Abstract

O câncer de próstata (PCA) é o câncer mais freqüentemente diagnosticado em homens no mundo desenvolvido. via de sinalização do receptor de androgénio desempenha um papel importante na progressão do cancro da próstata. Estudos recentes mostram que microRNA miR-124 exerce uma função supressora de tumor no câncer de próstata. No entanto, a relação entre a RA e miR-124 não é clara. No presente estudo, verificou-se um ciclo de feedback negativo entre a expressão de AR e miR-124. Por um lado, o miR-124 era um gene alvo regulada positivamente da AR, por outro lado, a sobre-expressão de miR-124 inibiu a expressão de AR. Além disso, descobrimos que o miR-124-2 e miR-124-3 promotores foram hipermetilado em células CaP AR-negativo. Além disso, a sobre-expressão de miR-124 taxas inibiu a proliferação ea capacidade de invasão das células CaP

in vitro

, e suprimiu o crescimento do tumor xenoenxerto

in vivo

. Tomados em conjunto, os nossos resultados apoiam um loop de retroalimentação negativa entre a expressão do AR e miR-124. A metilação de miR-124-2 e miR-124-3 pode servir como um biomarcador para células CaP AR-negativa, e a sobre-expressão de miR-124 pode ser de potencial valor terapêutico para o tratamento de CaP.

Citation : Chu M, Chang Y, Guo Y, Wang N, Cui J, Gao WQ (2015) Regulação e metilação de supressor de tumor miR-124 por andrógeno receptor em células do cancro da próstata. PLoS ONE 10 (4): e0116197. doi: 10.1371 /journal.pone.0116197

Editor do Academic: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, ÁUSTRIA

Recebido: 01 de outubro de 2014; Aceito: 07 de dezembro de 2014; Publicação: 10 de abril de 2015

Direitos de autor: © 2015 Chu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seu arquivo de Informações de Suporte

Financiamento:. o estudo é apoiado por fundos para W.-Q. Gao do Ministério da Ciência e Tecnologia chinês (2012CB966800; 2013CB945600 e 2012CB967900), o National Natural Science Foundation da China (81.130.038 e 81.372.189), Comissão de Ciência e Tecnologia de Xangai Município (programa de Pujiang), Comissão de Educação Shanghai Key Disciplina e Fundação Especialidade (J50208), Disciplina Key e Fundação Especialidade de Shanghai Serviços de Saúde e Fundação KC Wong, e M. Chu de Xangai Programa de Pós-Doutorado Científica da China (12R21415100)

Conflito de interesses:. Os autores declararam que nenhum concorrente existem interesses.

Introdução

Os microRNAs (mIR) são endógenas, single-stranded pequena não-codificante RNAs (aproximadamente 20-22 nucleotídeos) que normalmente causam o silenciamento do gene, reduzindo a estabilidade do mRNA e /ou tradução [1]. A sua expressão aberrante foi encontrado para ser associada com vários tipos de cancros [2-4]. MiR-124 é um microRNA altamente conservada que desempenha um papel supressor de tumor em vários tipos de cancros [5-9]. A sequência madura de miR-124 é processado a partir de três variantes de sequências de precursor, que estão localizados em cromossomas 8p23.1 (MIR-124-1), 8q12.3 (miR-124-2) e 20q13.33 (miR-124- 3), todos os quais contêm ilhas de CpG na sua região promotora [9].

ilhas CpG são regiões do genoma que contêm uma elevada frequência de locais de CpG e tipicamente localizados perto dos locais de início da transcrição [10]. Acredita-se que a metilação de CpG nessas regiões para levar ao silenciamento transcricional de seus genes a jusante [10]. Estudos recentes têm mostrado que a metilação é uma razão para a baixa expressão de miR-124 em cancro cervical [9], leucemia linfoblástica aguda [5], o carcinoma hepatocelular [6], e cancro do pâncreas [7]. No entanto, Raynal et ai. [11] relatou que a metilação do DNA não bloqueia de forma estável a expressão do gene desde histona deacetilase inibidores pode reativar expressão gênica sem afetar estado de metilação [11]. Mas os padrões de metilação podem servir como marcadores epigenética para a manutenção a longo prazo de silenciamento de genes [11]. Devido à sua especificidade e estabilidade em amostras humanas, os perfis de metilação de ADN pode ser útil como um biomarcador no rastreio do cancro [12, 13]. Consistente com esta noção, estudos recentes têm indicado que a metilação do DNA aberrante de miR-124 variantes fornecer um biomarcador valiosa para o cancro do colo do útero [9], o cancro da bexiga [14] e carcinoma de células renais de células claras [15].

o câncer de próstata (PCA) é a neoplasia maligna mais comum entre os homens idosos no mundo desenvolvido com o aumento das taxas nos países em desenvolvimento [16]. receptor de androgénio (AR) via de sinalização é muito importante no cancro da próstata [17], que regula muitos outros genes envolvidos na progressão tumoral ou supressão de tumores [18]. Além disso, demonstrou-se que a RA está correlacionada com o estado de metilação de microARNs específicos em células CaP [19]. No entanto, os mecanismos subjacentes regulação e metilação de miR-124 ainda não estão claros.

O objetivo deste trabalho é estudar o mecanismo de regulação de miR-124, o estado de metilação de miR-124 e do anti-tumor função de miR-124 em células APC. Os resultados do nosso experimento revelou que a sinalização AR promovido expressão de miR124, enquanto miR124 suprimida a expressão AR. Houve um loop de retroalimentação negativa entre miR124 e expressão AR. Além disso, a análise de metilação do DNA revelou que a metilação de alta miR124-2 e miR-124-3 ocorreu em células CaP AR-negativo, sugerindo que este fenótipo pode ser utilizada como um biomarcador para células CaP AR-negativo. Além disso, a sobre-expressão de miR-124 mostrou actividade anti-tumoral

In vitro

e

In vivo

, sugerindo um potencial valor terapêutico do miR-124 para o tratamento de CaP.

Materiais e Métodos

culturas de células do câncer de próstata e tratamento dihidrotestosterona

LNCaP, 22Rv1, DU145 e PC-3 linhas celulares foram obtidas a partir da American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, EUA ). células C4-2, uma sub-linha de células LNCaP foram obtidas a partir de UroCore (Oklahoma City, OK, EUA). PC3 /células RA são as células PC3 que sobre-expressam de forma estável o gene de AR de tipo selvagem [20]; células PC3 /neo são uma linha celular de controlo. As células foram mantidas de acordo com o fabricante e protocolos dos fornecedores. Para dihidrotestosterona (DHT, Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, EUA) de tratamento, o meio contendo soro bovino fetal a 10% (Hyclone, Logan, UT, EUA) foi substituído por soro de bezerro carvão despojado-bovino a 10% (Bioind , Israel) quando as células LNCaP foram 60% confluentes -70%, e, em seguida, 0, 5 e 10 nM de DHT foram adicionados respectivamente e as células foram ainda cultivadas durante 12 horas.

Os plasmídeos, produção e infecção por lentivírus

Uma sequência de 21mer (5-GGTGTCACTATGGAGCTCTCA-3) foi concebido para gerar o vector lentiviral de ARN curta hairpin AR (shRNA) [21], e a construção de vector, a produção e infecção por lentivírus foram feitas de acordo com a descrição anterior [19] . O lentiviral plenti-CMV-miR-124 vector foi construído de modo a que sobre-expressam de forma estável sequência madura de miR-124. O vetor de Plenti CMV /TO Puro vazio (Addgene plasmídeo # 17482 [22]) foi comprado de Addgene. O segmento genômico de miR-124 -2 sequências foi amplificada utilizando iniciadores de miR-124-2-F: CCTGGATCCGCTGTAAATGGCATGGAGATAT e miR-124-2-R: GCGTCTAGAGCGGCTGTAATGGAAAAGTAG; e subclonado em locais BamH1 e Xbal do plenti CMV /PURO PARA vector vazio [23]. produção e transdução de lentivírus foram feitas de acordo com um método anterior [23].

Real-Time PCR

Total de RNAs foram extraídos utilizando o RNeasy Além disso Mini kit (Qiagen, Valencia, CA, EUA) por várias células APC. A transcrição reversa foi realizada utilizando o kit de reagente PrimeScript RT (Takara, Dalian, China) e o Kit de Transcrição Reversa TaqMan MicroRNA (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. quantidades relativas de miR-124 (utilizando TaqMan Ensaios microARN, Applied Biosystems) e AR (utilizando o SYBR Green PCR Master Mix em tempo real, TOYOBO, Osaka, Japão) foram realizadas com um tempo real PCR System 7500 (Applied Biosystems). a expressão do gene foi normalizado pela RNU44 controlo endógena (o miR-124) ou β-actina (AR). Os valores de Ct foram calculados usando o método ΔΔCt. Foram utilizados os seguintes iniciadores: AR CCAGGGACCATGTTTTGCC para a frente, reverso CGAAGACGACAAGATGGACAA; β-actina frente CATGTACGTTGCTATCCAGGC, inverta CTCCTTAATGTCACGCACGAT.

Sodium modificação bissulfito e sequenciamento

O estado de metilação de cada miR-124 variantes foi determinada pelo bissulfito-Sequencing PCR (BSP) após a conversão de bissulfito de células utilizando o kit de metilação directa de ADN-EZ (Zymo Research Corporation, Irvine, CA, EUA), seguindo protocolos padrão. BSP Os iniciadores foram concebidos utilizando o software v1.0 Metil Primer Express (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) (Tabela 1). Os produtos de PCR foram ligados no vector T-pMD19 simples (Takara Biotecnologia Co., Ltd., Dalian, China). Colónias (n = 10) foram selecionados por linha de células APC e sequenciado por Shanghai Shenggong Biotech (Xangai, China).

ensaios de proliferação celular

A proliferação celular foi medida utilizando um contagem de células kit (CCK-8; Dojindo, Kumamoto, Japão) ensaio. As células foram plaqueadas em placas de 96 poços com 5000 células por poço e analisada aos 48, 72, 96 horas após o plaqueamento (n = 12). CCK-8 (10 ul) foi adicionado a cada poço e as células foram incubadas durante um período adicional de 2 horas. A absorvância foi medida com um leitor de microplacas (BioTek, EUA) em comprimentos de onda de 450 nm.

ensaios de migração

As placas Costar Transwell de migração com o tamanho dos poros 8um (# 3422, Corning, EUA) foram usava. A câmara superior foram semeadas com 1 x 10

5 células em meio isento de soro e 20% de FBS foi usado como o atraente na câmara inferior. Após 24 horas de cultura, as inserções de cultura foram removidos e lavados com tampão de fosfato salino (PBS) várias vezes para se livrar das células não acopladas. Todas as células remanescentes no lado superior foram raspadas com um cotonete. As células migradas no lado inferior do inserto foram fixadas em paraformaldeído a 4% durante 15 minutos, lavadas duas vezes com PBS, e coradas com 0,1% de violeta de cristal durante 10 minutos. Para cada inserção, 5 regiões aleatoriamente seleccionadas do filtro foram contados sob um microscópio de luz. Cada um dos experimento foi repetido três vezes.

In vivo

ensaios de xenoenxerto

Homem Seis semanas de idade ratinhos nus BALB /C (SLAC, Xangai, China) foram agrupados aleatoriamente e injectados por via subcutânea com 4x 10

6 LNCaP-controlo ou LNCaP miR-124-células misturadas com um volume igual de Matrigel (BD Biosciences, Bedford, MA, EUA). Cada grupo tinha pelo menos cinco ratos. Os tumores foram medidos com um compasso de calibre a cada 10 dias a partir de 2 semanas após a inoculação e o volume foi calculado como π /6 x comprimento x largura

2. tumores de xenoenxertos foram excisados ​​e pesados ​​ao sacrifício no pós-injecção das células de tumor 34 dias. Todas as experiências de rato foram aprovados pelo comitê de Renji hospital de cuidados com os animais e utilização.

A análise estatística

Os dados foram analisados ​​usando o SPSS 13.0 softwares (SPSS Inc., Chicago, Ill., EUA) e Prism GraphPad 5 (GraphPad Software, La Jolla, Calif., EUA). A análise estatística foi realizada utilizando o teste t de Student. Os dados são apresentados como a média ± SEM de pelo menos três experiências independentes. Os valores de probabilidade inferior a 0,05 foram considerados significativos.

Resultados

um loop de retroalimentação negativa entre miR-124 e de expressão AR

Para determinar se AR regula a expressão de miR-124 em linhas celulares de APC, a sobre-expressão de AR e experiências knockdown AR foram realizados em células PC3 (comparada PC3 /AR) e células LNCaP (comparada LNCaP-SH-AR), respectivamente. Como mostrado na Fig. 1, enquanto que a sobre-expressão do AR nas células PC3 melhoradas nível de miR-124 (Fig. 1A) expressão, knockdown de AR nas células LNCaP reduziu o nível de miR-124 (Fig. 1B) expressão. Além disso, examinamos se miR-124 é um microRNA responsiva andrógeno. As células LNCaP, células CaP responsivos aos andrógenos, foram plaqueadas em meio isento de androgénio e tratou-se com DHT para 0 nM, 1 nM e 10 nM, respectivamente. Após 12 horas, os ARN foram extraídos e PCR em tempo real foi analisada. Estas experiências revelaram um aumento da expressão do gene equivale níveis de miR-124 em células LNCaP tratadas com DHT (10 nM) de tratamento (Fig. 1C). Os resultados acima sugerem que AR está estreitamente correlacionada positivamente com a expressão de miR-124. No entanto, não está claro se existe uma influência feedback entre miR-124 e AR. Para estudar esta possibilidade, células LNCaP foram infectadas com um lentivírus de controlo (células de controlo de LNCaP) ou plenti-CMV-miR-124 lentivírus (células LNCaP-miR-124) que expressa elevados níveis de miR-124 (Fig. 1D). O nível de expressão de AR foi então analisada por qRT-PCR. Como mostrado na Fig. 1E, a sobre-expressão de miR-124 inibiu significativamente o nível de ARNm de AR, o que é consistente com um estudo anterior relatam que o tratamento com o miR-124 resultou numa redução da proteína AR nas células LNCaP [8]. Tomados em conjunto, estes resultados sugerem um ciclo de feedback negativo entre o miR-124 e de expressão AR (Fig 1F).

(A) PC3 /células AR são uma linha celular estável superexpressão cDNA AR humano.; células PC3 /neo são utilizadas como controlo. (B) As células LNCaP-SH-Ar são células AR-knockdown, em que as células LNCaP foram infectadas com lentivious AR shRNA; células-SH-LNCaP de controlo são utilizados como um controlo. (C) 0 nM, 1 nM e 10 nM de DHT foram adicionados a células LNCaP e cultivadas durante 12 horas. (D) As células LNCaP foram infectadas com um lentivírus de controlo (células de controlo de LNCaP) ou plenti-CMV-miR-124 lentivírus (LNCaP-miR-124 células). A expressão relativa de miR-124 em células LNCaP foi determinada por qRT-PCR e corrigidas para os níveis RUN44. Os valores médios dobrável mudanças normalizados para células (A) PC3 /Neo; (B) de células LNCaP-sh-AR; (C), as células LNCaP (0 nM de DHT) e células LNCaP de controlo (D). (E) Expressão relativa de AR foi determinada por normalizadas para os níveis de p-actina de qRT-PCR e. Os valores médios dobrável mudanças normalizados para células de controlo de LNCaP. (F) Um diagrama esquemático da via descrita no estudo. Os dados são apresentados como as médias ± SEM de 3 experiências independentes, cada uma das quais foram realizados em triplicado

análise de metilação de miR-124 em células CaP

A madura miR-124 contém 3 variantes prematuros: miR-124-1, miR-124-2 e miR-124-3 (20q13.33). seqüenciamento bissulfito PCR (BSP) e sequenciamento de genes foram realizados para analisar os níveis de metilação do DNA de cada uma das variantes miR-124. Estas análises mostraram que as actividades de metilação de miR-124-2 e miR-124-3 foram maiores nas células CaP AR-negativa (85% -96%, 80% -88%; respectivamente) do que em células CaP AR-positivas (0 % -50%, 1% a 3%; respectivamente) (Fig 2).. No entanto, em ambas as células CaP AR-AR negativos e positivos, a região do promotor de miR-124-1 foi metilada com apenas um grau limitado (2% -38%, a Fig. 2). Além disso, o miR-124-1 metilação não foi significativamente mais elevada do que a de células RA-positiva nas células CaP AR-negativa (DU145, PC3), excepto para as células DU145 em que metilação foi significativamente maior do que as células RA-positivas (22RV1, C4 -2 e LNCaP; p . 0,05)

resumo esquemático dos locais de CpG no miR-124-1, miR-124-2 e miR-124-3 regiões promotoras. análise (A) Metilação foi feito em 10 clones de cada linha celular. Cada linha de círculos representa um único clone, e cada círculo representa um único ADN metilado ou desmetilado local. (B) As percentagens de metilação de 10 clones de cada uma das linhas de células encontram-se resumidos no gráfico de barras. Os dados são apresentados como a média ± SEM. Os asteriscos indicam P 0,05, dois asteriscos indicam P . 0.001

miR-124 superexpressão suprime células LNCaP proliferação, migração e de xenotransplante de tumores de crescimento

Estudos anteriores indicam que miR-124 execuções um papel como um supressor tumoral [5-9], por isso, queria investigador se sobre-expressão de miR-124 pode inibir CaP células de proliferação. Para responder a esta pergunta, as células de controlo de LNCaP e células LNCaP-miR-124 foram semeadas em placas de 96 poços e examinadas em 48, 72, 96 horas após o plaqueamento inicial (n = 12). A proliferação celular foi medida pela absorvância (densidade óptica, OD) de 450 nm comprimento de onda. Os nossos resultados mostraram que a sobre-expressão de miR-124 inibiu significativamente a proliferação de células de LNCaP em 48, 72 e 96 horas, respectivamente (Fig. 3A).

células de controlo de LNCaP (A) e LNCaP miR-124-células eram banhado em 96 poços e examinadas em 48, 72, 96 horas, utilizando ensaio CCK8. A proliferação celular foi avaliada pelo valor de OD. Os dados são apresentados como a média ± SEM (n = 12). dados de grupo (B) e imagens representativas (C, D) são mostrados. (B) Número de células migratórias por campo das células-controle LNCaP e células LNCaP-miR-124. fotomicrografias representativas que ilustram a migração de células de controlo de LNCaP (C) e células LNCaP-miR-124 (D). Cinco ratinhos nus por grupo foram injectados subcutaneamente com 4×10

6 células de controlo de LNCaP ou LNCaP-miR-124 células. (E) O volume dos tumores de xenoenxerto foram medidos a cada 10 dias a partir de 2 semanas após a inoculação. (F) Os pesos dos tumores foram medidos na altura do sacrifício em 34 dias após a injecção das células tumorais. (L) Os tumores foram excisados, no momento de sacrifício na célula pós injecção do tumor 34 dias. Os dados estão apresentados como médias ± SEM. Os asteriscos indicam P 0,05, asteriscos duplos indicam P . 0,001

Além disso, determinamos se a sobre-expressão de miR-124 suprime a migração de células APC, as câmaras Transwell foram utilizados para avaliar o efeito de migratório LNCaP- as células de controlo e células LNCaP-miR-124. Os ensaios mostraram que a superexpressão Transwell de miR-124 suprimiu significativamente a migração de células LNCaP (Fig. 3B, C, D). A observação de que o miR-124 inibe a proliferação de células LNCaP e migração nos levou a determinar se miR-124 superexpressão pode inibir o crescimento do tumor xenoenxerto de células LNCaP

in vivo

. Para responder a esta questão, ratinhos nus machos foram inoculados subcutaneamente com células de controlo de LNCaP ou células LNCaP-miR-124. Verificou-se que ambos os grupos de ratos apresentavam tumores de xenoenxerto palpáveis ​​em 14 dias após a inoculação. No entanto, o tamanho dos tumores foram significativamente menores em LNCaP-miR-124 de xenoenxertos em comparação com os xenoenxertos de LNCaP-controlo após 24 dias (Fig. 3E, L). Além disso, verificou-se que o peso dos tumores foram significativamente mais leves em LNCaP-miR-124 de xenoenxertos em comparação com os xenoenxertos de LNCaP de controlo no momento do sacrifício no dia 34 (Fig. 3F, L). Colectivamente, a sobre-expressão de miR-124 não só a proliferação LNCaP inibido e migração celular

in vitro

mas também suprimiu significativamente o crescimento de tumores xenoenxerto

in vivo

.

Discussão

no presente estudo, nós apresentamos evidências de que o miR-124 é um andrógeno /gene responsivo AR e sobre-expressão de miR-124 inibe a expressão do AR e suprime o crescimento proliferação das células, migração e tumor xenoenxerto CaP. Estes resultados sugerem um ciclo de feedback negativo entre AR e miR-124 expressão, e miR-124 pode ser um alvo terapêutico promissor para CaP.

sinalização de andrógeno /AR é muito crucial no aparecimento e progressão da carcinogênese da próstata [ ,,,0],24, 25]. Não só, mas também hormonas esteróides compostos não esteróides AR poderia activar a sinalização [26]. Além disso, em “O câncer de próstata hormônio-refratário”, a sinalização AR podem ser ativados todos o mesmo [27]. Em suma, na sinalização de androgénio /AR, AR desempenha um papel mais importante do que o androgénio. Por conseguinte, em primeiro lugar, foi realizada a sobre-expressão de AR e experiências de knockdown para verificar se a sinalização AR poderia influenciar a expressão de miR-124. Descobrimos que a expressão de miR-124 foi positivamente correlacionada com AR. Em segundo lugar, o tratamento de células LNCaP com DHT induziu um aumento da expressão de miR-124. Portanto AR regula positivamente a expressão de miR-124. Note-se que os nossos resultados não são consistentes com um relatório anterior, em que R1881 andrógeno analógico foi usado e não regular [8] miR-124. Uma explicação para esta discrepância pode ser devido aos diferentes métodos de pesquisa. Mais estudos são necessários para esclarecer os resultados inconsistentes.

O ciclo de feedback negativo que observamos entre miR-124 e de expressão AR pode desempenhar um papel no desenvolvimento do CaP resistente à castração (CRPC). Como sabemos, a terapia de privação de andrógeno que remove andrógenos ou blocos circular o AR é um padrão de cuidados tratamento para tratamento de câncer de próstata. Apesar de uma resposta eficaz inicial à terapia, quase todos os pacientes inevitavelmente desenvolver a CRPC. Embora tenha havido muita pesquisa feito, o mecanismo ainda é incerto. Os nossos resultados mostram a sinalização de androgénio /AR pode influenciar positivamente a expressão de miR-124, mas este último inibe a expressão do primeiro. Especula-se que em células de próstata normal, o AR e miR-124 expressões estão em equilíbrio, tal como proposto para que ocorra entre os proto-oncogenes e supressores de tumor [28]. Se a sinalização AR é activado, a expressão de baixo fluxo-miR-124 seria alta, e inversamente inibe a sinalização AR. No entanto, o equilíbrio é perturbado em APC, isto é, a sinalização de AR pode ser ainda melhorada, quando a expressão de miR-124 é baixa [8].

Dado que a metilação desempenha um papel na regulação do gene expressão, o presente estudo investigou se a expressão de miR-124 foi associado com o seu estado de metilação. sequência madura de miR-124 tem três variantes precursoras, miR-124-1, 124-2 e miR-miR-124-3, todos os quais foram analisados ​​para o estado de metilação nos nossos estudos. Além miR-124-1, as regiões do promotor de miR-124-2 e miR-124-3 são altamente metilados nas células AR-negativos do que as células CaP CaP AR-positivas (Fig. 2). Quando a expressão de miR-124 é examinado em células APC, não mostrado consistência com o estado de metilação de células CaP (S1 Fig.). Esta discordância poderia ser explicada por uma teoria recente novo sugerindo que a metilação do ADN não fecha de forma estável para baixo a expressão do gene, mas, em vez serve como um marcador molecular para a manutenção a longo prazo de silenciamento de genes [11]. Devido a metilação do DNA representa uma fonte mais química e biologicamente estável de informações de diagnóstico molecular de RNA ou a maioria das proteínas [29], tem grande potencial para ser um biomarcador útil informativo no rastreio do cancro [12, 13]. A este respeito, os nossos resultados sugerem que a hipermetilação aberrante de miR-124-2 e miR-124-3 pode proporcionar um biomarcador útil para células CaP AR-negativo.

Deve salientar-se que a sobre-expressão de miR- 124 pode inibir processo carcinogênico CaP

in vitro

e

in vivo

, o knockdown de miR-124 em células LNCaP não muda o status cancerígena (dados não mostrados). Uma explicação pode ser que as sequências maduras de miR-124 tem três variantes de sequências de precursor, e é difícil de regular negativamente a expressão profundamente. No entanto, mais estudos são necessários para esclarecer este ponto.

Em conjunto, nossos resultados fornecem novos insights sobre o mecanismo regulador do supressor de tumor miR-124 e estado de metilação diferente de miR-124 variantes pode ser usado como um potencialmente biomarcador útil para células APC.

Informações de Apoio

S1 Fig. Expressão de miR-124 em células APC.

Expressão relativa de miR-124 em linhas celulares de CaP foi determinada por qRT-PCR e corrigidos para níveis RUN44. Os valores médios dobrável mudanças normalizados para células LNCaP. Os dados são apresentados como médias ± a partir de 3 experiências separadas, cada uma das quais foi realizada em triplicata

DOI:. 10.1371 /journal.pone.0116197.s001

(DOC)

Reconhecimentos

o estudo é apoiado por fundos para WQ Gao do Ministério da Ciência e Tecnologia chinês (2012CB966800; 2013CB945600 e 2012CB967900), o National Natural Science Foundation da China (81.130.038 e 81.372.189), Ciência e Tecnologia da Comissão, de Xangai Município (Pujiang programa), Comissão de Educação Shanghai Key Disciplina e Fundação especializada (J50208), Disciplina Key e Fundação Especialidade de Shanghai Serviços de Saúde e Fundação KC Wong, e M Chu de Xangai programa de Pós-Doutorado Científica da China (12R21415100).