Abstract

Fundo

Tissue análise proteômica da cabeça e do carcinoma de células escamosas do pescoço (CECP) e mucosa oral normal usando iTRAQ (tag isobárica para quantificação relativa e absoluta) rotulagem e espectrometria de massa de cromatografia de líquido, levou à identificação de um painel de biomarcadores incluindo S100A7. No processo multi-passo da cabeça e pescoço a tumorigénese, a presença de áreas displásicas no epitélio é proposto para ser associada a uma progressão propensos a cancro; no entanto, há nenhum são estabelecidos biomarcadores para prever o seu potencial de transformação maligna. Este estudo teve como objetivo determinar o significado clínico da S100A7 superexpressão para CECP.

Metodologia

A análise imunohistoquímica de expressão S100A7 em CECP (100 casos), lesões orais (166 casos) e 100 tecidos histologicamente normais foi realizado e correlacionado com os parâmetros clínico e prognóstico da doença ao longo de 7 anos para pacientes com CECP. Superexpressão da proteína S100A7 foi significativa nas lesões orais (de células escamosas hiperplasia /displasia) e sustentada em CECP em comparação com a mucosa normal (p

tendência 0,001). aumento significativo na S100A7 nuclear foi observada em CECP em comparação com lesões displásicas (p = 0,005) e associado com carcinoma de células escamosas bem diferenciados (p = 0,031). Notavelmente, a acumulação nuclear de S100A7 também surgiu como um preditor independente de sobrevida livre de doença reduzida (p = 0,006, hazard ratio (HR = 7,6), IC 95% = 1,3-5,1) em análise multivariada ressaltando sua relevância como um pobre prognosticator de HNSCC pacientes.

Conclusões

Nosso estudo demonstrou acumulação nuclear de S100A7 pode servir como preditor de mau prognóstico em pacientes com CECP. Além disso, o aumento da acumulação nuclear de S100A7 em CECP em comparação com lesões displásicas garante um estudo longitudinal em grande escala de pacientes com displasia de avaliar o seu potencial como um determinante do aumento do risco de transformação de lesões pré-malignas orais

Citation.: Tripathi SC, Matta A, Kaur J, J Grigull, Chauhan SS, Thakar A, et al. (2010) S100A7 Nuclear está associado com mau prognóstico em Câncer de Cabeça e Pescoço. PLoS ONE 5 (8): e11939. doi: 10.1371 /journal.pone.0011939

editor: Torbjorn Ramqvist, Karolinska Institutet, na Suécia

Recebido: 12 Março, 2010; Aceito: 05 de julho de 2010; Publicação: 03 de agosto de 2010

Direitos de autor: © 2010 Tripathi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. SCT é um destinatário de uma bolsa de Investigação Sênior de Conselho indiano de Pesquisa médica (ICMR), Nova Deli, Índia. RR agradece o apoio do Instituto Ontário de Câncer Research (OICR), Joseph e Mildred Sonshine Centro para Doenças cabeça e pescoço e Temmy Latner /Fundação Dynacare Família, Canadá. KWMS reconhece o apoio de infra-estrutura da Canadian Institutes of Health Research (CIHR), Ontario Investigação e Desenvolvimento Challenge Fund e Applied Biosystems /MDS Analytical Technologies. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (CECP) é o sexto tipo de câncer mais comum sendo responsável por mais de 500.000 novos casos por ano em todo o mundo, que inclui sites na cavidade oral, faringe e laringe [1]. carcinoma de células escamosas da cavidade oral é responsável por dois terços dos casos CECP que ocorrem nos países em desenvolvimento. A maioria dos carcinomas de células escamosas orais são precedidas por mudanças visíveis da mucosa oral. Leucoplasia é a lesão oral mais vulgarmente encontrados na cavidade oral. Estas lesões leucoplasia mostrar evidência histológica de hiperplasia de células escamosas ou displasia. As lesões orais com diagnóstico histológico de displasia são denominados como lesões pré-malignas orais (OPLS); em média, cerca de um por cento das lesões orais transformar em cancro anualmente [2] – [4]. Apesar da melhoria nas estratégias de tratamento, incluindo cirurgia, radioterapia (RT) e /ou quimioterapia (QT), o prognóstico de pacientes com tumores permanece em grande parte insatisfatória, devido à recorrência loco-regional. A taxa de sobrevida em 5 anos é inferior a 50%, e o prognóstico dos casos avançados não melhorou muito ao longo das últimas três décadas [5], [6]. Actualmente, os fatores prognósticos mais importantes incluem grau histológico do tumor, estágio, a profundidade da invasão tumoral e comprometimento de linfonodos regionais no momento do diagnóstico. Além desses parâmetros clínico, marcadores moleculares estão sendo intensamente procurado e verificado para esta malignidade. A falta de biomarcadores para a detecção precoce e de avaliação de risco é claramente refletido pelo fato de que mais de 50% de todos os pacientes com CECP tem doença avançada no momento do diagnóstico [5].

Em nosso estudo recente usando iTRAQ (isobaric tag para quantificação relativa e absoluta) rotulagem e espectrometria de massa de cromatografia líquida /conjunto multidimensional (LC-MS /MS) para analisar expressões de proteínas diferencial entre HNSCC e tecidos não-malignas, identificamos um painel de candidatos biomarcadores para esta malignidade [7]. S100A7 /Psoriasin foi identificado como sobre-expressos em CECP e emergiu entre o painel de três com melhor desempenho biomarcadores potenciais para distinguir HNSCC da mucosa oral normal [7]. Em outro estudo independente usando iTRAQ, nós também relataram aumento da expressão da proteína S100A7 em lesões orais pré-malignas (displasia), embora em apenas um número limitado de casos [8].

família de proteínas S100 consiste em pelo menos 25 tipos diferentes proteínas de baixo peso molecular (9-13 kDa), que são caracterizadas pela presença de dois locais de ligação do cálcio do tipo EF-hand conformação [9] – [12]. S100A7 gene está localizado dentro do “complexo de diferenciação epidérmica ‘no cromossoma humano 1q21 [13] – [16]. proteína S100A7, com um peso molecular de 11,4 kDa, foi encontrada para ser supra-regulada nas lesões da pele de pacientes com psoríase [17]. S100A7 é distribuído no citoplasma de queratinócitos na epiderme humana normal e está presente na periferia das células terminalmente diferenciadas em queratinócitos [18]. A expressão aumentada S100A7 tem sido relatada em diversas malignidades epiteliais, tais como, em carcinoma ductal in situ da mama, pulmão, bexiga, pele, esófago e do cancro gástrico [19] – [24]. expressão alterada de proteínas S100A4 e S100A2 tem sido associado com prognóstico em HNSCC [10], [25] – [28]. S100A7 superexpressão também tem sido relatada em um pequeno conjunto de HNSCC [29], [30]. Embora a expressão aumentada de S100A7 /Psoriasin foi relatado nestes estudos, o impacto da sua expressão no desenvolvimento do câncer, o prognóstico da doença, ea sobrevivência de pacientes com CECP continua a ser completamente determinada. Neste contexto nosso estudo assume importância, devido à sua natureza retrospectiva, o grande conjunto de pacientes que representam diferentes fases do CECP, ea análise de seguimento a longo prazo. Analisou-se a expressão de S100A7 /Psoriasin para CECP, lesões orais (com evidência histológica de hiperplasia de células escamosas ou displasia) e tecidos bucais não malignas por imuno-histoquímica, determinou a sua correlação com os parâmetros clínico, e investigou a sua utilidade como um marcador de prognóstico para CECP .

resultados

a análise imunohistoquímica de expressão S100A7 em lesões leucoplasia e câncer

Para determinar o significado clínico da proteína S100A7 na tumorigênese de cabeça e pescoço, sua expressão era analisadas em espécimes clínicos de lesões de carcinoma epidermóide, leucoplasia com hiperplasia de células escamosas ou displasia, e tecidos histologicamente normais, utilizando um anticorpo monoclonal específico por imuno-histoquímica. A Figura 1A mostra a distribuição de pontuação total imunocoloração de expressão S100A7 citoplasma /núcleo em tecidos normais orais, lesões leucoplasia com hiperplasia de células escamosas ou displasia e HNSCC. Dos 100 tecidos normais analisados, 84% não apresentaram imunocoloração S100A7 detectáveis ​​no núcleo /citoplasma das células epiteliais (Figura 1B (i)). Nos tecidos normais restantes (16%), coloração citoplasmática moderada foi observada em células epiteliais diferenciadas apenas na camada suprabasal. análise de tendências qui-quadrado mostrou aumento significativo na expressão S100A7 (nuclear /citoplasmático) em tecidos obtidos a partir de diferentes estágios de cabeça e pescoço tumorigênese (, hiperplasia de células escamosas normal, displasia e CECP; Tabela 1, p

tendência 0,001) .

o eixo vertical mostra a pontuação total de imunocoloração, obtida tal como descrito na secção de Métodos. (I) a expressão S100A7 Nuclear na hiperplasia de células escamosas (IHC gama de pontuação 0-7), displasia (intervalo 0-7) e HNSCC (intervalo 0-7) (b) S100A7 citoplasmática no normal (intervalo 0-7), células escamosas hiperplasia (intervalo 0-7), displasia (intervalo de 0-7) e HNSCC (gama 0-7). (B) Análise imuno-histoquímica de S100A7 em tecidos da cabeça e pescoço. secções embebidas em parafina de mucosa histologicamente normal, hiperplasia de células escamosas ou com displasia, e HNSCC foram coradas utilizando anticorpo monoclonal anti-S100A7, tal como descrito na secção de Métodos. (I) mucosa oral normal mostrando nenhum imunocoloração S100A7; (Ii) a hiperplasia de células escamosas mostrando nuclear e citoplasmática imunocoloração S100A7; (Iii) displasia retratando nuclear e citoplasmática imunocoloração S100A7 nas células epiteliais; (Iv) HNSCC ilustrando tanto citoplasmática intensa e fluorescência nuclear em células de tumor; (V) a seção HNSCC com uma displasia mostrando S100A7 imunomarcação nas células epiteliais (aumento original x 100); (VI) HNSCC utilizado como controlo negativo, não mostrando nenhum imunocoloração S100A7 em células de tumor; e (vii) o tecido do cancro da mama ER-negativo mostrando S100A7 imunocoloração. As setas mostram nuclear e localização citoplasmática (iv, ampliação original vii × 200).

lesões leucoplasia (hiperplasia de células escamosas /displasia).

Do leucoplasia 166 lesões analisadas, 97 casos (58,4%) apresentaram aumento significativo na imunocoloração S100A7 citoplasmático (p 0,001, odds ratio (OR) = 7,4; IC95% = 3,9-13,7). Entre estes casos imunopositivas 62 tecidos mostrou um aumento significativo na imunomarcação nuclear também S100A7 (p 0,001, OU = 11,3, IC 95% = 4,3-29,3) em comparação com os tecidos normais (Tabela 1). Estes 166 lesões leucoplasia incluiu 116 hiperplasias de células escamosas; 54,3% (63/116) dos casos apresentaram aumento significativo na imunocoloração citoplásmica S100A7 (pontuação total 3, p 0,001, OR = 6,2, IC de 95% = 3,2-11,9) em relação aos tecidos normais (Tabela 1 e Figura 1B ( ii)). aumento significativo na imunocoloração S100A7 nuclear também foi observada em 40/116 (34,5%) casos (P 0,001, OR = 10,0, IC 95% = 3,8-26,6). Notavelmente, o aumento da localização citoplasmática de S100A7 foi observada em 68% displasia (34 de 50 casos) (p 0,001, OU = 11,2, IC 95% = 5,0-24,8) em comparação com tecidos normais (Tabela 1 e Figura 1B (iii) ). Do mesmo modo, também se observou aumento progressivo na expressão nuclear de S100A7 em 22/50 (44%) displasia (p 0,001, OU = 14,9, IC 95% = 5,1-43,0). Curiosamente, a sobre-expressão S100A7 (citoplasma /núcleo) foi restrito a parabasais e apenas as camadas suprabasais. Nenhuma destas secções de tecido demonstrou expressão S100A7 em camadas proliferando na membrana basal. Leve imunomarcação S1007 membranoso; foi observada (pontuação total 0,001, OU = 38,6, IC 95% = 14,4-103,9). Nomeadamente, foi observado aumento significativo na expressão nuclear em S100A7 HNSCC (67%) em comparação com displasia (44%) (p = 0,005, OR = 2,7, IC de 95% = 1,3-5,4). Além de coloração nuclear, intensa coloração S100A7 também foi observada no citoplasma das células de tumor em 74 dos 100 HNSCC analisados ​​(p 0,001, OU = 14,9, IC 95% = 7,4-29,9, Tabela 1 e na Figura 1B (iv)) . Os parâmetros clínico de CECP e sua correlação com nuclear /expressão citoplasmática de S100A7 são apresentados na Tabela 1. Curiosamente, a sobre-expressão S100A7 nuclear mostrou uma associação com a diferenciação histopatológica do CECP (p = 0,031). Nenhum dos tecidos CECP mostrou membranoso imunocoloração S100A7. A maioria dos tecidos CECP analisados ​​neste estudo imuno-histoquímica S100A7 tinha mais do que 80% de células tumorais em H E secções. No entanto, havia cinco casos que mostraram displásico ou áreas hiperplásicas tecido adjacente ao tumor e estas regiões mostraram imunocoloração semelhante ao observado nos casos em que apenas tinham displasia ou hiperplasia (Figura 1B (v). Nenhuma imunocoloração foi observada em secções de tecido CECP utilizado como controlo negativo, onde o anticorpo primário foi substituído por isotipo IgG específica (Figura 1B (VI)), enquanto que o controlo positivo (cancro da mama ER-negativo) mostraram expressão S100A7 (Figura 1B (vii)).

avaliação do potencial S100A7 como marcador de diagnóstico para lesões orais e leucoplasia HNSCC

Receiver Operating análise characteristic (ROC) foi utilizada para determinar o potencial de sobre-expressão de distinguir S100A7 hiperplasia de células escamosas, displasia e carcinoma epidermóide de tecidos orais normais. o os valores para a área-sob-a-curva (AUC) foram 0,664, 0,691 e 0,824 para a hiperplasia de células escamosas (Figura 2a), displasia (Figura 2b), e HNSCC (Figura 2c), respectivamente (Tabela 2). da mesma forma, a análise ROC foi utilizado para a determinação da AUC para a coloração citoplasmática S100A7 em todos estes três grupos e a área sob a curva (AUC) valores foram 0,650, 0,746 e 0,788, respectivamente, como mostrado na Tabela 2 e Figura 2a-2c. Os valores preditivos positivos (VPP) foi de 88,9, 81,5 e 93,1 para a imunocoloração nuclear. Da mesma forma, para os valores preditivos positivos imunocoloração citoplasmática (PPV) foram 79,8, 68,0 e 82,2 nos três grupos (Tabela 2).

linha em negrito mostra a análise ROC para S100A7 nuclear. A linha tracejada mostra a análise ROC para S100A7 citoplasmática. Y-eixo do gráfico mostra fração de verdadeiros positivos e eixo X mostra fração de falso positivo.

Avaliação de S100A7 superexpressão como marcador de prognóstico para CECP

A previsão estimada potência do marcador, ou seja, a força de associação estatística da expressão S100A7 com mau prognóstico foi avaliada por análise de sobrevivência de Kaplan-Meier. análise de sobrevivência de Kaplan-Meier mostrou uma redução significativa sobrevida livre de doença (p = 0,016; sobrevida média de 13 meses) em pacientes com CECP abrigar aumento da expressão nuclear de S100A7, em comparação com sobrevida livre de doença mediana de 70 meses nos pacientes não mostrando nenhum imunocoloração S100A7 nuclear (Figura 3A). Da mesma forma, foi observada redução da sobrevivência livre de doença de 14 meses em pacientes com CECP mostrando a expressão citoplasmática intenso de S100A7, em comparação com os pacientes que não apresentaram aumento citoplasmática S100A7 (sobrevivência média de 70 meses, Figura 3B). A análise de regressão de Cox foram realizados para determinar o potencial de prognóstico da expressão S100A7 (nuclear /citoplasmático) para HNSCC em comparação com os outros parâmetros clínicos e patológicos – grau histológico, tamanho do tumor e estado nodal (Tabela 3). expressão S100A7 Nuclear emergiu como o marcador de prognóstico mais importante para CECP (p = 0,006, a razão de risco (RR) = 7,6; IC95% = 1,3-5,1).

estimativa de Kaplan-Meier de proporção acumulada de doença- sobrevida livre: (a) O tempo médio para a sobrevivência livre de doença (DFS; nenhuma recidiva /metástase) em pacientes com CECP mostrando imunomarcação nuclear de S100A7 foi de 13 meses, enquanto que em pacientes não mostrando /fraca imunomarcação S100A7 no núcleo DFS mediana foi de 70 meses ( p = 0,016); (B) Em pacientes que apresentam aumento da expressão S100A7 citoplasmática do DFS mediana foi de 14 meses, em comparação com HNSCC que mostrou imunomarcação citoplasmática leve ou moderada (mediana DFS = 70 meses, p = 0,055). dependentes do tempo positivo e negativo valores preditivos (PPV (t), NPV (t)) de expressão S100A7 nuclear. (C) PPV (t) por hora de reincidência do câncer por 49 pacientes com CECP com S100A7

+ (linha sólida) e para todos os pacientes 77 CECP com dados de sobrevivência (linha tracejada); d) NPV (t) por hora de reincidência do câncer por 28 pacientes com CECP com S100A7

-. (linha sólida)

Com base em nossos dados, o valor prognóstico adicional que S100A7 nuclear expressão fornecida para a previsão de recorrência do câncer (PPV) em pacientes com CECP foi medida pela relação: PPV

recaída /CECP (83 meses | S100A7) /PPV

recaída /CECP (83 meses) = 71,4 /61,0; ou para a exclusão (VPL) recorrência de câncer em pacientes com CECP foi NPV

recaída /CECP (83 meses | S100A7) /NPV

recaída /CECP (83 meses) = 57,1 /39,0, conforme mostrado na Figura 3C e 3D, respectivamente .

A verificação de S100A7 sobre-expressão por meio de RT-PCR e ocidentais

blotting

A sobre-expressão de S100A7 em lesões orais foi verificada por RT-PCR e análises de Western blot nas mesmas amostras de tecido representativo, como utilizado para análise imuno-histoquímica. análise de RT-PCR demonstrou o aumento dos níveis de transcritos de S100A7 em hiperplasia de células escamosas, displasia, e HNSCC em comparação com tecidos normais (Figura 4A). A análise Western blot mostrou uma única banda intensa de 11,4 kDa, confirmando a expressão aumentada de hiperplasia de célula escamosa, displasia e carcinoma epidermóide, em comparação com os tecidos normais (Figura 4B).

(a) a análise de RT-PCR de S100A7 na mucosa oral normal, hiperplasia de células escamosas, displasia e tecidos CECP. Para a análise de RT-PCR e análise de Western blot, utilizou-se normal (N = 5), hiperplasia (n = 5), displasia (n = 5) e HNSCC (n = 5) tecidos. Painel mostra o aumento dos níveis de transcritos de S100A7 em lesões orais hiperplasia de células -squamous (H), displasia (D) e HNSCC (T), em comparação com a mucosa normal (N), que mostrou níveis basais de transcrição S100A7. p-actina utilizada como um controlo para normalizar a quantidade de ARN utilizado em cada reacção de RT-PCR é mostrada no painel inferior. (B) análise de transferência de Western de S100A7 na mucosa oral normal (N), a hiperplasia de células escamosas (H), displasia (D) e tecidos CECP. Uma quantidade igual de lisados ​​de proteína a partir destes tecidos foram sujeitos a electroforese em 12% SDS-PAGE e transferidas para membrana de PVDF. A membrana foi incubada com os respectivos anticorpos primários e secundários, conforme descrito na secção de Métodos e o sinal detectado pelo método de quimioluminescência aumentada. Painel mostra o aumento da expressão da proteína S100A7 em lesões orais – hiperplasia de células escamosas (H), displasia (D) e HNSCC (T), em comparação com a mucosa normal (N). GAPDH foi utilizado como controle de carga

Discussão

Os resultados mais marcantes do nosso estudo são:. (I) aumento significativo na expressão S100A7 (citoplasma /núcleo) em hiperplasia de células escamosas, displasia e CECP em comparação com os tecidos orais normais; (Ii) a expressão S100A7 citoplasmática distingue escamosas hiperplasia das células, displasia e HNSCC de mucosa normal com elevada especificidade e PPV; (Iii) aumento significativo na acumulação nuclear S100A7 em HNSCC em comparação com displasia; e (iv) o potencial de S100A7 nuclear como um marcador de prognóstico de carcinoma epidermóide. É digno de nota que os estudos sobre a análise molecular de lesões leucoplasia – com hiperplasia de células escamosas ou displasia são muito limitadas, porque muitas vezes esses pacientes não procuram atendimento médico, devido a pequenas lesões que não colocam quaisquer problemas clínicos graves. A expressão aumentada S100A7 tem sido relatada em lesões displásicas [29], [30]. No entanto, nossos dados sugerem S100A7 superexpressão tão cedo quanto na hiperplasia de células escamosas, sem evidência histológica de displasia. O início da hiperplasia de células escamosas é frequentemente associada com inflamação crônica e as ligações moleculares entre a inflamação e pré-malignidade estão sendo intensamente perseguido. Neste contexto, nomeadamente estudos anteriores tenham relatado o papel das proteínas S100 na inflamação, apoiando nossas descobertas [21], [31] – [33]. S100A7 foi identificada no epitélio pré-maligna oral (displasia) por análise de microarray e proposto para ser um marcador de inflamação [34]. S100A7 tem mostrado desempenhar um papel na facilitação da resposta de célula inflamatória do hospedeiro, onde é implicado como um factor quimiotáctico para neutrófilos e linfócitos em doenças de pele [35]. S100A7 também tem sido associado com o aumento de células inflamatórias infiltra-se em todos os tipos de tumores invasivos da mama [24]. Além disso, S100A7 tem sido proposto como um gene de resposta da epiderme para citocinas inflamatórias [36], [37]. No cancro da mama (carcinoma ductal in situ), tanto a oncostatina M (OSM) e a interleucina-6 (IL-6) têm sido propostos para regular a expressão e a actividade de PI3K S100A7, regulando, STAT3 e Erk sinalização [38]. Estes mecanismos podem se estender a HNSCC, bem como, uma vez que o envolvimento de IL-6 e PI3K sinalização em HNSCC tem sido bem documentado por nosso laboratório e outros [39], [40].

Um dos principais desafios atualmente enfrentados pela oncologistas é a falta de marcadores moleculares para identificar pacientes com lesões leucoplasia orais que estão em alto risco de transformação para malignidade. Neste contexto, o aumento significativo na expressão S100A7 observada em HNSCCs (67% casos), em comparação com as lesões leucoplasia com displasia (44%) é um achado importante do nosso estudo (p = 0,005, OR = 2,8, IC 95% = 1,4-5,7), o que sugere que a acumulação nuclear de S100A7 pode estar ligada ao aumento do risco de transformação maligna e poderá servir como um marcador para identificar as lesões de alto risco. No entanto, esta constatação mandados de confirmação em um estudo de acompanhamento longitudinal de pacientes com lesões a leucoplasia, para estabelecer uma possível ligação entre a expressão S100A7 nuclear eo risco de desenvolvimento de câncer.

Em nosso estudo, S100A7 mostrou-se fator prognóstico para a sobrevivência reduzido de pacientes com CECP. No entanto, em contraste com estes resultados, a expressão desta proteína foi associada com elevada diferenciação. Nenhum dos espécimes mal diferenciados (n = 6), expressa S100A7. Esta descoberta parece ser contraditório à primeira vista. No entanto, é interessante notar que, entre os 100 casos CECP analisados ​​em nosso estudo, apenas 6 tumores pouco diferenciados foram analisados; em comparação com 45 tumores bem diferenciados foram investigados. Assim maior número de tumores pouco diferenciados precisam ser analisados ​​para determinar a correlação com a expressão S100A7 em um estudo futuro. Nosso estudo também foi apoiado por um relatório anterior que mostrava associação de expressão S100A7 nuclear com carcinoma de células escamosas bem diferenciado em comparação com carcinomas de células escamosas moderados e pouco diferenciadas [30]. Em um estudo paralelo usando CCEO tecidos seções, Kesting et al., [29] mostrou uma correlação significativa entre o aumento da expressão S100A7 e estágio do tumor (I e II), bem carcinomas diferenciados e tumores não-metastáticos, apoiando assim os nossos achados. Observações semelhantes foram relatadas na bexiga, da mama e cancro da pele [18], [29], [41] – [44]. S100A7 superexpressão mostrou associação com carcinoma de células escamosas bem diferenciado da bexiga em comparação aos tumores menos diferenciados. Da mesma forma, a sobre-expressão S100A7 tem sido mostrado para ser expressa na região superficial, diferenciadas do epitélio e sua expressão correlaciona-se com o grau de diferenciação de queratinócitos [18]. expressão S100A7 é relativamente baixo em lesões proliferativas hiperplásicas normais, benignas e ductal atípica, no alto das carcinoma ductal pré-invasivo in situ (DCIS), mas reduzidos em carcinomas invasivos [41] – [44]. Em tumores da pele, que está ausente em basalioma indiferenciada e fortemente expresso no carcinoma in situ, assim como em ceratoacantoma e carcinoma de células escamosas diferenciada. Tomados em conjunto, estes resultados sugerem claramente o papel de S100A7 na diferenciação epitelial. Na tentativa de explicar o papel de S100A7, Zhou et al. [30] demonstraram a superexpressão da proteína S100A7 resultou na degradação da β-catenina pelo independente via não-canônica de GSK3β em células cancerosas orais [30]. Além disso, a sobre-expressão de S100A7 inibiu a proliferação celular in vitro, mas promoveu a diferenciação do tumor em um modelo de câncer bucal xenotransplante ortotópico, apoiando nossos achados clínicos. Assim, S100A7 superexpressão suprime o crescimento do tumor e invasão de regulação negativa da sinalização β-catenina. No entanto, o mecanismo exato que explica esse papel bifásica de expressão S100A7 na proliferação em estágios iniciais, mas induzir a diferenciação em estágios avançados carcinogênese em cabeça e pescoço continua a ser completamente compreendido e garante uma investigação mais aprofundada.

Curiosamente, S100A7 sobre-expressão ( citoplasma /núcleo) tem sido associada com mau resultado paciente em pacientes com câncer de mama invasivo ER-negativos [41], [45]. Notavelmente, o nosso estudo mostrou significado da expressão S100A7 nuclear como um pobre prognosticator de CECP (independente de outros parâmetros clínicos e patológicos como revelado pelo modelo de regressão de Cox). Além disso, o nosso tempo de análise preditiva dependentes também revelou mau prognóstico dos pacientes com CECP que mostram aumento da expressão S100A7 nuclear. Tomados em conjunto, estes resultados demonstraram o potencial do S100A7 nuclear como um marcador preditivo de mau prognóstico de CECP. expressão alterada de várias proteínas S100 também tem sido associada com HNSCC [10], [25] – [28]. Recentemente, S100A4 e S100A2 ambos têm sido propostos como biomarcadores de relevância de diagnóstico e /ou prognóstico [26], [46]. S100 família de proteínas incluindo S100A7 foram mostrados para formar ambos os homodímeros e heterodímeros que interagem com c

junho

proteína de ligação a um domínio de activação (Jab1), proteína de ligação a H Ran (RanBPM), proteína de ligação de ácido gordo da epiderme (EFABP) , e transglutaminase. Interacções com RanBPM foram recentemente mostrado para promover a migração de células de cancro renal [47], sugerindo o potencial de influenciar a S100A7 potencial invasivo das células cancerosas. Usando electroforese 2D em gel, S100A7 foi identificado como um marcador putativo para a metástase pulmonar CCS para cérebro [48]. Usando modelos in vivo para perda de ambas HNSCC S100A7 e E-FABP foram mostrados para resultar na redução da adesão celular e aumento da motilidade celular, levando a metástases distantes [49]. Assim, especula-se que com uma maior compreensão do papel da S100A7 na migração celular, invasão e proliferação vias, S100A7 podem servir como um alvo terapêutico para o tratamento de inflamação e cancro.

Em conclusão, S100A7 foi mostrado para ser expresso em lesões orais na fase inicial, antes do início da displasia e em tumores francas. A sua localização subcelular, sugere que S100A7 nuclear pode estar associada com um risco aumentado de transformação de lesões orais pré-malignas e recorrência em HNSCC. Além disso, o aumento da acumulação nuclear de S100A7 em CECP em comparação com lesões displásicas garante um estudo longitudinal em grande escala de pacientes com displasia de avaliar o seu potencial como um determinante do aumento do risco de transformação de lesões pré-malignas orais e recorrência na HNSCC.

Materiais e Métodos

pacientes e coleta de dados clínico-patológico, amostras de tecido

o Comitê da All India Institute of Medical Sciences (AIIMS), Nova Deli, Índia Ética Institucional Humanos, aprovada este estudo antes do seu início. As amostras de tecido foram obtidos por procedimentos diagnósticos ou terapêuticos a partir de 166 pacientes com via oral lesions- leucoplasia clinicamente definida [com hiperplasia de células escamosas (n = 116) ou com displasia (n = 50)] participando do Ambulatório dos Departamentos de Disciplinas cirúrgicos e Otorrinolaringologia , AIIMS, e de 100 pacientes com CECP submetidos a cirurgia de câncer de curativo durante o período de 2002-2007, após a obtenção de consentimento por escrito dos pacientes. Sempre que possível, os tecidos, não-maligna (n = 43) foram tomadas a partir de cada um local distante do HNSCC cirurgicamente ressecado. tecidos bucais não malignas (n = 57) também foram coletadas dos pacientes atendidos no Departamento de Cirurgia Ambulatorial of Dental para a extração do dente, depois de obter o consentimento por escrito dos pacientes. Tomados em conjunto, estes 100 tecidos orais não-malignas com evidência histológica do epitélio normal, constituiu o grupo normal. Após a excisão, os tecidos foram imediatamente congelados instantaneamente em azoto líquido e armazenado a -80 ° C no tecido Research Banco até utilização ulterior; uma parte de tecido foi recolhido em 10% de formalina e embebidos em parafina para análises histopatológicas e imuno-histoquímicas. Confirmado histologicamente epitélio oral normal, hiperplasia de célula escamosa, displasia e carcinoma epidermóide como revelado por H E coloração foram utilizados para imuno-histoquímica [7]. dados demográficos, clínicos e patológicos de pacientes foram registrados em um performa pré-concebido como descrito anteriormente [7], [50]. As informações documentais incluídas TNM clínica estadiamento (tumor, nódulo, e metástases com base na classificação Cancer Center le União Internacional TNM de tumores malignos 2002), local da lesão, diferenciação histopatológica, idade, sexo e hábitos de consumo de tabaco.

Follow-up Study

Setenta e sete pacientes com CECP submetidos a tratamento 2002-2007 foram investigados e avaliados no câncer de cabeça e pescoço clínica follow-up em intervalos de tempo regulares. status de sobrevivência dos pacientes com CECP foi verificado e atualizado a partir dos registros do Tumor Registry, Institute Hospital do Câncer Rotary, AIIMS, a partir de dezembro de 2009. Os pacientes com CECP foram monitorados por um período máximo de 83 meses. sobreviventes livres da doença foram definidos como pacientes livres de evidência clínica e radiológica de recidiva local, regional ou distante no momento do último follow-up [50], [51]. Loco-regional recaída /morte foram observados em 51 de 77 (66%) pacientes monitorados durante o follow-up. Vinte e seis pacientes que não apresentaram recidiva estavam vivos até o final do período de acompanhamento. sobrevida livre de doença só foi avaliada no presente estudo, como o número de mortes devido à progressão da doença não permitiu uma análise estatística confiável. sobrevida livre de doença foi expressa como o número de meses a partir da data da cirurgia para loco-regional recaída /morte.

Imunohistoquímica

secções embebidas em parafina (5 mm) de não-oral humana