Abstract

Introdução

anticorpos agonistas segmentação Trail-receptores 1 e 2 (TRAIL-R1 e TRAIL-R2) estão sendo desenvolvidos como uma nova abordagem terapêutica na terapia do cancro, incluindo o cancro do pâncreas. No entanto, a distribuição celular desses receptores em amostras de câncer de pâncreas primários não foi suficientemente investigado e ainda nenhum estudo abordou a questão do seu significado prognóstico nesta entidade tumor.

objectivos e métodos

aplicando análise tissue microarray (TMA), foi realizada a avaliação imunohistoquímica da TRAIL-receptores em amostras cirúrgicas de 84 pacientes consecutivos afetadas por adenocarcinoma do pâncreas e, em 26 espécimes selecionados adicionais de pacientes sem linfonodos metástases no momento da cirurgia. Avaliou-se o significado prognóstico da coloração da membrana e intensidade da coloração para TRAIL-receptores.

Resultados

A fração de amostras de cancro do pâncreas com coloração da membrana positivo para TRAIL-R1 e TRAIL-R2 foi inferior que de células de tecidos circundantes que não de tumor (TRAIL-R1: p 0,001, TRAIL-R2: p = 0,006). Além disso, as análises de subgrupo mostraram que a perda de coloração da membrana para TRAIL-R2 foi associado com pior prognóstico em pacientes sem metástases ganglionares (multivariada de análise de regressão de Cox, Hazard Ratio: [intervalo de confiança de 95%: 0,22-0,87] 0,44; p = 0,019) . Em contraste, a análise dos receptores de engodo TRAIL-R3 e R4 em amostras de tumor mostrou um padrão de coloração exclusivamente citoplasmática e nenhuma relevância prognóstica.

Conclusão

Este é um primeiro relatório sobre o significado prognóstico da expressão receptores TRAIL em câncer pancreático mostrando que TRAIL-R2 pode representar um marcador de prognóstico para pacientes com doença em estágio inicial. Além disso, nossos dados sugerem que a perda de Trail-receptores ligados à membrana poderia representar um mecanismo molecular para falha terapêutica com a administração de anticorpos Trail-receptores-alvo em câncer pancreático. Esta hipótese deve ser avaliado em ensaios clínicos futuros

Citation:. Gallmeier E, Bader DC, Kriegl L, Berezowska S, Seeliger H, Göke B, et al. (2013) Perda de TRAIL-Receptores é uma característica recorrente no cancro do pâncreas e determina o prognóstico de pacientes sem Nodal Metástase após a cirurgia. PLoS ONE 8 (2): e56760. doi: 10.1371 /journal.pone.0056760

editor: Emilio Hirsch, da Universidade de Torino, Itália |

Recebido: 20 de julho de 2012; Aceito: 14 de janeiro de 2013; Publicação: 27 de fevereiro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Gallmeier et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelo Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) com bolsas DFG TO 605 /2-1 para EDT e DFG GA762 /3-2 ao EG e pela Else Kröner-Fresenius Stiftung com a concessão 2011_A226 para EDT. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de pâncreas é a quarta principal causa de morte relacionada ao câncer nos países industrializados, com uma sobrevida global em cinco anos uma média inferior a 5% e uma sobrevivência média de cerca de seis meses [1]. A sua biologia agressiva, a falta de sintomas iniciais e da ausência de métodos fiáveis ​​de rastreio são responsáveis ​​pelo estado avançado da doença no momento do diagnóstico. Nem as recentes melhorias em procedimentos cirúrgicos nem regimes de radiocomunicações ou quimioterápicos ainda levou a uma melhoria significativa na sobrevida dos pacientes. Consequentemente, um esforço significativo está sendo dedicado ao desenvolvimento de abordagens terapêuticas inovadoras e racionais que têm como alvo as características moleculares críticas nesta entidade tumor.

Nos últimos anos, a administração de anticorpos agonistas alvo os receptores de apoptose relacionado com TNF -inducing ligando (TRAIL) tem pré-clínica foi demonstrada para representar uma avenida terapêutica promissora, que é neste momento sob investigação clínica em numerosas entidades tumorais, incluindo o câncer de pâncreas [2] – [6]. TRAIL desempenha um papel numa variedade de processos biológicos incluindo a indução de apoptose em células de cancro após ligação aos seus receptores na membrana exterior da célula. De particular importância, foi demonstrado que a apoptose desencadeada por TRAIL desempenha um papel crítico para a vigilância do tumor, fazendo com que a folga imune mediada por células metastáticas; ratinhos TRAIL-knockout apresentam uma melhor formação de metástases [7], a perda de TRAIL de expressão de receptor está associado com prognóstico pobre e a recorrência de tumores em pacientes que sofrem de uma variedade de diferentes tipos de tumores [8], e expressão do receptor chamariz solúvel de ligação a TRAIL osteoprotegerina correlaciona-se com o estágio do tumor e formação de metástases em pacientes com câncer colorretal [9], que estabelece uma forte razão para o desenvolvimento de compostos como estratégia terapêutica anticancerígena Trail-receptores-alvo.

apesar do crescente interesse por TRAIL- receptores como alvo terapêutico no cancro, os estudos sobre a expressão, distribuição espacial e relevância do Trail-receptores como marcadores prognósticos em câncer de pâncreas ainda faltam. Especificamente, pouco se sabe sobre a expressão funcional e a disponibilidade de TRAIL-receptores distintos sobre a superfície de células de cancro do pâncreas, apesar da disponibilidade de anticorpos agonistas de segmentação tanto TRAIL-R1 ou TRAIL-R2 actualmente utilizados em ensaios clínicos. Através da aplicação de tecido microarrays análises para avaliar TRAIL-R1 e TRAIL-R2 status de expressão em uma grande coorte de espécimes cirúrgicos de adenocarcinoma do pâncreas, descobrimos que a perda de coloração da membrana para estes receptores é uma característica comum de câncer pancreático. Assim, a incapacidade de conseguir efeitos terapêuticos que utilizam receptores de TRAIL-segmentação compostos em ensaios clínicos pode ser devido à falta de selecção dos pacientes com tumores que expressam TRAIL-receptores ligados a membranas. Além disso, a perda de ligada à membrana TRAIL-R2 em tumores de pacientes sem metástases ganglionares no momento do diagnóstico é associado a um mau prognóstico em nossa coorte, potencialmente estabelecendo TRAIL-R2 como um marcador de prognóstico em específico de pacientes com câncer pancreático.

pacientes e Métodos

Declaração de Ética

de acordo com as diretrizes da nossa Universidade, coloração imuno-histoquímica de amostras de tecidos arquivados pode ser realizada desde que o anonimato é garantido. Portanto, a aprovação deste estudo foi dispensada pela comissão de ética da Universidade de Munique e sem consentimento por escrito foi exigido.

Case identificação, selecção e Doentes ‘Follow-up

Os pacientes com diagnóstico histológico de adenocarcinoma ductal pancreático, que passou por uma cirurgia para câncer de pâncreas (procedimento de Whipple, pancreatectomia distal, ou pancreatectomia total) do Departamento de cirurgia da Ludwig-Maximilians-University of Munich entre 31 de janeiro

st de 2003 e 14 de Junho

th de 2007, foram considerados para tissue microarray (TMA) de construção. Como segundo passo, coletivo este paciente foi sucessivamente alargado, mediante a inclusão de 26 pacientes consecutivos adicionais sem cirurgia metástase submetidos nodal até 7 de Outubro

th 2011 para possibilitar a avaliação específica do significado prognóstico da TRAIL-receptores na determinação do risco de recorrência após ressecção radical. Todos os dados clínico-patológicas foram coletados do banco de dados do Registro de Câncer de Munique e prontuários dos pacientes originais.

Em nosso estudo, a maioria dos pacientes (98 de 110, 89%) receberam terapia adjuvante incluindo a gemcitabina, quer como monoterapia (n = 35) ou em combinação com radioterapia (n = 50) e /ou outros agentes, incluindo 5-fluorouracil, oxaliplatina e cisplatina.

TMA Construção

parafina-embedded tecido arquivadas material do tumor e em torno de tecido pancreático normal foi utilizado para a construção TMA. TMA foram preparados como publicado antes [10]. Em breve, a região de interesse para ser amostrada foi identificado e marcado com hematoxilina-eosina lâminas de tecido. Do bloco de parafina correspondente (bloco dador), biópsias de tecido (cada 0,6 mm de diâmetro) foram retirados e, em seguida, vestida de um TMA bloco receptor usando um arrayer manual (Beecher Instruments, Sun Prairie, WI). Cada caso foi representada por três biópsias de diferentes partes do carcinoma pancreático e duas biópsias de tecido pancreático correspondente normal para excluir artefactos devido à expressão do antigénio heterogéneo e para permitir a comparação entre o tecido pancreático exócrino normal e tecido de tumor. A imuno-histoquímica foi realizada em 2 pm seções do TMA.

imuno coloração

Foram utilizados 5 mm seções de blocos de TMA para coloração imuno-histoquímica. anticorpo policlonal de cabra anti-TRAIL R1 (Santa Cruz Biotechnology Inc., Heidelberg, Alemanha) e anticorpo policlonal de coelho anti-TRAIL R2 (Calbiochem, CA, EUA) foram aplicados como anticorpo primário. Ambos os anticorpos foram previamente validado para imuno-histoquímica de Trail-receptores em nosso laboratório [8]. Para a recuperação de antigénio, as secções foram pré-tratadas por fervura num forno de microondas de 2 vezes em 15 min a 750 W no alvo Retrieval Solution (Dako, Hamburgo, Alemanha). A peroxidase endógena foi bloqueada através da incubação em peróxido de hidrogénio a 7,5% durante 10 minutos. Vectastain ABC Elite Kit-Universal (Vector Laboratories, CA, EUA) foi feita kit para a detecção de anticorpos e AEC (Zytomed Systems) foi utilizada como um cromogénio. As lâminas foram contrastadas com hematoxilina (Vector). Para avaliação dos receptores de engodo TRAIL-R3 e TRAIL-R4, foram utilizados os anticorpos seguintes: anticorpo policlonal de coelho TRAIL-R3 (Gene Tex, CA, EUA) e o anticorpo monoclonal de ratinho TRAIL-R4 (Biologia EUA, MA, EUA). A coloração positiva para TRAIL-receptores foi categorizado em primeiro lugar de acordo com a sua distribuição celular e independentemente da intensidade do sinal como se segue: coloração positiva no citoplasma única, uma coloração positiva em membranas celulares apenas, e coloração positiva em ambos membrana celular e no citoplasma. Para as análises estatísticas, tumores que exibem TRAIL-receptores que coram em membranas celulares ( “coloração da membrana” grupo) foram comparados com os tumores sem TRAIL-receptores que coram ou com expressão de TRAIL-receptores confinado apenas citoplasma ( “nenhuma membrana coloração” grupo) de acordo com a lógica que TRAIL-receptores são funcionalmente activa só se situado sobre a superfície das membranas celulares [11]. Além disso, realizamos uma análise semi-quantitativa de amostras de cancro do pâncreas através da atribuição de uma pontuação dependendo do Trail-receptores globais intensidade de coloração. (0: sem coloração, 1+ baixa intensidade de coloração, 2+ alta intensidade de coloração)

Estatísticas

a sobrevida global foi definido como o intervalo entre a data da cirurgia até a morte ou para o contato mais recente (para eventos censurados) a partir de 01 de setembro

st, 2012. os dados categóricos foram comparados por Chi -Square ou teste exato de Fisher, dados contínuos foram comparadas pelo teste t. tempos de sobrevivência mediana global foi estimada pelo método de Kaplan-Meier. O teste de log-rank foi usado para testar a homogeneidade das curvas de sobrevivência. modelos uni e multivariada riscos proporcionais de Cox foram utilizados para avaliar os efeitos das variáveis ​​sobre a sobrevida global. maturidade seguimento foi validado pela avaliação das curvas de acompanhamento para os pacientes que vivem para garantir tempos de acompanhamento comparáveis ​​de curvas de sobrevivência entre os respectivos grupos independentes [24]. As análises estatísticas foram realizadas utilizando software Statistical Package for Sciences (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA). Frente e verso

foram considerados estatisticamente significativos valores de P

de menos de 0,05.

Resultados

Seleção dos pacientes e e clínicopatológicos Características

84 pacientes consecutivos com histologicamente confirmou adenocarcinoma ductal pancreático, que passou por uma cirurgia para câncer de pâncreas no Departamento de cirurgia da Ludwig-Maximilians-University of Munich entre 31 de janeiro

st, 2003 e junho de 14

th, 2007, foram identificados. Uma vez que a expressão de TRAIL-receptores tem sido mostrado a ser afectado pela administração da quimioterapia e da radioterapia [12] – [14], os pacientes que receberam quimioterapia neoadjuvante ou irradiação neoadjuvante não foram considerados na análise estatística. Além disso, os pacientes que morreram como resultado de complicações pós-operatórias imediatas e pacientes para os quais nenhum acompanhamento foi disponíveis foram excluídos

Quando os dados histológicos foram ausente (amostras de tecido normal TRAIL-R1:5;. TRAIL-R2:9 amostras de tecidos normais e 5 amostras de tecido de tumor), só foram consideradas as amostras correspondentes de comparação de dados categóricos entre tecidos normais e tumorais. Todos os pacientes selecionados para este estudo (n = 84) tiveram um acompanhamento completo, quer até à morte (n = 72) ou até que o seu contacto mais recente (n = 12) em 1º de setembro de 2012. A menor follow-up após a cirurgia para pacientes ainda vivos em 1 de Setembro

st 2012 foi de 62,6 meses. O mais longo follow-up para os pacientes ainda vivos foi de 106,5 meses. A média de idade do paciente no momento da cirurgia foi de 65 anos (variação 32-81). Um resumo das características clinicopatológicas desta coorte pacientes ‘é mostrada na tabela 1. Numa segunda fase, os pacientes’ colectiva foi prolongado pela adição de 26 pacientes consecutivos sem metástases nodais no momento da intervenção cirúrgica, que foram tratados no ‘período de tempo até 7 de Outubro

th 2011. Um resumo dos recursos clincopathological de Nenhum dos pacientes nos três anos subsequentes subgrupo é fornecida na tabela S1.

imuno-coloração para TRAIL receptores 1 e 2 em o cancro do pâncreas e combinados tecidos circundantes

Para avaliar o estado de TRAIL-receptores em amostras de cancro do pâncreas e tecido circundante combinado, realizamos primeiro uma análise semi-quantitativa de Trail-receptores-1 e -2 intensidade de coloração independentemente do seu celular de distribuição, aplicando uma pontuação de coloração de intensidade que varia de 0 a 2.

a coloração positiva para TRAIL-R1 foi encontrada em 77% das amostras de tumor e 89% do tecido circundante compensada. Em vez disso, uma coloração positiva para o TRAIL-R2 foi encontrado em 99% de ambas as amostras de tumor e tecido circundante compensada pancreático (Tabela S2). No entanto, quando se avalia intensidade de coloração por TRAIL-R2, este receptor parece ter uma coloração inferior em amostras de tecido de tumor em comparação com o tecido não tumoral correspondente, com a maioria das amostras não tumorais com elevada intensidade-coloração (alta intensidade-coloração em amostras não tumorais de tecido = 71% vs. 48% das amostras de tecidos tumorais – teste de McNemar-Bowker: p = 0,021, mesa S2). A percentagem mais elevada de amostras de tumores mostrando uma coloração negativa para TRAIL-R1 e quanto maior o Índice de coloração intensidade global para TRAIL-R2 em amostras tumorais não indica uma perda de expressão de TRAIL-receptores em amostras de tumor versus amostras de tecido de tumor não emparelhados.

em seguida, analisou-se a distribuição intracelular espacial dos receptores de TRAIL, considerando a fracção de células no cancro e tecidos circundantes não tumorais de acordo com se a análise imuno-histoquímica mostrou coloração citoplasmática, a coloração das membranas ou ambos. figuras representativas de diferentes padrões de coloração de TRAIL-R2 estão apresentados (Fig. 1). Importante, TRAIL-R1 mostrou coloração da membrana positiva em 84% do normal circundante amostras de tecido pancreático, mas apenas em 44% das amostras de câncer pancreático, enquanto TRAIL-R2 mostrou coloração da membrana positiva em 99% do normal e em 81% das amostras de câncer de pâncreas ( Fig. 2). Assim, a fracção de amostras que exibiram coloração da membrana foi significativamente menor no cancro do que em tecidos normais correspondentes circundante (McNemar teste: TRAIL-R1: p 0,001; TRAIL-R2: p = 0,006).

As barras de escala representam 50 mm.

Percentagem de amostras que não revelem coloração (nenhum), marcação citoplasmática (citoplasma apenas), coloração da membrana (membrana apenas) ou ambos (m + c).

Correlação de Trail-receptores coloração com características clínicopatológicos dos tecidos tumorais e normais circundantes tecido pancreático

Para avaliar se TRAIL receptores de coloração em amostras de tumor e combinados amostras de tecidos não tumorais foi associado com características clínico-patológicas específicas, a membrana coloração de Trail-receptores foi correlacionada com características clínicas e patológicas de tumores, incluindo classificação, tamanho e estadiamento dos tumores, a presença ou ausência de margens livres de tumor após a ressecção cirúrgica e a aplicação de pós-intervencionista de radioterapia e /ou quimioterapia. No entanto, não há correlações significativas foram encontradas entre os receptores de TRAIL-coradas em membranas celulares do cancro do pâncreas (tabela 2) ou células vizinhas (não mostrado) e qualquer uma das características acima. Da mesma forma, análises de correlação entre esses parâmetros com a intensidade da coloração de Trail-receptores, independentemente da sua distribuição celular não mostraram qualquer associação significativa (dados não mostrados).

significado prognóstico da TRAIL-receptores de coloração em Pacientes Submetidos cirurgia

Como esperado, Kaplan-Meier e regressão de Cox univariada análises demonstraram gânglios linfáticos (Sem vs. N1), metástases (M0 vs. M1) e o tamanho do tumor (mediana, 3,5 cm x ≥3.5 cm ) para representar determinantes significativos da sobrevivência global (Figura S1, tabela 3). Em contraste, não foram encontradas correlações entre a sobrevida global e expressão membranoso de TRAIL-R1 ou TRAIL-R2, respectivamente (teste de log rank Kaplan-Meier: TRAIL-R1: p = 0,842, TRAIL-R2:. P = 0,176, fig 3A e 3B). Da mesma forma, as análises estratificar pacientes de acordo com a avaliação semi-quantitativa de Trail-receptores intensidade de coloração, independentemente da distribuição celular (pontuação variando de 0 a 2+) não deu diferenças significativas de sobrevivência (Kaplan-Meier rank longa: TRAIL-R1: p = 0,279; TRAIL-R2: p = 0.339- dados não mostrados). No entanto, as análises de subgrupo revelou que pacientes sem metástase nodal no momento da cirurgia tiveram melhor prognóstico se a coloração ligada à membrana para TRAIL-R2 foi positivo (HR: 0.30 [0.12-0.76], P = 0.011- dados não mostrados), enquanto não foram encontradas associações significativas para a expressão e sobrevivência TRAIL-R1 ligada à membrana neste subgrupo (HR: 1,21 [0,58-2,54], p = 0,608). Em apoio dos dados obtidos para TRAIL-R2, análise multivariada, incluindo variáveis ​​associadas à sobrevida global, nas análises univariadas com p 0,2, indicou que coloração da membrana TRAIL-R2 foi um fator independente de sobrevida neste subgrupo (HR calculada: 0.36 [ ,,,0],0,14-0,91], p = 0,031).

Os gráficos mostram a sobrevivência de acordo com a coloração TRAIL-R1 membrana (a), coloração da membrana TRAIL-R2 (B) e análise de subgrupo de sobrevivência de acordo com TRAIL-R1 (C ) e TRAIL-R2 (D) coloração da membrana em pacientes sem metástase nodal no momento da cirurgia.

Para substanciar nossos resultados no Nenhuma população, posteriormente alargado a dimensão deste subgrupo de incluir 26 adicionais Nenhum dos pacientes submetidos à cirurgia para câncer de pâncreas no período de três anos seguinte ao do coletivo TMA anterior. Análise de sobrevivência neste subconjunto prolongado de um total de 58 pacientes confirmou que apenas coloração da membrana de TRAIL-R2 foi associada com uma melhor sobrevida (análise univariada: TRAIL-R1: HR 1,22 [0,66-2,25], p = 0,514; TRAIL-R2 ( . HR 0.45 [,22-,88], p = 0.019- figura 3 C, D) a análise multivariada, incluindo variáveis ​​associadas à sobrevida global, nas análises univariadas com p 0,2, (ou seja, sexo, classificação, tamanho médio do tumor, e TRAIL- R2 coloração da membrana) confirmou a importância independente prognóstico da coloração da membrana para TRAIL-R2 neste subgrupo (ajustado para todos: HR 0,47 [0,23-0,96], p = 0,041; eliminação retrógrada: HR 0,44 [0,22-0,87], p = 0,019 ).

coloração e Cellular Distribuição das Decoy receptores TRAIL-R3 e TRAIL-R4 em células de cancro do pâncreas

receptores chamariz para TRAIL têm mostrado a desempenhar um papel na patogênese de tumores como revelado por relatórios publicados anteriormente pelos nossos e de outros laboratórios [9], [15], [16], mas atualmente não há informações sobre o significado prognóstico dos receptores de engodo para TRAIL em câncer pancreático está disponível. Para investigar o papel potencial desses receptores em antagonizar os efeitos da TRAIL-R1 e -R2, análises adicionais foram realizadas e TRAIL-R3 e coloração TRAIL-R4 em amostras de tumores de de nossos pacientes avaliados coletiva. De acordo com os relatórios anteriores, nossas análises mostraram coloração positiva TRAIL-R3 e TRAIL-R4 em 52% e 69% das amostras de tumor, respectivamente, e uma coloração de alta intensidade em 10% e 16% dos casos, respectivamente. No entanto, a coloração desses receptores foi restrita exclusivamente para o citoplasma e não tinha significado prognóstico em nossa coorte (TRAIL-R3: HR 0,95 [0,59-1,51], p = 0,840; TRAIL-R4: HR 1,06 [0,64-1,76], p = 0,806).

Discussão

terapias direcionadas e TRAIL-sinalização em câncer pancreático

o reconhecimento do papel desempenhado por apoptose mediada por TRAIL no processo de vigilância imunológica formação de tumores contrariar levou ao desenvolvimento eo emprego clínico de Trail-receptores destinados compostos como terapia antineoplásica; Neste momento, os anticorpos monoclonais a segmentação TRAIL-R1 (por exemplo mapatumumab [17]) ou TRAIL-R2 (por exemplo tigatuzumab [18]), ou formas recombinantes de TRAIL humano [19], são submetidos a extensa investigação clínica. Embora a simples expressão de receptores para TRAIL não representa o único factor determinante da resposta ao efeito apoptótico de TRAIL [20], é provável que a eficácia destes compostos vão actuar de uma forma dependente da expressão do receptor de TRAIL em tumores individuais. Surpreendentemente porém, enquanto a perda frequente de Trail-receptores relatado por várias entidades tumorais possam impedir a eficácia clínica destes compostos [8], [21] – [23], nenhum grande relatório sistemática na distribuição celular espacial e significado prognóstico do TRAIL receptores no câncer de pâncreas é ainda disponível (revisto em [3]). Além disso, embora os ensaios clínicos de fase precoce com TRAIL-receptores-alvo compostos ou anticorpos foram apenas recentemente iniciado em doentes com cancro do pâncreas, os resultados de ensaios clínicos com os compostos em colo-rectal e cancro do pulmão de células não pequenas-TRAIL-receptores-alvo têm resultados decepcionantes apresentados [17], [19], solicitando uma clarificação atempada do papel desses agentes na terapia de tumores sólidos.

coloração e intracelular Localização de Trail-receptores em tumores Versus redor pâncreas tecidos

Considerando a coloração geral do tumor e das amostras de pâncreas normais pareados, descobrimos que quase todas as amostras coradas positivo para TRAIL-R2; em vez disso, TRAIL-R1 manchado negativo em 23% das amostras de tumor e em 11% das amostras de pâncreas normais correspondentes. A perda de coloração TRAIL-R1 em células tumorais em comparação com o co-coradas circundante tecidos não tumorais a partir do mesmo paciente está de acordo com relatórios anteriores sobre outras entidades tumorais [23], [24] e com

In vitro

evidências que mostram que a perda de Trail-receptores em linhas celulares de cancro do pâncreas contribui para uma diminuição da sensibilidade no sentido de apoptose induzida por TRAIL [25]. No entanto, o único outro estudo publicado sobre a prevalência de Trail-receptores no câncer de pâncreas demonstrou regulação positiva de TRAIL-R1, em 38 amostras de câncer de pâncreas, em comparação com 31 amostras não-malignas pancreáticas ductal de tecido de pacientes de controle [26]. Há várias explicações para os diferentes resultados obtidos neste estudo contra nosso estudo, incluindo um menor número paciente na outra coorte, a fonte ea representatividade das amostras (em parte biópsias em outro estudo em relação espécimes apenas cirúrgicos em nosso estudo), ea inclusão (11 de 34 pacientes) em comparação com a exclusão de pacientes que receberam terapia neo-adjuvante, em conjunto com o facto de a expressão de TRAIL-receptores é aumentada por quimio- /ou radioterapia [27], [28].

a maioria dos relatos anteriores sobre a expressão de TRAIL-receptores em diferentes entidades tumorais foram baseados em critérios semi-quantitativa [22], [26], [29]; No entanto, estudos recentes demonstraram que particularmente a localização sub-celular de TRAIL-receptores possam influenciar a sua função; Especificamente, enquanto que a internalização do receptor de CD95 pró-apoptótica desempenha um papel estimulador na transdução da sinalização apoptótica, a internalização de TRAIL-receptores inibe a activação de caspase [30]. Nós recentemente proposto que a expressão de TRAIL-receptores devem ser avaliadas através da análise da fracção de TRAIL-receptores ligados à membrana, com base na razão de avaliar a fracção de receptores de TRAIL-efectivamente exposto ao circulante TRAIL como determinante supostamente predominante prognóstico [8]. Por conseguinte, considerou-se não apenas a intensidade da coloração, mas também a distribuição intracelular de coloração, isto é, a fracção de tumores que exibem receptores de TRAIL-coradas em membranas celulares em estudo. Verificou-se que 56% das amostras de tumor exibido sem coloração da membrana para TRAIL-R1 e 19% para o TRAIL-R2 com o grau de coloração da membrana que varia inversamente com a coloração citoplasmática, sugerindo que a internalização de TRAIL-receptores pode representar um mecanismo para a perda de receptores de TRAIL funcionais como uma característica distintiva das células de câncer de pâncreas, uma hipótese recentemente corroborada por outros estudos

in vitro

[11], [31].

prognóstico Impacto da expressão de TRAIL-receptores Cancro do pâncreas

Para avaliar se a perda de Trail-receptores ligados à membrana pode ter significado prognóstico, que posteriormente correlacionados Trail-receptores de coloração com a sobrevivência. sobrevivência de cinco anos de pacientes com tumores exibindo TRAIL-R1 ou TRAIL-R2 não diferiu significativamente da dos outros pacientes. Resultados semelhantes foram obtidos por estratificar pacientes de acordo com a pontuação de intensidade de coloração TRAIL-receptores. No entanto, a coloração da membrana para TRAIL-R2 foi associada a um melhor prognóstico de um subgrupo de pacientes sem metástases nodais no momento da cirurgia, o que é consistente com a evidência recente que a fracção de receptores ligados à membrana determina o seu estado funcional [11], [31] e desempenha um papel prognóstico importante em pacientes com carcinoma hepatocelular [8].

Embora não tenhamos encontrado nenhuma correlação específica entre a expressão de TRAIL-receptores e estágio do tumor em nossa coorte, o fato de que a expressão de TRAIL-receptores era não associada a qualquer parâmetro patológica suporta a hipótese de que, em vez de influenciar a iniciação do tumor, perda de TRAIL-receptores pode afectar a progressão do tumor numa fase posterior, devido à selecção de clones de células resistentes à circulante TRAIL e aos mecanismos de imuno-mediadas que controlam depuração de células metastáticas, [33] [32]. Assim, a falta de correlação entre o estado-receptores TRAIL e prognóstico em pacientes com doença metastática no momento da cirurgia é provavelmente atribuível a outros fatores determinantes metástase predominando superarão os efeitos de perda de TRAIL-receptores em fases posteriores. Relatórios recentes têm mostrado que a apoptose é desencadeada preferencialmente em células de cancro do pâncreas por TRAIL-R1 especialmente em combinação com inibidores de XIAP, enquanto que a estimulação de TRAIL-R2 requer reticulação eficiente para a indução de apoptose [34]. Estes dados sugerem que TRAIL-R1 deve ser o alvo preferencial dos agentes TRAIL-R-alvo em câncer pancreático. Nossos dados mostrando uma menor prevalência de coloração da membrana de TRAIL-R1 vs. TRAIL-R2 parecem confirmar o fato de que a perda de funcional TRAIL-R1 representa um passo importante da carcinogênese. No entanto, a relevância prognóstico de TRAIL-R2 em pacientes sem metástases no momento da cirurgia sugere que este receptor pode exercer um papel fisiológico como um supressor de tumor, nesta fase de desenvolvimento do tumor.

Em oposição à significado prognóstico positivo de TRAIL-R2, não foi encontrada correlação entre TRAIL-R3 ou TRAIL-R4 e sobrevivência. receptores de engodo para TRAIL tem mostrado desempenhar um papel na patogénese de tumores como revelado por relatos sobre o efeito de prognóstico negativo da expressão de TRAIL-R3 em cancro colorrectal [15] ou de TRAIL-R4 no cancro da mama [16], e pela nossa publicado anteriormente dados sobre o papel do receptor chamariz OPG solúvel para a determinação da resistência à apoptose em doentes com cancro colorectal [9]. A nossa constatação de que a coloração TRAIL-R3 e TRAIL-R4 em amostras de tumor é encontrada exclusivamente no citoplasma está de acordo com a conclusão anterior de que a coloração positiva para TRAIL-R1 e -R2, mas coloração insignificante para TRAIL-R3 e R4 pode ser encontrada na superfície de diferentes linhas de células de cancro do pâncreas por análise FACS [34]. Estudos futuros deverão avaliar se a ausência de coloração da membrana para TRAIL-R3 e -4 pode refletir a falta de significado prognóstico destes receptores no câncer pancreático, em contraste com as entidades tumorais, onde uma correlação negativa com a sobrevivência foi mostrado.

consequências clínicas da perda de TRAIL-receptores em células do cancro do pâncreas

a consequência clínica da perda funcional frequente de Trail-receptores no câncer pancreático podem ser representados pelo fato de que muitos tumores pancreáticos não respondem ao administração dos anticorpos agonistas específicos destinados tanto TRAIL-R1 como mapatumumab ou TRAIL-R2 como Tigatuzumab [27]. Portanto, os ensaios clínicos com base na administração de tais agentes pode ter que tomar o estado da respectiva coloração da membrana em conta.

Os mecanismos pelos quais os receptores de TRAIL-se perdem nas células tumorais ainda não são completamente compreendidos. perda genética ou mutação do Trail-receptores é um evento raro em células cancerosas, com média de 1% no carcinoma hepatocelular [21], [35] e, estando ausente em câncer pancreático em grande escala análises genéticas abrangentes [36], [37] . Além disso, como vários compostos [11], [38] – [42] pode aumentar a expressão de TRAIL-receptores ou a exposição sobre as membranas celulares, o silenciamento do gene epigenético e receptores TRAIL internalização indicam um mecanismo potencialmente reversível para a perda de TRAIL-receptores funcionais em Câncer. Mais importante, foi demonstrado recentemente que o silenciamento Hur aumenta a produção de TRAIL-R2, permitindo a sua tradução, por este meio intensificar a apoptose mediada por TRAIL [43]. Assim, os tumores que exibem coloração da membrana negativo para TRAIL-receptores podem ser susceptíveis a agentes capazes de aumentar a expressão de TRAIL-receptores, restaurando assim a eficácia de TRAIL endógeno [44], [45].