Abstract

O metabolismo das células cancerosas com piruvato-quinase M2 (PKM2) no seu centro do palco tem assumido uma importância primordial na investigação oncológica nos últimos tempos. metabolismo das células do cancro, caracterizado por a absorção de glucose melhorada, a produção de lactato e anabolismo é considerado um alvo ideal para intervenções terapêuticas. Expressão de PKM2 muda o metabolismo em favor das células cancerosas, por isso, o presente estudo foi desenhado para investigar o efeito até agora desconhecido de resveratrol, uma fitoalexina, na expressão PKM2 e as implicações resultantes sobre o metabolismo do câncer. Observou-se que o resveratrol PKM2 expressão sub-regulada pela inibição da sinalização de mTOR e suprimiu o metabolismo do cancro, apanhado pela diminuição da absorção de glucose, a produção de lactato (glicólise aeróbica) e anabolismo reduzida (síntese macromolecular) em várias linhas celulares de cancro. Uma diminuição contingente em níveis intracelulares de ribose-5-fosfato (R5p), um intermediário crítico da via das pentoses fosfato, representaram um anabolismo reduzida. Por conseguinte, o estado de metabolismo cancro suprimida resultou em proliferação celular reduzida. Curiosamente, o silenciamento de PKM2 absorção inibida glucose e produção de lactato shRNA-mediada, proporcionando evidência para o papel crítico de PKM2 e sua mediação nos efeitos observados do resveratrol sobre o metabolismo do cancro. Além disso, uma sobre-expressão de PKM2 aboliu os efeitos observados de resveratrol, significando o papel de PKM2 regulação negativa como uma função crítica de resveratrol. O estudo relata um efeito mediado por PKM2 novela do resveratrol sobre o metabolismo do câncer e fornece uma nova dimensão ao seu potencial terapêutico

Citation:. Iqbal MA, Bamezai RNK (2012) Resveratrol Cancer Inibe celular Metabolism por baixo Reguladora Piruvato Quinase M2 via inibição da alvo da rapamicina em mamíferos. PLoS ONE 7 (5): e36764. doi: 10.1371 /journal.pone.0036764

editor: Surinder K. Batra, University of Nebraska Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 15 de julho de 2011; Aceito: 06 de abril de 2012; Publicado em: 04 de maio de 2012

Direitos de autor: © 2012 Iqbal, Bamezai. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. A investigação foi financiado pela Universidade Grants Comissão, Governo da Índia. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

as células cancerosas confiar no processo de transformação metabólica para sustentar a proliferação. Estas células ignorar a fosforilação oxidativa mitocondrial, que channelizes glicose para a produção de ATP (catabolismo), e em vez disso utilizar a glicose para a síntese de macromoléculas (anabolismo) para células filhas [1]. As células cancerosas também converter mais de piruvato (produto de terminal da glicólise) em lactato, através de um mecanismo desconhecido em grande parte; e, assim, impedir a sua entrada em mitocôndrias [2]. O aumento da captação de glicose e produção de lactato são características de metabolismo do câncer (efeito Warburg ou glicólise aeróbica) [2], fornecendo células cancerosas uma vantagem de crescer mesmo em regiões com concentração muito baixa de oxigênio [1], [2]. factor de crescimento de sinalização mediada pelo alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) impulsiona o metabolismo das células cancerosas através da regulação da expressão de enzimas chave nas vias metabólicas [3]. Notavelmente, as mutações que causam hiper-activação de mTOR são comuns em cancros [4], [5].

Piruvato quinase M2 (PKM2) é mostrada para ser essencial para o metabolismo e o cancro essencial para o crescimento do tumor [6]. Das quatro isoformas de piruvato quinase G, R, M1 e M2 [7], [8], em proliferação e células embrionárias de tumor expressam predominantemente M2 [1]. Este interruptor isoforma é uma pré-condição para a glicólise aeróbica para ocorrer [9].

PKM2, uma isoforma alostérico da piruvato quinase, catalisa o último passo na conversão glicólise ou seja, de fosfoenol-piruvato em piruvato [10], [11]. Desde PKM2 tem uma actividade mais baixa em comparação com as isoformas constitutivamente activa [1], a sua supressão da actividade provoca uma acumulação de intermediários glicolíticas a montante. Um consequente resultado é um aumento da disponibilidade de intermediários glicolíticas para vias biossintéticas, como via de pentose fosfato (PPP), o que acelera a biossíntese macromolécula (ribose-5-fosfato; R5p) e crescimento tumoral [1]. R5p é um intermediário importante da via das pentoses fosfato e serve como um precursor para a síntese de macromoléculas [12]. A expressão de PKM2 em tumores é suficientemente elevada para ser explorada como um marcador prognóstico para cancro [13], [14], [15]. O nosso laboratório relatou mutações naturais em PKM2 associadas com o aumento da proliferação celular e poliploidia [16]; enfatizando o papel do PKM2 na proliferação celular. Por isso, o rastreio de drogas que inibem eficazmente a expressão PKM2 e prevenir transformação metabólica torna pertinente [17].

O resveratrol (3, 4 ‘, 5-trihidroxiestilbeno) é uma fitoalexina, presentes na pele de uvas vermelhas e outras frutas [18]. O resveratrol é relatado para exercer actividade anti-tumor em vários estágios de iniciação do tumor, promoção e progressão [19]. Isto é corroborado por relatos de efeito quimio-preventivo de resveratrol em várias linhas celulares de cancro, como, HeLa, A549 e MCF-7 [20], [21], [22]. Vários mecanismos de acção anti-proliferativa do resveratrol têm sido propostos, incluindo aumento de proteínas supressores de tumores como o p53 [22], BRCA 1 2 [23], fosforilação de factores de proteína e de transcrição Rb, como o NF-kB e AP-1 [24 ]. Em um relatório recente, o resveratrol foi mostrado para modular a proliferação celular via dependente de SIRT1 ativação da AMPK [25]. O resveratrol é relatado para inibir a via da PI3K e afecta a glicólise para causar a paragem do ciclo celular em linfomas de células B [26]. a inibição mediada pelo resveratrol do mTOR também é conhecido [27]. No entanto, estes resultados não explicam o papel do resveratrol na transformação metabólica, especialmente quando combinada com a expressão PKM2. Nós relatamos neste estudo, o efeito de resveratrol na expressão PKM2 com as consequentes implicações no metabolismo do câncer. Pela primeira vez, os nossos resultados demonstram novo efeito mediado-PKM2 do resveratrol sobre o metabolismo do cancro que corrobora com o seu potencial terapêutico.

Materiais e Métodos

A) de cultura celular, o tratamento com droga, PKM2 knockdown , transfections e estudos de proliferação celular

HeLa, HepG2 e linhas de células MCF-7 foram adquiridos a partir do Centro Nacional de Ciência celular, Pune, na Índia. Todas as linhas celulares foram mantidas em meio de glucose elevada de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM; Sigma, MO, EUA) com soro de bovino fetal a 10% (FBS) (Biowest, França), 1% de penicilina /estreptomicina (Sigma) a 37 ° C e 5% de CO

2 numa atmosfera humidificada. As células foram cultivadas em monocamada e passados ​​rotineiramente 2-3 vezes por semana. Para o tratamento medicamentoso, o resveratrol (Sigma) e rapamicina (Sigma) foram dissolvidos em etanol e dimetil sulfóxido (DMSO), respectivamente; armazenaram-se aliquotas a -80 ° C. As células foram semeadas em triplicado a uma densidade de 0,1-0,2 milhões /poço em placas de seis poços. Antes do tratamento com fármaco, as células foram incubadas durante 24 horas e em seguida substituído por meio contendo resveratrol, seguido por 48 horas de incubação. Etanol e células tratadas com DMSO foram utilizados como um controlo simulado. Lentivirus pGIPZ (Open Biosystems, EUA) foi utilizado para silenciamento shRNA-mediada de PKM2. Para a sobre-expressão PKM2 estudos, pcDNA-myc e pcDNA-myc-PKM2 etiquetada foram utilizados vectores. LTX Lipofectamina (Invitrogen, EUA) foi usada como um reagente de transfecção. Para estudos de proliferação, as células foram contadas, e semeadas em seguida, tratadas com tripsina a diferentes pontos de tempo, seguido por repetição contagem para avaliar a taxa de proliferação.

B) isolamento de ARN, a preparação de ADNc e a análise em tempo real

O ARN total extraiu-se a partir de linhas celulares utilizando TRIzol (Sigma) de acordo com o protocolo do fabricante. a qualidade do RNA foi analisado por A

260 /A

280 absorvância de equilíbrio e por electroforese em gel de agarose formaldeído a 1,2%. 1-2? G de RNA total foi transcrito de forma reversa em DNA utilizando o estojo de preparação de cDNA de cadeia simples (Applied Biosystems, EUA). Comercialmente disponível ensaio de expressão de genes Taqman (Applied Biosystems) com o número da peça Hs00987621_g1 foi utilizada para quantificar os níveis de mRNA de PKM2. Actina foi utilizada como controle endógeno (Part No. 4333762F, Applied Biosystems, EUA). sondas de iniciadores foram escolhidos para evitar a contaminação de amplificação de ADN genómico. PCR em tempo real foi realizada em ABI Prism 7000 Sequence Detection System (Applied Biosystems, EUA). ΔΔC método

t (limiar de ciclo) de quantificação relativa foi usada para calcular a mudança vezes na expressão de genes por SDS 1,1 software RQ (Applied Biosystems, EUA).

preparação C) lisado celular, a estimativa de proteína e Western blotting

lisado celular total foi preparado por incubação das células em gelo durante 30 minutos em tampão contendo Tris 50 mM, pH 7,2, NaCl 150 mM, 0,5% de desoxicolato de sódio, 10% de glicerol, 1% de Triton X-100, 0,1 % de SDS, 1 mM de ditiotreitol (DTT), 1 de fluoreto de fenilmetilsulfonilo mM (PMSF), fluoreto de sódio 5 mM (NaF), 1 mM de vanadato de sódio (NAV), cocktail de inibidores de fosfatase (Sigma), 4 ug /ml de aprotinina, 4 ug /ml de leupeptina e 4 ug /ml de pepstatina (Sigma). O lisado foi centrifugado a 12000 rpm num centrifugador de arrefecimento (MC 12, Remi, Índia) durante 15 minutos e o sobrenadante foi recolhido em tubos frescos de gelo arrefecido. A concentração de proteína foi estimada usando Pierce BCA (ácido bicinconínico) ensaios de proteína conforme o protocolo do fabricante. As proteínas foram separadas em 10% SDS-PAGE, transferidos para membrana de nitrocelulose (MDI, EUA) durante a noite a 4 ° C (transferência molhado), e sondados com os anticorpos primários. Membrana foi incubada com o anticorpo secundário adequado, durante 1 hora à temperatura ambiente e as proteínas foram detectadas utilizando o kit de quimioluminescência reforçada a partir de Thermo Scientific, EUA. Os anticorpos primários utilizados foram: anti-PKM2, anti-myc, anti-P-p70S6K, anti-p70S6K e anti-β-actina (Cell Signaling Technology, EUA)

D) captação de glicose e ensaio de produção de lactato.

o meio foi recolhido a partir de poços e a absorção de glucose foi analisada utilizando-se glicose (hexoquinase) estojo de ensaio (Sigma) de acordo com as instruções do fabricante. A produção de lactato foram analisadas utilizando um ensaio de lactato (BioVision, EUA), seguindo as especificações do fabricante. Todas as medições foram normalizados para o número de células.

E) extracção e Metabolito estimativa por LC-MS

Metabolito extracto foi preparado a partir de 5 milhões de células, utilizando 0,5 ml de etanol a 90% contendo 0,5% refrigerado ácido fórmico e centrifugado durante 30 minutos a alta velocidade numa centrifugadora refrigerada. Em seguida, o sobrenadante foi seco utilizando um fluxo de azoto e reconstituídas em 0,2 ml de água MilliQ. LC-MS foi realizada de acordo com as especificações descritas anteriormente [28]. Variação percentual do sinal (intensidade) foi calculado tomando o controle tratados simulada como referência; variação negativa de sinal representado a diminuição dos níveis de metabólitos.

F) A análise estatística

Todos os experimentos foram repetidos 3 vezes e são expressos como média ± SE.

valores p

foram calculados utilizando

test t

e do estudante

p . 0,05

foi considerado significativo

Resultados

Resveratrol diminui PKM2 ARNm e a expressão de proteína através de mTOR inibição

PKM2 ARNm e os níveis de proteína foram analisadas, utilizando PCR em tempo real e Western blotting, o resveratrol em células HeLa tratadas, HepG2 e células MCF-7. Nós escolhemos 50 uM resveratrol para 48 horas de exposição uma vez que este tratamento aumenta a percentagem de células bloqueadas em fase S [20]. Também é certo que a expressão PKM2 está no máximo na fase S [29]. Curiosamente, o resveratrol regulada para baixo de ARNm e proteína PKM2 por ~ 2 vezes em todas as linhas celulares estudadas (Figura 1A-D). Estes resultados fornecem evidências de primeira expressão PKM2 sendo afectada pelo resveratrol

o tratamento com resveratrol diminui ARNm PKM2 em (A), células HeLa.; (B), HepG2 e (C), as células MCF-7; por cerca de duas dobras. β-actina foi tomado como controle endógeno e normalizada para ARNm PKM2. análise de quantificação relativa foi realizada utilizando SDS 1,1 software RQ. Western blot mostrando proteína diminuída PKM2 em todas as linhagens de células estudadas no tratamento com resveratrol 50 uM (D).

C- Mock controlo tratado com resveratrol e R- tratada.

Todas as experiências foram repetidas 3 vezes e os dados são expressos como média ± SE.

* p . 0,05

A fim de investigar como resveratrol é baixo regulação da expressão PKM2, nós olhamos para a via de sinalização mTOR, que é frequentemente desregulado em cancros [30], [31], [32], [33]. mTOR também é conhecido por regular a expressão de várias enzimas glicolíticas incluindo PKM2 [3], [34]. Após o tratamento com resveratrol, observou-se a inibição da sinalização de mTOR em todas as linhas celulares estudadas (Figura 2A). A inibição da mTOR por sua rapamicina inibidor bem conhecido (20 nM durante 24 horas) também reduziu a expressão PKM2 (Figura 2B). Estes resultados mostraram que o resveratrol regulada negativamente expressão PKM2 por inibição de mTOR.

O resveratrol (50 uM) inibiu a sinalização mTOR em todas as três linhas celulares estudadas como evidente a partir da diminuição da fosforilação de P-p70S6K após o tratamento com resveratrol (A) ;

C- Mock tratada controle e resveratrol R- tratada

. inibição de mTOR por 20 nM de rapamicina reduzida expressão PKM2 em todas as linhas de células experimentais (B);

C- Mock tratada controle e Rapa- 20 nM Rapamicina

.

Diminuição da captação de glicose e produção de lactato no tratamento com resveratrol

células

Cancro requerem um fornecimento grande e contínua de glicose para os processos anabólicos. A produção de lactato por células cancerosas impede a entrada de piruvato em mitocôndrias [2]. Assim, o aumento da captação de glicose e produção de lactato são características de metabolismo do câncer. Efeito do resveratrol sobre o metabolismo do cancro foi estudada através da avaliação das alterações na absorção de glucose e produção de lactato. Curiosamente, observou-se uma diminuição substancial na captação de glicose e produção de lactato no tratamento com resveratrol (Figura 3A-B), demonstrando que o resveratrol inibe a glicólise aeróbica, o que é sugestivo de metabolismo do câncer suprimida.

A diminuição significativa na captação de glicose (a) e produção de lactato (B), foi observada em células HeLa e HepG2 (

* p 0,05

), na sequência de 48 horas de tratamento com resveratrol. No entanto, em células MCF-7 glicólise aeróbica não mostraram sinais significativos de inibição (

P 0,05

). Todos os experimentos foram repetidos 3 vezes e os dados são expressos como média ± SE.

O silenciamento de PKM2 resultado em glicólise aeróbica diminuída e proliferação celular

Nós postulamos que a diminuição observada em glicólise aeróbica foi em parte devido à diminuição da expressão PKM2. Para testar esta hipótese, nós silenciados PKM2 usando shRNA. PKM2 derrubar alcançado (~60-70%) foi avaliada por PCR em tempo real (Figura 4A). Seguindo knockdown, captação de glicose e produção de lactato foi medido. As células com PKM2 silenciada mostraram uma redução significativa na incorporação de glucose e produção de lactato, sugerindo que é necessário para PKM2 glicólise aeróbica (Figura 4B-C). A diminuição da glicólise aeróbica, resultou na inibição da proliferação celular (Figura 4D). Estes resultados confirmaram que PKM2 é crítica para o metabolismo e a proliferação celular do cancro. Resultados afirmou que o resveratrol inibe o metabolismo do câncer através PKM2

PKM2 foi derrubado (cerca de 60% – usando vector pGIPZ lentiviral contendo PKM2 shRNA) como analisado por:. PCR em tempo real (A), diminuição da captação de glicose (B) , produção de lactato (C) e proliferação celular (D) após derrubar. Todas as experiências foram repetidas 3 vezes e os dados são expressos como média ± SE.

* p . 0,05

Resveratrol diminui o anabolismo em células cancerosas

ribose-5-fosfato, um marcador de anabolizantes, é necessário para a síntese de macromoléculas. Ele é um intermediário na via da pentose fosfato [12]. Para examinar se o resveratrol afecta negativamente o anabolismo em células cancerosas, medimos níveis intracelulares de R5p em linhas de células tratadas com resveratrol. Os metabolitos foram extraídos a partir de linhas de células tratadas, seguido por análise de LC-MS. Interessantemente, a redução de ~20-25% foi encontrada em níveis R5p resveratrol em células tratadas, sugerindo anabolismo inibida (Figura 5). MCF 7 células mostraram uma pequena diminuição nos níveis de R5p indicando uma anabolismo fracamente suprimida.

R5p é uma via das pentoses fosfato intermediário, um importante marcador para o anabolismo (biossíntese de nucleotídeos). Aproximadamente 20-25% foi observada redução nos níveis intracelulares de R5p em células HeLa e HepG2 após 50 uM tratamento com resveratrol. No entanto, houve uma diminuição insignificante de cerca de 5% em células MCF-7 (ver texto). Os resultados indicaram o anabolismo inibido após o tratamento com resveratrol. Todas as experiências foram repetidas 3 vezes. Os valores são expressos como média ± SE.

* p . 0,05

metabolismo do câncer suprimida inibe a proliferação celular

Para estudar como a taxa de proliferação de várias linhas de células é afetada após o tratamento resveratrol, nós tratamos células HeLa, HepG2 e MCF7 com 50 resveratrol M para 0, 24, 48, 72 e 96 horas e contadas as células. Efeito foi destaque no HeLa e HepG2, mas era fraca em MCF7 (Figura 6A-C) células. No entanto, o resveratrol inibiu a proliferação celular, sugerindo que a supressão da proliferação de células do cancro metabolismo retardado bem.

Para examinar o modo como a inibição do metabolismo do cancro afecta a proliferação de linhas de células, que tripsinizadas e contadas as células em 0, 24, 48, 72 e 96 horas. Houve um decréscimo na taxa de proliferação em todos os três linhagens de células estudadas com diminuição proeminente em células HeLa (A), HepG2 (B) e pelo menos proeminente na MCF -7 (C). Todas as experiências foram repetidas 3 vezes e os dados são expressos como média ± SE.

* p . 0,05

Sobre-expressão de PKM2 reverte os efeitos do resveratrol

Para confirmar nossas descobertas de resveratrol no metabolismo do câncer e, consequentemente, a proliferação, visando PKM2, nós transitoriamente sobre-expressos PKM2 em células HeLa expostos à mídia contendo 50 mM resveratrol. As células foram transfectadas quer com pcDNA-myc (a transfecção Mock) ou com pcDNA-myc-PKM2 (PKM2 transfecção). Depois de 48 horas de transfecção (e o tratamento com resveratrol simultânea), as células foram contadas, lisadas e colhidas para extracção de proteína. A transfecção foi confirmada utilizando anticorpo anti-myc e os anticorpos anti-PKM2 (Figura 7a); assim era a inibição da mTOR (Figura 7A). Como esperado, a sobre-expressão de PKM2 resultou num aumento da proliferação celular, em comparação com células transfectadas zombar mesmo na presença de 50 uM de resveratrol (Figura 7B). Além disso, a sobre-expressão PKM2 causada captação de glicose aumentada e produção de lactato (Figura 7C e D) em células HeLa expostas ao resveratrol; contrariar os efeitos negativos de resveratrol. Estes resultados ainda mais fundamentada que PKM2 é um alvo fundamental do resveratrol e a sua expressão determina o metabolismo do cancro e, consequentemente, a proliferação celular.

A sobre-expressão de myc utilizando PKM2 etiquetado vector pCDNA (ver texto) foi confirmada utilizando anti myc e PKM2 anticorpos anti (A). Aumento da proliferação celular em células transfectadas PKM2, em comparação com células falsamente transfectadas, na presença contínua de concentrações inibitórias de resveratrol (B). a absorção de glicose (C) e produção de lactato (D) foi substancialmente aumentada em células transfectadas PKM2 PKM2 indicando que a sobre-expressão anula os efeitos do resveratrol sobre o metabolismo e a proliferação celular do cancro. Estes resultados validam adicionalmente PKM2 como alvo crítico de resveratrol. Todas as experiências foram repetidas 3 vezes e os dados expressos como média ± SE.

* p 0,05

.

PKM2 – indica células transfectadas em falso enquanto PKM2 + indica células PKM2 transfectadas

Discussão

transformação metabólica é considerada como uma mudança indispensável adquirido por células cancerosas de prosperar. . Investigação sobre os vícios metabólicas das células cancerosas tem acelerado nos últimos anos. fenótipo metabólico das células cancerosas é acreditado para envolver enzimas como alvos adequados para as estratégias de anticancerígenos. As drogas que inibem o metabolismo de células cancerosas por direccionamento de uma variedade de moléculas (incluindo enzimas), directa ou indirectamente, estão sob ensaios clínicos [17]. É, por conseguinte, pertinente para drogas de tela com um potencial de moléculas alvo críticos envolvidos na transformação metabólica.

O resveratrol, que conhecida pelas suas propriedades anti-cancro, nunca foi associada com enzimas metabólicas cruciais como PKM2. Sua relação com o metabolismo do câncer é mal compreendida. Temos pela primeira vez resveratrol mostrado afeta o status PKM2, inibindo o metabolismo do câncer.

Foi relatado anteriormente que o resveratrol afeta o metabolismo da glicose em células de cancro do ovário [35]. Faber

et al

mostraram diminuição da expressão de algumas enzimas glicolíticas sobre o tratamento com resveratrol [27], mas as suas observações não indicam resveratrol metabolismo do câncer alterando por afetar o status de moléculas críticas como PKM2. Desde PKM2 foi recentemente identificada como um jogador-chave na promoção do metabolismo do câncer e crescimento do tumor [6], era imperativo para investigar se o resveratrol poderia alterar PKM2 para afetar o metabolismo das células cancerosas.

PKM2, devido à sua posição na glicólise, promove vias biossintéticas (eg PPP) necessários para a síntese macromolecular [2], [6], [12]; e, por conseguinte, a sua expressão é maior em S (síntese) de fase do ciclo celular [29]. Mostrámos que a regulação por diminuição dos PKM2, pelo resveratrol, inibe as vias biosintéticas necessárias para a síntese de macromoléculas (Figura 5). Estes resultados, possivelmente, explicar a acumulação observada de células na fase G0 /G1 no tratamento com resveratrol [26]; e sugerir como resveratrol inibe o metabolismo do câncer, visando PKM2.

A diminuição da captação de glicose e produção de lactato (glicólise aeróbica) pelo resveratrol alarga o seu espectro quimiopreventivo e enfatiza o seu valor terapêutico, uma vez glicólise aeróbica fornece uma linha de vida para o câncer células. Ao demonstrar que os efeitos inibitórios metabolismo do câncer de resveratrol são mediadas por PKM2, nossos resultados fornecem uma visão sobre a base molecular da ação resveratrol. Nas células MCF-7, embora o resveratrol diminuição da expressão PKM2, o metabolismo alterado do cancro foi insignificante. Esta observação correlacionada com relatórios anteriores de menor glicólise aeróbica em células MCF-7 de cancro da mama não-invasivos [36]. Notavelmente, em outras células de cancro da mama altamente invasivos como MDA-MB-231, de alta glicólise aeróbica confirma que a nossa observação em MCF-7 é a linha de célula específica e não podem ser generalizados para os cancros da mama [36]. Nossos resultados também adicionou uma visão mecanicista à expressão PKM2 regulação negativa, demonstrando que uma inibição da sinalização mTOR é responsável pelo processo (Figura 2). Knock down estudos indicaram que PKM2 é crítico para a glicólise aeróbica e proliferação celular (Figura 4), bem. Estes resultados são consistentes com observações anteriores que indicam que PKM2 é importante para a glicólise de células cancerosas e o crescimento [6], [12]. A observação de uma diminuição nos níveis intracelulares R5p estendido ainda mais o efeito de resveratrol para a inibição do metabolismo biossintética (anabolismo). Essencialmente, foi demonstrado que o resveratrol inibe o metabolismo de células cancerosas, que por sua vez retarda a proliferação celular.

A diminuição na expressão PKM2 (Figura 1), seguindo o tratamento com resveratrol, o resveratrol fornece uma vantagem terapêutica [6]. Além disso, a reversão dos efeitos do resveratrol sobre PKM2 sobre-expressão (figura 7) implica que PKM2 é crucial para determinar o destino metabólico das células cancerígenas e é um alvo fundamental de resveratrol.

Os resultados estabeleceram ligação anteriormente desconhecido entre o resveratrol e PKM2; acrescentando assim uma nova dimensão ao potencial terapêutico do resveratrol. Os resultados também endossa resveratrol como um agente anti-câncer promissor no dificultando o metabolismo pro-cancerosas através PKM2 baixo regulamentação. As nossas observações sugerem que o resveratrol podiam ser utilizados em ensaios clínicos para o seu efeito sobre o metabolismo contra o cancro através PKM2. Os nossos resultados sugerem que os compostos naturais devem ser rastreados para seu potencial terapêutico e aqueles conhecidos por possuir propriedades anticancerígenas devem ser investigados quanto aos seus efeitos sobre o metabolismo contendo câncer.

Reconhecimentos

RNKB reconhece o apoio prestado pelos a Comissão concede Universitárias (UGC) para o Centro (NCAHG) e MA Iqbal reconhece o apoio da UGC, Governo da Índia, para a bolsa de pesquisa.