Abstract

local de integração pró-vírus para Moloney vírus da leucemia murina (pim-1) é um proto-oncogene que é ligado ao desenvolvimento e progressão de vários cancros. Neste estudo, avaliou-se a expressão de PIM-1 em tumores do estroma tumoral, e na mucosa do tumor adjacentes em conjunto como um factor de risco independente para os pacientes com cancro do cólon. O estudo incluiu 343 pacientes com câncer de cólon. coloração imuno-histoquímica foi utilizado para detectar a PIM-1. regressão de Cox multivariada para sobrevida livre de doença (DFS) foram utilizados para identificar fatores prognósticos independentes. Analytic processo de hierarquia (AHP) foi usada para calcular o peso do PIM-1 em tumores, estroma do tumor e do tumor da mucosa adjacente de modo a obter uma pontuação total PIM-1 (PTS) para recorrência e sobrevivência. As curvas de Kaplan-Meier DFS e curvas mínimos para pacientes com diferentes níveis de pim-1 expressão foram comparadas pelo teste de log-rank. Neste estudo, foram identificados quatro fatores prognósticos independentes para pacientes com câncer de cólon: pim-1 expressão em tumores, estroma tumoral, mucosa tumor adjacente, bem como o estágio do tumor. Foi estabelecido que estágio clínico é um importante fator prognóstico para pacientes com câncer de cólon. No entanto, PTS pode identificar os pacientes que são susceptíveis de se repetirem, não só em todo o grupo excisão radical, mas também dentro de cada etapa deste grupo. . Com base nos resultados deste estudo, podemos concluir que o PTS combinado com sistema de estadiamento clínico pode ser um melhor preditor de prognóstico dos pacientes com câncer de cólon do que usando o sistema de estágio clínico sozinho

Ensaios Clínicos Gov. Número: ChiCTR -PRCH-12002842

Citation: Peng Yh, Li Jj, Xie Fw, Chen Jf, Yu Yh, Ouyang Xn, et al. (2013) Expressão da pim-1 em tumores, estroma tumoral e Tumor-Adjacente Mucosa Co-determina o prognóstico de cólon pacientes com câncer. PLoS ONE 8 (10): e76693. doi: 10.1371 /journal.pone.0076693

editor: Keitaro Matsuo, Kyushu University Faculdade de Ciências Médicas, Japão

Recebido: 29 de maio de 2013; Aceito: 25 de agosto de 2013; Publicação: 07 de outubro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Peng et al. . Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento: Conceder um apoio foi fornecido pela Ciência Natural da província de Fujian (número de concessão 009J01184). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

a recorrência e metástase distal são as principais causas de morte em pacientes com câncer de cólon. O sistema de estadiamento atualmente disponíveis é incapaz de discriminar entre os pacientes que mais se repetirão e morrem e aqueles pacientes que permanecerá livre de doença, porque o prognóstico de pacientes com câncer de cólon é determinada não só pelas características da própria célula tumoral, mas também pela cancerosa estado da mucosa adjacente [1], a activação de células imunitárias e a presença de outros componentes do estroma tumoral [2,3]. Assim, a identificação e avaliação de novos biomarcadores de prognóstico é crucial, a fim de identificar os pacientes de alto risco e para assegurar que esses pacientes recebam o tratamento necessário.

O local de integração pró-vírus proto-oncogene para Moloney vírus da leucemia murina ( PIM1) codifica uma cinase de proteína serina /treonina que regula a sobrevivência celular, a proliferação, a diferenciação, a apoptose e a tumorigénese [4]. A família Pim tem três membros: PIM-1, PIM-2 e pim-3. De todos eles, PIM-1 é considerado como sendo o mais biomarcador útil para o diagnóstico e prognóstico [5,9] cancro. O gene codifica para PIM-1 2 isoformas com pesos moleculares de 33 e 44 kDa, respectivamente [6]. A 44 kDa PIM-1 localiza-se principalmente à membrana, ao passo que a de 33 kDa PIM-1 localiza no citosol e no núcleo, o que indica que estas duas isoformas regulam vias de sinalização distintas em células cancerosas [7,8]. Estudos recentes de pim-1 têm-se centrado sobre as suas actividades oncogênicos, e possível uso de Pim quinases inibição como um alvo para intervenção terapêutica [9]. A sobre-expressão de PIM-1-quinases foi observado em tumores humanos de origem epitelial e hematopoiética. Além disso, correlacionada com mau prognóstico em várias malignidades hematopoiéticas [10,11], câncer gástrico [12] e carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço [13]. No entanto, contrariamente a estas conclusões, Pim-1 superexpressão correlacionada com bom prognóstico no câncer de próstata, carcinoma ductal de pâncreas e câncer de pulmão não-pequenas células [14-17].

Durante o desenvolvimento embrionário, PIM-1 é altamente expresso em fígado, baço, medula óssea, enquanto que a sua expressão está ausente em tecidos adultos [18]. Outros estudos sobre as actividades fisiológicas dos PIM-1 quinases revelou que os ratinhos deficientes em pim1 falhou para suportar o crescimento de pré-células B [19]. Moreso, as células-tronco hematopoiéticas Pim1 com deficiência não poderia repovoar hospedeiros irradiados [20]. Além disso, outros estudos revelaram que CD40, um membro da família TNFR, que desempenha um papel central na activação de células B dependente de células T,-regula a expressão de PIM-1 para manter a sobrevivência e proliferação das células B [21]. Organismos que carecem de CD40 ou CD40L são incapazes de gerar respostas imunitárias humorais secundárias a antigénios dependentes das células T [22]. Assim, a expressão de PIM-1 no estroma do tumor pode ser um biomarcador importante que reflecte a capacidade de células T ou B para produzir uma resposta imune contra o tumor.

As funções conhecidas de PIM-1 sugerem que pode possivelmente servir como um bom marcador para avaliar as propriedades de tumor, activação imune de tumor leucócitos intersticiais, e o estado canceroso da mucosa tumoral adjacente. Neste estudo, foi utilizada uma base de dados de tissue microarray (TMA) para definir combinações de tumor, estroma tumoral e mucosa tumor adjacente associado com DFS e OS no câncer de cólon. Em conjunto com o atual sistema de estadiamento clínico, as informações obtidas a partir da base de dados melhorado a nossa capacidade de identificar pacientes com alto risco de recorrência da doença após a excisão radical.

Métodos

Os dados clínicos e cancro do cólon amostra coleção

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Southwest Hospital e Fuzhou Hospital Geral de Ética. Doentes prevista consentimento informado por escrito de acordo com a GCP que seus espécimes serão utilizados como parte do estudo em curso sobre genética molecular do câncer de cólon. Neste estudo, amostras clínicas foram retirados de pacientes com câncer de cólon que foram submetidos a colectomia radical, entre 2004 e 2010 em Fuzhou General Hospital. colectomia espécimes de 343 pacientes foram utilizados para construir a TMA. Todos os casos tiveram tecido canceroso suficiente disponível na colectomia para tecido canceroso representante a ser colhida para a construção TMA após o diagnóstico histopatológico clínica padrão. pós-colectomia dados clínicos de acompanhamento, incluindo a avaliação regular do paciente pela visita à clínica, telefone, correio electrónico ou estação de serviço à comunidade, foram usadas para determinar a sobrevivência específicos de câncer e livre de doença em geral. A recorrência focal foi determinada por colonoscopia e as metástases à distância foi determinada por tomografia computadorizada. Todos os pacientes foram devidamente aconselhados a submeter à terapia necessária e exame de saúde de acordo com as diretrizes da National Comprehensive Cancer Network (NCCN). Neste estudo, a data limite para follow-up foi de dezembro de 2011.

TMA construção

de alta densidade microarrays de tecido foram construídos como descrito por Perrone et al. [23] TMA foram montadas com tecido do arrayer TM-1 (Pequim boyikang Laboratório Instrument Co., Ltd., China). Normais em branco blocos de parafina usados ​​no diagnóstico clínico foram utilizados para os blocos série receptora. Todos hematoxilina clínica e eosina (H E) -stained lâminas foram examinadas por histologia para verificar os tecidos alvo. A mucosa presente dentro de l cm da massa do tumor foi definida como a mucosa tumoral adjacente. Até dois núcleos de tecidos em duplicado foram colhidas de cada área circulada. Para construir uma TMA, os centros de referência de núcleos de tecido com um diâmetro de 1,2 mm foram espaçadas de 1,6 mm. Em seguida, a TMA foi descongelada em uma incubadora durante 1 h para um estado semi-líquido a 60 ° C. Após a construção do TMA, 4μm secções foram cortadas, e a corrediça inicial foi corado com H E para verificar o diagnóstico histológico. As imagens TMA foram adquiridos com a estação de trabalho de imagem BLISS microscópio (Bacus Laboratories, Inc., Lombard, EUA). A expressão proteica foi avaliada com uma imagem Pro-plus 6.0 (Media Cybernetics, EUA) por dois patologistas seniores independentemente.

A imuno-histoquímica

Padrão imuno-peroxidase de avidina-biotina foi usado para analisar o PIM-1 a expressão da proteína. O anticorpo monoclonal de coelho contra PIM1 (Epitomics, catálogo # 2409-1) numa diluição de 1: 150 (concentração original de 0,2 mg ml

-1) foi usado. O nível de expressão de PIM-1 foi indicado como ausente, fraca, moderada ou forte de acordo com a intensidade da imunocoloração e a percentagem de células positivas. A intensidade da coloração foi avaliada de forma cega e graduados numa escala de 0 (negativo) a 2+ (positivo forte), como relatado [8]. O grau de coloração positiva na mucosa e tumor focos tumorais adjacentes foi classificada como 0,1-25 (1+), 26-50 (2+), 50-75 (3+) e 76-100% (4+ ) como relatado [8]. (0) e fraco nível ausente (1+) a expressão pim-1 foi marcado como 1 (baixo), moderada (2+) como 2 (moderada) e alto nível (3+, 4+) expressão pim-1 foi marcado como 3 (alto). A pontuação foi realizada por dois patologistas seniores de forma independente usando um sistema telepathology sem o conhecimento prévio do palco ou resultado clínico. Um total de 42 tecidos blocos de microarranjos de amostras de cancro de cólon 540 derivadas de 343 doentes foram avaliados. A pontuação média foi calculada a partir de duas amostras de cancro do cólon retirados de cada paciente.

Métodos estatísticos

regressão de Cox foi utilizado para avaliar se o sexo, idade, tamanho do tumor, metástases em linfonodos, metástase órgão remoto , estadiamento clínico, grau de níveis de diferenciação e pim-1 expressão em amostras de câncer de cólon (que incluíam tumores, estroma do tumor e da mucosa tumor-adjacentes) estão em correlação com DFS e OS. O método Delphi foi empregada para obter as intensidades para a AHP. Em seguida, AHP foi usada para calcular os pesos de PIM-1 contribuem para DFS em tumores do estroma tumoral, e na mucosa do tumor adjacentes, a fim de obter a PIM-1 pontuação total (PTS) (Tabela 1). Então PTSs foram classificados em baixo, moderado e alto graus pelo método Delphi. A análise de Kaplan-Meier foi utilizado para estimar a percentagem cumulativa de DFS e OS com base em diferentes fases de tumor, o nível de expressão de PIM-1 em tumores, estroma do tumor e na mucosa do tumor adjacentes, bem como o PTS, e teste log-rank foi utilizado para comparar as curvas.

PIM-1 expressão Kaplan-Meier

ausente ou fraco moderado

alta

Mi

Wi

wi0

característica vetor

máximo valor próprio

índice de consistência (CI)

tumor11 /31 /50.0666666670.405480130.11326860.358295253.163234530.081617266Tumor adjacente mucosa31261.817120590.50760261.60566604Tumor stroma51 /212.51.357208810.37912881.199273243.57980953Table 1. Para obter uma pontuação total pim-1 (PTS), o peso de pim-1 em tumores, estroma tumoral e mucosa tumor adjacente foi caculaed pelo processo de hierarquia analítica.

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Resultados

as características basais dos pacientes clínica

a fim de determinar se o conjunto de dados foi representativo, as características da coorte de pacientes recrutados foram examinados em primeiro lugar. Um total de 343 pacientes foram recrutados para este estudo e as características basais dos doentes são apresentadas na Tabela 2. A média de idade dos pacientes no momento da cirurgia foi de 61 anos (intervalo 17-86 anos). estágio clínico foi determinado após uma análise patológica pós-operação de acordo com o Cancer AJCC Staging Manual (7ª ed). Houve 52, 186 e 106 pacientes em estágios I, II e III, respectivamente. Um paciente foi rejeitada por causa de R1 a excisão em stageⅡdesease. O tempo médio DFS foi de 61 meses (intervalo de 0.5-86 meses).

Pim-1 expressão no tumor (%) Pim-1 pontuação total (PTS) (%)

Variáveis ​​

baixo

moderada

alta

P

※

Baixa

moderada

alta

p

※

Idade (anos) 0.64650.2424 60 y18.7941.8239.3927.8846.6725.45 (31/165) (69/165) (65/165) (46/165) (77/165) (42 /165) ≥60 y16.2946.6330.0830.3451.6917.98(29/178)(83/178)(66/178)(54/178)(92/178)(32/178)Gender0.63000.1464Male16.3346.4337.2433.1647.4519.39(32/196)(91/196)(73/196)(65/196)(93/196)(38/196)Female19.0541.5039.4623.8151.7024.49(28/147)(61/147)(58/147)(35/147)(76/147)(36/147)WHO grade0.70670.2357G120.4136.7342.8628.5748.9822.45(10/49)(18/49)(21/49)(14/49)(24/49)(11/49)G217.6244.8337.5530.6549.8119.54(46/261)(117/261)(98/261)(80/261)(130/261)(51/261)G312.1251.5136.3618.1845.4536.36(4/33)(17/33)(12/33)(6/33)(15/33)(12/33)T status0.59790.3901T 0/116.6716.6766.6750.0016,6733.33(1/6)(1/6)(4/6)(3/6)(1/6)(2/6)T218.8737.7443.4022.6456.6020.75(10/53)(20/53)(23/53)(12/53)(30/53)(11/53)T317.9245.0037.0831.6747.5020.83(43/240)(108/240)(89/240)(76/240)(114/240)(50/240)T413.6452.2734.0920.4554.5525.00(6/44)(23/44)(15/44)(9/44)(24/44)(11/44)N status0.75810.0330N016.8844.7338.4032.4949.7917.72(40/237)(106/237)(91/237)(77/237)(118/237)(42/237)N122.5843.5533.8729.0346.7724.19(14/62)(27/62)(21/62)(18/62)(29/62)(15/62)N217.3934.7847.838.7052.1739.13(4/23)(8/23)(11/23)(2/23)(12/23)(9/23)N39.5252.3838.1014.2947.6238.10(2/21)(11/21)(8/21)(3/21)(10/21)(8/21)TNM stages0.73290.0510Stage i19.2336.5444.2326.9255.7717.31 (10/52) (19/52) (23/52) (14/52) (29/52) (9/52) Stage ii16.2247.0336.7634.0548.1117.84 ( 30/185) (87/185) (68/185) (63/185) (89/185) (33/185) Stage iii18.8743.4037.7421.7048.1130.19 (20/106) (46/106) (40 /106) (23/106) (51/106) (32/106) Tabela 2. correlação correlação de pim-1 expressão no câncer de cólon.

※ teste do qui-quadrado. Abreviatura: T, tumor; N, nó. CSV Transferir CSV

A relação entre a expressão de PIM-1 e DFS ou OS

Pim-1 está normalmente localizada na membrana, citosol e núcleo das células tumorais, células do estroma do tumor, bem como a mucosa do tumor adjacente células, como anteriormente relatado [8]. As pontuações diferentes de expressão de PIM-1 são apresentados na Figura 1 e Figura S1. Devemos notar que a localização do pim-1 em clusters dentro dos núcleos de células da mucosa tumor adjacente foi classificada como bastante forte (Figura 1E). Foi observada baixa, média e alta Pim-1 expressão em 17,49% (60 de 343), 44,31% (152 de 343) e 38,19% (131 de 343) dos tumores dos pacientes, respectivamente (Tabela 2). Quando estroma tumoral foi examinado 34,99% (120 de 343), 44,61% (153 de 343) e de 20,41% (70 de 343) dos pacientes exibiu baixa, média e alta expressão de PIM-1 (Tabela S1), respectivamente. Em tumoral adjacente mucosa, 63,56% (218 de 343), 29,15% (100 de 343) e 7,29% (25 de 343) dos pacientes exibiu baixa, média e alta Pim-1 expressão (Tabela S1), respectivamente.

(a) Alto nível de Pim-1 expressão no estroma tumoral (seta vermelha), pontuação 3, baixo nível de pim-1 expressão no tumor (seta rosa), marcar 1. (B) Alto nível de pim -1 expressão no estroma tumoral (seta vermelha), pontuação 3, alto nível de Pim-1 expressão no tumor (seta rosa), marcar 3. alto nível de expressão (C) Pim-1 no tumor (seta vermelha), pontuação 3. (D) Alto nível de Pim-1 expressão na mucosa tumor adjacente (seta vermelha), pontuação 3. (E) pim-1 em clusters dentro dos núcleos de células da mucosa tumorais adjacentes marcados como (seta vermelha) bastante forte, pontuação 3. (F) Baixo nível de Pim-1 expressão no estroma tumoral (seta vermelha), pontuação 1, expressão nível mediano de pim-1 no tumor (seta rosa), marcar 2.

um Cox riscos proporcionais modelo multivariável, o estado do tumor (P = 0,015), estadiamento TNM (P = 0,000), expressão pim-1 no estroma tumoral (P = 0,000) e pim-1 expressão na mucosa tumor adjacentes (P = 0,000) foram, cada um, independentemente, e significativamente associados com o DFS (Tabela 3). Além disso, pim-1 expressão no estroma tumoral significativamente associada com o DFS.

DFS (n = 343)

CI de 95,0% para Exp (B)

P

valor

T status1.558 (1.090,2.228) 0.015TNM Stages1.910 (1.449,2.516) 0.000Pim-1 em Tumor stroma0.387 (0.286,0.525) 0.000Tumor mucosa4.463 adjacentes (3.261,6.107) 0.000 tabela 3. a análise multivariada Cox regressão para DFS em 343 pacientes com câncer de cólon.

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Estas características combinadas de pim-1 expressão em tumores, estroma tumoral e tumorais adjacentes mucosa sugerem que pim-1 expressão pode servir como um marcador de prognóstico útil para o cancro do cólon. Para testar esta hipótese, utilizou-se analítico processo de hierarquia (AHP) para determinar a distribuição ponderada coeficiente de PIM-1 contribui para o DFS e OS em tumores, estroma do tumor e na mucosa do tumor adjacentes que foi 0,1132686, 0,3791288 e 0,5076026, respectivamente (Tabela 1 ). Em seguida, o PTS foi calculada com base na pontuação patológico, utilizando a fórmula PTS = 0.1132686p1 0.5076026p2 + + (-) 0.3791288p3, onde P1, P2 e P3 correspondeu à pontuação patológica da expressão de PIM-1 no tumor, tumor- mucosa adjacente e estroma tumoral, respectivamente. PTS foram classificados em baixo (PTS≤0), moderada (0 PTS≤0.5) e alta (PTS 0,5) graus pelo Método Delphi. Utilizando o método de Kaplan-Meier com o teste log-rank, curvas DFS (Figura 2.A.4) e curvas OS (Figura 2.B.4) foram comparados. Estas análises têm demonstrado também que a avaliação PTS combinado com estágio clínico é mais preciso do que a avaliação por estágio clínico isoladamente (Figura 2.A, B).

curvas (A) DFS de diferentes PTS (-1 pim total de score) em diferentes grupos de pacientes: 1, estágio ⅰ; 2, fase Ⅱ; 3, fase Ⅲ; 4, todos os pacientes. (B) curvas OS de diferentes PTS (PIM-1 escore total) em diferentes grupos de pacientes: 1, estágio Ⅰ; 2, fase Ⅱ; 3, fase Ⅲ; 4, todos os pacientes.

A relação entre Pim-1 expressão e DFS ou OS em diferentes estágios tumorais

A sobrevida dos pacientes foi analisada pelo método de Kaplan-Meier, teste log-rank ( Figura S2.D.1; Figura S3.D.1), assim como o DFS e oS baseado em estágio clínico (Figura S2.D.2; Figura S3.D.2; Tabela 4, S2-S4). Os resultados destas análises indicam que a expressão de PIM-1 na mucosa do tumor adjacentes e estroma tumoral, bem como PTS foram significativamente associados com o DFS (P 0,0001, P = 0,0041, P 0,0001, respectivamente) e OE (P 0,0001, P = 0,0066, P 0,0001, respectivamente) (Tabela 4, as Figuras 2.A.4 e B.4; Figuras S2.B.4 e C.4; Figuras S3.B.4 e C.4).

Variáveis ​​

casos P

DFS

OS

sobrevivência de 5 anos,%

p

※

cinco anos de sobrevivência, %

p

※

Pim-1 (tumores) 3430.90960.9126low6052.9665.69moderate15263.8865.69high13162.6068.93pim-1 (mucosa tumor adjacente) 343 0,0001 0.0001low21880.5984.49 moderate10036.2840.27high2500pim-1 (tumor stroma)3430.00410.0066low12030.2334.32moderate15370.6978.02high7068.8569.34PTS343 0.0001 0.0001low10095.7598.36moderate16959.2962.57high7414.9230.03TNM stages343 0,0001 0.0001Stage Ⅰ5275.6581.09Stage Ⅱ18572.5475.81Stage Ⅲ10622.3146.30Table 4. variáveis ​​determinantes do DFS e OS de 343 pacientes com câncer de cólon por análise de sobrevida univariada

※ teste log-rank CSV Baixar CSV..

Além disso, nós examinamos a DFS e oS em cada estágio do tumor com base em pim-1 expressão em tumores (Figura S2 A.1,2,3,4;.. Figura S3 A.1,2,3,4 ), a mucosa do tumor adjacente (Figura S2 B. 1,2,3,4;.. A Figura S3 B.1,2,3,4), estroma do tumor (Figura S2 Cs 1, 2, 3, 4..; Figura S3. Cs. 1, 2, 3, 4), bem como o PTS (Figura 2. A. e B. 1,2,3,4 1,2,3,4). Verificou-se que não só pode PTS prever o DFS, mas também o sistema operacional de pacientes com câncer de cólon (Tabela S2-S4, Figura 2.A.1,2,3 e B. 1,2,3).

Para testar a hipótese de que o câncer estado da mucosa adjacente e a activação de células imunes no estroma tumoral eram mais importantes fator prognóstico no período livre de doença, enquanto os personagens tumorais são mais importantes fator prognóstico no período de recidiva da doença /metástase, que examinaram a relação entre a progressão sobrevivência livre de (PFS) e a expressão de PIM-1 no tumor, da mucosa do tumor adjacentes e estroma tumoral. Cinqüenta e dois pacientes que receberam quimioterapia de primeira linha com 5-FU acrescido de oxaliplatin foram recrutados para este fim, após o retorno. Os resultados destas análises mostram que o PFS foi significativamente associada com pim-1 expressão no tumor (p = 0,0141), enquanto não houve associação estatisticamente significativa entre PFS e pim-1 expressão na mucosa tumor adjacentes (p = 0,6194) ou tumor estroma (p = 0,3438) (dados não mostrados). Estes resultados indicam que o PTS pode reflectir o estado do cancro da mucosa adjacente e a activação de células imunitárias no estroma do tumor, bem como as características do tumor. Em suma, a pontuação PTS pode melhorar a previsão para além estágio clínico do que qualquer outro preditor significativo para DFS.

Discussão

A incidência de câncer de cólon continua a aumentar, especialmente nos países desenvolvidos [24]. A ressecção cirúrgica do tumor primário é o principal tratamento para o cancro colorectal com exceção da fase Ⅰ e, em parte, à fase II cancros do cólon para os quais a administração da quimioterapia adjuvante é recomendada pelo NCCN ORIENTAÇÃO (https://www.nccn.org/index asp).

o uso de quimioterapia adjuvante para o tratamento de estágio II de câncer de cólon ainda está em disputa e mesmo na fase III, os doentes a aderência às diretrizes da NCCN é de 71% [25]. A Sociedade Americana de Oncologia Clínica relata que as provas recolhidas a partir dos ensaios clínicos randomizados não suporta o uso de quimioterapia adjuvante como o tratamento de rotina para pacientes com estágio II de câncer de cólon, porém os pacientes com estágio de alto risco doença II podem beneficiar deste tipo de tratamento [26]. Além disso, os doentes de alto risco não estão bem definidas. Os resultados do estudo MOSAIC indicaram que a adição da oxaliplatina a um regime de fluorouracil e leucovorina melhora o tratamento adjuvante de câncer de cólon (estágio II e Ⅲ) [27]. No entanto, o benefício do tratamento adjuvante, muitas vezes vem com o custo de receber tratamento excessivo de muitos pacientes, mesmo em estágio Ⅲ da doença.

Hoje, o estágio do tumor ainda é o indicador de prognóstico mais importante utilizado na prática clínica para prever a sobrevida de pacientes com câncer de cólon em estágio inicial. No entanto, a previsão exacta da recorrência do cancro do cólon ainda não é alcançada e não há uma necessidade persistente de melhores marcadores a fim de resolver este problema. Estudos recentes destinadas a identificar outros factores prognósticos têm sido principalmente focados no exame células tumorais, como era o caso nos estudos que examinam a importância de miR-365 [28], a assinatura intestinal células estaminais [29], sintase timidilato [30], e outros biomarcadores candidatos possíveis. Cada um destes estudos é limitado a exames teóricos, que são difíceis de pôr em prática clínica. Neste estudo, nós desenvolvemos um método combinado com estágios clínicos que possam prever a recorrência de câncer de cólon em pacientes com colectomia radical.

Apesar de não haver evidência direta de que eles devem receber quimioterapia adjuvante na fase Ⅱ doença, havia ainda 42% dos pacientes incluídos em nosso estudo que receberam 5-FU quimioterapia adjuvante, 12% que receberam capecitabina e 15% dos pacientes que receberam quimioterapia adjuvante 5-FU acrescido de oxaliplatin enquanto os 31% restantes doentes não receberam adjuvante quimioterapia. A principal razão pela qual eles receberam quimioterapia adjuvante foi o conforto de psicologia médico-paciente.

Além disso, nosso estudo incluiu 42% dos pacientes que receberam 5-FU acrescido de oxaliplatin quimioterapia adjuvante, 39% dos pacientes que receberam 5-FU sozinho ou capecitabina isolada quimioterapia adjuvante, e 19% dos pacientes que se recusaram a receber quimioterapia em estágio da doença III. Não houve diferença significativa (p 0,05) em DFS ou OS entre fase II, os doentes, independentemente de eles receberam quimioterapia adjuvante ou não. Além disso, não houve diferença significativa (p 0,05) entre diferentes subgrupos de fase III, os doentes novamente independentemente de terem recebido quimioterapia adjuvante ou não. Além disso, a fim de evitar o efeito do tratamento subsequente após o retorno, neste estudo, que levou DFS como o objectivo primário, e OS como o endpoint secundário.

células-tronco intestinais podem ser as células de origem para o cancro colorectal [31]. Dado que a activação oncogénica de vias de sinalização intracelular tem sido associada com a tumorigénese em células de cancro do cólon [32], a activação do oncogene de mucosa adjacente de tumor pode, possivelmente, ser utilizado na predição da recorrência do tumor após colectomia radical. Nossos dados demonstram que pim-1 ativação de oncogenes da mucosa tumor adjacente está significativamente associado à DFS e que maior nível de pim-1 conta expressão para menor DFS. Portanto, a activação de oncogenes na mucosa do tumor adjacentes devem ser tidas em conta quando da realização de ensaios para identificar os factores de prognóstico no cancro do cólon. No entanto, estes resultados são contraditórios com os resultados clínicos que a recorrência da doença após colectomia deve-se principalmente à metástase remota e não recorrência focal e, portanto, mais estudos são necessários.

Na última década, estroma associado a um cancro tem tornar-se uma preocupação maior do que massas insulares [33-35]. fibroblastos associados ao câncer são o principal componente do estroma associado a um cancro. O significado de diferentes subtipos de fibroblastos associados ao cancro na patogénese do tumor não é clara. No nosso estudo, os fibroblastos foram encontrados em várias proporções em cancros do cólon, frequentemente constituindo a população principal de células do estroma tumoral. Curiosamente, em alguns casos, os fibroblastos associados ao cancro foram positivas para a expressão de PIM-1, ao passo que noutros casos eles foram PIM-1 negativo. Este fenômeno pegou nosso interesse, e nós descobrimos que os níveis mais elevados de pim-1 expressão em estroma associado a um cancro foram associados com DFS mais elevados e OS. Nossos dados indicam ainda que células do estroma tumorais associadas a cancro pim-1-positivos foram de proteção ao hospedeiro, mas o mecanismo exato de sua ação ainda precisa ser elucidado.

A inflamação tem um papel bem definido na promoção a progressão do tumor [36]. O microambiente inflamatório é um componente essencial de todos os tumores. Assim, as células inflamatórias imunes são um componente adicional do estroma associado a um cancro. A maioria dos estudos têm-se centrado na capacidade das células inflamatórias para promover a tumorigénese, desenvolvimento, invasão e metástase [2,37]. Além disso, um estudo recente descobriu que o aumento da infiltração de tumores com células T CD8-positivas citotóxicos tem sido correlacionada com a sobrevivência prolongada [38].

Em nosso estudo de câncer de cólon, descobrimos que, em contraste com PIM células inflamatórias imunes 1-negativas, as células inflamatórias imunes PIM-1-positiva que acompanham fibroblastos foram associados a cancro associada com o aumento de DFS e OS, talvez actuando como subclasses de matar tumores de células do sistema imunológico. Este resultado indica que a PIM-1 pode actuar como um marcador potencial para discriminar entre tumor e matar as células-imunes inflamatórias promotoras de tumor, que é consistente com estudos anteriores [39].

Em conclusão, este estudo sugere que o parâmetros prognósticos do cancro do cólon não são apenas determinadas pelas células tumorais, mas também por estroma associado a um cancro e mucosa tumor adjacente especialmente quando se trata de DFS. Por conseguinte, a activação de proto-oncogene pim-1 em diferentes partes do tumor (células de tumor, o estroma associado a um cancro e na mucosa do tumor adjacentes) pode ser muito importante para a avaliação de prognóstico do paciente. No entanto mais estudos para elucidar o mecanismo exato de pim-1 ação em tumores e tumor associado mucosa, ainda são necessários.

Informações de Apoio

Figura S1.

O perfil de expressão de PIM-1. (A) a expressão nível mediano de Pim-1 no estroma tumoral (seta vermelha), pontuação 2, a expressão nível elevado de Pim-1 no tumor (seta rosa), contagens 3. (B) Expressão negativa de Pim-1 no estroma tumoral (seta vermelha), pontuação 1. (C) expressão negativa de Pim-1 no tumor (seta vermelha), pontuação 1. (D) expressão nível mediano de Pim-1 na mucosa (seta vermelha) tumor adjacente, partituras 2.

doi: 10.1371 /journal.pone.0076693.s001

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Figura S2. curvas

DFS gerados por Kaplan-Meier. curvas (A) DFS de diferente nível de expressão pim-1 em tumores de diferentes pacientes do grupo: 1, estágio Ⅰ; 2, stageⅡ; 3, fase Ⅲ; 4, pacientes totais. curvas (B) DFS de nível pim-1 expressão diferente no estroma tumoral de diferentes pacientes do grupo: 1, estágio Ⅰ; 2, stageⅡ; 3, fase Ⅲ; 4, pacientes totais. curvas (C) DFS de diferente nível de expressão pim-1 na mucosa tumor adjacentes de diferentes pacientes do grupo: 1, estágio Ⅰ; 2, stageⅡ; 3, fase Ⅲ; 4, pacientes totais. (D) curvas DFS de pacientes Total (1) e pacientes com estágio Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ doenças (2)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0076693.s002

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Figura S3 . curvas OS

gerados por Kaplan-Meier. (A) curvas de mínimos de diferente nível de expressão pim-1 em tumores de diferentes pacientes do grupo: 1, estágio Ⅰ; 2, stageⅡ; 3, fase Ⅲ; 4, pacientes totais. (B) curvas OS de diferente nível de expressão pim-1 em estroma tumoral de diferentes pacientes do grupo: 1, estágio Ⅰ; 2, stageⅡ; 3, fase Ⅲ; 4, pacientes totais. (C) curvas OS de diferente nível de expressão pim-1 na mucosa tumor adjacentes de diferentes pacientes do grupo: 1, estágio Ⅰ; 2, stageⅡ; 3, fase Ⅲ; 4, pacientes totais. (D) as curvas do sistema operacional de pacientes Total (1) e pacientes com estágio Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ doenças (2)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0076693.s003

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Tabela S1 .

correlação clínico-patológico de pim-1 expressão no câncer de cólon.

doi: 10.1371 /journal.pone.0076693.s004

(DOC)

Tabela S2.

variáveis ​​determinantes do DFS e OS de pacientes com doença em estágio i por análise de sobrevida univariada. (Log-rank ※ teste.).

doi: 10.1371 /journal.pone.0076693.s005

(DOC)

Tabela S3.

variáveis ​​determinantes do DFS e OS de pacientes com estágio II da doença por análise de sobrevida univariada.

doi: 10.1371 /journal.pone.0076693.s006

(DOC)

Tabela S4.

variáveis ​​determinantes do DFS e OS de pacientes com estágio III da doença por análise de sobrevida univariada.

doi: 10.1371 /journal.pone.0076693.s007

(DOC)

Tabela S5.

Pim-1 expressão em tumores, mucosa tumor adjacente e estroma tumoral.

doi:. 10.1371 /journal.pone.0076693.s008

(DOC)

Reconhecimentos

Agradecemos Medjaden Bioscience Limited para auxiliar na preparação deste manuscrito