Sumário
Genômica e análise proteômica de tecidos normais e cancerosas rendeu informação molecular abundante para potenciais biomarcadores e alvos terapêuticos. Considerando vantagens potenciais em acessibilidade ao intervenção farmacológica, identificação de alvos residente no endotélio vascular dentro de tumores é particularmente atraente. Com o emprego de espectrometria de massa (MS) como uma ferramenta para identificar proteínas que são sobre-expressas no endotélio associado ao tumor em relação às células normais, o nosso objectivo descobrir alvos que podem ser utilizados na terapia do cancro angiogénese tumoral. Nós desenvolvemos métodos proteômica que nos permitiu concentrar os nossos estudos sobre a descoberta de /proteínas secretadas superfície celular, uma vez que representam importantes oportunidades terapêuticas e biomarcadores de anticorpos. Em primeiro lugar, foram isoladas células endoteliais (ECs) de tecidos de cancro do rim humano normal e por FACS usando CD146 como um marcador. Além disso, dispersos cólon e cancro do pulmão tecidos humanos e os seus tecidos normais correspondentes foram cultivadas
ex-vivo
e seu conteúdo endotelial foram preferencialmente expandida, isolado e passadas. proteínas da superfície celular foram então preferencialmente capturado, digerida com tripsina e sujeita a análise proteómica à base de MS. Os peptídeos foram primeiro quantificados e, em seguida, as sequências de péptidos expressas diferencialmente foram resolvidos por análise de MS. Um total de 127 original não sobreposta (total 157) célula endotelial do tumor sobre-expressa proteínas identificadas a partir de células endoteliais associadas ao rim isolado directamente e os identificados a partir de
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tecidos cultivados do pulmão e do cólon, incluindo marcadores CE conhecidos tais como CD146, CD31, e VWF. A expressão análise de um painel dos alvos identificados foram confirmados por imuno-histoquímica (IHQ), incluindo CD146, B7H3, Thy-1 e ATP1B3. Para determinar se as proteínas identificadas mediar qualquer papel funcional, foram realizados estudos de siRNA que levaram à dependência funcional não identificado anteriormente para B7H3 e ATP1B3
Citation:. Mesri M, Birse C, Heidbrink J, K McKinnon, Marca E, Bermingham CL, et al. (2013) Identificação e Caracterização de Metas de angiogênese através da proteômica Profiling de células endoteliais em Cancer tecidos humanos. PLoS ONE 8 (11): e78885. doi: 10.1371 /journal.pone.0078885
editor: Benedetta Bussolati, Centro de Biotecnologia Molecular, Itália