Abstract

Fundo

O endotélio não é um órgão homogêneo. heterogeneidade da célula endotelial tem sido descrito no nível da morfologia celular, função, expressão do gene, e da composição de antigénio. Como consequência da genética, transcriptoma e envolvente diversidade ambiente, as células endoteliais de diferentes leitos vasculares têm diferenciado funções e fenótipo. A detecção de células endoteliais circulantes (PEC) por citometria de fluxo é uma abordagem amplamente utilizada em pacientes com câncer, e seu número, viabilidade e cinética é uma ferramenta promissora para estratificar a receber tratamento anti-angiogênico paciente.

Metodologia /PRINCIPAIS CONCLUSÕES

Actualmente PEC são identificadas como positivas para um antigénio de ligação nuclear (DNA +), negativa para o marcador CD45 pan leucócitos, e positivo para CD31 e CD146. Na sequência de uma abordagem recentemente validado no nosso laboratório, foi investigada a expressão de CD109 em PEC a partir do sangue periférico de pacientes de cancro sujeitos e saudáveis. A natureza endotelial destas células foi validado por RT-PCR para a presença do nível de m-ARN de CDH5 (VE-Caderina) e CLDN5 (Claudin5), dois transcritos específicos endoteliais. Antes do tratamento, os níveis significativamente mais elevados de CD109 + PEC e viável CD109 + PEC foram encontrados em pacientes com câncer de mama e pacientes com glioblastoma, em comparação com controles saudáveis, e seu número diminuiu significativamente após o tratamento. Níveis mais elevados de transcritos endoteliais específicas expressas no desenvolvimento de células endoteliais CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, foram observados em ordenada CD109 + PEC quando comparado com classificada CD146 + PEC, sugerindo que estes genes podem desempenhar um papel importante não só durante a embriogénese, mas também em angiogénese adulto. Curiosamente, os níveis de mRNA de TEM8 (identificado como Antrax Toxina receptor1, Antrax1) foram expressos em CD109 PEC + +, mas não em CD146 + PEC.

Conclusão

Em conjunto nossos resultados sugerem que CD109 representam um população rara de células endoteliais tumorais, que desempenham um papel prognóstico potencialmente útil em pacientes com glioblastoma circulante. O papel da expressão CD109 nas células endoteliais dos vasos específicos de câncer merece ser mais bem investigada por estudos de expressão gênica

Citation:. Mancuso P, Calleri A, Gregato G, Labanca V, Quarna J, Antoniotti P, et al . (2014) uma subpopulação de células endoteliais circulantes Expresso CD109 e é enriquecido no sangue de pacientes com câncer. PLoS ONE 9 (12): e114713. doi: 10.1371 /journal.pone.0114713

editor: Lu-Gang Yu, da Universidade de Liverpool, Reino Unido

Recebido: 05 de maio de 2014; Aceito: 13 de novembro de 2014; Publicação: 15 de dezembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Mancuso et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes e informações de apoio provenientes de arquivos de citometria de fluxo e estudo de biologia molecular estão dentro do papel

Financiamento:. Apoiado em parte pela AIRC (Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro), Fondazione Umberto Veronesi, e Ministero della Salute. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

a angiogénese desempenha um papel crucial no crescimento e progressão tumoral [1] – [3] e com base na teoria de que o direccionamento de células endoteliais pode ser uma estratégia mais eficaz do que a segmentação células tumorais, durante a última década muitos anti -angiogenic drogas foram introduzidos para o ambiente clínico [4] – [8].

de modo a avaliar os biomarcadores da angiogénese que pode prever o resultado de terapias anti-angiogénicos circulantes em doentes com cancro, muitas abordagens foram testados em ambos estudos pré-clínicos e clínicos [9] – [11] aplicativos de largura e entre estes a quantificação de células endoteliais circulantes (PEC) por citometria de fluxo tem encontrado [12] – [14].

PEC são células endoteliais maduras liberados a partir de vasos durante volume de negócios fisiológico endotelial ou, em pacientes com câncer, a partir da vasculatura do tumor, onde eles provavelmente refletem dano ou disfunção endotelial. Estas células são aumentados em pacientes com câncer quando comparados com indivíduos saudáveis, e as suas modificações, em número e viabilidade mostrou preditivo, prognóstico, dinâmico ou escapar valor biomarcador [15] – [18].

O endotélio não é um órgão homogênea. heterogeneidade da célula endotelial tem sido descrito no nível da morfologia celular, função, expressão do gene, e da composição de antigénio [19]. Como consequência da genética, transcriptoma e envolvente diversidade ambiente, as células endoteliais de diferentes leitos vasculares têm diferenciado funções e fenótipo [20] -. [24], [35]

marcadores endoteliais Atualmente utilizados para identificar PEC são CD34, CD31 e CD146, em combinação com CD45, para excluir os leucócitos, e um marcador de coloração nuclear (como Syto16, Hoechst ou DRAQ5) para eliminar a contagem de micropartículas endoteliais alveolares [14], [25] – [26].

p> o gene CD109 codifica uma glicoproteina de glicosil-phosphatidylinositolanchored que é um membro da alfa (2) da família macroglobulina /C3, C4, C5 de proteínas contendo tioéster-[27]. CD109 interage directamente com o tipo I factor de crescimento transformante beta (TGF-β) do receptor de sinalização e modula negativamente a sinalização de TGF-β [28]. Ele é expressa numa subpopulação de células CD34 + [29], sobre as plaquetas activadas e células T activadas [30], e numa subpopulação de células endoteliais [31]. Curiosamente, foi relatado que é uma CD109 de 12 marcadores endoteliais sobre-expressos em células endoteliais de tumores [23], [24]. A fim de obter uma compreensão mais detalhada de fenótipo CEC, foi investigada a expressão de CD109 nas células endoteliais em cultura e no PEC a partir do sangue periférico de pacientes de cancro sujeitos e saudáveis. Nós usamos uma abordagem de citometria de fluxo validado em nosso laboratório, bem como a natureza endotelial dessas células foi validado por RT-PCR e expressão gênica.

Materiais e Métodos

Declaração de Ética

Todos os pacientes deram consentimento informado por escrito antes da inclusão no protocolo terapêutico e para fins de pesquisa. Toda a investigação clínica foram realizadas de acordo com os princípios expressos na Declaração de Helsinki

Para os pacientes do cancro da mama: O ensaio foi conduzido no Instituto Europeu de Oncologia, Milão, Itália e aprovados pelo “IRCCS – Istituto Europeo. di Oncologia e Centro Cardiológico Monzino “Comitê de Ética e registrado no banco de dados Institute (# 2007-006025-27)

Para pacientes com glioblastoma:. o ensaio foi conduzido no Instituto neurológico” Carlo Besta “de Milão, Itália e aprovados pelo “Regione Lombardia Sezione Fondazione IRCCS Istituto Neurologico Besta” Comitê de Ética e registrado no banco de dados Institute (# 1/08).

Detecção de CD109 em colônias endoteliais

Para validar por citometria de fluxo a expressão de CD109 nas células endoteliais in vitro colónias endoteliais foram obtidos a partir de sangue periférico (PB) de 10 dadores saudáveis ​​(7 do sexo feminino, 3 homens) e 23 doentes com cancro, como descrito anteriormente [32].

Resumidamente, as células mononucleares (MNC) foram isoladas a partir de PB utilizando centrifugação de gradiente Ficoll-Paque, ressuspensas em meio EGM2 (Lonza, Walkersville, MD) e semeadas em colagénio I placas de petri (35 mm Biocoat, BD Labware, Bedford, MA) . As culturas foram incubadas a 37 ° C, 5% de CO2, 95% de humidade relativa durante 3-4 semanas. O meio foi mudado a cada 2 dias durante 7 dias e, em seguida, duas vezes por semana até que a primeira passagem, e cultura monitorizados para a detecção de colónias endoteliais com base em características morfológicas, como previamente descrito [32]. Após 15-20 dias, as células foram destacadas com tripsina /EDTA (Gibco, BRL, Reino Unido) e coradas com anticorpos monoclonais (MoAb) anti-CD31-PeCy7, CD34-APC, CD45-H7, e 7-AAD (todos da Beckman Coulter) CD146-PE (Chemicon), VEGFR-2- PE (R . D) e CD109-PE (Abcam) para estudos de citometria de fluxo

Triagem de CD109 + CD146 + e células do sangue periférico

para executar uma análise de microarray de genes expressos em células endoteliais circulantes positivos para CD109 (CD109 + PEC) e CEC positiva para CD146 (CD146 + PEC), foi utilizado um período de três Afluxo de laser classificador de células de alta velocidade (BD).

Resumidamente, em duas experiências diferentes, a 150 ml de sangue de 8 indivíduos saudáveis ​​foram recolhidas e após isolamento PTM com gradiente Ficoll, foram esgotadas de células de glóbulos brancos, utilizando o anticorpo anti-CD45 acoplado com MicroBeads magnéticos MACS (Miltenyi Biotech) seguindo as instruções do fabricante. As células foram coradas para Syto16, CD45, CD31 e CD109 e no segundo experimento para Syto16, CD45, CD31 e CD146.

Durante procedimento de triagem, as amostras foram continuamente arrefecido a 4 ° C e uma altura de pulso dispersão para a frente e análises de dispersão secundários foram realizados para excluir grupos de células e dobletes. Um procedimento de separação de células duas vias foi realizada com A140 hum bocal com uma pressão de 5,5 PSI, e com uma taxa de eventos de 1000-1500 eventos por segundo, utilizando um modo de pura sorte. O portão de triagem foram pintados sobre Syto16 + CD45-CD31 + CD109 + células e sobre as células CD45 + Syto16-CD31 + CD146 +. As amostras foram recolhidas em tubos de polipropileno estéreis contendo RPMI e usadas para análise molecular. Pureza foi sempre superior a 95% com uma recuperação de 70-80%.

análise das células CD109 + PEC ordenados a expressão do gene de RT-PCR e e CD146 + PEC

isolamento do RNA de ordenada CD109 + PEC e CD146 + PEC, foi realizada utilizando um estojo de isolamento ArcturusPicoPureRNA, e o ADNc foi gerado a partir da quantidade total de ARN utilizando o ADNc de alta capacidade de inverter kit de transcrição (Applied Biosystems). Quantitative PCR em tempo real (qRT-PCR) foi realizada após a pré-amplificação de ADNc (TaqManPreAmp Mistura de PCR Kit) com um ABI Prism 7000 plataforma utilizando TaqMan Ensaio de Gene Expression para CDH5 (VE-caderina), CLDN5, (Claudina 5) VWF (factor de von Willebrand), CD34, VCAM-1, CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, ARAP3, TEM8 (receptor ANTRAX1) [33].

Caracterização de CD109 + CEC e CD146 + fenótipo CEC

Para caracterizar CD109 + CEC e CD146 + fenótipo CEC, foi utilizada uma combinação de 10 anticorpos monoclonais (Syto 16 FITC, CD146 PE, 7-AAD, CD31 PeCy7, CD34 ECD, CD13 APC, CD90 APC-AF700, CD117 APC-AF750, CD45 Pacific Blue e CD109 Laranja do Pacífico). CD90 e CD 117 foram comprados pela Beckman Coulter.

Unlabeled CD109 (Abcam) foi conjugado com laranja pacífico, usando o Zenon

Kit R tecnologias de rotulagem (Life Technologies), de acordo com as instruções do fabricante.

CD34, CD90 e expressão CD117 foram avaliados em DNA + (Syto16 +) CD45-CD31 + CD109 + e sobre DNA + (Syto16 +) células CD45-CD31 + CD146 +.

Para confirmar por citometria de fluxo a natureza endotelial de CD109 + PEC e CD146 + PEC, usamos Ulex europeaus lectina e Ac-LDL FITC-se tomar.

Para Ac-LDL FITC-se levar, foram coletados 5 ml de sangue a partir de 5 doentes com cancro da mama diferentes, e depois de multinacionais isolamento com Ficoll-gradiente, as células foram incubadas com FITC de Ac-LDL de acordo com as instruções do fabricante (10 ug /ml durante 4 horas a 37 ° C). Após incubação Ac-LDL, que coradas com células Syto16, CD45, CD31 e CD109 para investigar a presença de células AcLDL + CD109 + CD45-Syto16 entre + (nucleadas) CD31 + células. Cinco diferentes experimentos foram realizados.

Detecção de CD109 + PEC e CD146 + PEC em indivíduos saudáveis ​​e pacientes com câncer

Na sequência de um protocolo de citometria de fluxo validado em nosso laboratório para detecção CEC (Fig. 1), [ref 14], o número ea viabilidade de CD109 + PEC e CD146 + PEC foram avaliadas no sangue periférico de 50 indivíduos saudáveis ​​e em 200 doentes com cancro (66 cancro da mama metastático e 134 pacientes com glioblastoma).

fluorescência Minus One para cada fluorescência é relatado.

Resumidamente, a coloração nuclear Syto16 foi utilizado para discriminar entre ADN contendo células, plaquetas e restos celulares, e 7AAD para determinar o estado da viabilidade das células. O painel de MoAbs utilizado incluiu anti-CD45 (para excluir as células hematopoiéticas), anti-CD31 (um marcador de diferenciação celular endotelial), anti-CD34 (como as células endoteliais e progenitoras marcador) e anti-CD109 ou anti-CD146.

Após a incubação de 2,5 × 10

6 total de células com MoAbs (4 ° C durante 20 minutos) e as células de lise com cloreto de amónio (NH

4Cl), pelo menos 2 x 10

6 células totais foram adquiridos pelo fluxo citómetro (FACS Canto, BD, de 2007 a 2010 e Navios, Beckman Coulter, a partir de 2010 até fevereiro de 2013). A análise foi realizada sobre as células positivas para Syto16 (ADN) negativas para CD45 e positivas para CD31 e CD109 ou para CD31 e CD146.

A combinação de Syto16 7AAD e foi utilizado para avaliar a viabilidade CEC de acordo com van der Pol et ai. [34]. células necróticas foram identificados como Syto16 baixo /7AAD células positivas, apoptóticos como Syto16 baixo /7AAD células negativas e viáveis ​​como Syto16 brilhante /7AAD negativo.

Análise Estatística

As variáveis ​​contínuas são apresentados como ± médios SEM. Two-way ANOVA, ou bicaudal teste t de Student, foram utilizados sempre que necessário. A significância estatística foi tomada em p . 0,05

Resultados

colônias endoteliais fenótipo

Peripheral MNC do sangue (30 × 10

6 células banhado) gerados colônias endoteliais de 9 de 10 indivíduos saudáveis ​​e de 14 de 23 pacientes. Todas as colónias endoteliais foram positivas para CD31, CD146, CD34 e VEGFR-2 e negativa para CD45.

colônias endoteliais de todos os indivíduos saudáveis ​​e de 10 pacientes com câncer também foram avaliados para a expressão CD109. CD109 foi expressa em 1/9 culturas endoteliais de indivíduo saudável (11%) e em 5/10 (50%) culturas endoteliais de pacientes com câncer.

RT-PCR da ordenada CD109 + PEC e CD146 + PEC

Dobre alterações de genes down- ou up-regulamentados são expressos comparando cDNA de CD109 + PEC para CD146 + PEC como células de referência (Fig. 2).

Dobre alterações de genes down- ou up-regulada são expressa comparando ADNc de CD109 + de células CD146 + como células de referência. Para garantir a reprodutibilidade biológica, o sangue para a coleta de cDNA foram obtidos a partir de 8 doadores diferentes.

Em ambos CD109 + PEC e CD146 + PEC que confirmou a expressão de mRNA nível de CDH5 (Ve-caderina) e CLDN5 (Claudina V), duas transcrições específicas endoteliais, sugerindo que ambas as células estão relacionadas e da natureza endotelial [23] – [24]. Mesmos resultados foram obtidos para os níveis de mRNA de vWF, VCAM1 e CD34.

Níveis mais altos de transcrições endoteliais específicas expressas no desenvolvimento de células endoteliais [33] CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, foram observados em classificada CD109 + PEC quando em comparação com ordenados CD146 + PEC.

Curiosamente, os níveis de mRNA de TEM8 (identificado como Antrax Toxina receptor1, Antrax1) foram expressos apenas no CD109 + PEC + mas não em CD146 + PEC.

CD109 + e CD146 + CEC fenótipo

Como se mostra na Fig. 3, entre Syto16 + 7-AAD-CD31 células + CD45-, foram detectados dois população diferente da PEC, sendo um positivo para CD109 +, mas negativo para CD146, e um positivo para CD146, mas negativo para CD109. Ambos CD146 + PEC e CD109 + PEC foram negativas para CD90 e CD117, para confirmar estas células são células provável diferenciadas e não progenitores. CD34 foi positivo em 30% de CD146 + PEC e em 20% de CD109 + PEC, e CD13 foi positivo em 50% e 60% de CD146 + PEC e CD109 + PEC, respectivamente, confirmando estas células são células de vasculatura angiogénica [44] activado.

Após a exclusão de detritos (a) e selecção de CD45- (B), nucleados (Syto16 +) e CD31 + células (C), a CEC foram identificadas como positivas para a CD109 ou CD146 (e). (D): controle negativo. CD109 + PEC e CD146 + PEC foram avaliados por citometria de fluxo para a expressão de CD34, CD117, CD90 e CD13.

Ambos CD146 + PEC e CD109 + PEC foram positivos para o Ulex europeaus Lectina (Fig. 4 A-B1). Para excluir contaminação células epiteliais, que manchou nucleadas (Syto16 +) CD45- células de EpCAM e mesmo que uma subpopulação de células EpCAM + está presente, estas células são negativas para a expressão de CD31 (Fig. 4 C-C1).

coloração EpCAM (4C-C1) confirmou que as células epiteliais mesmo se presente no compartimento da célula do DNA + CD45-, são negativos para a expressão de CD31 presente apenas nas células endoteliais.

para examinar CD109 + PEC função, foi realizada Ac-LDL-se-take. Como Ac-LDL é retomado por macrófagos /monócitos, utilizou-se estas células como “controlo positivo interno” para confirmar a actividade de endocitose. Conforme relatado na Fig. 5, + células entre Ac-LDL ambos foram detectados CD45 + CD31 + CD14 + (monócitos) e CD45-CD31 + CD109 + (células endoteliais).

Depois de dublets (A) e restos de exclusão (B), Ac-LDL + As células foram detectados (C). Entre estas células, as células CD45 + CD31 + e CD45-CD31 + foram detectados (D). CD45 + CD31 + foram também positivas para CD14 (monócitos, E) e de CD45-CD31 + foram também positivas para CD109 + (células endoteliais, F). células Ac-LDL + foram nucleadas (Syto16 +, F). C1, D1, E1 e F1 são os controles negativos.

Detecção de CD109 + PEC em indivíduos saudáveis ​​e pacientes com câncer

Os pacientes características são apresentados na Tabela 1.

níveis significativamente mais elevados de CD109 + PEC, CD146 + PEC, viável CD109 + PEC e viável CD146 + PEC (P = 0,0001) foram encontrados no início do estudo em pacientes com câncer de mama e pacientes com glioblastoma, em comparação com controles saudáveis ​​(Tabela 2). CD109 + PEC foram de 26 ± 20 /ml em sujeitos saudáveis ​​(n = 50), 62 ± 43 /mL em pacientes com cancro da mama metastático (n = 66, p 0,0001) e 101 ± 84 /mL em pacientes com glioblastoma (n = 134 , p 0,0001) antes do tratamento. A fração de apoptose /necrótica CD109 + PEC foi de 71 ± 18% em sujeitos saudáveis, 51 ± 18% em pacientes com câncer de mama e 60 ± 21 em pacientes com glioblastoma.

Após o tratamento CD109 + PEC e viável CD109 + PEC foram 52 ± 42 /mL e 15 ± 20 /mL, respectivamente, em pacientes com câncer de mama, e 64 ± 60 /mL e 35 ± 30 /mL em pacientes com glioblastoma (Tabela 3).

CD146 + PEC foram de 43 ± 23 /ml em sujeitos saudáveis ​​(n = 50), 103 ± 83 /mL em pacientes com cancro da mama (n = 64, p 0,0001) e 117 ± 87 em pacientes com glioblastoma (n = 134, p 0,0001).

A fração de apoptose /necrótica CD146 + PEC foi de 67 ± 20% em sujeitos saudáveis, 62 ± 20% em pacientes com câncer de mama e 66 ± 18 /mL em pacientes com glioblastoma antes do tratamento.

Após o tratamento CD146 + PEC e viáveis ​​CD146 + PEC foram de 96 ± 121 /mL e 41 ± 88 /mL, respectivamente, em pacientes com câncer de mama, e 78 ± 84 /mL e 23 ± 31 /mL em pacientes com glioblastoma (Tabela 3) .

Discussão

heterogeneidade da célula endotelial tem sido descrito no nível da morfologia celular, função, expressão do gene, e da composição de antigénio. Uma vez que os vasos sanguíneos são distribuídos por todo o corpo, as células endoteliais são expostos a uma enorme variedade de microambientes tecidulares e a grande variedade de entradas de sinal é suficiente para gerar a heterogeneidade fenotipica do outro lado da árvore vascular [19], [21], [35] .

a detecção de células endoteliais circulantes por citometria de fluxo é uma abordagem amplamente utilizada em doentes com cancro, e a identificação do número, viabilidade e cinética de células endoteliais é uma ferramenta promissora para estratificar a receber tratamento anti-angiogénico paciente [ ,,,0],15] – [18]

Atualmente, CECs são enumerados por uma abordagem multiparamétrica citometria de fluxo combinando CD146, CD31, CD45, um antigénio de ligação nuclear (Syto16, Dapi ou HOECST) juntamente com uma coloração celular viabilidade (. como 7-AAD ou anexina V).

CD109 é uma glicoproteína da superfície celular de glicosilfosfatidilinositol ancorada e é um dos 12 marcadores endoteliais sobre-expressos em células endoteliais de tumores [23], [24].

neste trabalho, seguindo uma abordagem recentemente validado em nosso laboratório [14], nós ordenamos CD109 + PEC e CD146 + PEC e nós confirmada por RT-PCR, tanto em população a expressão de mRNA nível de CDH5 (Ve-caderina) e CLDN5 (Claudin5) dois genes selectivamente expresso em células endoteliais. Níveis mais elevados de CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, Gpr116 expressas no desenvolvimento de células endoteliais [33], estavam presentes em CD109 + PEC quando comparado com CD146 + PEC, sugerindo que estes genes podem desempenhar um papel importante não só no desenvolvimento de células endoteliais mas também em angiogénese adulto.

Demonstrámos que CD109 + PEC e CD146 + PEC são dois subpopulação de células endoteliais diferentes, sendo estes dois antigénios não expressas nas mesmas células, enquanto que o CD34 (um marcador actualmente utilizado para identificar as células progenitoras) foi positiva em 20% dos CD109 + PEC e, em 30% dos CD146 + PEC.

Foram avaliados o número, viabilidade e cinética de CD109 + PEC e de CD146 + PEC e observou que tanto a subpopulação de células endoteliais são enriquecidos no sangue de pacientes com glioblastoma e cancro da mama, são mais viável quando comparado com o valor observado no indivíduo saudável, e seu número diminuir significativamente após o tratamento.

em nossa experiência anterior, informou que, em pacientes com câncer de mama tratadas com quimioterapia metron, CD146 + níveis CEC após dois meses de tratamento foram associados com PFS prolongada [15]. Em outro ensaio clínico, no peito de pacientes com câncer tratados com quimioterapia metronomic e bevacizumab, os níveis de CEC de base também foram associados com PFS [36], [37] confirmando que a quantificação de CD146 + PEC é útil para identificar pacientes que podem se beneficiar de tratamentos anti-angiogénicos [ ,,,0],38].

em uma série de pacientes com glioblastoma tratados com AZD2171, um inibidor da tirosina quinase receptor pan-VEGF, Batchelor descobriram que os níveis CEC viáveis ​​foram maiores nos pacientes que apresentaram progressão da doença durante o tratamento com AZD2171 em comparação com pacientes sem progressão no dia 112 [39].

Nós informou recentemente [40] que, em pacientes com glioblastoma tratados com bevacizumab e irinotecano ou apenas com bevacizumab, PFS e OS foram significativamente aumentados em pacientes com contagens basais de CD109 + PEC maior de 41,1 /ml, (1stquartile), enquanto nenhum fator prognóstico foi associado a CD146 + PEC.

Estes dados sugerem que a heterogeneidade CEC pode refletir a complexidade tumor vascular e que CD109 + PEC pode ser um marcador de prognóstico potencialmente útil para glioblastoma pacientes.

foi relatado que CD109 é sobre-expresso na vasculatura do tumor [24], e neste estudo observou-se que todas as colónias endoteliais de indivíduos saudáveis ​​e de 10 pacientes com câncer foram positivas para CD31, CD146, CD34 e VEGFR-2 e negativo para CD45, CD109 enquanto era positivo em 1/9 culturas endoteliais a partir de sujeitos saudáveis ​​(11%) e em 5/10 (50%) a partir de culturas endoteliais doentes com cancro.

m Além disso -ARN nível de TEM8, uma glicoproteína de superfície celular identificados como Anthrax Toxina Receptor 1, eram detectáveis ​​em CD109 + PEC, mas não em CD146 + PEC. Tem sido relatado que TEM8, é sobre-regulada em vasos tumorais [41], [42]. Em ratinhos KO TEM8 angiogénese fisiológica e a cicatrização de feridas ocorre normalmente, mas em ratinhos portadores de tumor, crescimento de tumor é prejudicada, mostrando que TEM8 pode ser necessária para promover a angiogénese de tumores, mas não o normal desenvolvimento [43].

Tomados em conjunto estes CD109 resultados sugerem que poderia representar uma população rara de células endoteliais tumorais, que desempenham um papel prognóstico potencialmente útil em pacientes com glioblastoma circulante. O papel da expressão CD109 nas células endoteliais dos vasos específicos de câncer merece ser mais bem investigada por estudos de expressão gênica.

Conclusões

Há uma necessidade crescente na identificação circulando marcador biológico para estratificar pacientes que podem benefício do tratamento anti-angiogénico. Neste trabalho relatam que CD109 é um potencial marcador de prognóstico útil em pacientes com glioblastoma, e que o seu papel na angiogênese do câncer precisam ser investigadas no ajuste do tumor diferente.

Reconhecimentos

apoiado em parte por AIRC, (Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro), Fondazione Umberto Veronesi, e Ministero della Salute.