008 Boukovinas et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi parcialmente financiado pela Associação de Creta for Biomedical Research (CABR). Dr. John Souglakos é o destinatário de uma bolsa de pesquisa CABR. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

-cancro do pulmão de células não pequenas (NSCLC) continua a ser a principal causa de morte por cancro [1], com pouca melhoria na sobrevivência, independentemente do tipo de quimioterapia utilizado, quer em combinação ou como agentes únicos [2] . Combinações de agentes citotóxicos de terceira geração, tais como taxanos, vinorelbina e gemcitabina, cisplatina com emergiram como novos padrões. Em vários ensaios clínicos de fase III em NSCLC avançado, a combinação de platina com taxanos atingido tempos médios de sobrevivência de 8-11 meses e a sobrevivência de 31-46% [3] 1-ano. combinações não baseadas em platina com gemcitabina e docetaxel ou paclitaxel produziram um benefício de sobrevivência semelhante com um perfil de toxicidade mais favorável [4], [5]. A fim de melhorar ainda mais a sobrevivência, um ensaio de Fase III de cisplatina personalizado de acordo com os níveis de ARNm de ERCC1 no estádio IV NSCLC foi realizada. Os pacientes no grupo de controle receberam cisplatina e docetaxel, enquanto no braço genotípica, os pacientes com baixos níveis de ERCC1 receberam cisplatina e docetaxel e aqueles com níveis elevados receberam gemcitabina e docetaxel [6]. Embora a resposta objectivo era superior no braço genotípica do que no grupo de controlo (50,7% vs 39,3%), esta não se traduziu para a melhoria da sobrevivência. O julgamento British Thoracic Oncology Group (BTOG1) também não encontraram nenhuma associação entre os níveis ERCC1 e sobrevida em pacientes com NSCLC avançado tratados com docetaxel mais carboplatina [7]. estudos retrospectivos de estágio IV NSCLC têm relatado que os pacientes com níveis de mRNA RRM1 baixo ERCC1 ou tiveram uma sobrevida mediana até 15 meses quando tratados com gemcitabina e cisplatina, com diferenças mais significativas na sobrevivência de acordo com os níveis RRM1 [8], [9], [10]. Um estudo de viabilidade do tratamento personalizado em pacientes com NSCLC com alta e baixa ERCC1 subunidade ribonucleótido-redutase M1 (RRM1) expressão de mRNA descobriu que a gemcitabina e docetaxel pode ser a combinação ideal para este subgrupo de pacientes [11].

RRM1 e RRM2 são codificadas por diferentes genes em cromossomas separados e seus mRNAs são expressos diferencialmente ao longo do ciclo celular. redução da expressão de let-7 microRNA (miRNA) é freqüentemente observada em NSCLC [12] e muitas vezes leva a superexpressão de RRM1 e RRM2 [13]. A resistência a gemcitabina foi associado com ambos RRM1 e RRM2 superexpressão [14], [15]. Pequeno ARN interferente segmentação RRM2 reforçada quimiossensibilidade a gemcitabina no adenocarcinoma pancreático [16]. Em nosso estudo de pacientes com adenocarcinoma de pulmão metastático tratados com gemcitabina e docetaxel, os pacientes com baixos níveis de RRM1 e RRM2 tiveram uma taxa significativamente mais elevada de resposta (60% vs 14,2%), tempo de progressão (9,9 vs 2,3 meses) e sobrevida global (15,4 vs 3,6 meses) do que os pacientes com níveis elevados de ambos os genes [17].

também foi observada uma estreita correlação entre os níveis de RRM1 e BRCA1 [18] expressão, [19], [20], ea perda de let-7 foi mostrado para upregulate

BRCA1

, bem como

RRM1

e

RRM2

[13]. Além disso, tanto

BRCA1

e

RRM1

está regulada no t-antigénio assinatura SV40 T /[21]. expressão de BRCA1 confere quimiossensibilidade diferencial em linhas celulares de cancro [22], [23]. pacientes com cancro do ovário na tercis mais baixos de expressão de BRCA1 mostrou sensibilidade ao cisplatino e resistência ao paclitaxel e docetaxel, enquanto que aqueles nos mais altos tercis tinha resistência à cisplatina e sensibilidade ao paclitaxel e docetaxel [23]. Os baixos níveis de BRCA1 também se correlacionou com o aumento da sobrevida em pacientes com NSCLC tratados com gemcitabina e cisplatina [18].

A fim de validar nossas descobertas anteriores sobre RRM1 e RRM2 [17] e continuar a investigar o papel do BRCA1 em sensibilidade taxano e resistência, analisamos retrospectivamente uma série de amostras tumorais de pacientes com NSCLC avançado tratados com gemcitabina e docetaxel em uma randomizado de fase III julgamento realizado pelo Grupo de Oncologia Research Helénica (Hørg) [5].

Métodos

pacientes

amostras de tumor foram coletados de tumores primários de pacientes com diagnóstico histológico de estágio IIIB inoperável e IV NSCLC, que foram incluídos no braço experimental de um estudo randomizado Hørg realizadas no período de abril de 1999 a Setembro de 2002 [5] (sem registro de ensaio necessária antes de 2005). Os critérios de elegibilidade tenham sido previamente relatado. O estudo foi aprovado pelos Comitês de Ética dos hospitais participantes, e todos os pacientes deram o seu consentimento informado assinado antes da entrada no estudo. Os pacientes receberam de primeira linha gemcitabina (Gemzar®; Eli Lilly, Indianapolis, IN, EUA) 1000 mg /m

2 nos dias 1 e 8 e docetaxel (Taxotere, Sanofi-Aventis, Collegeville, NJ, EUA), 100 mg /m

2 no dia 8, com granulócitos factor de estimulação de colónias de suporte-humano a cada 3 semanas, tal como anteriormente descrito. avaliação do paciente foi realizada no início e após cada três ciclos de quimioterapia [5].

Desenho do estudo

O presente estudo foi uma análise retrospectiva do valor prognóstico do BRCA1, expressão RRM1 e RRM2 mRNA em pacientes com NSCLC tratados com gemcitabina de primeira linha e docetaxel. Todas as biópsias tumorais disponíveis do tumor primário com mais de 100 células por secção foram incluídos na análise. Todos os resultados de eficácia foram avaliados para todos os pacientes inscritos numa base de intenção de tratar.

A expressão gênica análise

Todos os tumores embebidos em parafina foram revisados ​​por dois patologistas independentes para definir o tumor mais adequado área para microdissecação a assegurar um mínimo de 90% de células tumorais. As células malignas foram adquiridos utilizando um microdissector piezoelétrico Eppendorf (Eppendorf, Hamburgo, Alemanha). O ARN foi purificado pelo método LS Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA), seguido por precipitação com isopropanol e tratamento com DNase (Ambion, Austin, TX, EUA). a síntese de cDNA foi realizada usando SuperScript III transcriptase reversa (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA). A quantificação relativa da expressão do gene foi realizado utilizando o Prism 7900HT Sistema de Detecção de Sequência ABI (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). (Para mais detalhes sobre a análise de expressão gênica, consulte Texto S1).

Análise estatística

Além de analisar os níveis de cada gene de expressão como uma variável contínua, a expressão do gene também foi categorizado em tercis em a fim de explorar a tendência risco de as variáveis ​​de genes e para identificar facilmente os grupos de níveis de expressão de genes com risco diferente. As respostas foram registradas de acordo com os critérios RECIST [24]. O tempo mediano até à progressão tumoral e sobrevivência global foram calculados a partir do início do tratamento para a primeira progressão da doença documentada ou morte, respectivamente.

O potencial associação entre os níveis de características, e expressão de genes de resposta de linha de base foram comparados com ambos os dois teste exato -sided de Fisher ou o teste do qui-quadrado para variáveis ​​categóricas e o teste de Kruskal-Wallis para variáveis ​​contínuas. A normalidade das variáveis ​​contínuas foi verificada com um teste de Kolmogorov-Smirnov. O teste de Spearman foi utilizado para avaliar a correlação entre BRCA1, RRM1 e expressão de mRNA RRM2. Todos os fatores de risco para resposta foram avaliados em uma análise univariada, e uma análise de regressão logística multivariada, com índices ímpares ajustadas e seus intervalos de confiança de 95% (IC), foi utilizado para avaliar qual dos fatores tiveram uma influência significativa na resposta. O teste de probabilidade de Hosmer-Lemeshow foi usado para avaliar a qualidade do ajuste.

A associação de fatores de risco com extremos de tempo-a-caso foi analisado com o teste de log-rank, e o método de Kaplan-Meier foi utilizado para traçar os correspondentes de progressão time-to-e sobrevivência curvas. A análise de regressão Cox univariada, com taxas de risco e ICs de 95%, foi utilizado para avaliar a associação entre cada potencial fator prognóstico e sobrevivência e tempo de progressão. Esses fatores foram incluídos em um modelo de regressão multivariada de Cox com um procedimento passo a passo (ambos frente e para trás) para avaliar a significância independente de diferentes variáveis ​​sobre a sobrevivência e tempo de progressão. O teste da razão de verossimilhança foi utilizado para avaliar a qualidade do ajuste, e o teste de Wald foi usado para avaliar a significância do coeficiente. No caso de potenciais múltiplas comparações, os

p

-Valores foram corrigidos com a correção de Bonferroni.

Todos os cálculos estatísticos foram realizados com o SPSS, versão 15.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL , EUA). Frente e verso

foram considerados significantes p

-Valores de menos de 0,05.

Resultados

características do paciente e os resultados clínicos

No ensaio randomizado original [ ,,,0],5], 209 pacientes com NSCLC foram tratados com gemcitabina e docetaxel; 107 não foram incluídos no estudo devido à falta de tecido de tumor (Fig. 1). Os dados clínicos e amostras de tumores primários estavam disponíveis para 102 pacientes, que foram incluídos no presente estudo. A amplificação do gene BRCA1, e RRM1 RRM2 foi bem sucedida em 96 amostras. Oitenta e um foram adenocarcinomas, dez carcinomas de células escamosas, e cinco carcinomas de células grandes. As características dos pacientes são mostradas na Tabela 1. No ensaio inicial, a taxa de resposta foi de 30%, o tempo de progressão de 4 meses, e sobrevivência mediana de 9 meses [5]. Resultado para os 96 pacientes avaliados no presente estudo foi semelhante:. Taxa de resposta de 30,5%, o tempo de progressão de 4,2 meses, ea sobrevida média de 10,5 meses

Duzentos e nove pacientes foram tratados com gemcitabina e docetaxel como parte de um estudo randomizado de fase III em NSCLC avançado [5]. biópsia do tumor foi obtido a partir de um total de 102 pacientes; 68 pacientes foram descartados, porque apenas espécimes citológicos estavam disponíveis, e 39 biópsias brônquicas continha muito poucas células tumorais para análise. A análise da expressão de mRNA foi possível em amostras tumorais de 96 de 102 pacientes.

BRCA1, RRM1 e mRNA RRM2 níveis de expressão

Os níveis de expressão de mRNA Median foram 3,64 (intervalo de 0- 34,37) para BRCA1, 0,82 (gama 0-325,23) para RRM1 e 27,16 (0,97-256,84 gama) para RRM2 (Tabela 1). Os níveis de expressão não seguem uma distribuição normal (Fig. S1). Não houve correlação entre a idade, o sexo, PS, ou estágio da doença e BRCA1, níveis RRM1 ou mRNA RRM2. correlações significativas foram observadas global entre BRCA1 e RRM1 (ρ = 0,27;

p

= 0,008) e uma tendência não significativa para a correlação entre RRM1 e RRM2 (ρ = 0,19;

p = 0,06

) os níveis de ARNm. Houve também uma significativa correlação inversa entre BRCA1 e níveis de mRNA RRM2 (ρ = -0,25;

p

= 0,02). A Tabela 1 também mostra os níveis dos três genes de expressão de mRNA de acordo com tercis.

A expressão gênica e resposta ao tratamento

A fim de prever a resposta ao tratamento, um modelo de regressão logística foi ajustada para o expressão de cada gene como uma variável contínua. Como os níveis de BRCA1 aumentado, a probabilidade de resposta aumentou significativamente (Odds Ratio [OR] = 1,09; IC 95%, 1,02-1,16;

p

= 0,01). Em contraste, como níveis RRM2 aumentou, a probabilidade de resposta diminuiu significativamente (OR = 0,94; IC de 95%, 0,91-0,97;

P

0,0001). Uma tendência semelhante, mas não significativo foi observado para níveis RRM1 (OR = 0,97; IC 95%, 0,77-1,23;

p

= 0,82)

Quando respondentes foram classificados de acordo com seu gene. os níveis de expressão por tercis, a maioria dos inquiridos tiveram expressão BRCA1 alta e baixa expressão RRM2: 58,6% no mais alto tercil de expressão BRCA1 (

p

= 0,002) e 72,4% no menor tercil de expressão RRM2 (

p

. 0,0001) (Tabela 2)

A análise de regressão logística univariada mostrou que a expressão de baixo RRM2, ECOG PS 0, e expressão alta BRCA1 foram significativamente associados com uma probabilidade mais elevada de resposta (Tabela 2). Na análise de regressão logística multivariada dessas variáveis, juntamente com RRM1 e estágio da doença, apenas a baixa expressão RRM2 emergiu como um fator preditivo independente para a resposta (Tabela 2).

A expressão gênica e tempo de progressão

a análise univariada para o tempo de progressão revelou que a única variável clínica associada com o tempo de progressão foi de PS (hazard ratio [HR] para PS 1-2, 1,55; IC 95%, 0,99-2,41;

p

= 0,05) (Tabela 3). A análise univariada para o tempo de progressão de acordo com os níveis de expressão de genes como variáveis ​​contínuas mostraram que como valores RRM1 e RRM2 aumentou, o risco de progressão aumentou significativamente: RRM1 (HR, 1,02; IC 95%, 1,01-1,02;

p

= 0,001); RRM2 (HR, 1.005; 95% CI, 1,001-1,008;

p

= 0,01). No entanto, como os níveis de BRCA1 aumentou, o risco de progressão diminuída (HR, 0,99; IC 95%, 0,95-1,02;

p

= 0,36).

Quando os níveis de expressão do gene eram categorizados por tercis, o risco de progressão foi maior para os pacientes do intermediário e maiores tercis de RRM1 e RRM2 do que para aqueles no menor tercil: tercil intermediário RRM1 (HR, 1,20; IC 95%, 0,72-1,97;

p

= 0,49); RRM1 mais alto tercil (HR, 1,51; IC 95%, 0,91-2,51;

p

= 0,11); RRM2 tercil intermediário (HR, 1,28; IC 95%, 0,77-2,13;

p

= 0,35); RRM2 mais alto tercil (HR, 1,93; IC 95%, 1,16-3,22;

p

= 0,01) (Tabela 3). O risco de progressão foi maior para os pacientes no tercil intermediário e menor de BRCA1 do que para aqueles no mais alto tercil: tercil intermediário BRCA1 (HR, 1,33; IC 95%, 0,80-2,22;

p

= 0,28) ; BRCA1 menor tercil (HR, 1,51; IC 95%, 0,91-2,49;

p

= 0,11) (Tabela 3). Tempo de progressão de acordo com a expressão gênica por tercis é mostrada na Tabela 3.

Um modelo multivariada foi equipado com as variáveis ​​analisadas no cenário univariada.

Quando os termos de interação foram examinados para verificar se eles melhorou significativamente o ajuste, nenhuma foi significativa, exceto para BRCA * RRM1, que deu um significado de

p

= 0,02 para o modelo sem o termo de interação (Tabela S1). O modelo multivariado foi então estratificada por RRM1 (Tabela S2) e sem estágio da doença. Neste modelo, os pacientes no menor tercil de RRM2 continuou a ter o menor risco de progressão, independentemente dos níveis de RRM1.

Os pacientes foram classificados em três grupos de acordo com risco de progressão, baseada na interação observada entre RRM1 e BRCA1. Vinte e quatro pacientes estavam no grupo de baixo risco (BRCA1 intermediário + baixo RRM1; alta BRCA1 + baixo RRM1; alta BRCA1 + RRM1 intermediário); 42 pacientes estavam no grupo de risco intermediário (baixo RRM1 baixo BRCA1 +; BRCA1 intermediário + alta RRM1; alta BRCA1 + alta RRM1); e 30 pacientes estavam no grupo de alto risco (RRM1 intermediário baixo BRCA1 +; BRCA1 intermediário + RRM1 intermediária, baixa BRCA1 + alta RRM1).

O tempo médio de progressão foi de 10,13 meses (IC 95%, 7,65 -12,62) para os pacientes do grupo de baixo risco, 4,17 meses (IC 95%, 72,90-5,44) para os pacientes no grupo de risco intermediário e 2,30 meses (IC 95%, 1,76-2,84) para doentes no alto grupo de risco (

p

= 0,001) (Tabela S2, S3; a Fig. 2).

os pacientes foram classificados em três grupos de acordo com risco de progressão, baseada na interação observada entre RRM1 e BRCA1. Vinte e quatro pacientes estavam no grupo de baixo risco (BRCA1 intermediário + baixo RRM1; alta BRCA1 + baixo RRM1; alta BRCA1 + RRM1 intermediário); 42 pacientes estavam no grupo de risco intermediário (baixo RRM1 baixo BRCA1 +; BRCA1 intermediário + alta RRM1; alta BRCA1 + alta RRM1); e 30 pacientes estavam no grupo de alto risco (RRM1 intermediário baixo BRCA1 +; BRCA1 intermediário + RRM1 intermediária, baixa BRCA1 + alta RRM1). O tempo médio de progressão foi de 10,13 meses (IC 95%, 7.65-12.62) para os pacientes no grupo de baixo risco, 4,17 meses (IC 95%, 72,90-5,44) para pacientes no grupo de risco intermediário e 2,30 meses ( IC 95%, 1,76-2,84) para os pacientes do grupo de alto risco (

p

= 0,001) (Ver também Tabelas S2, S3).

a expressão gênica e sobrevivência

na análise univariada de sobrevivência, a única variável clínica significativa foi PS (HR para PS 1-2, 1,94; IC 95%, 1,21-3,12;

p

= 0,005) (Tabela 4 ). Como valores RRM1 e RRM2 aumentou, o risco de morte aumentou: RRM1 (HR, 1,01; IC 95%, 1,00-1,02;

p

= 0,005); RRM2 (HR, 1.004; 95% CI, 1,00-1,008;

p

= 0,06). No entanto, como os níveis de BRCA1 aumentou, o risco de morte diminuiu (HR, 0,99; IC 95%, 0,96-1,03;

p

= 0,60). Quando os níveis de expressão de genes foram categorizados em tercis, foi observado o mesmo padrão de aumento do risco de morte para os níveis mais elevados de ambos RRM1 e RRM2 e níveis mais baixos de BRCA1 (Tabela 4). No modelo multivariada incluindo todas as variáveis ​​da análise univariada, apenas a PS emergiu como um fator importante para a sobrevivência (Tabela 4).

A expressão gênica e de segunda linha de tratamento

Em segundo lugar terapia -line foi administrada em 31 pacientes, 90,3% dos quais receberam quimioterapia baseada em cisplatina. Não houve diferenças nos níveis de expressão de genes entre os pacientes que receberam e os que não receberam terapia de segunda linha. O tempo para progressão para todos os 31 pacientes calculados a partir do início da terapia de segunda linha foi 3,40 meses (IC 95%, 2,73-4,07). Em contraste com o padrão observado com a terapia de primeira linha, os baixos níveis de BRCA1 foram significativamente associados com o menor risco de progressão para a terapia de segunda linha. O tempo médio de progressão foi de 6,60 meses para os pacientes no menor tercil, 2 meses para aqueles no tercil intermediário e 2,40 meses para aqueles no mais alto tercil de expressão BRCA1 (

p

= 0,004) (Tabela 5, Fig. 3). a expressão de ARNm de BRCA1 emergiu como o único factor significativo tanto no univariada e multivariada de tempo até à progressão nos 31 doentes que receberam terapia de segunda linha (Tabela 6).

Em contraste com o padrão observado com primeira linha terapia, baixos níveis de BRCA1 foram significativamente associados com o menor risco de progressão para terapia de segunda linha. O tempo médio de progressão foi de 6,60 meses para os pacientes no menor tercil, 2 meses para aqueles no tercil intermediário e 2,40 meses para aqueles no mais alto tercil de expressão BRCA1 (

p

= 0,004) (Tabela 5) . (Para mais detalhes, veja o texto.)

Discussão

O presente estudo encontrou uma correlação inversa entre a expressão do mRNA RRM2 e resposta a gemcitabina e docetaxel em pacientes com NSCLC avançado. Pacientes com baixa expressão de ARNm RRM2 atingido uma taxa de resposta significativamente mais elevada e o tempo de progressão do que aqueles com expressão elevada RRM2. Além disso, a expressão de ARNm RRM2 foi revelado como um factor preditivo para a resposta independente. Estes resultados confirmam as nossas anteriores conclusões em um pequeno grupo de adenocarcinomas do pulmão tratados com o mesmo regime de [17]. Embora os níveis medianos RRM2 foram diferentes nos dois estudos, possivelmente devido a pequenas diferenças em populações de doentes ou em alguns passos da extracção de ARN e procedimentos de PCR de quantificação, a correlação entre os níveis de mRNA e resultados clínicos foi semelhante em ambos os estudos. Curiosamente, os ratinhos transgénicos desenvolveram adenocarcinoma de pulmão, mas não outros tumores, na presença de sobre-expressão RRM2 [25]. Em estudos retrospectivos anteriores [8], [9], descobrimos que níveis elevados de RRM1 previu maior sobrevida em pacientes com NSCLC fase IV tratados com gemcitabina e cisplatina, mas não naqueles tratados com regimes baseados em cisplatina, sem gemcitabina.

a correlação significativa entre o topo tercil da expressão de mRNA BRCA1 e melhor resposta observada no presente estudo contribui para a crescente corpo de evidências de que BRCA1 é um mediador crucial de DNA danos resposta [26]. baixa expressão de BRCA1 confere sensibilidade aumentada a cisplatina [22], [23], [27], [28] e etoposido [22] e a resistência à antimicrotúbulo drogas, tais como o paclitaxel [22], [23], [28], o docetaxel [23] e vinorelbina [22], enquanto que a expressão elevada de BRCA1 conduz a resistência à cisplatina [22], [23], [27], [28] e etoposido [22] e sensibilidade ao paclitaxel [22], [23], [28], o docetaxel [23] e vinorelbina [22]. No presente estudo, os pacientes com expressão de mRNA baixo BRCA1 tinha má resposta e tempo para progressão para gemcitabina de primeira linha e docetaxel; em contraste, obtiveram o máximo benefício de um tratamento à base de cisplatina de segunda linha, atingindo um tempo médio de progressão de 6,6 meses.

Várias camadas de evidências mostram que a revogação da função BRCA1 leva a resistência a drogas antimicrotúbulo . defeitos checkpoint do fuso estão associadas com resistência aos taxanos e alcalóides de vinca. Supressão do

Mad2

ou

BubR1

no cancro da mama células tratadas com paclitaxel MCF-7 abole a função de ponto de verificação do eixo, resultando em resistência paclitaxel reforçada [29]. Além disso, a infra-regulação da expressão BRCA1 medeia a resistência paclitaxel através de inativação prematura do posto de controle do fuso em células MCF-7 através de regulação negativa da BubR1 [30].

BRCA1

disfunção está intimamente relacionado ao fuso defeitos de ponto de verificação mas não em fase G2 para alterações. De facto, um conjunto de alterações na expressão de genes devido ao knockdown de BRCA1 endógenos tem sido identificada na próstata (DU-145) e células da mama (MCF-7) de cancro por análise de DNA microarray [31]. Diversas categorias de genes são regulados negativamente em células knockdown-BRCA1, incluindo genes envolvidos na regulação da transcrição e do ciclo celular e na replicação e reparação do ADN. RNAs de interferência BRCA1 de curto (siRNAs) também causou a regulação negativa de ADN topoisomerase II alfa (TOP2A), uma enzima envolvida na replicação de ADN e em ambos o ADN de danos-responsivo barreira G2 e o ponto de controlo G2 decatenation. Este ponto de verificação requer TOP2A, ATR, WRN (de Werner helicase síndrome), e BRCA1; é defeituoso em células com mutante

BRCA1

. No entanto, em contraste com

BRCA1

linhas celulares -mutant, knockdown de tipo selvagem de BRCA1 não atenuou o ponto de verificação, mas mostrou atenuação do ponto de verificação fuso mitótico [31]. BRCA1 regula positivamente a expressão de muitos genes envolvidos no posto de controle do fuso, tais como

Bub1

e

BubR1

. Consistente com estes resultados, as células pré-tratadas com BRCA1 de siRNAs falhou para prender na metáfase após o tratamento com nocodazol [31].

Curiosamente, BRCA1 de siRNAs também causou a regulação negativa dos genes do metabolismo, incluindo o

RRM2

e

dihidrofolato redutase (DHFR)

[31]. Além disso, um gene assinatura integrada de vários modelos transgênicos de cancros epiteliais intrínsecas às funções do T-antígenos /vírus 40T Simian é composto de genes que regulam a replicação celular, proliferação e reparo do DNA. BRCA1 é sobre-expresso em três T /t-antigênica modelos de ratos transgénicos (mama, pulmão, próstata), assim como outros genes, incluindo

Bub1b

,

TOP2A

,

DHFR

,

timidilato sintase (TS)

, e

RRM1

[21].

a eficácia limitada da quimioterapia atual abordagens é sintetizado em metastático, onde o tempo até à progressão varia de 5,2 a 5,5 meses, com diferentes combinações de quimioterapia, tais como o docetaxel e cisplatina [32] ou novos compostos como pemetrexed (um inibidor de DHFR e TS) mais cisplatina [33]. Portanto, apesar da natureza retrospectivo do presente estudo, um tempo para a progressão de 10 meses em 24 de 96 pacientes no grupo de baixo risco (alta BRCA1 e níveis baixos RRM1), tratadas com docetaxel mais gemcitabina, representa um promissor novo marco que a validação méritos em um estudo prospectivo de quimioterapia personalizada. Estes achados clínicos são semelhantes aos obtidos com os inibidores da tirosina-cinase EGFR em doentes com NSCLC ancorando

EGFR

mutações. No único estudo prospectivo relatado do tratamento com gefitinib em 31 pacientes com NSCLC com

EGFR

mutações, um tempo de progressão de 9,2 meses foi atingido [34].

A partir do presente estudo, não podemos determinar se a expressão de ARNm de BRCA1, ou RRM1 RRM2 pode ter um prognóstico -, bem como uma predição – papel. Em início de carreira,, pacientes com NSCLC ressecados quimioterapia pela primeira vez, a expressão do mRNA BRCA1 foi a única variável independente de prognóstico [20]. Do mesmo modo, a expressão elevada de ARNm da proteína que interage com BRCA1 Bach1 /Brip1 foi encontrado em cancros da mama [35] agressivos. Além disso, tem sido mostrado BRCC36 estar presente no complexo de BRCA1 de RAP80 [36] e é sobre-expresso no cancro da mama, quando confere radiorresistência [37]. Isto realça a possibilidade de que BRCA1 – ou vários parceiros interactuantes -. Pode conferir mau prognóstico, bem como resistência a cisplatina ou outros agentes que danificam o ADN

Em resumo, os nossos resultados indicam que a eficácia de gemcitabina e docetaxel pode ser melhorou quando personalizado de acordo com a expressão de mRNA de BRCA1, RRM1 e RRM2. É intrigante especular que BRCA1 poderia se tornar um marcador preditivo importante para a personalização de pemetrexed e cisplatina em pacientes com baixos níveis de BRCA1, uma vez que BRCA1 poderia ser um substituto de DHFR e TS níveis [21], [31]. Estudos prospectivos de quimioterapia personalizado com base na expressão destes genes foram abertos.

Informações de Apoio

Figura S1. parcelas

caixa mostrando valores de expressão de mRNA para BRCA1, RRM1 e RRM2. Os valores numéricos exibidos em cada gráfico de caixa são valores que diferem da média. Estes valores numéricos têm a probabilidade de pertencer à distribuição desses genes

doi:. 10.1371 /journal.pone.0003695.s001

(2,25 MB TIF)

Tabela S1.

interações para tempo de progressão

doi: 10.1371 /journal.pone.0003695.s002

(0.05 MB DOC)

Tabela S2. A análise multivariada

do tempo de progressão estratificada por RRM1

doi: 10.1371 /journal.pone.0003695.s003

(0.04 MB DOC)

Tabela S3.

tempo médio de progressão estratificada por RRM1

doi: 10.1371 /journal.pone.0003695.s004

(0.04 MB DOC)

texto S1.

Boukovinas et al – BRCA1

doi: 10.1371 /journal.pone.0003695.s005

(0.04 MB DOC)