Abstract

Neste estudo, HPRP-A2, um sintético 15-mer peptídeos catiônicos com todos os D-aminoácidos, que inibia eficazmente a sobrevivência das linhas de células gástricas de um modo dependente da dose. células tumorais gástricas matando pelo HPRP-A2 envolve um rápido colapso da integridade da membrana e vias intracelulares. iodeto de propídio (PI) e os ensaios de lactato desidrogenase (LDH) demonstrou que o tratamento de uma hora com HPRP-A2 conduziu a alterações da permeabilidade da membrana de células BGC-823 de uma forma dependente da dose. Além disso, HPRP-A2 apoptose induzida em células BGC-823 envolve um aumento significativo na geração de espécies reactivas de oxigénio (ROS), caspase-3, -8 e -9 activação, uma redução do potencial de membrana mitocondrial (MMP), e ciclo celular prisão em fase G1. Em adição à sua citotoxicidade inerente, HPRP-A2 sinergia fortemente com doxorubicina (DOX) para aumentar a eficácia de matar células de tumor gástrico in i

n vitro

. Acreditamos que HPRP-A2, com todos os D-aminoácidos pode ser um candidato potente de agentes terapêuticos anti-cancro, especialmente na terapia de combinação

citação:. Zhao J, X Hao, Liu D, Huang Y, Chen Y (2015 )

In vitro

Caracterização da rápida citotoxicidade do Anticancer Peptide HPRP-A2 através da membrana Destruição e Mecanismo intracelular contra linhas celulares de cancro gástrico. PLoS ONE 10 (9): e0139578. doi: 10.1371 /journal.pone.0139578

editor: Aamir Ahmad, Escola de Medicina da Universidade Estadual Wayne, United States |

Recebido: 02 de julho de 2015; Aceito: 15 de setembro de 2015; Publicação: 30 de setembro de 2015

Direitos de autor: © 2015 Zhao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel

Financiamento:. Este estudo foi apoiado pela National Science Foundation Natural da China (No. 81.373.445, YXC e No. 21.442.001, YBH) e da Fundação de Ciência Natural da província de Jilin (No. 20150101189JC , e No. YC 20140101042JC, YBH). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

nas últimas décadas, apesar de avanços foram alcançados no desenvolvimento de terapias contra o câncer, resistência e toxicidade não específica de medicamentos convencionais ainda são questões garrafa-pescoço para práticas clínicas potenciais [1-3]. Por isso, é urgentemente necessário para desenvolver novos medicamentos com diferentes modos de ação que pode superar as deficiências de muitas drogas disponíveis.

Atualmente, as aplicações potenciais de peptídeos anti-cancerígenos (ACPs) como agentes terapêuticos para o tratamento do cancro progressão atrair mais atenção do que a quimioterapia convencional, principalmente por causa das propriedades seguintes: (1) especificidade elevada. Os péptidos carregados positivamente atingir selectivamente as células cancerosas que carregam cargas negativas e que têm diferentes componentes de membrana a partir de células normais [4, 5]; (2) novo modo de acção. Pode evitar estabelecidos mecanismos de multirresistência [5-7]; (3) efeito anticancerígeno sinérgico com quimioterápicos. Tem sido relatado que pode produzir certas ACPs actividade anti-cancro sinérgico quando utilizado com diferentes drogas anticancro convencionais [8-10] combinada.

O mecanismo geral de morte celular induzida por péptido é ruptura da membrana citoplasmática através micelização ou a formação de poros , embora alguns dos ACPs são relatados para desencadear apoptose através da via do receptor de morte e /ou a via mitocondrial [8, 11]. Além disso, a formação de poros na membrana celular e a alteração da permeabilidade da membrana pode proporcionar uma melhor canal para a entrada de outras drogas anti-cancro nas células e melhorar as suas actividades anti-cancro [8, 12].

O nosso estudo anterior provou que HPRP-A2 pode induzir a morte celular e, simultaneamente, melhorado DOX /epirubicina (PAI) induzida por apoptose em linhas de células HeLa e HepG2 [12]. Além disso, devido à composição do D-aminoácido, HPRP-A2 é resistente à clivagem proteolítica e retém actividades anticancro equivalentes aos seus enantiómeros L [6, 12]. Com base nos estudos anteriores, nos propomos cumprir dois objetivos neste estudo: a delinear o mecanismo anticancerígeno subjacente de HPRP-A2 e investigar o efeito anticancerígeno sinérgico na BGC-823 e as células SGC-7901 quando combinado HPRP-A2 com DOX.

Materiais e Métodos

linhas de células e cultura de células

linhas celulares de cancro gástrico humano BGC-823 e SGC-7901 foram obtidos a partir da American Type Culture Collection, que autentica o celular linhas de teste de ADN de repetição de curto em tandem, foram usadas dentro de 6 meses após a reanimação e cultivadas em DMEM com soro fetal de bovino (FBS; 10% v /v), penicilina (100 U /ml) e estreptomicina (100 U /ml) numa atmosfera húmida a 37 ° C com 5% de CO

2.

a síntese peptídica e purificação

o péptido foi sintetizado por síntese de péptidos em fase sólida, utilizando Fmoc (9-fluorenil química -methoxycar-bonyl) tal como descrito anteriormente [13]. A caracterização adicional foi detectado por espectrometria de massa e análise de aminoácidos. DOX-HCl foi comprado de Meilun Biology Technology Co., Ltd. (Dalian, China).

ensaios de viabilidade celular

BGC-823 e as células SGC-7901 (5 × 10

3) foram plaqueadas em triplicado em placas de microtitulação de 96 poços. O meio completo foi substituído após 24 h com 100 ul de meio fresco contendo várias concentrações de drogas. Após mais 24 h, as células foram incubadas com 3- (4,5-dimetil-2-tiazolil) -2,5-difenil-2H-tetrazólio (MTT) a 37 ° C durante 4 h. Em seguida o dimetilsulfóxido (DMSO) foi adicionado para dissolver os cristais de formazano e a absorvância a 492 nm foi medida com um leitor de microplacas (GF-M3000; Gaomi Caihong Analytical Instruments Co., Shandong). Jin fórmula foi utilizada para quantificar o efeito sinérgico adicional do tratamento de combinação de HPRP-A2 e DOX. A fórmula é: Q = Ea + b /(Ea + Eb-Ea × Eb), onde Q é o índice de combinação; Ea + b representa a taxa de inibição da proliferação celular do fármaco combinada; EA e EB são sinais da taxa de inibição da proliferação celular de cada droga. Após o cálculo:. Q 0,85, Q 1,15 e 0,85 Q 1,15 indicam antagonismo, sinergia e efeito aditivo, respectivamente [14]

análise

atividade hemólise ensaio

atividade hemólise foi realizada como descrito anteriormente [13]. Para obter as células vermelhas do sangue, sangue humano fresco estabilizado com EDTAK foi centrifugado a 1000 rpm durante 5 minutos, foram lavadas duas vezes com PBS e diluídas para uma concentração final de 2% em PBS. 70 ul de 2% de eritrócitos humanos foram adicionados a uma placa de 96 poços de fundo redondo, seguindo-se 70 ul de diferentes concentrações de HPRP-A2. Após incubação a 37 ° C durante 1 h, a placa foi depois centrifugada a 3000 rpm durante 10 min e 90 ul de sobrenadante foram transferidos para uma placa de 96 poços de fundo plano. A libertação de hemoglobina foi determinada através da medição da absorvância do sobrenadante a 540 nm. Os eritrócitos em PBS e água destilada (dH

2O) foram utilizados como controlos negativos e positivos, respectivamente. A actividade hemolítica foi calculada como a percentagem de um grupo experimental e de controlo positivo, após subtracção do controlo negativo, respectivamente. Os dados são a média ± DP de três experiências independentes.

ensaio PI

células BGC-823 (1 × 106 células /poço) foram semeadas em placas de seis poços. Após incubação com HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) durante 1 h, as células foram recolhidas e depois tratou-se com 5 ug /ml de PI a 4 ° C durante 10 minutos no escuro. As células foram lavadas com PBS por três vezes e, em seguida, detectar a intensidade de fluorescência de PI utilizando citometria de fluxo (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San José, CA, EUA).

libertação de LDH

a libertação de LDH a actividade foi medida pelo kit de ensaio de LDH (Jiancheng Bioengineering, Ltd., China) de acordo com as instruções dos fabricantes. Células BGC-823 foram semeadas a 5 x 10

3 células /cavidade em uma placa de 96 poços. Após incubação com HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) durante 1 h, a libertação de LDH no sobrenadante foi medida com um leitor de microplacas (GF-M3000; Gaomi Caihong Analytical Instruments Co., Ltd. Shandong, China) 450 nm. As células sem o tratamento ou lisadas com Triton X-100 foi utilizado como controlos negativos e positivos, respectivamente. Todas as experiências foram realizadas em triplicado. A actividade da LDH foi calculada como a percentagem de um grupo experimental e de controlo positivo, após subtracção do controlo negativo, respectivamente.

ROS ensaio

ROS kit de ensaio (BestBio, Co. Xangai, China) foi usada para detectar a geração de ROS. As células (1 x 106) foram tratados por HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) durante 1 hora. Os procedimentos subsequentes foram realizados de acordo com o protocolo do fabricante. Em resumo, as células digeridos por tripsina foram centrifugadas a 1500 rpm durante 3 minutos, lavadas três vezes com PBS e, em seguida, suspenso em 500 ul de PBS. Após incubação com 2 ‘, 7’-diacetato dichlorofluorescin (DCFH-DA) sonda fluorescente durante 20 min a 37 ° C, as células foram lavadas com PBS por três vezes e detectada a intensidade da fluorescência verde (em GEOMEAN) por citometria de fluxo. A intensidade de fluorescência verde foi positivamente correlacionada com o nível de ROS.

Medição da MMP

MMP foi determinada pelo kit de ensaio de potencial de membrana mitocondrial com 5,5 ‘, 6,6’-tetracloro -1,1 ‘, 3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodeto (JC-1), que é uma sonda de actividade mitocondrial (BestBio, Co., Xangai, China). JC-1 é sempre utilizado para detectar a despolarização mitocondrial que ocorre nas fases iniciais de apoptose. Quando as células com alta de MMP, JC-1 reunidos na matriz mitocondrial, formando J-agregados e produzir fluorescência vermelha. Por outro lado, as células que contêm JC-1 monômero monômero monomermonomer têm baixa MMP e mostrar fluorescência verde. despolarização mitocondrial foi determinada por uma diminuição no vermelho (590 nm, canal FL-2) /verde (530 nm, FL-1 canal) rácio de intensidade de fluorescência. Resumidamente, após o tratamento com HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) durante 1 h, as células BGC-823 foram recolhidas e incubadas com 0,5 ml de JC-1 solução durante 20 minutos a trabalhar a 37 ° C, depois lavadas duas vezes com PBS, suspensas em PBS, e analisadas por citometria de fluxo (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San José, CA, EUA).

a actividade da caspase ensaio

As células foram tratadas com HPRP-A2 (10, 15 ? M) durante 24 h e então os níveis de atividades caspase foram medidos utilizando os kits de detecção de atividade da caspase correspondentes (BestBio, Co., Shanghai, China), de acordo com as instruções dos fabricantes. Média de dados são apresentados como a média ± DP de pelo menos três experiências independentes.

ciclo celular análise

BGC-823 células (1 × 10

6) foram semeadas em placas de 6 poços placas durante 24 h. Após indução com HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) durante 24 h, a distribuição do ciclo celular foi determinada por um citómetro FACScan e software celular Quest (FACS Calibur, Becton-Dickinson, San José, CA, EUA). Todos os experimentos foram realizados em triplicado.

A análise estatística

Os dados são apresentados como médias ± SD de três determinações independentes. significância estatística das diferenças entre os grupos foram analisadas pelo

t

-teste, com significância aceito em

P Art 0,005 (*) e

P Art 0,001 (**).

Resultados

Peptide e citotoxicidade

Como mostrado na Figura 1, peptide HPRP-A2 fica a 15 resíduos de α-helicoidal anfipática da membrana-ativo péptido composto por todos os D-aminoácidos. Comparando-se a toxicidade selectiva do HPRP-A2 em relação a células de cancro gástrico e as células normais (células vermelhas do sangue humano), pode-se facilmente verificar que o IC

50 (a concentração de droga em que a viabilidade celular foi reduzida em 50% em comparação com o não tratado células) valores são muito menos do que a concentração mínima hemolítica (a concentração de droga que resultou em 20% de hemólise de células) da HPRP-A2. Estes resultados indicaram que HPRP-A2 pode matar selectivamente as células cancerosas gástricas e poupar as células normais (Figuras 2 e 3). Similar actividades anticancro das duas linhas de células (BGC-823 e SGC-7901) indicaram que houve um efeito de largo espectro na acção anti-cancro de HPRP-A2. Devido à sua característica de membrana-activo, HPRP-A2 mostra o potencial terapêutico anti-cancro uma vez que é mais selectivamente tóxica para as células tumorais do que as células normais.

As células foram tratadas com diferentes concentrações de HPRP-A2 para 1 hora. A viabilidade celular foi determinada utilizando o método de MTT. Os resultados são expressos como percentagem do controlo ± desvio padrão de três experiências independentes. A análise estatística comparou o grupo de tratamento HPRP-A2 com os grupos de controlo (* P 0,005; ** P 0,001).

Os pontos de dados presentes média ± S.D. de três experiências independentes. DH2O PBS e foram utilizadas como controlos negativos e positivos, respectivamente. A análise estatística comparou o grupo de tratamento HPRP-A2 com os grupos de controlo positivo (* P 0,005; ** P 0,001)

HPRP-A2 induziu o aumento da membrana permeabilidade

.

de forma a verificar a alteração da permeabilidade da membrana, após incubação com HPRP-A2, a absorção celular de PI e libertação extracelular de LDH foram investigadas com citometria de fluxo e leitor de microplacas para células BGC-823. Como mostrado na Fig 4, os gráficos de citometria de fluxo da PI mover-se gradualmente na direcção de uma elevada intensidade de fluorescência de um modo dependente da concentração, e o aumento da libertação de LDH foi também observada nas células incubadas com HPRP-A2. Isto quer dizer, HPRP-A2 poderia provocar o dano da membrana celular e resulta no aumento da permeabilidade da membrana celular.

As células foram incubadas com concentrações crescentes de péptidos durante 1 h a 37 oC. (A) comparações quantitativas de intensidade de fluorescência (em GEOMEAN) a várias concentrações, foram analisadas por citometria de fluxo. (B) de LDH no sobrenadante foi medida com um leitor de microplacas a 450 nm. As células sem o tratamento ou lisadas com Triton X-100 foi utilizado como controlos negativos e positivos, respectivamente. A actividade da LDH foi calculada como a percentagem de um grupo experimental e de controlo positivo, após subtracção do controlo negativo, respectivamente (* P 0,005). Os dados são a média ± DP de três experiências independentes.

HPRP-A2 causou os danos da função mitocondrial

As espécies reativas de oxigênio intracelulares de libertação (ROS) e potencial de membrana mitocondrial (MMP ) foram detectados com FACS para refletir a função de mitocôndrias de células BGC-823

in vitro

. Como mostrado na Fig 5A, o histograma de citometria de fluxo das células incubadas com maior concentração de HPRP-A2 revelou uma maior intensidade de fluorescência, após incubação durante 1 h. A citometria de fluxo quantitativa correspondente comparação da intensidade de fluorescência em GEOMEAN para estas diferentes concentrações mostrou uma tendência semelhante, ou seja, que o aumento da libertação de ROS nas células BGC-823 na presença de HPRP-A2 era dependente da concentração. Semelhante dependente da concentração tendência de mudança também foi observado na Figura 5B, a proporção de FL2-H /FL1-H marcadamente diminuída, indicando uma despolarização da MMP.

(A) células BGC-823 foram tratadas durante 1 h e a geração de espécies reactivas de oxigénio (ROS) foi analisada por FACS para comparar quantitativamente a intensidade de fluorescência (em GEOMEAN) em várias concentrações. (B) Depois de 1 h de tratamento, a proporção de FL2-H /FL1-H diminuiu, indicando uma redução de MMP. células (C) BGC-823 foram tratadas com HPRP-A2 (10 e 15? M) durante 24 h e, em seguida, os níveis de actividade de caspase foi medida. Os dados são expressos como média ± DP de três experiências independentes. A análise estatística comparou o grupo de tratamento HPRP-A2 com os grupos de controlo (* P 0,005; ** P 0,001).

ativação Caspase e ciclo celular análise

Ativação de caspase-3, -8 e -9 em células induzidas por HPRP A2 foi medida utilizando um leitor de microplacas com um a 405 nm. Como mostrado na Fig 5C, caspase-3, -8 e -9 foram todos aumentado após o tratamento com HPRP-A2, durante 24 h em células BGC-823, o que sugere que a indução da apoptose pela HPRP-A2 pode ser dependente de caspase . Como mostrado na Figura 6, as células BGC-823 tratadas com os diferentes concentrações de HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) durante 24 h resultou no aumento da prisão sub-G1 e paragem em G1. Estes resultados também reforçou o aumento da actividade da caspase-3, após o tratamento de HPRP-A2.

distribuições do ciclo celular após o tratamento com 5, 10 e 15 μΜ HPRP-A2, durante 24 h separadamente foram detectados por citometria de fluxo. distribuições de ciclo celular foi avaliado por coloração com PI. Os resultados foram apresentados de uma das três experiências com resultados semelhantes.

aumento induzido por HPRP-A2 em DOX citotoxicidade

foram selecionados células

BGC-823 e SGC-7901 para estudar o efeito anticancerígeno sinérgica de HPRP-A2 e quimioterápico DOX. As células foram tratadas com HPRP-A2 (6 uM) e /ou Dox (1,6 ug /ml) durante 4, 24 e 48 h. ensaios MTT foram utilizados para avaliar os efeitos anti-cancerígenos nas células de combinações. As concentrações de fármaco seleccionado neste estudo foram baseadas na IC

50 valores de cada fármaco isoladamente. Não houve redução citotoxicidade ou o crescimento evidente quando cada droga foi usada sozinha. Em contraste, quando usado em combinações de péptidos /fármaco (HPRP-A2 /DOX) com as mesmas doses de ser usado sozinho, a combinação exibiram citotoxicidade significativa (Figura 7). É também evidente que a actividade anti-cancro de HPRP-A2 não foi muito afectado pelo tempo de incubação; Em contraste, com o aumento do tempo de incubação de 48 h, DOX mostra muito maior actividade anti-cancro do que o de 4 horas, indicando os dramaticamente diferentes mecanismos de acção entre ACP e fármaco quimioterapêutico. De acordo com a fórmula do Jin, todos os valores de (índice de combinação) Q foram maiores do que 1,15, o que indica a existência de efeitos sinérgicos significativas entre o péptido α-helicoidal HPRP-A2 e o fármaco anticancerígeno convencional DOX em BGC-823 e células SGC-7901 .

Painel (a, B e C) representa a inibição do crescimento em BGC-823 e células SGC-7901 com uma combinação de HPRP-A2 (6 uM) e DOX (1,6 ug /ml), após incubação durante 4 , 24 e 48 horas, respectivamente. Os resultados são expressos como a percentagem do controlo ± desvio padrão de três experiências independentes. O painel D mostra o índice de combinação (Q) do tratamento de combinação de HPRP-A2 e de DOX, em que Q 0,85, Q 1,15 e 0,85 Q 1,15 indicam antagonismo, sinergia, e um efeito aditivo, respectivamente. A análise estatística comparou o grupo de tratamento de combinação com os grupos DOX (* P 0,005; ** P 0,001)

Discussão

peptídeos anticancerígenos (ACPs) recentemente recebeu. grandes atenções como agentes quimioterapêuticos promissores, que evitam as desvantagens de drogas actuais. Muitos estudos têm verificado que alguns péptidos catiónicos sintéticos e naturais possuem um espectro amplo e rápida de actividade anti-cancro em relação a células tumorais, em vez de células normais, tais como as células vermelhas do sangue humano [4, 15]. Além disso, os ACP foram também verificados para ter capacidade de superar o mecanismo de multirresistência às drogas, e os efeitos sinérgicos no tratamento de combinação [11].

HPRP-A2 possui um espectro rápido e amplo da atividade anticancerígena, no entanto, algumas diferenças também ocorrem na sensibilidade do HPRP-A2 para diferentes linhas de células. Com base nas diferentes IC

50 valores para HPRP-A2 para BGC-823 (8,65 ± 0,38 mM), SGC-7901 (10,42 ± 0,30 mM), PC3 (21,38 ± 0,56 mM) e B16 (19,16 ± 0,38 mM ), o escolheu BGC-823 e as células SGC-7901 como alvos de investigação. Além disso, as actividades anti-cancro de HPRP-A2 para outras linhas de células de cancro, tais como células HeLa e HepG2 foram publicados no nosso trabalho anterior [12]. Ambos BGC-823 e as células SGC-7901 pertencem a linhagens de células gástricas, assim, selecionamos BGC-823 como um exemplo para investigar o mecanismo anticancerígeno de HPRP-A2

in vitro

.

neste estudo, demonstrámos que HPRP-A2 é um péptido anfipático em hélice α com actividade anticancerígena significativa de linhagens de células SGC-7901 BGC-823 e. Os nossos estudos indicaram que HPRP-A2 exibiram uma toxicidade cancro selectivo, principalmente porque as células cancerosas que são compostas de mais fosfolípidos aniónicos e contêm mucina O-glicosilada, o que aumenta a carga negativa na superfície da célula do cancro [16, 17]. Além disso, mais microvilosidades nas células cancerosas podem aumentar a concentração de péptido de ligação por meio da expansão da superfície da membrana e, assim, exibir citotoxicidade mais forte contra membranas de células de cancro [11, 18].

ACPs são capazes de perturbar a membrana celular, o que pode causar alterações da permeabilidade da membrana celular. Neste estudo, a alteração da membrana da célula BGC-823 foi observada por detecção de PI-permeabilização e a libertação de LDH. Os aumentos graduais de PI permeabilização e liberação LDH estão em maneiras dependentes da concentração após o tratamento com HPRP-A2. Além disso a morte celular, induzida HPRP-A2-se associado com a geração de espécies reactivas de oxigénio, a despolarização da MMP, a activação das actividades de caspase e o bloco em fase G1 do ciclo celular.

Para além da citotoxicidade de HPRP-A2, que provou que poderia aumentar a eficácia da DOX contra BGC-823 e as células SGC-7901, o que é consistente com o nosso estudo anterior. Em nosso estudo anterior, temos explorado terapia antineoplásica combinacional usando peptídeos α-helicoidais HPRP-A1 e HPRP-A2 com as drogas químicas DOX e do PAV, em linhas de células HeLa e HepG2 [12]. A sinergia mostrado permite que os usos de concentrações relativamente baixas de peptídeos e drogas para conseguir efeitos anticancerígenos significativas

in vitro

e

in vivo

. Esta redução da dose minimiza os efeitos secundários da droga sobre as células normais e permite um efeito anti-cancro eficaz mediada por apoptose. Nosso presente estudo tem implicações em que HPRP-A2 pode tornar-se um agente terapêutico anticancerígeno promissor com alta seletividade anticâncer e forte efeito sinérgico em terapia de combinação. Os nossos estudos mostram principalmente o mecanismo de morte celular induzida por HPRP-A2 e pode ser útil na concepção de agentes quimioterapêuticos contra linhas de células gástricas.

Conclusões

HPRP-A2 mostra actividade anticancerígena forte para BGC- 823 e SGC-7901 linhas celulares e baixa toxicidade contra células vermelhas do sangue humano. HPRP-A2 cancro morte celular induzida tanto por meio de efeito directo membrana destrutiva e mecanismos intracelulares, incluindo um aumento dramático em caspase-3, -8 e -9 activação, uma redução do potencial de membrana mitocondrial (MMP), e a geração de ROS e paragem do ciclo celular em G1. Além disso, HPRP-A2 synergized fortemente com DOX para aumentar a eficácia de matar células tumorais gástricas

in vitro

. Nossos resultados sublinham o amplo potencial anticancerígeno de HPRP-A2 e elucidar seu mecanismo de ação. Acreditamos que dotando ACPs com propriedades mais eficazes e de metas de tumor abrirá novas maneiras de combater o câncer com sucesso.