Abstract
Polysaccharopeptide (PSP), da
Coriolus versicolor
, tem sido amplamente utilizado como adjuvante à quimioterapia com demonstrada anti-tumorais e efeitos imunomoduladores largos. Enquanto mecanismo de acção da PSP ainda permanece desconhecida, o seu potencial imunomodulador reforçada com goma arábica é de grande interesse. goma de acácia, o qual também contém polissacáridos e glicoproteínas, tem sido demonstrado ser imunopotenciador. Para elucidar se PSP ativa diretamente as respostas das células B-T-celulares dependentes
in vivo
, foi utilizado um sistema de suporte hapteno bem estabelecida (globulina Nitrophenyl galinha-gama (NP-CGG)). 6 semanas de ratinhos C57BL /6 machos foram imunizados com 50 ug de NP
25-CGG alúmen precipitar intraperitonealmente. Camundongos foram tratadas por gavage diariamente com 50 mg /kg PSP em um veículo contendo goma arábica e sacrificados nos dias 0, 4, 7, 10, 14 e 21. ELISA foi utilizado para medir o total e relativa hapteno-específicas anti-NP IgA, IgM e os níveis de IgG de titulação em comparação com os controlos. Verificou-se que a PSP, combinado com a goma de acácia, aumentou significativamente os níveis totais de IgG de titulação no dia 4 (p 0,05), diminuição dos níveis de titulação de IgM nos dias 4 e 21 (P 0,05), sem alterações observadas no título de IgA ou IgE níveis em qualquer um dos pontos de tempo medidos. Os nossos resultados sugerem que, embora a PSP combinado com goma de acácia parece exercer efeitos imunológicos fracos através de respostas de células B dependentes de células T específicas, que são susceptíveis de ser largo e não-específica que suporta a literatura corrente na PSP. Relatamos pela primeira vez que a aplicação de um sistema de hapteno-transportador bem estabelecido que pode ser utilizado para caracterizar e delinear as respostas das células B dependentes de células T específicas de potencial imunomodulatório combinações de medicamentos à base de plantas à base de glicoproteínas
in vivo
Citation:. Sekhon BK, Roubin RH, Li Y, Devi PB, Nammi S, Fan K, et al. (2016) Avaliação da Selected imunomodulador glicoproteínas como um complemento para o cancro imunoterapia. PLoS ONE 11 (1): e0146881. doi: 10.1371 /journal.pone.0146881
editor: Valerie A. Ferro, University of Strathclyde, Reino Unido
Recebido: 12 Agosto, 2015; Aceito: 24 de dezembro de 2015; Publicação: 22 de janeiro de 2016
Direitos de autor: © 2016 Sekhon et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Data Availability:. Todos relevante os dados estão dentro do papel
Financiamento: Este trabalho foi financiado pelo Cancer Institute NSW:. DMS; Instituto Nacional de Medicamentos Complementar. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
Competir interesses:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
introdução
Fugindo destruição imune tem sido considerada como uma característica emergente de câncer [1]. Em particular, a ausência de antigénios de cancro fortes, perda de MHC de classe I ou moléculas estimuladoras e ou co-estimuladores pode resultar na falha de reconhecimento de células T, a apresentação de antigénios e a eliminação de tumores [2,3]. Os efeitos colaterais associados com os locais de quimioterapia carga adicional sobre a capacidade do hospedeiro para montar uma resposta imune eficaz contra antigénios e o sistema imunológico comprometido é portanto vulnerável a infecções potencialmente com risco de vida [4]. As tentativas de segmentação e estimular a resposta imune do hospedeiro suprimida contra tais assaltos, foi recebido com sucesso misturado na entrega de terapias eficazes. Apesar de várias abordagens de imunoterapia, como a vacinação com células dendríticas possuem baixa toxicidade, infelizmente, eles raramente ultrapassam uma taxa de resposta objectiva clínica do tumor de 15% [5]. Terapias como os linfócitos infiltrantes de tumor (TILs) Os protocolos foram recentemente avaliada numa análise combinada relatar uma taxa de resposta completa de 20% com uma taxa de resposta objectiva global de 70% em pacientes com melanoma [6]. terapias de citocina, em particular, a administração sistémica de IL-12 têm sido associados com efeitos colaterais graves e um índice terapêutico muito estreito [7]. Poucos desses ensaios clínicos que administram IL-12 em pacientes com câncer têm mostrado resultados encorajadores [7]. No entanto, a imunoterapia com outras interleucinas tais como doses elevadas de IL-2 continua a ser um tratamento eficaz para os últimos 20 anos em pacientes com carcinoma de células renais metastático, conferindo respostas duráveis completas bem documentados em 10-15% dos pacientes selecionados [8] . Mediada por anticorpos terapias, tais como o desenvolvimento de anticorpos monoclonais têm sido usados com sucesso para atingir vários receptores incluindo o VEGF, EGFR, Her-2 exerce vários efeitos em diferentes cancros que resultam em sobrevivência prolongada [9]. Em particular, o desenvolvimento da ipilimumab anticorpo monoclonal IgG1 completamente humanizado tem como alvo o linfócito T citotóxico antigénio-4 (CTLA-4) na superfície de células T auxiliares inibindo desse modo o desenvolvimento de tolerância imunológica. Ipilimumab é aprovado pela FDA para o tratamento de melanoma [10]. Mais recentemente, a descoberta de MDX-1106 (nivolumab), um inibidor de alvos IgG4 checkpoint totalmente humanizados morte programada de 1 (PD-1) exercendo efeitos imunossupressores de células T evitar a tolerância. Fases I e II estudos foram realizados em vários tipos de câncer, mostrando tumor respostas objetivas e melhorar a sobrevida global dos pacientes com melanoma avançado [11]. Como resultado, nivolumab foi aprovado pela FDA para o tratamento de pacientes com melanoma inoperável ou metastático que já não respondem a outras drogas, e portadores de carcinoma do cancro do pulmão de células não-pequenas metastático (NSCLC) com a progressão ou depois com base em platina quimioterapia. O objectivo é desenvolver e combinar várias estratégias terapêuticas em conjunto que proporcionam efeitos de largo espectro, com potencialmente menos toxicidade, minimizando a resistência, melhorando assim os resultados do tratamento para aqueles com câncer. A talidomida é um tal medicamento usado para a gestão eficaz do mieloma múltiplo, possuindo efeitos complexos, mas multifacetados incluindo potente citotóxica e actividades imunomoduladoras [12]. Em particular, a talidomida tem a capacidade de estimular prognosticamente significativas respostas de células T citotóxicas em pacientes com mieloma múltiplo [13] e macroglobulinemia de Waldenstrom [14].
numerosas intervenções nutricionais demonstraram potencial na modulação da resposta imune dsyregulated. Em particular, os derivados de cogumelos foram bem estudados e são conhecidos por possuir efeitos imuno-estimuladores, mas uma evidência clara da sua capacidade para aumentar as respostas imunológicas contra antigénios específicos é lentamente emergente [15]. polissacarídeos ligados a proteínas ou polysaccharopeptides (PSP), são uma classe de compostos encontrados em abundância em certos cogumelos e têm sido amplamente utilizados como modificadores da resposta biológica (BRM) no Leste da Ásia [16]. PSP derivado de
Coriolus versicolor
foi reportado para reforçar o sistema imune, e ser um potente imunomodulador contra cancros e infecções [17-19]. efeitos imunoestimulantes de PSP incluem a elevação de citocinas pró-inflamatórias, tais como γ interferão (IFN-y), interleucinas, tais como IL-2; actividade de células assassinas naturais (NK) de células, a activação do complemento (C3), e proliferação de célula T [20]. É importante notar, que anteriormente relatado que a PSP regula positivamente a percentagem de monócitos, mas não alterou os subconjuntos de células T, células NK ou células B [21]. Em particular, não foram encontradas diferenças significativas na relação CD4 /8 após o tratamento PSP [21]. Esta descoberta apóia estudos clínicos que não apresentaram mudanças significativas na relação CD4 /8 após o tratamento PSP [22,23]. Embora nosso estudo anterior sobre PSP foi realizado in vitro, não ter em conta as questões de biodisponibilidade ou seus efeitos sobre o metabolismo do fígado. É plausível que os resultados negativos de células T pode ser atribuída à ausência de uma tríade imune completamente intacta de DC, T e células-B. Um estudo confirmatório usando animais é, portanto, crucial e o objecto do presente estudo.
respostas de anticorpos de células B dependentes de células T, um antigénio recolhido pelas CD ou os macrófagos são apresentados a células T-helper onde cognato interacção entre células B pode ocorrer. A célula-B com a mesma especificidade que uma célula T específico engole e digere o antigénio e exibe os fragmentos antigénicos ligados às suas moléculas do MHC II único na sua superfície para posterior apresentação. Uma célula T madura correspondente interage com o das células B e segrega citoquinas que conduzem à divisão celular de células B e produção de anticorpos. Este processo pode levar à produção de células B de memória (Fig 1).
Curiosamente, grande parte dos dados (incluindo a nossa) sugerem que houve aumento dos níveis de citocinas e subconjuntos imunológicos conferida pela PSP de não espec�icos mas amplas atividades que vão. Se PSP exerce as respostas de anticorpos de células B dependentes de células T, ou as respostas de anticorpos de células B independente de células T não tenha sido elucidada, em parte, devido a uma falta de ensaios adequados, incluindo modelos animais. Uma tentativa de avaliar os efeitos adjuvantes da vacinação com baseados em glicoproteína medicamentos à base de plantas com potencial imunomodulador (particularmente
Astragalus Comprar e PSPs de
Coriolus versicolor
) emparelhado com conjugados de KLH foram realizados [24,25] . Embora este estudo foi capaz de demonstrar efeitos adjuvantes significativas com estes medicamentos à base de plantas, os modelos KLH apresentar uma série de limitações. Em primeiro lugar, a resposta de células B para a proteína KLH complexo é uma resposta policlonal em relação a um vasto repertório de epítopos antigénicos que fazem a determinação de respostas específicas, tais como as respostas das células B dependentes de células T impossíveis. Em segundo lugar Esta resposta de células B dependente de células T no modelo KLH se estende por um período prolongado tornando-o difícil de diferenciar entre os efeitos directos e indirectos. Os efeitos adjuvantes da vacinação com medicamentos à base de plantas à base de glicoproteínas neste estudo KLH são susceptíveis de ser largo e não-específica. Por conseguinte, os endereços modelo NP-CGG ambas estas limitações do modelo KLH em ser capaz de determinar os efeitos adjuvantes de células B dependente de células T específicas de directos e imunomoduladores medicamentos à base de plantas combinada com agentes imunopotenciadores. A fim de maximizar a resposta imune do baço, NP-CGG foi administrada através da via i.p. rota. Como este é um estudo mecanicista para confirmar a imunidade adaptativa, não há nenhuma aplicação clínica eventual para o modelo NP-CGG via i.p. própria rota. Ao medir as respostas anti-NP específicas em diferentes pontos no tempo, uma resposta de células-B-T-célula dependente síncrono pode ser claramente delineado.
Descrevemos aqui pela primeira vez que a aplicação de um hapteno bem estabelecida -carrier sistema NP-CGG para caracterizar e delinear as respostas imunológicas de células T especifica dependente de células B na presença de PSP, um adjuvante vulgarmente utilizado para a imunoterapia do cancro. De células T respostas de anticorpos de células B dependente em particular, têm um enorme potencial para conferir imunidade adaptativa contra os antígenos de câncer (aumento da avidez) [26-28]. Portanto a capacidade da PSP para exercer células T respostas dependentes
in vivo
é, portanto, altamente desejável e foi investigada neste estudo.
Nossa hipótese é que no modelo NP-CGG, PSP exerce sua imunológica efeitos através de interações célula-B dependentes de células T, alterando a subsequente imunoglobulina (Ig) classe isótipo assim a quantidade de Ig em animais inicialmente impugnados pela NP-CGG e, posteriormente, dadas PSP.
Embora seja bem estabelecido que, neste modelo de produção de anticorpo de pico de classes específicas ocorre em pontos de tempo específicos (IgM = dia 10, dia 14 = IgG, IgA = dia 18 [29]), qualquer aumento de PSP pode ser facilmente determinada. Foi previamente mostrado que para respostas primárias contra NP, existe uma fase de atraso inicial de 3-4 dias de iniciação de células T [30]. Em seguida, as células B específicas-NP serão recrutados para as respostas de anticorpos esplênicas, ativado e crescer exponencialmente. Estes clones de células B, em seguida, quer desenvolver em plasmablasts de curta duração em focos extra-foliculares, ou migrar para folículos onde formam centro plasmócitos de vida longa germinais. Não só as período de vida das células do plasma a partir de duas fontes diferentes, as células de plasma derivadas de centros germinativos, foram encontrados para ser de afinidades muito mais elevados em relação ao imunogénio específico [30]. Esta melhoria da cegueira antigénio-anticorpo vai ter um papel importante para as funções efectoras eficientes de células B, e, assim, implicações clinicamente relevantes. O objectivo do estudo foi determinar as respostas de anticorpo em vários pontos temporais e avaliar a classe de imunoglobulina produzida eles. O nosso estudo permite elucidar o mecanismo de acção de um medicamento à base de plantas clinicamente útil como um adjunto para tratamento do cancro. Acacia é um conhecido imunopotenciador, onde os estudos têm demonstrado que a goma de acácia pode activar as células dendríticas [31], conferir imunidade inata e adaptativa (Strobel e Ferguson, 1982) [32], bem como exercer efeitos anti-parasitárias
In vivo
[33]. Além disso, Strobel e outros (1986) observaram que, subsequentemente, goma de acácia pode ser utilizado para induzir a tolerância oral consoante o modelo utilizado [34]. Em nosso estudo, goma acácia foi utilizado como um imuno para explorar os efeitos combinados com PSP para determinar se os dependentes respostas de células B de células T foram reforçadas em comparação com goma acácia sozinho
Materiais e Métodos
Animais e dieta
5 semanas de idade C57BL /6 machos foram obtidos a partir de O Centro de Recursos animal (Canning Vale, Austrália) e mantido em uma instalação livre de patógenos específicos com alimentos irradiados e água ad libitum.
Todos os procedimentos com animais foram realizados em estrita conformidade com as recomendações nos procedimentos operacionais Laboratory animal Services padrão e políticas desenvolvidas pela Universidade de Sydney. O protocolo foi aprovado pela Comissão de Ética animal da Universidade de Sydney (Aprovação No: L24 /2-2007 /1/4484). Consulte o diagrama de fluxo na figura 2. Todos os animais foram monitorados regularmente e especialmente depois gavaging e vacinação para quaisquer problemas de saúde adversos e gerido em conformidade. métodos adequados para a eutanásia foram realizadas.
5 semanas de idade foram autorizados a se aclimatar durante uma semana, imunizados com NP
25-CGG em 6 semanas, grupos de ratos foram então tratadas por gavage diariamente com PSP, acácia ou MQ por até 21 dias e sacrificados em vários pontos do tempo (dias 0, 4, 7, 10, 14 e 21).
Imunização e antígeno
4-hidroxi 3-nitrof (NP) de hapteno conjugado com globulina de galinha γ (CGG) (NP
25-CGG; Biosearch Technologies, Novato, CA) foi precipitada em alúmen [35]. 6 semanas de idade os ratinhos foram imunizados com 50 ug de alúmen precipitado (em 200 ul de PBS) injectados i.p. no início do estudo (dia 0) e, em seguida, divididos em 4 grupos: NPCGG = sem controle de sonda gástrica ou de controle sem tratamento, controle MQ = MQ veículo água, acácia = goma acácia, PSP = PSP tratada
PSP e soro coleção
Polysaccharopeptide (PSP) derivado do chinês
Cov-1 | estirpe de
Coriolus versicolor
(Winsor Health Products Ltd, Hong Kong) foi obtido e descrito anteriormente [21]. PSP foi suspenso em 5% de goma arábica em água esterilizada MQ (Sigma, St. Louis, MO, EUA) numa concentração final de 5 mg /ml. 50 mg /kg (200 ul) de PSP foi administrada diariamente aos ratos no grupo de tratamento por sonda oral (PSP) e parou após 21 dias. Desde goma acácia foi a linha de base potencial imunomodulatório para o estudo, PSP foi administrado em conjunto com a goma de acácia. Quaisquer potenciais efeitos imunomoduladores da PSP seria esperado para ser maior do que os da goma de acácia. Os restantes ratinhos foram controlos e goma de acácia administrada (acácia), água MQ (MQ), ou qualquer sonda esofágica (NP-CGG). PSP não foi administrada a ratinhos no grupo MQ
Grupos de 6 ratinhos foram então sacrificados sequencialmente na linha de base (dia 0).; 4, 7, 10, 14 e 21 dias após a imunização. PSP e acácia tratados ratos foram sacrificados nos dias 4, 7, 10, 14 e 21; enquanto que os ratinhos tratados MQ e NP-CGG foram sacrificados nos dias 10 e 21. O soro foi recolhido em todos esses momentos.
Conjugação de succinimida NP aos portadores de proteína
Usando o método pelo Lalor [36] o éster de succinimida de NP (4-hidroxi-5-iodo-3-nitrofenil) caproato-o-succinimida (NIP-OSu) (Biosearch Technologies, Novato, CA, EUA) foi conjugado com albumina de soro bovino (BSA; Sigma) produzindo uma relação de substituição aproximado de NP
2-BSA e NP
18-BSA respectivamente.
a detecção de anticorpos séricos NP-specific por ELISA
soro específico-NP IgM, IgG, IgA e IgE foram quantificados por ELISA em vários pontos de tempo. Para determinar se PSP foi capaz de aumentar a resposta predominantemente início de anticorpos IgM anti-NP-CGG que atinge o pico no dia 10, medimos os níveis séricos de ratos em 0, 4, 7, 10, 14 e 21 dias após a imunização. Da mesma forma para avaliar as alterações nas respostas de IgA para NP-CGG que picos no dia 18, foram medidos os níveis de título do soro de ratos em 0, 10, 14 e 21 dias após a imunização. Para examinar se a PSP tem o potencial para aumentar as respostas imunológicas a longo prazo que ocorrem pós 14 dias após a imunização, foi medida uma elevada afinidade e o total de respostas de anticorpos IgG anti-NP-CGG por ELISA directo, utilizando NP
2-BSA e NP
18-BSA, respectivamente, como a proteína de revestimento. Os títulos do soro foram determinados a 0, 4, 7, 10, 14 e 21 dias após a imunização em NP
25-CGG. Para afastar quaisquer possíveis respostas inflamatórias ou alérgicas que podem ter ocorrido em resposta à administração de PSP por um período prolongado de tempo, medimos a níveis de titulação IgE 7 dias após a imunização. Resumidamente placas de 96 poços foram revestidas com 100 uL de 5 ug /ml de NP
2-BSA ou NP
18-BSA em tampão de 0,5 M de carbonato (pH 9,6) a 4 ° C durante a noite e bloqueado com 1% de BSA em PBS. Depois de quatro lavagens com PBS contendo 0,05% de Tween 20 (Santa Cruz Biotechnology, CA, EUA), as amostras de soro diluídas em série foram adicionadas a cada poço em duplicado e incubadas durante 1 h a 37 ° C numa caixa humidificada. Após a lavagem, de cabra conjugado com biotina anti-ratinho IgM, IgG, IgA (Caltag Laboratories) ou IgE (Southern Biotech) diluições que variaram entre 1: Foi adicionado 10000 e incubados durante 1 h a 37 ° C numa caixa humidificada: 3000-1 . actividade SA-HRP foi visualizada utilizando O-fenilenodiamina (OPD, Sigma). Após o desenvolvimento da reacção de cor foi parada com 50 ul de 20% H
2SO
4 e foram determinadas as densidades ópticas a 492 nm utilizando um leitor de placas Polarstar (BMG Labtech, Austrália). soros de controlo positivo foram incluídos de forma que as curvas de calibração padrão para a determinação de títulos de anticorpos relativos poderia ser produzido.
A análise estatística
As análises estatísticas foram realizadas utilizando o não-paramétrico de Kruskall-Wallis ou
post-hoc
Mann-Whitney, quando apropriado. A significância estatística foi obtida quando p 0,05 quando comparado com os grupos de controle.
Resultados
Acacia e PSP não têm efeito sobre o corpo e do baço pesos
Como PSP e Acacia são ambos conhecidos por serem imunopotenciadores, ele é plausível que quaisquer respostas imunes reforçadas causadas por estes agentes no modelo de NP-CGG, é provável que ocorra no baço e ser reflectidas em alterações no peso do baço. O peso corporal foi também avaliada para corresponder com as variações de peso do baço e descartar quaisquer efeitos adversos da PSP e Acacia que podem inversamente ser vistos em uma diminuição no peso corporal. Nós não encontrou qualquer variação significativa nos pesos corporais dos ratos antes ou durante a imunização (Tabela 1). Nem havia qualquer variação significativa entre os pesos corporais dos ratinhos em grupos de entre ou em diferentes pontos de tempo, excepto no dia 21, onde NPCGG e MQ (P 0,05) foram significativamente aumentados em comparação com Acacia (Tabela 2). Há uma tendência de aumento do peso do baço visto de dias 7-14 no grupo ACACIA embora este aumento não atingiu significância estatística. No geral não houve variação significativa no peso do baço na morte entre os grupos (Tabela 3).
PSP diminui os níveis específicos de NP titulação de IgM nos dias 4 e 21
Foram avaliados níveis de titulação de IgM uma vez que são o primeiro anticorpo ser produzido por células B contra um antigénio em ratinhos e humanos e são especialmente potentes na activação do sistema do complemento. titre níveis de IgM foram avaliadas em cada ponto do tempo (dias 4, 7, 10, 14 e 21), a fim de determinar se PSP combinado com acácia poderia aumentar o nível conhecido título de IgM de acordo com o modelo de NP-CGG. Neste modelo que seria de esperar que o nível de título IgM para o pico no dia 10. Quaisquer desvios, tais como uma mudança nesse pico ou alterações anteriores ou posteriores serão reflectidas neste máxima ocorrendo em diferentes pontos de tempo. Curiosamente, encontramos uma diminuição significativa no soro NP IgM específica níveis de titulação em ratinhos tratados com PSP nos dias 4 e 21 (Fig 3B e 3F) em comparação com os tratados com a acácia (P 0,05). Em contraste, verificou-se um aumento significativo no grupo ACACIA em comparação com o grupo de controlo NP-CGG (P 0,05) no dia 21 (Figura 3F). O grupo MQ mostrou um ligeiro aumento nos níveis de IgM título do soro NP específicos no dia 10, que é mais aparente no dia 21 (Fig 3D e 3F), embora eles não foram significativamente diferente de qualquer dos outros grupos. Não houve diferenças significativas nos níveis de titulação NP específicos IgM aos 7, 10 ou 14 dias após a imunização nos grupos PSP ou acácia nem nos grupos NP-CGG controle (P 0,05) MQ ou (Fig 3C-3E).
camundongos C57BL /6 foram imunizados com NP
25CGG e soro foi recolhido nos dias 0, 4, 7, 10, 14 e 21. Os títulos específicos de NP IgM foram medidos a partir de duas vezes em série diluída ( 1 /40-1 /80) amostras de soro por ELISA. ACACIA aumentou significativamente respostas NP-específica de IgM no dia 21 em comparação com somente NP-CGG. Os dados são apresentados como a média de duas experiências independentes, com 5-6 ratinhos por grupo. * P 0,05.
PSP aumenta os níveis de IgG titulação específicas-NP no dia 4
Foram avaliados os níveis de IgG como desde que siga a produção de IgM e IgA embora mais potente no longo prazo secundário imunológico respostas, os níveis de titulação de anticorpos IgG foram avaliados em cada ponto de tempo (dias 4, 7, 10, 14 e 21), a fim de determinar se PSP combinado com acácia poderia aumentar o nível de IgG título conhecido de acordo com o modelo de NP-CGG. Neste modelo que seria de esperar que o nível de título IgG para o pico no dia 14. Quaisquer desvios, tais como uma mudança nesse pico ou alterações anteriores ou posteriores serão reflectidas neste máxima ocorrendo em diferentes pontos de tempo. Nós achamos um aumento significativo na afinidade baixa NP-IgG específica níveis título do soro em ratinhos tratados com PSP no dia 4 em comparação com Acacia (P 0,05) como se vê na figura 4. Este aumento do nível de título no dia 4 ocorre muito mais cedo do que o esperado. A relação entre a expressão da afinidade total elevado para a baixa afinidade resposta de anticorpos IgG específicos de NP foi significativa para acácia no dia 4 (P = 0,008) em comparação com PSP (Fig 4). O grupo MQ mostrou um ligeiro aumento no IgG específica NP níveis título do soro no dia 10, que é mais aparente no dia 21 (Figura 4D e 4F) para respostas tanto a alta afinidade total e de baixa afinidade, embora eles não foram significativamente diferente de qualquer um dos outros grupos.
a expressão da alta afinidade total e baixa afinidade NP-específicos títulos de IgG foram medidos a partir de duas vezes amostras de soro diluídas em série (de 1 /40-1 /80 para o dia 4 a 1 /8000- 1/10000 para o dia 10 em diante) usando NP
2-per BSA (NP
2) e NP
18-per BSA (NP
18), respectivamente, por ELISA. A baixa afinidade de respostas de anticorpos IgG específicos NP-em Acacia foram significativos ao dia 4 mas em nenhum outro ponto de tempo (dias 7, 10, 14 ou 21) em comparação com PSP. A relação entre a expressão do total de elevada afinidade e de baixa afinidade NP-específicas respostas de IgG foi significativa para acácia no dia 4 em comparação com PSP. NP
2 de linha de base muito baixos (dados não mostrados). Os dados são apresentados como a média de duas experiências independentes, com 5-6 ratinhos por grupo. * P 0,05.
No geral, não foram encontradas diferenças significativas na expressão do total de níveis elevados de afinidade ou de baixa afinidade NP específicas de soro IgG para NP-CGG em qualquer um dos outros pontos de tempo ou grupos (P 0,05).
PSP não altera NP específicos de níveis de IgA titre
Foram avaliados os níveis de IgA titre uma vez que são o primeiro nível de defesa atuando como um anticorpo neutralizante contra antígenos invadindo através da mucosa. níveis de titulação IgA foram avaliados em cada ponto de tempo (dias 4, 7, 10, 14 e 21), a fim de determinar se PSP combinado com Acacia poderia aumentar o nível de título IgA conhecido conforme o modelo NP-CGG. Neste modelo que seria de esperar que o nível de título IgA para o pico no dia 18. Quaisquer desvios, tais como uma mudança nesse pico ou alterações anteriores ou posteriores serão reflectidas neste máxima ocorrendo em diferentes pontos de tempo. Como tal, não foram encontradas diferenças significativas nos níveis específicos de NP séricos de IgA em qualquer um dos pontos de tempo investigados nem em qualquer um dos grupos (P 0,05). (Fig 5)
Depois de NP- CGG imunização não foram observadas alterações em respostas de anticorpos IgA em qualquer ponto de tempo (dias 0, 10, 14 ou 21) para PSP ou acácia. Os títulos de IgA específicos de NP foram medidos duas vezes amostras de soro diluídas em série (1 /50-1 /100) por ELISA. Os dados são apresentados como a média de dois experimentos independentes com 5-6 ratos por grupo.
PSP não altera os níveis de NP específicas-titre IgE
Foram avaliados os níveis de titulação de IgE para governar para se PSP é capaz de induzir efeitos alergénicos neste modelo uma vez que a ligação ao antigénio pode desencadear o mastócito para libertar mediadores químicos tais como a histamina que induzir imunidade anti-parasita e alergia. Nós não encontrou quaisquer alterações significativas nos níveis de IgE nos dias 10, 14 ou 21 no grupo tratado PSP em relação ao basal (grupo NP-CGG no dia 0 pós imunização) (P 0,05) como visto na Figura 6. É improvável que PSP exerce respostas alérgicas neste modelo.
Depois de NP-CGG imunização nenhuma mudança em respostas de anticorpos IgE foram observados em qualquer ponto do tempo (dias 4, 7, 10, 14 ou 21) para PSP NP específica Os títulos de IgE foram medidos a partir de duas vezes amostras de soro diluídas em série (1 /5-1 /20) por meio de ELISA. Os dados são apresentados como a média de dois experimentos independentes com 5-6 ratos por grupo.
Discussão
vigilância imunológica Cancer ocorre quando processos de verificação do sistema imunológico são prejudicados, resultando assim em um incapacidade de identificar correctamente, de forma eficaz como alvo e destruir células cancerosas que pode levar ao crescimento de tumores e metástases. Mais recentemente, “immunoediting cancro” tem sido utilizado para descrever este processo dinâmico de eliminação, equilíbrio e escapar [37]. Embora a imunoterapia é uma boa abordagem específica para superar e aumentar cada um desses processos, o uso de medicamentos à base de plantas oferece uma grande promessa. Polysaccharopeptides como PSK e PSP derivados do cogumelo
Coriolus versicolor
foram bem estudados e pretendia reforçar o sistema imunitário com amplas que variam actividades anti-câncer, conferindo uma vantagem de sobrevivência em pacientes com câncer [38]. PSK (de outra forma conhecido como Krestin) foi usado no Japão como um adjuvante aos tratamentos anti-cancro convencionais desde 1