Sumário

de alto risco papilomavírus humano (HPV) dos tipos são associados com câncer cervical. Está bem estabelecido que os tipos de HPV individuais variam em oncogenicity, mas os dados atuais sobre a sua implicação prognóstica permanecem controversos. Foi examinada a associação entre tipos de HPV /espécies e a sobrevivência de 236 mulheres chinesas com idades entre 26-87 (média de 54,4) anos após ter recebido tratamento primário para câncer cervical. No geral, 45,8% eram de estágio FIGO I, 41,9% estágio II, e 12,3% estágio III. Os quatro tipos mais comuns foram HPV-16 (60,2%), HPV-18 (21,6%), HPV-52 (11,9%), e HPV-58 (9,3%). No geral, 19,5% dos pacientes tinham infecções de tipo múltiplo, 78,4% abrigava uma ou mais espécies de alfa-9, e 28,8% abrigavam um ou mais alfa-7 espécies. Após um acompanhamento médio de 8,0 anos, 156 (66,1%) pacientes sobreviveram. A taxa de sobrevida global em 3 anos foi de 75,5%. Fatores independentemente associados com uma sobrevida global de 3 anos mais pobre foram idade 60 anos, o tamanho do tumor 4 cm, comprometimento de linfonodos e tratamento com radioterapia +/- quimioterapia. A análise univariada mostrou HPV-16-type única infecção foi associada com uma sobrevida marginalmente pior específica da doença (71,6% vs. 87,0%, HR: 1,71, IC 95% = 1,01-2,90), enquanto os não-HPV-16 alfa-9 espécies foi associada com uma melhor sobrevida específica da doença (90,0% vs. 76,2%, HR: 0,36, IC 95% = 0,16-0,79). No entanto, na análise multivariada, HPV estado de infecção independentemente de diferentes métodos de agrupamento, incluindo os tipos individuais, espécies-tipo único ou co-infecção, não possuem qualquer significado prognóstico significativo. Em conclusão, não observamos qualquer associação entre a infecção com um determinado tipo de HPV /espécies e sobrevivência. Uma estratificação baseado no tipo de HPV no tratamento e plano de follow-up não poderia ser recomendado

Citation:. Lau YM, Cheung TH, Yeo W, Mo F, Yu MY, Lee KM, et al. (2015) implicação prognostica de tipos de Papilomavírus Humano e Espécies em pacientes com câncer em tratamento primário do colo do útero. PLoS ONE 10 (4): e0122557. doi: 10.1371 /journal.pone.0122557

Editor do Academic: Rui Medeiros, IPO, Instituto Português de Oncologia do Porto, PORTUGAL

Recebido: 09 de dezembro de 2014; Aceito: 22 de fevereiro de 2015; Publicação: 09 de abril de 2015

Direitos de autor: © 2015 Lau et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

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competir interesses: os autores leram a política da revista e eles têm o seguinte competindo interesses: Paul KS Chan participa em ensaios clínicos apoiados pela GlaxoSmithKline e F. Hoffmann-La Roche, e recebeu honorários como membro do conselho consultivo, e apoio de viagem para participar de conferências acadêmicas da GlaxoSmithKline. Isto não altera a adesão dos autores para PLOS ONE políticas em dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

A nível mundial, o cancro do colo do útero é o quarto câncer mais comum em mulheres com 528.000 novos casos ocorreram em 2012 [1]. Em Hong Kong, o câncer cervical é o câncer mais comum em mulheres nona com uma taxa de incidência de 10,4 por 100.000 [2]. A associação etiológica entre a infecção pelo papilomavírus de alto risco humano (HPV) tipos e câncer cervical tem sido bem estabelecida [3]. Até à data, mais de 150 tipos de HPV foram identificados, que são classificados em alfa, beta, gama, mu- e nu-gêneros; sob as quais são posteriormente agrupados em espécies e tipos [4]. tipos de HPV associados a malignidade são referidos como de “alto risco”, que inclui HPV-16, -18, -31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -68, -73 e -82. tipos “de baixo risco”, incluindo HPV-6, -11, -40, -42, -43, -44, -54, -61, -70, -72 e -81 estão associados com lesões anogenitais benignos [5, 6 ]. Vários tipos de HPV são comumente encontrados em amostras de cancro do colo do útero. No entanto, a implicação oncogênico de co-infecção permanece controverso [7-9]. As únicas características do tumor reconhecido para associar com o tipo de HPV é a maior prevalência de HPV 18 no adenocarcinoma cervical e carcinoma adeno, em comparação com carcinoma de células escamosas [10, 11].

tipos de HPV de alto risco demonstrar uma distribuição desigual em cancros cervicais, como resultado da sua diferença de oncogenicidade e, talvez, a um certo grau, a sua distribuição ethnogeographical [12]. Os oito tipos de HPV mais comuns encontrados em cancros cervicais mundial em ordem decrescente são HPV-16, -18, -33, -45, -31, -58, -52 e -35. No entanto, a variação geográfica da prevalência existe. Por exemplo, o HPV-52 e -58 são mais prevalentes em cancros cervicais asiáticos, em comparação com outras regiões [13, 14].

O prognóstico do cancro do colo do útero é afetado por estadiamento, tamanho do tumor, nó parametrial e da linfa envolvimento. Em tumores iniciais de palco, invasão linfática e invasão estromal profunda ( 10 mm ou 70% invasão) estão associados com mau prognóstico. Estudos anteriores sugerem um pior resultado para o adenocarcinoma [15-17]. Embora o potencial oncogénico dos tipos de HPV tem sido bem estabelecida, a sua significado prognóstico permanece controverso. Vários estudos descobriram que o HPV-18 confere mau prognóstico no câncer cervical estágio inicial [11, 18-20]. De Cremoux et ai. informou que tipos de HPV de alto risco foram associados com sobrevida livre de doença reduzida em comparação com os tipos de risco intermediário [21]. No entanto, o estudo de Tong et al. Não foi observada nenhuma diferença na sobrevivência global entre os de alto risco e tipos de risco intermediário [22]. Lai et ai. relatou uma melhor taxa de sobrevida em 5 anos para o HPV-58 e os tipos relacionados (HPV-52 /-33), em comparação com HPV-16 /-18 e os tipos relacionados (HPV-31 /-68) [23]. Huang et ai. informou que o HPV-31 e os tipos relacionados (HPV-33, -35 e -67) poderia prever uma melhor sobrevida [24]. Wang et al. compararam pacientes infectados somente apenas, alfa-9 espécies com alfa-7 espécies, e co-infecção com alfa-7 e 9 espécies de alfa-; e concluiu que estes grupos conferido pior, melhor e desfecho sobrevivência intermediária, respectivamente [25]. No entanto, as observações foram negativas relatado por outros [22, 26-28].

Análise no prognóstico de diferentes tipos de HPV é complicada pelo facto de que a co-infecção com tipos múltiplos é comum e pouco se sabe sobre a interacção entre os tipos de co-infectar. A prevalência muito enviesada de certos tipos de HPV, por exemplo HPV52 e HPV58, também coloca desafios. Este estudo avaliou o significado prognóstico dos tipos de HPV com foco na co-infecção e aqueles tipos, o HPV-52 e -58, comumente encontrados em nossa localidade.

Método

População do estudo

os pacientes que receberam a operação para o cancro do colo do útero no Prince of Wales Hospital entre 1997 e 2009 foram recrutados com o consentimento informado por escrito. Os prontuários foram revistos em 2012 através do Sistema de Gestão Clínica eletrônico para determinar resultados. relatórios patológicos e radiológicos foram recuperados para determinar conclusões de notas clínicas. características patológicas, incluindo estágio do tumor, o tamanho, tipo histológico e grau, parametrial, o envolvimento vaginal e linfonodo foram registrados no momento do diagnóstico. A data de tratamento primário definido o início da contagem de sobrevivência. A data do diagnóstico de recidiva por imagem, biópsia ou exame clínico definido a data de recaída. morte específica da doença foi definida como morte por câncer de colo de útero e complicações relacionadas ou toxicidade do tratamento. O estudo foi aprovado pelo comitê de ética institucional local, da Universidade Chinesa de Hong Kong Joint-Novos Territórios Médio Cluster Comitê de Ética em Pesquisa Clínica, com o número de homologação CRE-2.008,200.

detecção do HPV e digitando

tecidos tumorais congelados frescos foram coletadas por biópsia do colo do útero ou durante a operação. Os métodos de detecção e tipagem de DNA do HPV foram descritos anteriormente [14, 26]. Resumidamente, o ADN de HPV foi detectada por reacção em cadeia da polimerase (PCR) utilizando iniciadores de consenso, PGMY09 /11. espécimes de HPV-positivos foram tipificados por matriz linear de HPV Genotipagem de teste (Roche, Molecular Systems, Inc., CA). Como de acordo com as instruções do fabricante, todas as amostras que mostram uma banda positiva que pode indicar a presença de HPV52 foram confirmados por específicos de HPV52 por PCR utilizando os iniciadores M13-HPV52-PE7-F2: 5′-TGT AAA ACG ACG GCC AGT GGA GGA TAC AGA TGG TGT GG-3 ‘; M13-HPV 52-PE7-R: 5’-CAG GAA ACA GCT ATG ACC ATG AAT GCA GCC GTA GTG-3 ‘. Em vista da baixa taxa positiva de HPV-45 entre os casos de adenocarcinoma, adenocarcinoma de todas as amostras foram testadas, Além disso, por um PCR específico de HPV-45 como alvo o gene de E7 utilizando os iniciadores: 5’-CCR RGM AAC ACT GCA AGA AAT T -3 ‘e 5′-CGC GCT GGT AGT TGT GCA TGA C-3’.

tipos de HPV são agrupados de acordo com a classificação das espécies, adoptado pelo Comité Internacional para a Taxonomia de Vírus [29]. espécies de alfa-9 inclui HPV-16, -31, -33, -35, -52, -58 e -67; e alfa-7 espécies inclui HPV-18, -39, -45, -59, -68, -70 e -85.

O tratamento e acompanhamento

Os pacientes foram tratados de acordo com a o protocolo do departamento que foi constantemente atualizado de acordo com as diretrizes contemporâneas. planos de tratamento foram decididos em reuniões Tumor Board ginecológicos que consistem em gynaeoncologists, médicos oncologistas e radiação, bem como patologistas. A Federação Internacional de Ginecologia e Obstetrícia sistema de estadiamento (FIGO) foi utilizado. Em geral, o tratamento adjuvante com radioquimioterapia concomitante (CCRT) são dadas para a fase ressecado doença I-II com fatores de mau prognóstico, incluindo comprometimento de linfonodos pélvicos, doença parametrial ou margem de ressecção positiva. Pós-operatório radioterapia adjuvante (RT) por si só foi utilizado para pacientes que estavam impróprios para ou diminuiu CCRT

CCRT primário foi o tratamento para o estágio IB /IIA estágio volumoso. ( 4 cm) /estágio IIB- IVA doença ou a qualquer momento, com comprometimento dos linfonodos pélvicos. Primária RT sozinha foi uma alternativa à cirurgia para pacientes com estágio IA ou doença em estágio IIA não-volumosos que estavam impróprios para cirurgia. Primária RT sozinha foi uma alternativa de tratamento para pacientes com estágio IB /IIA volumosos ( 4cm). /Estágio IIB à doença IVA ou para aqueles com comprometimento dos linfonodos pélvicos que eram impróprios para ou recusado CCRT

Para pacientes tratadas com CCRT, semanal cisplatina 40 mg /m

2 para 6 ciclos foram administradas concomitantemente com radioterapia externa como radiosensitiser, começando um dia antes do dia-1 radioterapia. Para a radioterapia, o paciente foi submetido a um curso de irradiação externa combinada com a braquiterapia intracavitária. irradiação externa para pelve inteira foi dada em 1,8 Gy por fração, 5 vezes por semana com uma dose total de 45-54 Gy. braquiterapia intracavitária (ICB) foi administrado semanalmente por 3 doses usando a alta taxa de dose (HDR) afterloading técnica, entregando 7 Gy por fração ao ponto A. impulso parametrial adicional (normalmente 5,4-9,0 Gy mais de 3-5 frações) foi administrado com dose calculada de acordo com a fase e a tolerância do tecido normal. região para-aorta abdominal foram irradiadas se o envolvimento de linfonodo para-aórtico era suspeito.

Os pacientes tiveram a primeira visita de acompanhamento às 6 semanas pós-tratamento, e depois a cada 3 meses no primeiro ano, a cada 4 meses no segundo ano, a cada 6 meses no terceiro ao quinto ano, e anualmente a partir do sexto ano em diante. exames físicos, incluindo per-vaginal e per-rectal exame foram realizados em cada seguimento. exame de Papanicolaou e de imagem foram dispostos como clinicamente indicado.

A análise estatística

As análises estatísticas foram realizadas utilizando o Statistical Analysis System (SAS) versão 8.2. método de Kaplan-Meier foi utilizado para a análise de sobrevivência. As curvas de sobrevida foram comparadas pelo teste de log-rank. taxa de risco (HR) foi determinada por regressão de Cox na análise univariada. As variáveis ​​que apresentaram associações significativas na análise univariada foram testadas em modelo multivariado de regressão de Cox com a seleção passo a passo. Todos os valores de p foram em frente e verso. Um valor de p 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

Resultados

Um total de 271 pacientes com estágio FIGO recém-diagnosticados doenças I-IV foram recrutados, dos quais 35 foram excluídos da análise de sobrevivência por causa da doença IV etapa 21 casos, o estágio da doença I-III, mas recusou o tratamento em 10 casos, e informe médico incompleto em 4 casos. Assim, um total de 236 pacientes foram incluídos neste estudo. O banco de dados de informações clínicas é mostrada na Tabela S1.

Os 236 participantes do estudo com idades entre 26-87 (média de 54,4, 95% intervalo de confiança [CI] = 52.7-56.1) anos, com um tempo médio de acompanhamento de 8,0 (IC 95% = 7.2-8.7) anos. Sessenta e um pacientes apresentaram recidiva, com recidiva local em 6 casos, a recidiva pélvica em 7 casos, e recaída distante em 45 casos. As informações sobre o local de reincidência não estava disponível em 3 casos. A sobrevivência de 3 anos global, sobrevida livre de doença e sobrevida específica da doença foi de 75,5%, 78,5% e 79,9%, respectivamente. Houve 80 mortes no momento da análise do estudo em 2 de Abril de 2012, dos quais 57 foram relacionados ao câncer do colo do útero e 21 foram devido a outras causas. A causa da morte estava faltando em 2 casos, que foram censurados na data da morte na análise de Kaplan-Meier. Embora a idade 60 anos teve marginalmente melhor sobrevida em 3 anos em geral (78,3% vs 77,1%, p = 0,02), idade avançada teve sobrevida global mais pobres em longo prazo (Fig 1). Outras características dos pacientes do estudo são apresentados na Tabela 1.

tipos de HPV de alto risco foram encontrados em 98,3% dos tumores, enquanto que 4 (1,7%) tumores continham exclusivamente tipos de baixo risco, incluindo um caso de HPV-26, um caso de HPV-70, e dois casos de HPV-53. Os 4 tipos de HPV mais comuns foram detectados HPV-16 (60,2%), HPV-18 (21,6%), HPV-52 (11,9%) e HPV-58 (9,3%) (Tabela 2). No total, 185 (78,4%) espécimes nutria HPV das espécies alfa-9, enquanto que 68 (28,8%), continham espécies alfa-7 (Tabela 3). No geral, 190 (80,5%) amostras continham infecção do tipo single, enquanto 46 (19,5%), continham vários tipos de HPV, com 30 (12,7%) espécimes continham 2 tipos, 10 (4,2%) espécimes continham 3 tipos, 2 (0,8%) amostras continha 4 tipos, e 4 (1,7%) espécimes continha 5 tipos. Co-infecção taxa de HPV-16, HPV-18, HPV-52, HPV-58 contendo tumores foram 24,6%, 41,0%, 60,7% e 54,5%, respectivamente.

univariada análise

Seis características clínico-patológicas, incluindo a fase FIGO, tamanho 4 cm, envolvimento parametrial, o envolvimento vaginal, comprometimento de linfonodos e modalidade de tratamento primário, foram significativamente associados com todos os parâmetros de sobrevivência, incluindo a sobrevivência de 3 anos global, sobrevida específica da doença de 3 anos e sobrevida livre de doença de 3 anos por análise univariada ( tabela 4).

os tumores abrigando a infecção pelo HPV de tipo único exibiu uma sobrevida livre de doença de 3 anos mais pobre em comparação com aqueles com vários tipos (76,1% vs. 88,8%), mas a diferença foi apenas na margem de significância estatística (p = 0,05, HR = 0,44, IC 95% = 0,19-1,02) (Tabela 5). HPV-16 (infecção single) foi associado a uma pior sobrevida de 3 anos específica da doença (71,6% vs. 87,0%, p = 0,04, HR = 1,71, IC 95% = 1,01-2,90). A presença de não-HPV-16 alfa-9 espécies foi associada com uma melhor sobrevida em 3 anos específica da doença (90,0% vs. 76,2%, p = 0,01, HR = 0,36, IC 95% = 0,16-0,79) e 3 sobrevivência year livre de doença (87,1% vs. 75,3%, p = 0,02, HR = 0,45, 95% CI ,22-,91). HPV-18 sozinho ou co-infectados com outros tipos que não conferia uma diferença significativa na sobrevida.

A análise multivariada

características clínicopatológicos que mostram uma associação significativa com qualquer parâmetro de sobrevivência no univariada análise foram testados no modelo multivariada por regressão de Cox com a seleção passo a passo. Além disso, foram adicionados status de infecção por HPV selecionados individualmente para o modelo multivariada, incluindo: (i) o HPV-16, -18, -52, -58 estado de infecção classificadas em matéria de tipo simples ou co-infecção; (Ii) agrupados em alfa-7 e -9 espécie.

Quatro características clinicopatológicas foram encontrados para ser fatores prognósticos independentes para a sobrevida global de 3 anos mais pobres, incluindo participação do nó (i) linfático (HR = 4.17, IC95% = 2,51-6,94); (Ii) o tamanho 4 cm (HR = 1,83, 95% CI = 1,11-3,02); (Iii) a idade 60 anos (HR = 2,53, 95% CI = 1,49-4,29); e (iv) a radioterapia /chemoradiation vs. cirurgia +/- adjuvante (HR = 2,89, IC 95% = 1,30-6,45). Além disso, comprometimento de linfonodos (HR = 4,19, 95% CI = 2,45-7,16), o tamanho do tumor (HR = 2,03, 95% CI = 1,12-3,68) e modalidade de tratamento (HR = 2,77, 95% CI 1,15-6,69) foram fatores prognósticos independentes para sobrevida específica da doença. Considerando que, comprometimento dos linfonodos (HR = 4,23, IC 95% = 2,54-7,05) e modalidade de tratamento (HR = 2,87, IC = 1,45-5,71 95%) foram fatores prognósticos independentes para sobrevida livre de doença. No entanto, a infecção com diferentes tipos de HPV, independentemente do agrupamento de métodos, não foi preditiva de sobrevida global, sobrevida específica da doença ou sobrevida livre de doença no modelo multivariado.

Discussão

A distribuição de tipos de HPV observados neste estudo é consistente com relatos anteriores de que maior prevalência de HPV-52 e HPV-58 são encontrados na Ásia e partes da China [13, 14, 30, 31]. De nota, 21,2% dos nossos casos foram adenocarcinoma eo carcinoma adeno em que HPV18 constituíam uma grande parte. Nós não poderíamos observar qualquer associação independente entre os tipos de HPV mais prevalentes (HPV-16, -18, -52 e -58) com a sobrevida pós-tratamento em pacientes com câncer cervical. Embora, análise univariada sugerem que o HPV-16 pode prever uma sobrevivência mais pobres, esta associação não pôde ser confirmada no modelo multivariado. Da mesma forma, não-HPV-16 alfa-9 espécie como um grupo foi associada com uma melhor sobrevivência específica da doença de 3 anos em análise univariada, mas não na análise multivariada. Considerando que, para outros tipos comuns de HPV (HPV-18, -52 e -58), não houve associação significativa pôde ser observado até mesmo na análise univariada. Nossos resultados estão em linha com as observações negativas relatadas por Pilch et al. [26], Zampronha Rde et ai. [27], e Ikenberg et ai. [28], mas são ao contrário de outros. Wang et al. analisou 1010 pacientes com cancro do colo do útero foram submetidos à radioterapia primária, e demonstrou uma melhor sobrevivência para alfa-9 espécies em comparação com alfa-7 espécies, enquanto co-infecções de alfa-9 e alfa-7 espécies foram encontrados para ter uma sobrevida intermediária [25]. Embora tenhamos observado uma melhor sobrevivência para alfa-9 espécies, a associação não pôde ser confirmada no modelo multivariado. Lai et ai. estudados 1067 doentes com cancro do colo do útero estágio inicial que se submeteram à cirurgia primária, e mostrou que o HPV-18 positividade foi um preditor independente de recidiva [11]. Burger et ai. examinou 171 estágios I e II, os doentes submetidos a cirurgia primária, e relatou que o HPV-18 foi um fator prognóstico pobre [18]. No presente estudo, observou-se um prognóstico um pouco melhor para o HPV-18, mas as diferenças não foram estatisticamente significativos, mesmo na análise univariada.

Nós tentamos analisar a implicação prognostica de infecções do tipo múltipla como um todo, bem como subgrupos de acordo com a presença dos quatro tipos mais comuns de HPV-16, -18, -52 e -58. Como, de acordo com estudos anteriores, nenhuma associação independente significativa pôde ser demonstrada [11, 24, 25].

Para o melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro estudo sobre a associação entre a infecção pelo HPV e sobrevivência em Hong Kong em que o HPV-52 e HPV-58 são mais prevalentes. Foi utilizado um método sensível capaz de detectar uma ampla gama de tipos de HPV, bem como co-infecções, o que permite uma análise aprofundada sobre diferentes estados de infecção. Além disso, a duração suficiente de seguimento fornece força substancial para o estudo. No entanto, temos limitações. Por exemplo, o número de sujeitos do estudo foi relativamente pequeno, especialmente para não-HPV-16 tipos, bem como a natureza retrospectiva da coleta de dados pode representar preconceitos. A razão para observações diversas entre os estudos não é clara. A maioria dos estudos apenas foram capazes de comparar um tipo comum, muitas vezes de HPV-16 /-18, com um grupo heterogéneo de diferentes tipos de HPV, em que a composição varia geograficamente. Outra questão inexplorada é se a associação com pior sobrevida relatado em algumas localidades pode ser devido à circulação de variantes com maior oncogenicity e conferindo assim uma maior chance de recorrência. Além disso, fatores genéticos, tais como polimorfismos de HLA, que variam com grupos éticos, podem influenciar a susceptibilidade ao câncer do colo do útero, bem como os resultados clínicos após a infecção com certos tipos de HPV [32-36].

Em conclusão, não observaram qualquer valor prognóstico do tipo de HPV para pacientes chineses de Hong Kong que recebem tratamento primário para câncer cervical. Risco tratamento estratificada ou estratégia de seguimento com base no tipo de HPV não pode ser recomendada.

Informações de Apoio

Tabela S1. banco de dados de informações clínicas dos sujeitos do estudo

doi:. 10.1371 /journal.pone.0122557.s001

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