Sumário
progressão resistente à castração de câncer de próstata após terapias de privação de andrógenos continua a ser o desafio mais crítico no manejo clínico de câncer de próstata. receptor de androgénio Ressurgente (AR) a actividade é um condutor estabelecido de progressão resistente à castração, e regulação positiva do AR de comprimento completo (AR-FL) e as variantes de AR splicing constitutivamente activas (AR-VS) tem sido implicado de contribuir para o ressurgimento atividade AR. Nós relatado anteriormente que ginsenoside 20 (S) -protopanaxadiol-aglicona (PPD) pode reduzir a abundância de ambos AR-FL e AR-Vs. No presente estudo, mostrou ainda que o efeito de PPD em genes de expressão e alvo AR era independente de androgénio. PPD tratamento resultou numa supressão de transactivação AR independente do ligando. Além disso, PPD retardada recrescimento resistente à castração dos tumores de xenoenxertos de LNCaP após a privação de androgénio e inibiu o crescimento de tumores de xenoenxerto 22Rv1 resistente à castração com expressão endógena do AR-AR-FL e Vs. Isto foi acompanhado por uma diminuição nos níveis de antigénio específico da próstata no soro, bem como uma diminuição dos níveis de AR e mitoses nos tumores. Notavelmente, os tumores de xenoenxerto 22Rv1 eram resistentes à inibição do crescimento pela próxima geração enzalutamida anti-androgénio. O presente estudo representa o primeiro a mostrar a eficácia pré-clínica de PPD em inibir a progressão e o crescimento do cancro da próstata resistente à castração. Os resultados fornecem uma base racional para desenvolver ainda mais PPD ou seus análogos para a terapia do cancro da próstata
Citation:. Cao B, Qi Y, Yang Y, Liu X, Xu D, Guo W, et al. (2014) 20 (S) -Protopanaxadiol inibição da progressão e crescimento do cancro da próstata resistente à castração. PLoS ONE 9 (11): e111201. doi: 10.1371 /journal.pone.0111201
editor: Jindan Yu, da Universidade Northwestern, Estados Unidos da América
Recebido: 24 de junho de 2014; Aceito: 23 de setembro de 2014; Publicação: 06 de novembro de 2014
Direitos de autor: © 2014 Cao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel
Financiamento:. Este trabalho foi financiado pelo National Cancer Institute do National Institutes of Health conceder R01CA188609, Departamento de Defesa concede W81XWH-12-1-0112 e W81XWH-12- 1-0275, National Science Foundation Natural de Projetos de China 81272851, 30973587, 81102383, 81302206 e 81430087, Louisiana Board of-Regents Grant LEQSF (2012-15) -RD-A-25, Research Fund Consortium Cancer Louisiana, Câncer Tulane Fundo Developmental center, e Escola de Fundo piloto Medicina e Fundo Ponte Universidade de Tulane. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
terapia de privação de andrógeno, o que perturba receptor de andrógeno (AR) a sinalização através de antagonistas de castração ou AR, é o tratamento de primeira linha para câncer de próstata disseminada. No entanto, a progressão para a fase presentemente incurável, denominado cancro da próstata resistente à castração (CRPC), ocorre invariavelmente [1]. actividade AR Ressurgente é estabelecido um controlador de fracasso terapêutico e resistente à castração progressão [2], [3]. O cancro da próstata pode adaptar-se a terapia de privação de androgénio por mutação AR, amplificando /sobre-expressam AR, upregulating variantes AR splicing constitutivamente activos (Ar-Vs) que não possuem o domínio de ligação ao ligando, activando AR por mecanismos independentes de androgénios e /ou aumentando intra os níveis de andrógenos -tumoral através de
de novo
andrógeno síntese [4] – [17]. Como consequência, AR é reativado no CRPC embora o tumor não é mais sensível à terapia de privação de andrógeno.
Várias novas drogas que alvejam AR reativação no CRPC têm sido desenvolvidos, e dois deles foram aprovados pelo FDA para tratamento da CRPC metastático,
ou seja
, o abiraterona andrógeno biossíntese inibidor eo potente antagonista do AR enzalutamida [18], [19]. Eles anunciou uma nova era da terapia de câncer de próstata. No entanto, muitos pacientes apresentaram doença resistente à terapêutica, e respondedores mais iniciais desenvolveram resistência dentro de meses após o início da terapia, novamente acompanhado de antígeno específico da próstata aumentada (PSA), indicando a sinalização reativada AR [18], [19]. Um mecanismo potencial de resistência aos abiraterona e enzalutamida tem sido atribuída a um aumento da expressão de AR de comprimento completo (FL-AR) e AR-Vs [20] – [24]. A sobre-expressão de AR-FL foi mostrado para sensibilizar o receptor a baixos níveis de andrógeno [25] e para converter o crescimento do cancro da próstata a partir de uma para uma fase resistente à castração [10] sensível à castração. aumento da expressão de AR-Vs foi mostrado para conferir crescimento resistente à castração dos tumores de próstata [14], [15], [26] – [28], e correlacionar com pior sobrevida dos pacientes CRPC [29]. Derrubar AR-FL ou Ar-Vs por shRNA em modelos de xenoenxerto pode atrasar a progressão do cancro da próstata a resistência castração e /ou suprimir o crescimento do tumor da próstata que já progrediu para o estado resistente à castração [15], [30] , [31]. Portanto, abordagens terapêuticas que podem diminuir a disponibilidade de ambos AR-AR-FL e Vs deve oferecer um benefício considerável na prevenção e inibição da recorrência de cancro da próstata após a terapia de privação de androgénio.
A raiz de ginseng é um dos mais commonly- ervas medicinais usadas no mundo ocidental, particularmente para a intervenção câncer [32]. Ginsenosides são considerados os principais constituintes de ginseng farmacologicamente activos [33]. Nós relatado anteriormente que um metabolito principal intestinal de ginsenosides, 20 (S) -protopanaxadiol-aglicona (PPD), é eficaz na regulação negativa da expressão e atividade da AR, incluindo tanto AR-FL e AR-Vs, em células cancerosas humanas da próstata [ ,,,0],34]. A diminuição na expressão de AR é devido ao PPD mediada por transcrição reduzida do gene de AR e aumento da degradação mediada por proteassoma de AR-FL e proteínas AR-V [34]. Nós adicional mostrou que o PPD também inibiu a expressão de AR em tumores de xenoenxerto de próstata, mas não em próstatas normais do hospedeiro [34]. No presente estudo, foram avaliados pré-clinicamente o potencial da utilização PPD para melhorar o resultado terapêutico da terapia de privação de andrógeno.
Materiais e Métodos
linhas celulares e Reagentes
LNCaP e 22Rv1 células foram obtidas da American Type Culture Collection na passagem 4. células CWR-R1 foram fornecidos pelo Dr. Elizabeth M. Wilson e cultivadas como descrito [35]. As células utilizadas neste estudo foram a menos de 20 passagens (~ 3 meses de cultura não-contínua). PPD foi obtido a partir do Laboratório de Química Orgânica da Universidade de Jilin, Changchun, China. Os compostos de grau de pureza de 98%, como determinado por cromatografia líquida de elevado rendimento, foram utilizadas em estudos de cultura de células, e que de 95% foi usado em estudos com animais. Enzalutamida foi comprado de Selleck Chemicals (Houston, TX), e a pureza de 99% foi confirmado pela Ressonância Magnética Nuclear
Western Blotting
O procedimento foi descrito anteriormente [36].. bandas imunorreactivas foram quantificadas por densitometria e normalizada para desidrogenase do gliceraldeído-3-fosfato (GAPDH). Foram utilizados os seguintes anticorpos:. anti-GAPDH (Millipore), anti-AR (Millipore), e anti-AR-V7 (precisão de anticorpo)
quantitativa de transcrição reversa-PCR (qRT-PCR)
qRT-PCR foi realizada como descrito [37]. Os conjuntos de iniciador-sonda de qPCR para PSA, protease transmembranar, serina 2 (TMPRSS2), e A2 ciclina (CCNA2) eram de IDT. As sequências dos iniciadores para isoformas AR foram como descrito [15].
Reporter Gene Assay
O elemento andrógeno-sensível (ARE) plasmídeo repórter -luciferase, contendo três repetições da região são ligados em em tandem com o repórter luciferase de pirilampo [38], foi utilizado para medir AR
trans
-activating actividade. Foi co-transfectadas transientemente em células com o pRL-TK
Renilla
constructo de luciferase (Promega) a proporção 20:01 como descrito [39]. ensaio de luciferase dupla foi realizada por instrução do fabricante (Promega), e a atividade da luciferase do pirilampo foi normalizada ao do
Renilla
luciferase.
Tumor xenoenxertos Models
Homem ratinhos nus foram obtidos a partir do Centro de Produção NCI animal às 5-6 semanas de idade. Para o modelo de progressão resistente à castração dos tumores LNCaP, os ratinhos foram inoculados subcutaneamente com 4 × 10
6 células LNCaP suspensas em Matrigel a 50% no flanco direito, após uma semana de adaptação. Quando o tamanho do tumor atingiu -100 mm
3, a castração foi realizada
via
uma abordagem escrotal. No dia seguinte, a castração, os ratos foram divididos aleatoriamente em dois grupos e receberam 40 mg /kg de PPD em azeite de oliva ou óleo de controle por meio de gavagem oral de 6 dias por semana. Para o modelo de tumor 22Rv1 resistente à castração, os ratinhos foram castrados cirurgicamente após uma semana de adaptação, e deixou-se recuperar durante 3 dias antes de serem inoculados subcutaneamente com 4 × 10
6 22Rv1 células no flanco direito. No dia a seguir à inoculação, os ratinhos foram distribuídos aleatoriamente e colocadas sobre os mesmos regimes de tratamento, tal como descrito para o modelo de LNCaP. As dimensões do tumor e os pesos corporais foram medidos duas vezes por semana e semanais, respectivamente. O volume do tumor foi calculado como
0,524 x largura
2 x comprimento
[40]. No final da experiência, os ratos foram anestesiados com ketamina /xilazina, o sangue coletado para determinação de PSA no soro usando quantitativo ELISA (United Biotech) e sacrificados por CO
2. Os tumores foram removidos, pesados, e fixados em formalina a 10% para inclusão em parafina e análises histológicas. Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Comitê Animal Care Institucional e Use da Universidade Tulane.
Análises de imuno-histoquímica AR
A imuno-histoquímica foi realizada como descrito anteriormente [34]. Como controlo negativo, o anticorpo primário foi substituído por uma IgG não imune, na mesma concentração, e nenhuma reactividade foi detectada. secções coradas foram escaneados usando o Aperio ScanScope Scanner e imagens digitalizadas foram analisadas com os algoritmos Aperio WebScope integradas. Para a coloração AR, as imagens foram amostrados sequencialmente ao longo de cada seção com áreas de necrose, artefatos de preparação, e bordas evitado. A intensidade da coloração nuclear foi categorizada a forte, fraco, ou negativo, conforme determinado pelo algoritmo Aperio Nuclear V9. coloração fosfo-histona H3 foi quantificada tal como descrito [41]. Cinco campos microscópicos aleatórios foram capturados para cada seção do tumor na ampliação de 10x, e o número de células fosfo-histona-H3-positivos foi contado manualmente.
Análise Estatística
O Student bicaudal t teste foi utilizado para determinar as diferenças médias entre tratamento e controle. Os dados são apresentados como média ± SEM.
Resultados
PPD regulação negativa do AR-FL e AR-Vs em andrógeno-Destituído Condição
O primeiro avaliou o efeito do PPD no Os níveis de proteína AR-V AR-FL e em 22Rv1 e CWR-R1 células resistente à castração cultivadas em condições de privação de andrógeno. Estes dois modelos celulares expressam AR-FL junto com três ~ 80-kDa grande AR-Vs, ou seja, AR-V7, AR-V1 (aka AR4), e AR-V4 (aka AR5) [15], [16]. análises de Western blot foram realizadas com um anticorpo que reconhece todas as isoformas AR ou específico para AR-V7. À medida que a mais abundante e activa AR-V nas células [15], AR-V7 é o único RA-V, nas quais tem sido desenvolvido um anticorpo específico. Tal como mostrado nas Figuras 1A e 1B, PPD regulada negativamente tanto AR-FL e AR-Vs de uma maneira dependente do tempo, com a mudança no AR-Vs semelhante ao da AR-FL na 22Rv1 células, mas ligeiramente mais significativa do que a de AR -FL em células CWR-R1. Em seguida, examinaram o efeito de PPD em níveis de mRNA de diferentes isoformas AR nestas células cultivadas em condições de privação de androgénio por qRT-PCR. Conforme apresentado nas Figuras 1C e 1D, o tratamento PPD também reduzida AR-FL e transcritos AR-V em ambos os modelos celulares. Curiosamente, foi observado um aumento modesto, mas estatisticamente significativo de expressão do AR-V1 no ponto de tempo precoce na 22Rv1 células. No entanto, o aumento não foi sustentada com um tratamento mais prolongado. Estes resultados indicam que PPD pode inibir a expressão de AR-FL e AR-Vs na condição de privação de andrógeno
A análise de mancha B. ocidental de proteínas AR com um anticorpo que reconhece todas as isoformas AR ou específico para AR-V7 em 22Rv1 (A) ou células CWR-R1 (B). Os números nas tabelas representam intensidades normalizadas relativas das bandas de proteína AR em comparação com o valor de controlo de 100 C. Análise de qRT-PCR dos níveis de ARNm de AR-AR-FL e Vs em 22Rv1 células. *,
P Art 0,05 de controle. As células foram cultivadas em condições de privação de androgénio. PPD, 20 ug /ml. As barras de erro, SEM.
PPD Supressão de andrógeno-independente Atividade AR
AR-Vs falta o domínio de ligação ao ligando e possuir actividade constitutiva andrógeno-independentes [15], [16 ], [42]. PPD regulação baixa do AR-Vs seria esperado para levar à supressão de transactivação AR independente de androgénios. Nós, portanto, avaliaram o efeito da PPD na actividade AR em células 22Rv1 cultivadas em condições de privação de andrógeno pelo ensaio do gene repórter. Como mostrado na Figura 2A, a transactivação AR independente de androgénios foi deprimido por PPD como uma função do tempo. Às 6 e 12 h após o tratamento PPD, a actividade foi inibida em 36% e 66%, respectivamente. Procedeu-se examinar o efeito de PPD em genes AR-alvo endógenas, a alvos canónica PSA e TMPRSS2, bem como o CCNA2 AR-específica do V-alvo [20], [43], por qRT-PCR sob as mesmas condições. De acordo com o resultado do gene repórter, todos os alvos (Figuras 2B 2C) mostraram uma diminuição dependente do tempo da expressão. Tomados em conjunto, os dados demonstram a capacidade de DPP para inibir independente de androgénios AR-FL e actividades AR-V.
. ensaio de gene repórter mostrando inibição PPD de andrógeno-independentes
trans
atividade da AR -activating. 22Rv1 células foram co-transfectadas com o construto ARE-luciferase e a construção de pRL-TK, e a actividade da luciferase do pirilampo foi normalizada pela do
Renilla luciferase
. B As análises C. qRT-PCR mostrando PPD diminuir a expressão do canónica alvos AR PSA e TMPRSS2 (B) e o alvo CCNA2 AR-específica-V (C) em células 22Rv1. *,
P Art 0,05 de controle. As células foram cultivadas em condições de privação de androgénio. PPD, 20 ug /ml. As barras de erro, SEM.
PPD inibição da progressão resistente à castração de LNCaP Tumores
Em seguida, avaliamos o efeito da PPD na recorrência do câncer de próstata após a terapia da privação do andrógeno no modelo de xenotransplante LNCaP . LNCaP é uma linha celular de cancro humano da próstata dependentes de androgénios e expressa predominantemente AR-FL [44]. O desenvolvimento de tumores de xenoenxertos de LNCaP requer androgénios, e a castração provoca um crescimento desacelerado inicial dos xenoenxertos de [45], [46]. No entanto, semelhante ao câncer de próstata humanas, os xenotransplantes, eventualmente, tornar-se resistentes a castração e retomar o crescimento [45] – [49]. ratinhos nus masculinos foram implantados com células LNCaP no flanco dorsal direita. A castração foi realizado quando os tumores atingiram -100 mm
3. camundongos castrados foram então divididos em dois grupos que receberam quer azeite como controle ou 40 mg /kg PPD através de sonda oral 6 dias por semana. O tratamento foi iniciado no dia seguinte ao da castração.
comparados com os tumores de LNCaP crescidas em ratos intactos gónada-[45], [46], houve uma desaceleração do crescimento de tumor em ambos os grupos durante as duas primeiras semanas de tratamento o mais uma resposta inicial à castração (Figura 3A). Os tumores no grupo de controlo voltaram a crescer a partir de 17 dias de tratamento como resultado da aquisição de resistência à castração, enquanto que os tumores no grupo de PPD permaneceu pequena. A partir do dia 25, a diferença no tamanho médio do tumor entre os dois grupos tornou-se estatisticamente significativa. No final da experiência, o tamanho médio do tumor foi de 1000 mm
3 no grupo controle, mas 330 mm
3 no grupo PPD, indicando ~67% de inibição do crescimento dos tumores pelo PPD. Em linha com este resultado, os pesos médios dos tumores eram de 0,76 g e 0,32 g no grupo controle e PPD, respectivamente (Figura 3B). Durante o período de 42 dias de tratamento, PPD não pareceu causar toxicidade nos ratinhos, tal como indicado por nenhuma diminuição no peso corporal em comparação com o grupo de controlo (Figura 3C).
células LNCaP foram inoculadas em gonadal-intacto ratinhos nus, e castração cirúrgica foi realizada quando os tumores atingiram -100 mm
3. O tratamento com 40 mg /kg através de sonda oral PPD 6 dias por semana foi iniciado no dia seguinte a castração (n = 10). volumes tumorais A. dizer. pesos tumorais B. individuais na parte final da experiência. C. pesos corporais médios do rato. D. Média nível de PSA no soro determinado por ELISA, normalizada pelo peso de tumor, na conclusão do estudo. *,
P Art 0,05 a partir do grupo de controle. As barras de erro, SEM.
próstata reincidência do tumor após a castração está associada a níveis séricos de PSA elevados [50]. Medimos os níveis de PSA no soro de ratinho utilizando ELISA. Tal como mostrado na Figura 3D, a suplementação de PPD conduziu a uma queda de praticamente 50% no nível de PSA no soro média, a partir de 173 ng /ml /g no grupo de controlo a 97 ng /ml /g no grupo de PPD. Os níveis foram normalizados por peso do tumor. Assim, a queda não foi uma consequência da inibição do crescimento do tumor, mas sim uma indicação de PPD supressão de AR reactivação nos tumores. Nós, então, medida a expressão da proteína AR por imuno-histoquímica em tecidos fixados em formol. Como mostrado na Figura 4A, o tratamento PPD diminuiu a percentagem de células com coloração forte AR, enquanto o aumento da percentagem de células com coloração negativa. Os dados, portanto, corroborada nosso
in vitro
resultados, mostrando a eficácia do PPD em downregulating nível AR e da atividade em células CRPC
in vivo
.
Os tumores foram colhidos no final da experiência da Figura 3. A. AR coloração imuno-histoquímica das secções de tumores. O painel esquerdo, a quantificação dos dados. painéis da direita, imagens representativas. B. Phospho-histona H3 coloração imuno-histoquímica das secções de tumor. O painel esquerdo, a quantificação dos dados. painéis da direita, imagens representativas. C. H E coloração das secções de tumores. *,
P Art 0,05 a partir do grupo de controle. As barras de erro, SEM.
ainda avaliou o efeito de PPD em mitose nos tumores através de imuno-histoquímica utilizando um anticorpo contra fosfo-histona H3, um marcador da mitose [41]. Como mostrado na Figura 4B, a suplementação de PPD causou uma diminuição significativa no número médio de mitoses por campo de imagem. Hematoxilina e eosina (H E) de coloração de tecidos não mostrou qualquer alteração histopatológica aparente dos tumores após tratamento PPD (Figura 4C). Colectivamente, os dados sugerem o potencial da utilização PPD para prevenir recaídas câncer de próstata após terapia de privação de andrógeno.
PPD inibição do crescimento de resistente à castração 22Rv1 Xenoenxerto Tumores
A seguir, avaliou a capacidade dos PPD, em comparação com o anti-androgénico enzalutamida da próxima geração, para inibir o crescimento de tumores da próstata que já são resistentes utilizando o modelo de xenoenxerto de 22Rv1 castração. 22Rv1 células foram inoculados no flanco dorsal direito de ratinhos nus machos castrados. A administração de 40 mg /kg de PPD ou 10 ou 30 mg /kg através de sonda oral enzalutamida 6 dias por semana foi iniciado quando os tumores atingem -100 mm
3. Como mostrado na Figura 5A, PPD inibiu significativamente o crescimento dos tumores 22Rv1. Na conclusão da experiência, o peso médio dos tumores foi de 0,35 g no grupo de PPD, mas 0,54 g no grupo de controlo, indicando ~ 35% de inibição do crescimento do tumor por PPD (Figura 5B). Isto também foi associada com o declínio ~ 50% nos níveis de PSA no soro (Figura 5D), bem como uma diminuição significativa no sinal de imunocoloração AR detectada utilizando um anticorpo pan-AR (Figura 6A) e o número de mitoses (Figura 6B) nos tumores . análise de Western blot mostrou ainda PPD downregulation de ambos AR-FL e AR-Vs nos tumores (Figura 6c). PPD não causou redução nos pesos corporais dos ratinhos (Figura 5C) ou alteração histopatológica aparente dos tumores (Figura 6D).
22Rv1 células foram inoculadas em pequenos ratos nús castrados. Quando os tumores atingiram -100 mm
3, os ratinhos foram tratados com 40 mg /kg por via oral de administração forçada através de PPD 6 dias por semana (n = 11). volumes tumorais A. dizer. peso do tumor B. Individual na conclusão do experimento. C. pesos corporais médios do rato. D. Média nível de PSA no soro determinado por ELISA, normalizada pelo peso de tumor, na conclusão do estudo. *,
P Art 0,05 a partir do grupo de controle. As barras de erro, SEM.
os tumores foram colhidos no final da experiência da Figura 5. A. AR coloração imuno-histoquímica das secções de tumores. O painel esquerdo, a quantificação dos dados. painéis da direita, imagens representativas. B. Phospho-histona H3 coloração imuno-histoquímica das secções de tumor. O painel esquerdo, a quantificação dos dados. painéis da direita, imagens representativas. análise de mancha de Western de C. os tumores usando um anticorpo pan-AR. A determinação quantitativa dos dados foi apresentada abaixo dos blots. D. H E coloração das secções de tumores. *,
P Art 0,05 a partir do grupo de controle. As barras de erro, SEM.
Curiosamente, enzalutamida, nem no da dose, foi capaz de inibir o crescimento de tumores 22Rv1 (Figura 7A), suprimir os níveis de PSA no soro em ratinhos (Figura 7D), inibem a mitose (Figura 8A), ou causar lesão microscópica aparente dos tumores 22Rv1 (Figura 8B). Na conclusão do experimento, houve uma tendência de diminuição no peso de tumor com o aumento da dose de enzalutamida (Figura 7B). No entanto, a diminuição não foi estatisticamente significativa, possivelmente devido ao pequeno tamanho da amostra do experimento. No entanto, a redução observada com 10 mg /kg enzalutamida, a dose mais comumente usado para enzalutamida que é eficaz contra modelos de xenoenxertos de LNCaP resistente à castração [27], [51], [52], foi bastante marginal. Tomados em conjunto, os dados sugerem que o potencial da utilização de PPD para inibir o crescimento das CRPC.
22Rv1 células foram inoculadas em pequenos ratos nús castrados. Quando os tumores atingiram -100 mm
3, os ratinhos foram tratados com 10 ou 30 mg /kg por via oral de administração forçada através enzalutamida 6 dias por semana (n = 4). volumes tumorais A. dizer. peso do tumor B. Individual na conclusão do experimento. C. pesos corporais médios do rato. D. Média nível de PSA no soro determinado por ELISA, normalizada pelo peso de tumor, na conclusão do estudo. Enz, enzalutamida. Nenhum dos grupos de tratamento mostraram diferença estatística a partir do grupo de controlo em qualquer um dos pontos terminais. As barras de erro, SEM.
os tumores foram colhidos no final da experiência da Figura 7. A. H3 coloração imuno-histoquímica de fosfo-histona das secções de tumores. O painel esquerdo, a quantificação dos dados. painéis da direita, imagens representativas. B. H E coloração das secções de tumores. Enz, enzalutamida. As barras de erro, SEM.
Discussão
Foi demonstrado anteriormente que a PPD suprime andrógeno sinalização através diminuindo a expressão de ambos AR-FL e AR-Vs [34]. No presente estudo, nós estendemos as observações a condição de privação de andrógeno, mostrando regulação negativa independente de andrógeno de expressão AR e transativação pelo PPD. Mais importante ainda, o presente estudo demonstrou, pela primeira vez, a possibilidade de utilizar PPD para melhorar o efeito terapêutico da terapia de privação de androgénio. Mostrámos, em modelos de xenoenxerto, que PPD previne ou retarda o desenvolvimento da CRPC após a privação de androgénio e inibe o crescimento de tumores na próstata resistente à castração com expressão endógena do AR-AR-FL e Vs.
elevação no soro nível de PSA é utilizado como um marcador bioquímico para a recorrência após a terapia. Mostrámos que a suplementação de PPD conduz a uma redução nos níveis de PSA no soro. Além disso, a redução não é simplesmente uma consequência da diminuição de tamanhos tumorais por PPD, uma vez que o efeito continua a ser significativo após a normalização pelo peso do tumor. Os dados, em vez disso, indicam a capacidade do PPD para suprimir AR reactivação em tumores recaíram após a privação de andrógeno e em tumores que são resistentes a castração, proporcionando, portanto, um mecanismo de base para a capacidade do PPD para inibir a resistência castração.
A dose de PPD que foi usado nos nossos estudos de xenoenxertos foi de 40 mg por kg de peso corporal do rato. Com base na conversão de área de superfície corporal [53], a dose humana equivalente de 40 mg /kg PPD é 3,24 mg /kg. Isto equivale a uma dose diária de 194 mg para um adulto de 60 kg. A suplementação diária de 2 g de extracto de ginseng para adultos com um peso médio de 60 kg não mostrou qualquer efeito adverso em ensaios clínicos em seres humanos [54], [55]. Uma vez que o teor de ginsenósidos do extracto foi de 14,5% [54], a dose diária de ginsenósidos nestes ensaios foi de 290 mg. Assim, a dose que foi utilizado nos estudos com animais é possível em humanos.
Apesar da longa apreciação da importância de segmentação de sinalização AR para o tratamento do cancro da próstata, nenhuma terapia tem sido desenvolvido até à data para alvejar directamente com AR reduzir a sua disponibilidade. Em adição ao PPD, vários outros compostos têm sido mostrados pré-clinicamente para reduzir os níveis de AR-AR-FL e Vs e para inibir o crescimento de células CRPC [26], [56] – [61]. Estes compostos podem servir como um antídoto eficaz para superar a resistência à terapia de privação de androgénio, em particular para a resistência devido à expressão regulada positivamente de AR-Vs. Por causa da falta do domínio de ligação ao ligando, AR-Vs não pode ser alvo de terapias actuais privação androgénica, incluindo a nova abiraterona drogas e enzalutamida. Isto reflecte-se os nossos dados mostram a ineficácia da enzalutamida contra o crescimento de AR-expressando V tumores de xenoenxerto 22Rv1 no acolhimento castrado. Por outro lado, o crescimento destes tumores pode ser inibida por PPD numa dose f armacologicamente realizáveis. Estes resultados suportam o potencial da utilização PPD em combinação com estas novas drogas para o tratamento do câncer de próstata. Determinar as eficácias combinatórios e as melhores sequências de tratamentos é uma área da nossa investigação em curso. Tomados em conjunto, os resultados do estudo atual não só fornecem uma base racional para desenvolver ainda mais PPD ou o seu análogo para a intervenção da CRPC, mas também fundamentar a redução AR-FL e disponibilidade AR-V como uma abordagem viável para melhorar os resultados terapêuticos da terapia de privação de andrógeno .
Reconhecimentos
Agradecemos ao Dr. Elizabeth M. Wilson, da Universidade da Carolina do Norte para fornecer células CWR-R1.