Abstract

Fundo e visa

Transcatheter técnicas intra-arterial pode efetivamente entregar agentes quimioterápicos para tumor e melhorar a eficácia da quimioterapia. O presente estudo foi desenvolvido para avaliar o efeito das técnicas de transcateter intra-arterial sobre a distribuição da doxorrubicina em relação aos vasos sanguíneos no cancro do fígado.

Métodos

tumores VX2 foram implantados nos fígados dos 32 coelhos . Os animais foram divididos em 4 grupos de 8 animais cada. Grupo 1 (Doxo iv) os animais receberam injeção intravenosa de doxorrubicina; grupo 2 (Doxo ia) receberam infusão intra-arterial hepática doxorrubicina; Grupo 3 (IA Doxo + E) receberam doxorrubicina infusão intra-arterial hepática seguido por embolização; grupo 4 (Doxo + L IA + E) receberam infusão intra-arterial hepática de doxorrubicina misturado com Lipiodol seguido por embolização. Dez minutos ou 4 horas após o tratamento, os animais foram sacrificados e os tumores foram amostrados. técnicas de imunofluorescência foram usadas para avaliar a distribuição de doxorrubicina em relação aos vasos sanguíneos.

Resultados

Doxorrubicina fluorescência foi distribuída em torno de vasos sanguíneos do tumor e diminuiu com a distância a partir dos vasos sanguíneos. As células tumorais em regiões avasculares e adjacentes não foram expostos a concentrações detectáveis ​​de doxorrubicina. Os tumores no grupo 2, 3 e 4 tiveram um aumento significativo na penetração da doxorrubicina em comparação com os tumores do grupo 1 (

P

0,05). Entre os três grupos de terapias transcateter, distância de penetração doxorrubicina no grupo 3 foi significativamente maior do que no grupo 2 e 4 (

P Art 0,05), e não houve diferença significativa entre o grupo 2 e 4 tumores (

P Art 0,05) em 10 minutos. Em contraste, em 4 horas e no total, ambos os grupos 3 e 4 tumores tiveram aumentos significativos na penetração da droga em comparação com o grupo 2 (

P Art 0,05), e não houve diferença significativa foi observada entre os grupos 3 e 4 tumores (

P Art 0,05).

Conclusão

terapias Transcatheter intra-arterial melhorar a penetração doxorrubicina em câncer de fígado; no entanto, o seu efeito na distribuição de drogas é um pouco limitado

Citation:. Liang B, Xiong F, Wu H, Wang Y, Dong X, Cheng S, et al. (2013) Efeito da Transcatheter intra-arterial Terapias sobre Circulação de doxorrubicina em cancro do fígado em um modelo de coelho. PLoS ONE 8 (10): e76388. doi: 10.1371 /journal.pone.0076388

editor: Gayle E. Woloschak, Northwestern University Feinberg School of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 21 de março, 2013; Aceito: 30 de agosto de 2013; Publicação: 08 de outubro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Liang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O trabalho foi apoiada pela subvenção do National Ciências naturais da Fundação da China (No. 81.101.134). Os financiadores não tiveram um papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

O câncer de fígado continua a ser um desafio de saúde substancial em todo o mundo. Embora a ressecção, o transplante de fígado e ablação são terapias curativas, apenas uma pequena minoria dos pacientes são candidatos para estes tratamentos [1]. terapias Transcatheter intra-arterial são amplamente utilizados tratamentos paliativos para câncer primário e metastático não ressecável fígado [2] e têm demonstrado resultados encorajadores em termos de sobrevivência [3], [4]. A justificativa para terapias intra-arterial decorre da observação de que o fornecimento de sangue dos cânceres de fígado avançado é na maior parte dependente da artéria hepática [5]. Hepática infusão quimioterapêutico artéria, definida como a injecção de quimioterapia com ou sem lipiodol na artéria hepática por meio de colocação do cateter selectiva, é um componente importante das terapias para o cancro do fígado transcateter [6]. Apesar de o cancro do fígado é resistente a quimioterapia sistémica, o tumor provou responder em certa medida para infusão quimioterapêutico artéria hepática. A injecção de drogas quimioterapêuticas provoca efeito citotóxico [7], e quando combinado com a seguinte embolização dos vasos que se alimentam de tumor, isto é, quimioembolização arterial transcateter (TACE), resulta em necrose tumoral substancial [8]. A sensibilidade aumentada de câncer de fígado à quimioterapia é presumedly atribuído à prestação eficaz da altamente concentrado doseado de drogas quimioterápicas para o tumor.

No entanto, a eficácia da quimioterapia no cancro do fígado permanece controverso. Estudos recentes têm mostrado que a quimioterapia sem embolização pareceu atingir uma menor percentagem de necrose tumoral em comparação com a TACE [9], e que a adição de quimioterapia a embolização, não resultou em uma melhor eficácia do que a embolização isoladamente [10]. É bem conhecido que, para maximizar os efeitos citotóxicos de agentes quimioterapêuticos devem penetrar profundamente a chegar a todas as células cancerosas, a uma concentração terapeuticamente eficaz. Dados anteriores sugerem que quando administrada por via subcutânea ou por via intravenosa de drogas anticancro gradientes formados dentro do tumor, com concentrações elevadas na periferia e baixas concentrações no centro do tumor [11], [12]. Embora a concentração da droga no tecido de tumor tem sido mostrado para ser muito maior do que no parênquima hepático normal [13], [14], anti-cancro fármaco administrado através de uma via intra-arterial foi localizada principalmente em torno dos vasos embolizados em cancros do fígado submetidos a TACE [15 ], [16]. A distribuição limitada de fármaco anticancro no tumor podem ser responsáveis ​​pela eficácia prejudicada de quimioterapia. Um exame da distribuição de drogas em câncer de fígado após terapias percutâneo intra-arterial pode ajudar a compreender o efeito terapêutico da infusão de quimioterápicos e desenvolver estratégias para modificar a distribuição de drogas.

A doxorrubicina é um agente quimioterápico mais utilizado único na terapia transcateter para o fígado Câncer. Infusão da droga exibiu taxa de resposta favorável e sobrevida em candidatos seleccionados [17]. Além disso, a droga é passível de detecção directa por microscopia de fluorescência, devido à sua propriedade fluorescente. Doxorrubicina tem sido usado para estudar a distribuição da droga em relação aos vasos sanguíneos do tumor, reconhecidos pela CD31 marcador de células endoteliais, em animais e tumores humanos [11], [12]. No presente estudo, utilizou-se a fluorescência da doxorrubicina para estudar o efeito de técnicas de transcateter na distribuição de drogas em um modelo de tumor VX2 de câncer de fígado.

Materiais e Métodos

O delineamento experimental

Um total de 32 coelhos adultos brancos da Nova Zelândia pesando 2,5-3,0 kg foram usados ​​neste estudo. VX2 tumores foram inoculados nos fígados dos animais. Dezassete dias após a inoculação do tumor, cada animal foi submetido a imagiologia de ressonância magnética (MR) para detectar a formação de tumores. Um dia depois de ressonância magnética, os coelhos portadores de tumor foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos de 8 animais cada, foram tratados. No grupo 1 (Doxo IV), os animais receberam uma injecção intravenosa de doxorrubicina. No grupo 2 (Doxo IA), os animais foram submetidos a infusão intra-arterial hepática doxorrubicina. No grupo 3 (Doxo IA + E), os animais foram submetidos a infusão intra-arterial hepática de doxorrubicina seguido por embolização com agente oclusão vascular. No grupo 4 (Doxo + L + E IA), os animais receberam infusão intra-arterial hepática de doxorrubicina misturado com lipiodol seguido da embolização. Dez minutos ou 4 horas após o tratamento intervencionista, quatro animais de cada grupo foram sacrificados, respectivamente, e amostras de tumor foram colhidas por imunofluorescência.

Tumor inoculação

As experiências com animais foram realizados de acordo com o Guia para Cuidado e Uso de Animais de laboratório de Huazhong Universidade de Ciência e Tecnologia, como aprovadas pelo Comitê de Cuidados Animais da Província de Hubei, na China. Os animais foram anestesiados com uma injecção intravenosa de pentobarbital sódico (30 mg /kg de peso corporal), e todas foram feitos esforços para minimizar o sofrimento. tumor VX2 é um carcinoma maligno altamente derivado de um papiloma induzido por vírus de coelhos. O tumor pode ser cultivada no fígado de coelho e mostram algumas semelhanças biológicos para o carcinoma hepatocelular humano, que se tornou um modelo de tumor do fígado dos animais óptima para o desenvolvimento de terapias dirigidas ao cateter [18]. A estirpe VX2 foi mantido por transplante sucessiva na pata traseira dos coelhos transportadora. Para a inoculação tumoral, o tumor foi colhido a partir do primeiro transportador de coelho e cortados em fragmentos de 1 mm

3 em solução de Hanks. Em seguida, o fígado do coelho receptor foi exposta através de uma incisão abdominal subxifoide, e os fragmentos de tumor foram incluídos 10 mm de profundidade no lobo esquerdo do fígado. Um pequeno pedaço de esponja de gelatina foi colocada dentro da ferida para obter a hemostasia e a parede abdominal foi fechada em seguida.

ressonância magnética

ressonância magnética foi executada utilizando uma unidade de 1,5-T (Magnetom Avanto ; Siemens Medical Solutions, Erlangen, Alemanha). Os coelhos foram fotografadas na posição supina utilizando a combinação de uma bobina phased-array corpo de seis canais e uma bobina phased-array de dois canais espinha. Todos os animais foram submetidos a sequência spin-echo turbo ponderada em T2 com os seguintes parâmetros de imagem: TR /TE = 3700/87 ms, espessura de corte de 4 mm, diferença intersecção 15%, de 168 Hz /pixel BW, a 200 × 200 mm

2 campo de visão, 320 × 320 matriz, o fator de turbo = 11, as médias = 2.

técnicas de transcateter

procedimento percutâneo foi realizada nos animais sob a orientação de angiografia digital (Altis Zee Celling, a Siemens Medical Solutions, Muenchen, Germany). Em resumo, a artéria femural direita foi acedida através puncturation aberta com uma agulha de 18-gauge e cateterizado com uma bainha vascular 4-F (Terumo, Tóquio, Japão). A 4-F Cobra cateter visceral (Terumo) foi pela primeira vez utilizado para seleccionar o eixo celíacos, e, em seguida, um sistema de cateter coaxial de 2,7-F (Terumo) foi avançada coaxialmente através do cateter 4-F da hepática adequada. Depois de o tumor inoculado foi confirmada para receber o seu fornecimento de sangue a partir da artéria hepática com angiografia de subtracção digital da artéria hepática adequada, tratamentos subsequentes foram realizados. A doxorubicina foi dada intra-arterial ou intravenosa, numa dose de 8 mg /kg para facilitar a detecção e quantificação da droga auto-fluorescência. Para a preparação dos materiais, 8 mg /kg de pó de doxorrubicina foi dissolvido em 1 ml de água salina ou misturado com 0,4 mL Lipiodol, e PVA partículas 150-250 pM em tamanho (PVA, Cook, Bloomington, EUA), empacotado como um frasco de partículas secas, foram reconstituídos com 10 ml meio de contraste. Os animais do Grupo 2 receberam a infusão intra-arterial hepática de solução de doxorrubicina. Grupo 3 os animais receberam a infusão de solução de doxorrubicina seguido por embolização com 0,2-0,4 mL de mistura de PVA. Grupo 4 os animais receberam a infusão da mistura a doxorrubicina /Lipiodol, seguido da embolização de PVA. O endpoint embolização para os grupos 3 e 4 foi a estase completa do fluxo sanguíneo anterógrado. Para o Grupo 1 os animais, a solução de doxorrubicina foi injectada na veia da orelha, sem procedimento intervencionista.

imunofluorescência e imagem análise

Os animais foram sacrificados humanamente 10 minutos ou 4 horas após a administração de doxorrubicina com a administração intravenosa de overdose de sódio de pentobarbital (100 mg /kg de peso corporal). A selecção dos dois pontos de tempo sacrifício foi baseada na observação anterior que a doxorrubicina pode ser eficazmente transportadas para as células tumorais através de vasos sanguíneos em um tempo de ciclo de 10 minutos, quando utilizado sozinho [19], e que, quando misturado com Lipiodol, todos doxorrubicina pode eluir a partir da emulsão Lipiodol em menos de 4 horas [20]. As amostras que incluíam o maior diâmetro do tumor foram recolhidas e, em seguida, imediatamente incorporado no composto de temperatura óptima de corte e congelados em azoto líquido. secções de criostato de 10 um de espessura foram cortadas com o maior diâmetro do tumor, montadas em lâminas de vidro, e deixou-se secar ao ar.

Doxorrubicina auto-fluorescência foi detectada utilizando Nikon TE2000 invertido microscopia de fluorescência 465-495 nm de excitação e 510 a 555 nm filtros de emissão, e imagens de secção de tecido foram capturadas com uma câmera Nikon DS-U3. Os vasos sanguíneos foram reconhecidas pela expressão de proteína de membrana CD31 sobre as células endoteliais. Seguindo imagiologia doxorrubicina, secções de tecido foram fixadas em paraformaldeído durante 10 min, lavadas em PBS, e bloqueadas com soro fetal de vitelo (diluição 1:20; Roche) durante 20 minutos para evitar a ligação não específica de anticorpo. As amostras foram incubadas durante a noite a 4 ° C com anticorpos de ratinho anti-CD31 monoclonais humanos (diluição 1:20; Dako), depois lavados em PBS e coradas com anticorpo secundário de cabra anti-ratinho FITC (diluição 1:50; Jakson) para 1 h à temperatura ambiente, após o que coraram com corante nuclear DAPI durante 10 min. Finalmente, as seções foram com um meio de montagem contendo inibidor anti-fluoresceína escorregou-cover. Anti-CD31 fluorescência representando célula endotelial foi detectado com 510-560 nm de excitação e 590 nm de emissão filtros, e DAPI-coradas localização ADN nuclear foi detectada com filtros de emissão de 330-380 nm de excitação e 420 nm.

imagens compostas de doxorrubicina e CD31 fluorescência foram gerados usando software Image Pro Plus. Para imagens CD31, microvasos densidade (MCD) foi avaliada usando o método de contagem introduzido por Weidner et al [21]. As secções de tumor foram primeiramente digitalizado no campo de baixa ampliação (× 40 ampliação, 6,82 milímetros

2) para encontrar as áreas que apresentaram a vascularização mais intensa e, em seguida, microvasos individuais foram contadas em três diferentes campos de alta ampliação (× 200 ampliação, 0,27 mm

2). O MVD final foi o valor médio das contagens dos três campos. Para a avaliação da doxorrubicina, três campos de alta ampliação diferentes (× 100 ampliação, 1,09 mm

2) com foram selecionados alta fluorescência doxorrubicina. Foram excluídas áreas de necrose e artefato coloração.

A penetração da doxorrubicina foi medido utilizando o Pro Plus software de aplicação e algoritmos personalizados de imagem. Resumidamente, uma imagem de doxorubicina e uma imagem de vasos sanguíneos separados do mesmo campo foram primeiramente capturado. De modo a tornar a imagem do vaso sanguíneo do mesmo tamanho que a imagem de doxorubicina, uma cópia extra da imagem doxorrubicina foi feita, e foi revestida sobre o topo da imagem do vaso sanguíneo. A imagem de vasos sanguíneos foi então mascarados, de modo que todos os vasos sanguíneos podem ser identificados e ser convertido em cor branca com uma intensidade de 255. Os pixels restantes em que a imagem tinha uma intensidade de 0. Isto foi chamado uma imagem binarizada. Qualquer pixel que não foi 0 foi considerado como um vaso sanguíneo. A imagem foi então convertida e uma nova imagem foi formada utilizando a função de filtro de distância. Neste quadro, o valor de cinzento de cada ponto representadas a distância do ponto mais próximo para o recipiente. A imagem doxorrubicina também foi comutada para a imagem binarizada, em que cada mancha positiva doxorrubicina foi representada como seu ponto central. Usando a função mínima do software, a distância de cada ponto de doxorrubicina a partir do vaso sanguíneo mais próximo foi medida. Os dados foram tabulados para mediar a distância de penetração do campo doxorrubicina. A distância da penetração média dos três campos foi tomada como a distância de penetração doxorrubicina final para cada animal [22]. A contagem de mancha fluorescente específico da doxorrubicina em cada campo foi simultaneamente contados.

A análise estatística

Os dados são resumidos como a média ± desvio padrão (SD). As diferenças entre os grupos foram comparados por meio de análise de uma via de variância seguido por LSD-

t

teste.

P

. 0,05 foi considerado estatisticamente significativo

Resultados

tumor VX2 e procedimento percutâneo

tumor VX2 foi cultivada com sucesso no lóbulo esquerdo do fígado de cada coelho (Figura 1). Os tumores variou de 1.16-2.12 cm de diâmetro. O diâmetro médio do grupo 1, 2, 3 e 4 foram de 1,53 cm ± 0,27, 1,58 cm ± 0,30, 1,63 cm ± 0,25 e 1,49 ± 0,20 cm, respectivamente, sem diferença significativa entre os grupos (

P

= 0,679). procedimentos transcateter foram realizados com sucesso em todos os animais (Figura 2).

imagem MR ponderada em T2 mostra um tumor VX2 hiper-intensidade no lóbulo esquerdo do fígado (seta).

Selective angiograma artéria hepática esquerda mostra um tumor hypervascular (seta) que recebem seu suprimento sanguíneo da artéria hepática esquerda (seta).

microvasos densidade

Nas seções criostato, microvasos foram demonstrados como fluorescência verde de células endoteliais única separados ou cluster celular conectado (Figura 3). Microvasos foram heterogeneamente distribuídas dentro do tumor VX2, e a vascularização mais intensa foi observada na borda do tumor. Não houve diferença significativa no MVD entre os quatro grupos (

P

= 0,543) (Tabela 1).

Fotomicrografia de um tumor VX2 representativa mostra numerosos vasos sanguíneos (verde, reconhecido por CD31) na borda do tumor.

distribuição de doxorrubicina e sua relação com microvasos

a doxorrubicina fluorescência vermelha nas secções tumorais. A fluorescência específica com a droga foi detectada principalmente em núcleos de células ainda que emanava de todos os tecidos tumorais (Figura 4). Geralmente, doxorrubicina distribuídos em torno de vasos sanguíneos do tumor e diminuiu com a distância a partir dos vasos sanguíneos (Figura 5). A intensidade de fluorescência da doxorrubicina também deteriorado com a distância a partir dos vasos sanguíneos. Notou-se que, mesmo nos grupos tratados com transcateter muitas regiões de células tumorais não foram expostos a concentrações detectáveis ​​de doxorrubicina. Estas células tumorais foram localizados principalmente nas regiões avasculares e adjacentes. Além disso, houve alguns microvasos CD31 positivo sem circundante doxorrubicina detectável.

Fotomicrografia de um tumor VX2 representativa mostra doxorrubicina auto-fluorescência (vermelho) na borda do tumor.

hematoxilina-eosina (a), imunofluorescência (B, núcleo; C, doxorubicina; D, vasos sanguíneos) e composto (e, composto original, F, compósito modificado) imagens mostram a distribuição de doxorrubicina (vermelho) em relação ao tumor vasos sanguíneos (verde).

a Tabela 1 e Figura 6 resumir a distância de penetração doxorrubicina em quatro grupos com base no momento do sacrifício. Os tumores no grupo 2, 3 e 4 tiveram um aumento significativo na penetração da doxorrubicina em comparação com o grupo 1 tumores em 10 minutos (

P

= 0,032, 0,001 e 0,046, respectivamente), de 4 horas (

P

= 0,046,

P Art 0.001 e

P Art 0,001, respectivamente) e no total (

P

= 0,09,

P

0.001 e

P Art 0,001, respectivamente). Entre os três grupos de terapias transcateter, grupo 3 tumores apresentou a maior distância de penetração doxorrubicina, com diferença significativa em comparação com o grupo 2 e 4 (

P

= 0,010 e 0,007, respectivamente), e não houve diferença significativa entre o grupo 2 e 4 tumores (

P

= 0,846) em 10 minutos. Em contraste, em 4 horas e, no total, ambos os grupos 3 e 4 tumores tinham um aumento significativo na penetração da droga em comparação com o grupo 2 (

P

= 0,004 e 0,001, em 4 horas;

P

0.001 e

P

= 0,023, no total, respectivamente), e nenhuma diferença significativa foi observada entre os grupos 3 e 4 tumores (

P

= 0,454, em 4 horas;

P = 0,138

, no total, respectivamente).

Imagens mostra a diferença na penetração doxorrubicina entre um grupo (a, e), 2 (B, F), 3 (C, G) e 4 (D, H) tumores em 10 minutos (A-D) e de 4 horas (e-H) ponto de tempo.

A contagem da mancha fluorescência específica doxorrubicina entre os quatro grupos apresentaram uma tendência de alteração semelhante à tendência observada na distância de penetração doxorrubicina (Tabela 1). As contagens de fluorescência de doxorrubicina no grupo 2, 3 e 4 eram significativamente maiores do que no grupo de 1 (

P

0,05). Entre os três grupos de terapias transcateter, houve um aumento na fluorescência de drogas Quantidade de entre o grupo 2 e 3 e entre 2 e 4, embora a última não era estatisticamente significativa em 10 minutos (

P

= 0,568). Não houve diferença significativa entre o grupo 3 e 4 em drogas contagem de fluorescência a 4 horas (

P

= 0,170) e no total (

P

= 0,286), embora a diferença foi significativa em 10 minutos (

P

= 0,001).

Discussão

é bem conhecido que, para ser mais eficazes agentes quimioterapêuticos devem penetrar profundamente a chegar a todas as células cancerosas, a uma concentração terapeuticamente eficaz . Os objectivos da hepática infusão de quimioterápicos artéria, com ou sem embolização subsequente, são maximizar os efeitos citotóxicos de agentes quimioterapêuticos e minimizar a toxicidade sistémica. Embora os estudos anteriores sugeriram que as técnicas de transcateter intra-arterial aumentar a concentração de droga intra-tumoral [11], [12], e prolonga o tempo de contacto da droga com células tumorais [23], o que pode explicar, em parte para a eficácia quimioterapêutica melhorado, o papel destas técnicas de droga distribuição permanece em grande parte indefinido. Os dados aqui sugerem que as técnicas de transcateter intra-arterial melhorar a distribuição da doxorrubicina em câncer de fígado.

Este estudo demonstra que as técnicas de transcateter intra-arterial contribuir para a penetração de doxorrubicina. Acredita-se que a administração de agentes quimioterapêuticos para células cancerígenas envolve classicamente três processos: o transporte através de vasos sanguíneos, o transporte de vasos sanguíneos dentro do tumor espaço intersticial, e o transporte através do espaço intersticial [24]. Estes processos são determinados por vários factores, incluindo as propriedades fisico-químicas de um fármaco e as propriedades biológicas de um tumor. Estudos recentes têm demonstrado que o transporte da droga transvascular é afectado principalmente pela pressão microvascular e o fluxo de sangue no tumor, e que o transporte através do interstício de droga de peso molecular baixo como doxorrubicina é afectado principalmente pela difusão, que depende do gradiente de difusividade e concentração de droga [24], [25]. Como mostrado nos nossos resultados, a distância de penetração de fluorescência doxorrubicina foi significativamente maior nos três grupos de terapias transcateter do que a injecção na veia grupo doxorrubicina. Este achado provavelmente é atribuída aos processos melhorados de transporte de drogas geradas pela entrega percutâneo intra-arterial. Em primeiro lugar, a infusão da droga através de um cateter intra-arterial inserido pode entregar drogas directamente nas artérias que se alimentam de tumor, facilitando o transporte através de vasos sanguíneos. Em segundo lugar, a infusão teoricamente aumenta o fluxo sanguíneo em tecidos de tumor, o que pode melhorar o transporte da droga transvascular. Finalmente, a entrega intra-arterial de doses altamente concentradas de quimioterapia aumenta o gradiente de concentração, o que pode aumentar o transporte de drogas através de interstício tumor.

Além disso, nosso estudo sugere que a embolização transcateter intra-arterial após a infusão intra-arterial doxorrubicina ajuda ainda mais a penetração da droga . Num artigo de revisão mais cedo, Geschwind [26] especulado que a embolização de partícula dos vasos do tumor-alimentação pode permitir a droga de penetrar no tumor com maior facilidade. Nossos resultados mostraram que ambos os grupos 3 e 4 a tumores tinham uma maior distância média de penetração doxorrubicina em comparação com o grupo 2, que suportam a hipótese. Tem sido demonstrado que uma pressão microvascular maior e /ou uma pressão de fluido intersticial inferior pode aumentar a filtração de fluido transvascular e por sua vez, conduzem a um acessório de transporte da droga para transvascular tumor [24]. Acreditamos que o aumento significativo na distância de penetração doxorrubicina no grupo 3 e 4 tumores, provavelmente, ser o resultado do aumento da diferença de pressão gerado pela subsequente embolização dos vasos do tumor-alimentação.

Uma descoberta interessante foi que a distância de penetração em doxorubicina grupo 4 tumores foi significativamente menor do que no grupo de 3 a 10 minutos, mas foi ligeiramente maior do que o grupo de 3 a 4 horas. Isto pode ser devido a diferentes intervalos de tempo entre a administração de fármaco e a necropsia. estudos experimentais anteriores demonstraram que Lipiodol, como um transportador de fármacos anti-cancerígenos, podem aumentar a concentração de droga intra-tumoral [27], mas que o material retido principalmente em vénulas microarterioles e após a infusão intra-arterial, como resultado da sua lipossolubilidade [28]. Lewis e colegas [20] realizada recentemente experiência de libertação de doxorrubicina in vitro utilizando um aparelho de células T e descobriram que o medicamento fluido a partir de doxorubicina mistura /Lipiodol em menos de 4 horas, com uma meia-vida de 1 hora. Neste estudo, dos tecidos do tumor extracção 10 minutos após o tratamento, inevitavelmente, subestimam a penetração de drogas em tumores que receberam Lipiodol. Em contraste, o intervalo de tempo de 4 horas, permite a doxorrubicina a eluir da emulsão Lipiodol, levando ao aumento da penetração da droga.

usando microscopia de fluorescência, que também apresentaram um aumento significativo da contagem de doxorrubicina mancha fluorescente em três grupos de terapias transcateter em comparação com o grupo de injecção na veia. É análogo aos resultados observados com a cromatografia líquida de alta eficiência em estudos anteriores [11], [12], [29], que confirmam que as técnicas de transcateter intra-arterial melhorar a concentração da droga no cancro do fígado. Entre os três grupos de terapia transcateter intra-arterial, a tendência de mudança de contagem de doxorrubicina de fluorescência foi semelhante à distância de penetração de doxorrubicina, que provavelmente também se explica pelo transporte de drogas relacionadas com a embolização e retenção da droga Lipiodol-causado.

Por outro lado, o nosso estudo mostrou que as células de tumor em regiões avasculares e adjacentes de tumores que receberam o tratamento percutâneo não foram expostos a concentrações detectáveis ​​de doxorrubicina. É semelhante aos resultados observados em estudos recentes. Namur e colegas realizado o transplante de fígado após TACE em pacientes com carcinoma hepatocelular e que a concentração de doxorrubicina no tecido do tumor diminuiu com a distância aos vasos ocluída e a penetração da droga foi associada com necrose tumoral [15]. Estes resultados sugerem que o efeito de técnicas de transcateter intra-arterial atualmente utilizados na distribuição da droga poderia ser um pouco limitado. técnicas de transcateter intra-arterial, porque eles dependem da vasculatura existente, pode melhorar a entrega da droga para as regiões vasculares do tumor, mas não conseguem melhorar o fornecimento às regiões avascular. À luz destes resultados, é claro que métodos adicionais para modificar a distribuição de medicamentos deve ser introduzido em percutâneo intra-arterial terapias para conseguir uma melhor eficácia quimioterápico.

Este estudo teve várias limitações. Em primeiro lugar, utilizou-se uma overdose de doxorrubicina para facilitar a detecção da inflorescência fármaco específico, especialmente em tumores que recebe a injecção intravenosa de doxorrubicina, que pode subestimar o efeito de técnicas de transcateter intra-arterial na penetração da droga. A distribuição da doxorrubicina dada em uma dose de rotina por via percutânea intra-arterial precisa ser mais investigada. Em segundo lugar, foram selecionados 10 minutos e 4 horas após a administração de doxorrubicina como os pontos de tempo sacrifício para assegurar uma penetração eficaz da droga [19], [20]. Dado o facto de que a entrega de droga no tumor é um processo dinâmico, é possível que mais pontos de tempo das medições pode fornecer informações adicionais sobre a doxorubicina penetração no tumor. Finalmente, utilizou-se uma amostra do tumor para avaliar a distribuição de doxorrubicina em todo o tumor. O comprimento de penetração em imagens bidimensionais poderia sobrestimar a distância real de uma mancha fluorescente doxorrubicina ao seu recipiente mais próxima vez que o recipiente pode ser mais próximo para fora da secção. Futuros estudos utilizando a técnica de imunofluorescência deve apontar para quantificar coloração em todo o tumor.

Em resumo, este estudo fornece evidências de que a artéria hepática infusão de quimioterápicos, especialmente quando combinada com a embolização, melhora a penetração da droga, bem como a concentração do fármaco no fígado Câncer. Isto pode, pelo menos em parte, explicar o mecanismo pelo qual a técnicas de transcateter intra-arterial são terapias eficazes para o cancro do fígado. Por outro lado, os nossos resultados sugerem que o efeito destas técnicas sobre a distribuição da droga é um tanto limitado, apesar da sobredosagem de doxorrubicina. Mais estudos são necessários para desenvolver estratégias adicionais para melhorar a distribuição da doxorrubicina.