Sumário

Molecular detecção na mucosa lingual e no tracto gastro-intestinal desempenhar um papel na detecção de drogas e toxinas ingeridas. Portanto, polimorfismos genéticos que afectam a capacidade de iniciar estas respostas podem ser críticos para a eficiência subsequente de evitar e /ou eliminar possíveis ameaças ao organismo. Usando uma abordagem de marcação na região de Taste Receptor 2R38 (

TAS2R38

) gene, investigamos toda a variação genética comum desta região do gene em relação ao risco de câncer colorretal com um estudo caso-controle em uma população alemã (709 controles e 602 casos) e em uma população Checa (623 controles e 601 casos). Descobrimos que não houve associações significativas entre SNPs individuais do

gene

TAS2R38 e câncer colorretal na Checa ou na população alemã, nem na análise conjunta. No entanto, quando analisamos os diplotypes e os fenótipos descobrimos que o grupo não-provador teve um aumento do risco de câncer colorretal em comparação com o grupo de provadores. Esta associação foi marginalmente significante na população Checa, (OR = 1,28, 95% CI 0,99-1,67; P

value = 0,058) e estatisticamente significativa na população alemã (OR = 1,36, 95% CI 1,06-1,75; P

value = 0,016) e na análise conjunta (OR = 1,34, 95% CI 1,12-1,61; P

value = 0,001). Em conclusão, encontramos uma associação sugestiva entre o fenótipo de sabor amargo humana e para o risco de CRC em duas populações diferentes de origem caucasiana

Citation:. Carrai M, Steinke V, Vodicka P, Pardini B, Rahner N, Holinski-E Feder, et ai. (2011) Associação entre TAS2R38 Gene polimorfismos e Colorectal Cancer Risk: Um Estudo de Caso-Controle em duas populações independentes de Caucasiano Origin. PLoS ONE 6 (6): e20464. doi: 10.1371 /journal.pone.0020464

editor: Yiqing Song, Brigham Hospital da Mulher, e da Harvard Medical School, Estados Unidos da América

Recebido: 28 de fevereiro de 2011; Aceite: 25 de abril de 2011; Publicação: 02 de junho de 2011

Direitos de autor: © 2011 Carrai et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este projecto foi parcialmente financiado pela Agência Grant da República Checa: CZ: GACR: GA310 /07/1430, pela área /Norway Grants Económica europeia e o orçamento do estado República Checa, por meio do Fundo de Apoio à Pesquisa: a /CZ0046 /2 /0012. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito. Sem financiamento externo adicional recebida para este estudo

Conflito de interesses:. EHF e MM são empregados por Medical Genetics Center /Medizinisch Genetisches Zentrum, Munique. Isto não altera a adesão dos autores para todos os PLoS ONE políticas em dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

O câncer colorretal (CRC) é o terceiro câncer mais comum no mundo eo segundo na Europa [1], [2]. fundo genético é pensada para desempenhar um papel na modulação do risco individual [3]. O principal interesse da pesquisa sobre a susceptibilidade genética do CRC tem sido focada em genes envolvidos no transporte de xenobióticos e metabolismo [4], [5], [6], [7], o reparo do DNA e do ciclo celular [8], [9 ], resistência à insulina, obesidade e os níveis de glucose [10], e a inflamação [11], [12]. No entanto, a possível associação entre os receptores gustativos, sensoriamento amargo e risco de CRC foi recentemente testado [13], [14], [15], [16]. O sistema gustativo, desenvolvido durante a evolução, é um gatekeeper nutricional do corpo para determinar quais alimentos devem ser ingeridos e que deve ser rejeitado como potencialmente prejudiciais. Em particular, a capacidade de discriminar gosto amargo evoluiu como um sinal de aviso central em relação a ingestão de substâncias tóxicas possíveis.

TAS2R38,

o gene mais estudado pertencentes a esta família, é muito envolvido na capacidade de provar os glucosinolatos, uma grande família de compostos sabor amargo que são amplamente distribuídas em plantas e em particular no

Brassica

sp. [17], [18]. A discriminação de gosto amargo pode influenciar o consumo de vegetais que contêm estes ligantes e desde a ingestão de vegetais reduzido pode aumentar o risco de câncer de cólon, a capacidade de resposta individual a compostos amargos pode modular o risco de doença [19], [20], [21], [22 ]. Além disso, os receptores de sabor amargo codificados pela família de genes são expressos TAS2R não só na língua mas também nas células do tracto gastrointestinal (GI) [23], [24]. receptores gustativos pode fornecer, desta forma, o organismo com duas linhas de defesa contra possíveis agentes tóxicos. O primeiro pode ser ao nível do gosto na língua, ao evitar a ingestão. A segunda linha de defesa, a detecção molecular no tracto gastrointestinal, podem ser responsáveis ​​para a detecção de drogas e toxinas ingeridas, iniciando assim as respostas crítica para a sobrevivência. Nomeadamente, o processo de detecção é iniciada através do envio de mensagens para o sistema nervoso para dar origem a uma resposta apropriada da sua neutralização e expulsão [23]. Além disso, o sensor de sabor é um sistema importante para iniciar vias hormonais e /ou neuronais levando à regulação da ingestão de calorias, a secreção pancreática de insulina, metabolismo e [23]. Embora estes sistemas de controle fundamentais têm sido conhecidos desde há muitos anos, as vias celulares e neurais que medeiam respostas biológicas para luminal estímulos em geral, e estímulos amargos em particular, continuam a ser mal caracterizada, no entanto, relatórios recentes estão rapidamente adicionando novas informações a este muito importante tópico [25], [26], [27], [28]

TAS2R38

gene é caracterizado por três SNPs de codificação não sinônimas (rs713598 – G145C, Ala49Pro;. rs1726866 – T785C, Val262Ala; rs10246939 – A886G, Ile296Val). Estes três polimorfismos, que também são SNPs tagging e cobrem toda a variabilidade genética comum do locus do gene, dar origem a vários haplótipos. Dois destes haplótipos, Pro-Ala-Val (PAV) e Ala-Val-Ile (AVI) são, de longe, o mais comumente encontrados em populações humanas [29], [30], [31]. Os indivíduos que possuem pelo menos uma cópia do alelo PAV são significativamente mais sensíveis aos saborizantes amargos, como SUPORTE ou PTC (fenótipo aperitivo), do que os que são homozigóticos para o alelo AVI (fenótipo não-provador). Uma vez que os fenótipos distintos (provador

vs

não provador) refletem uma funcionalidade receptor diferencial, a incapacidade de provar compostos amargos poderia ser também um marcador para uma função prejudicada dos receptores em GI: indivíduos não-provador pudesse reagir mais lento na eliminação de xenobióticos no intestino e, consequentemente, estar em maior risco de CRC.

o objetivo deste estudo foi, através de uma abordagem tagging, para avaliar a possível correlação entre toda a variabilidade genética comum de

TAS2R38 Comprar e o resultado é uma “capacidade degustação” e risco de CRC em um total de 1203 casos de cancro colorectal e 1332 controles das populações alemã e checa, que são conhecidos por apresentar um dos maior incidência de CRC [32].

resultados

neste estudo caso-controle foi avaliada a variabilidade no

gene

TAS2R38 em um grupo de indivíduos de origem caucasiana alemão e checo. Os detalhes a respeito das principais características das duas populações de estudo são apresentados na Tabela 1.

taxas de Genotipagem de sucesso e de controle de qualidade

A distribuição dos genótipos em todos os loci estavam em Hardy-Weinberg em controlos, com não significativos valores de qui-quadrado (p 0,05, dados não apresentados). amostras em duplicado numa ordem aleatória (8%) também foram incluídos e concordância dos seus genótipos foi superior a 99%. A taxa média de chamadas para os três SNPs foi de 97,9%.

Principais efeitos de SNPs genotipados

A distribuição dos genótipos e suas odds ratio (OR) para associação com o risco de CRC são apresentados na Tabela 2. Foram avaliadas as RUP separadamente e em conjunto para as duas populações. Descobrimos que não houve associações significativas entre os SNPs do gene da

TAS2R38 Comprar e CRC nem nos tchecos, em que os alemães, nem na análise conjunta.

haplótipos, diplotype e análise de fenótipo

A distribuição dos principais haplótipos (PAV e AVI) não foi significativamente diferente (p = 0,99) nas duas populações. Embora haplótipos raros (AAV; PVV; AAI; PVI e PAI) representaram a mesma frequência cumulativa (4%), tanto para o alemão e os grupos Checa, que apareceu de forma diferente distribuídos conforme relatado nas Figuras complementares S1 e S2. Execução de análise de regressão logística em conjunto sobre o alemão e as populações Checa observou-se uma associação estatisticamente significativa entre

TAS2R38

diplotypes e risco CRC: portadores do diplotype AVI /AVI apresentar um risco aumentado de CRC em comparação com o PAV /PAV transportadoras com uma OR de 1,33 (IC 95% 1,03-1,72; p = 0,027). País de origem e sexo não alterou significativamente a associação observada (p = 0,85 e p = 0,36, respectivamente) como relatado na Tabela 3.

Na população checa os portadores da diplotype AVI /AVI apresentado uma tendência estatisticamente não significativa para o aumento do risco CRC, com um OR de 1,15. (95% CI 0,80-1,66; p = 0,44)

na população alemã encontramos uma associação significativa entre as transportadoras diplotype AVI /AVI e aumento do risco de CRC com um OR de 1,52 (IC de 95% 1,05-2,21, p = 0,027) em comparação com os transportadores PAV /PAV

Finalmente, dividiu-se todos os diplotypes em dois grupos definidos pelo seu fenótipo. , o provador (PAV /PAV; PAV /PVV; P _ * /A_ *)) do grupo ea não-provador ((AVI /AVI; AAV /AVI) grupo não-provadores foram associados com um risco aumentado de CRC na. população alemã (OR = 1,36; IC 95% 1,06-1,75; p = 0,016). os não-provadores também foram associados com um risco aumentado na população Checa, embora não em um nível estatisticamente significativa (OR = 1,28; IC 95% 0,99 -1,67; p = 0,0580. Analisando as duas populações em conjunto a associação foi mais forte (OR = 1,34; IC 95% 1,12-1,61, p = 0,001 (Tabela 4)

Efeitos de SNPs genotipados em diferentes estratos da população

para a população Checa temos realizado estratificação análise para o status de sexo e tabagismo e também realizada uma análise utilizando o IMC como fator de ajuste. para a população alemã nós não temos dados sobre o tabagismo e IMC. em nosso estudo, não houve diferença na as distribuições de genótipos nos diferentes estratos, nem IMC teve qualquer efeito sobre a associação.

Discussão

no presente estudo variação genética comum em

TAS2R38

foi completamente capturado. o abordagem de marcação SNP intensiva aplicada fornece um fim à análise exaustiva de associações de risco CRC com variantes polimórficas comuns conhecidos para o locus de interesse. Além disso, as análises de haplótipos, diplotype e fenótipo fornecer uma visão abrangente da variabilidade genética comum do

gene TAS2R38

em relação com o risco de CRC.

neste estudo tinha poder suficiente (mais de 80% para um modelo codominante) para detectar OR = 1,30 em alfa = 0,05 para um SNP com um MAF de 0,33 (que é o alelo mais raro aqui estudados) se considerando apenas a população alemã. Para a população Checa tivemos o mesmo poder para detectar associações de OR = 1,27 ou superior e agregação de duas populações que obtivemos poder suficiente para detectar associações mais modestos (OR≥1.21).

O presente estudo fornece interessante evidências sobre o possível papel da TAS2R38 em risco CRC. Analisando os três SNPs isoladamente, não encontramos qualquer associação com o risco de CRC. No entanto, quando se analisou a distribuição de grandes diplotypes entre os casos e os controlos, descobrimos que a combinação AVI /AVI é associada a um risco aumentado de CRC. Esta associação foi mais forte quando se considera os dois juntos população (p para o teste de tendência = 0,007). Indivíduos portadores desta diplotype são referidos como compostos amargos “não-provadores”, em oposição a “provador”. Nós finalmente considerado o fenótipo não-provador contra todos os outros e descobriu que ele foi associado com aumento do risco CRC em ambas as populações, embora a associação foi mais forte na população alemã que na Checa. Esta associação sugere que os fenótipos distintos, que reflectem uma funcionalidade do receptor diferencial na incapacidade para provar compostos amargos, poderia ser também um marcador para uma função prejudicada dos receptores do GI: indivíduos não-provador poderia reagir mais lento em xenobióticos eliminando no intestino e, consequentemente, estar em maior risco de CRC.

as possíveis limitações deste estudo incluem o tamanho da amostra relativamente pequena e as possíveis diferenças entre as duas populações selecionadas, especialmente no que diz respeito de possíveis fatores de confusão, tais como a dieta. No entanto, podemos confiantemente exclui um papel importante das diferenças étnicas entre as duas populações. Em um estudo recente Nelis e colegas investigaram a estratificação da população de base na Europa, mostrando que havia muito pouco, se algum, diferenças na composição genética dos alemães e tchecos [32]. Além disso, a República Checa e as populações alemãs também têm uma incidência CRC comparáveis ​​de acordo com Globocan [1]. hábitos alimentares e ingestão de alimentos não são radicalmente diferentes nos dois países (https://faostat.fao.org/site/609/DesktopDefault.aspx?PageID = 609). No entanto, encontramos uma associação mais fraca entre a variabilidade genética do

lócus

e risco de CRC na população Checa. Uma explicação pode estar relacionada a fatores ambientais (por exemplo, dieta, tabagismo). Uma segunda explicação pode ser a diferença na estratégia de inscrição de temas de estudo desde alemães tinham uma história familiar de CRC ou CRC diagnosticado com idade inferior a 50. Média e mediana de idade são mais baixas na população alemã e isso pode refletir o fato de a causalidade do tumor pode ter um componente genético forte desde o ambiente teve menos tempo para modificar o risco de câncer para estes indivíduos. É também possível que as interacções entre os genes e do ambiente poderia ser a causa da associação mais fraca na população Checa de um modo que não foi possível detectar neste estudo. Finalmente a associação poderia ser uma descoberta casual, mas gostaríamos tendem a excluir isso para o fato de que nas duas populações a associação parece indicar ao mesmo grupo que o aumento dos indivíduos de risco.

As diferenças de género para o gosto amargo tem foram exploradas [33] e por essa razão que realizamos análises estratificadas em ambas as populações. Descobrimos que o sexo não era um fator modificador em qualquer população.

Vários estudos de associação do genoma (GWAS) sobre o risco de CRC foram publicados [34], e em nenhum

TAS2R38

emergiu como um locus de susceptibilidade possível. No entanto, é interessante notar que a região genómica em que o

TAS2R38

reside está mal coberto pelas matrizes SNP utilizados em publicada CRC GWAS. Em particular, rs1726866 e rs10246939 não estão presentes nessas plataformas (https://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgGateway). Encontramos uma associação usando as combinações dos três genótipos em diplotypes, portanto, não é surpreendente que GWAS, onde dois dos três SNPs foram falta e que não costumam estudar haplótipos /diplotypes /fenótipos, não detectou qualquer sinal no neste locus.

em conclusão, encontramos uma associação sugestiva entre o fenótipo sabor amargo humana e para o risco de CRC em duas diferentes populações de origem caucasiana. Um estudo maior, independente é necessária para investigar mais este achado.

Materiais e Métodos

Ética Declaração

Todos os participantes assinaram um consentimento informado por escrito. O estudo foi aprovado pelos conselhos de revisão ética das instituições responsáveis ​​pelo recrutamento de sujeitos em cada um dos centros de recrutamento.

O consentimento informado foi obtido de todos os participantes do estudo. As comissões de ética foram os seguintes:

Ethik Kommission der Medizinischen Fakultät der Ruhr Universität Bochum [Reg.-Nr.:1514]; Ethik Kommission – Medizinische Fakultät Bonn [LFD. Nr. 115/09]; Ethik Kommission der Medizinische Fakultät der Universität Technischen; Dresden [Bearbeitungs- Nr. EK170102000]; Ethikkommission der Medizinische Fakultät der Heinrich Heine Universität Düsseldorf [Studiennummer: 1172]; Ethikkommission eu der Universität – Medizinische Fakultät Heidelberg [Antrags- Nr .: 220/2002]; Ethikkommission II an der Fakultät für klinische Medizin der Ruprechts-Karl-Universität Heidelberg (sobre amostras de Mannheim) [Antrags- Nr .: 87/04] Ethikkommission der Medizinische Fakultät Universität München [Projekt Nr. 255/98]; Comitê komise Etická Ústravu Experimentální Medici AV ČR Ética do Instituto de Medicina Clínica e Experimental e Faculdade Thomayer Hospital [C. J. 786/09 (09-04-09)]

Estudo populações

Para o estudo dos casos de controle de presente consideramos um grupo de indivíduos de duas populações: Um. A partir de República Checa (601 casos, 623 controles) e outra da Alemanha (602 casos, 709 controles).

a população checa tem sido amplamente descrito em outros lugares [7]. Resumidamente, os casos eram pacientes CRC visitam nove departamentos oncológicas (dois em Praga, cada um em Benesov, Brno, Liberec, Ples, Pribram, Usti nad Labem, e Zlin) distribuídos em todas as regiões geográficas de República Checa e ser representativa da população de todo o país. Este estudo inclui pacientes que poderiam ser entrevistadas e forneceram amostras biológicas de qualidade suficiente para análise genética. Todos os casos tiveram confirmação histológica do diagnóstico de tumor. No grupo de casos, testes genéticos para hereditário sem polipose CRC (HNPCC) foi recomendado para quatro pacientes, que pertenciam a famílias que obedeça aos critérios II Amsterdam, e esses casos foram excluídos.

Os controles foram selecionados entre os pacientes internados cinco grandes departamentos gastrointestinais (Praga, Brno, Jihlava, Liberec, e Pribram) em todo o República Checa, durante o mesmo período que o recrutamento dos casos. Apenas os indivíduos cuja resultados colonoscopic foram negativos para malignidade, adenomas colorretais ou IBD foram escolhidos como controles. Entre 739 controles convidados, um total de 623 (84,3%) foram analisados ​​neste estudo (controles perdidos foram semelhantes aos incluídos no que respeita à distribuição por sexo).

Os casos incluídos neste estudo tinham uma idade média de 59,2 anos (variação 27-74), enquanto que os controlos tinham uma idade média de 55,3 anos (variação 28-91).

as análises genéticas não interferir com procedimentos diagnósticos ou terapêuticos para os sujeitos. Todos os participantes assinaram um termo de consentimento informado eo projeto do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Instituto de Medicina Experimental, em Praga, República Checa.

Para a população alemã, como descrito em [35], [ ,,,0],36] casos CRC composta de 602 pacientes de índice (faixa etária 13-82 anos, média de 43,2 anos) recrutados por seis hospitais universitários alemães (Bochum, Bona, Dresden, Düsseldorf, Heidelberg e Munique /Regensburg). Os casos foram coletados como parte de um grande estudo sobre a susceptibilidade a HNPCC. Os critérios de inclusão para os casos foram (i) uma história familiar de CRC ou (ii) CRC diagnosticado com idade inferior a 50. Análise de instabilidade de microssatélites foi aplicado como um teste de pré-triagem antes da análise mutação no

MSH2

e

MLH1

genes. Todos os casos foram testados para ser estável microssatélites.

A série de controle consistiu em 709 doadores de sangue saudáveis, independentes e ethnicity-, sexo e pareados por idade (26-64 anos, média de 44,5 anos), que foram recrutados entre 2004 e 2006 pelo Instituto de Medicina Transfusional e Imunologia da Faculdade de Mannheim, Alemanha. Os intervalos correspondentes para a idade eram “menores de 30 anos, grupos de cinco anos (30-34, 35-39, …, 60-64) e” mais de 65 anos “. coleta de sangue foi realizada durante a doação de sangue regular de acordo com as diretrizes alemãs. O estudo foi aprovado pelos Comitês de Ética locais competentes, e consentimento informado por escrito foi obtido de todos os indivíduos.

Os detalhes a respeito das principais características das duas populações de estudo são apresentados na Tabela 1.

Seleção de SNPs marcação

Nós teve como objetivo levantar todo o conjunto de variantes genéticas comuns em

TAS2R38

. Para este fim, seguimos uma abordagem híbrida de marcação-funcional. Foi utilizado o algoritmo descrito por Carlson e colegas de trabalho [37], que foi desenvolvido para selecionar o conjunto maximamente informativa de tag SNPs em um estudo de associação candidato-gene. Todos os polimorfismos na região de

TAS2R38

local com menor freqüência do alelo (MAF) ≥5% em caucasianos do Projeto Internacional HapMap (versão 21-A; https://www.hapmap.org) foram incluídos. Marcação de SNPs foram seleccionados com o uso do programa Marcador dentro Haploview (https://www.broad.mit.edu/mpg/haploview/; https://www.broad.mit.edu/mpg/tagger/) [38 ], [39], usando a marcação de pares com um r mínimos

2 de 0,8. Considerando que a região genômica de

TAS2R38

é caracterizada por altos níveis de disquilibrium de ligação (LD), postulamos que esses SNPs também são susceptíveis de assinalar quaisquer SNPs comuns até então não identificados no gene. Foram selecionados rs713598, rs1726866 e rs10246939 como marcação de SNPs já que são todos os não-sinônimas funcionais [29], [30], [40], [41], [42], [43], [44], [45] SNPs .

extracção de DNA e genotipagem

DNA foi extraído de amostras de sangue com proteinase K de digestão padrão seguido por extracção com fenol /clorofórmio e precipitação com etanol. A fim de ADN de casos e controlos foi randomizado em placas de PCR, a fim de assegurar que um número igual de casos e controlos podem ser analisadas simultaneamente. Todos genotipagem foi realizada utilizando o ensaio TaqMan. As sondas e iniciadores MGB Taqman foram adquiridos a Applied Biosystems (Foster City, CA) como ensaios de pré-concebido. A mistura de reacção incluía 10 ng de ADN genómico, 10 pmol de cada iniciador, 2 pmol de cada sonda e 2,5 ml de 2x Master Mix (Applied Biosystems) num volume final de 5 mL. A termociclagem incluiu 40 ciclos com 30 s a 95 ° C, seguido de 60 s a 60 ° C. placas de PCR foram lidas num instrumento ABI PRISM 7900HT (Applied Biosystems).

Todas as amostras que não dão um resultado confiável na primeira rodada da genotipagem foram devolvidos para até duas rodadas adicionais de genotipagem. Os pontos de dados que ainda não foram preenchidos após este procedimento foram deixados em branco.

O haplótipo e diplotype reconstrução

haplótipos e diplotypes foram reconstruídos usando software de fase [46].

Análise Estatística

A distribuição de genótipos de frequência foi analisada para os casos e os controles. Hardy-Weinberg foi testado nos casos e nos controlos e nas duas populações separadamente pelo teste do qui-quadrado. Foi utilizada a regressão logística para análise multivariada para avaliar os principais efeitos do polimorfismo genético sobre o risco de CRC usando um co-dominante e um modelo de herança dominante. O genótipo mais comum nos controles foi designado como a categoria de referência. Todas as análises foram ajustadas para idade e sexo. Na população Checa também ajustada para o índice de Max Corporal (IMC) como uma variável contínua. Foram analisadas as duas populações separadamente e em conjunto (nós ajustamos também para centro de recrutamento neste último caso).

A regressão logística considerando o haplótipo reconstruído ajustado para idade (contínua), sexo e centro de estudos foi realizado para calcular o risco estima. O “provador” (PAV) de haplótipos foi definido como grupo de referência. Nós finalmente criado diplotypes para cada indivíduo e agrupados e dividiu-os em dois grupos fenotípicos, o grupo provador ((PAV /PAV; PAV /PVV; P _ * /A_ *) eo grupo não-provador (AVI /AVI; AAV /AVI ). para a análise diplotype o grupo “provador” foi definido como referência.

Nós também realizada análise estratificada por hábitos de sexo e tabagismo. os fumantes foram classificados como fumantes atuais, ex-fumantes (parar de fumar há mais de 5 anos ) ou que nunca fumaram. Os fumantes foram posteriormente divididos em fumantes pesados ​​(mais de 20 cigarros por dia) e fumantes não-pesados ​​(menos de 20 cigarros por dia). Todas as análises foram realizadas utilizando STATGRAPHICS

®

software XVI Centurion (© 2009 por StatPoint Technologies, Inc.www.STATGRAPHICS.com) e software STATA (StataCorp, College Station, TX).

Informações de Apoio

Figura S1.

Distribuição dos haplótipos no população checa

doi:. 10.1371 /journal.pone.0020464.s001

(DOC)

Figura S2

Distribuição dos haplótipos na população alemã..

doi: 10.1371 /journal.pone.0020464.s002

(DOC)