Pergunta

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continuação a

Pergunta –

quais são os métodos de ensaio TGO, TGP e fosfatase alcalina

resposta –

o que você quer dizer com princípios como indicação, os métodos, composição ou qualquer outra coisa, por favor especificar a responder corretamente a sua pergunta

graças

resposta

Existem dois métodos comuns de determinação da atividade de uma enzima. Um tempo de paragem

ensaio e um ensaio em tempo real. Um ensaio de tempo de parada é apenas isso, iniciar a reação e parar ou ler o

resultados em um determinado momento. Esta é a maneira mais fácil de fazer muitos ensaios de uma só vez, mas há duas

coisas que precisam ser considerados antes de fazer este tipo de ensaio. A primeira é a linear do ensaio. Em

outras palavras, no tempo em que eu estou correndo o ensaio, é o produto que está sendo produzido (ou substrato

convertido) a uma taxa linear. Se as condições do tubo de ensaio são tais que os reagentes

(substrato) estão esgotados ou os produtos são da inibição da enzima, então você não pode usar este ensaio.

Em segundo lugar, é o composto você está medindo estável o suficiente para esperar para ler e são as condições utilizadas

para parar a enzima, ou seja, ácido ou base muito dura para manter a estrutura da leitura? Estaremos

fazendo ensaios em tempo real. Ou seja, a variação de absorvância (também conhecido como densidade óptica? OD) vs. tempo.

A partir deste gráfico (feito no espectrofotômetro) você irá selecionar uma região que é razoavelmente linear e

determinar o DOD /min e depois convertê-lo para Unidades de actividade enzimática por ml.

fosfatases alcalinas são um grupo de isoenzimas com uma capacidade comum de hidrolisar ligações éster fosfatase orgânicos em meio alcalino, gerando um radical orgânico e de um fosfato inorgânico. A sua função biológica é desconhecida. A fosfatase alcalina no soro normalmente vem a partir do fígado e do osso e, durante a gravidez, a partir da placenta. Também está presente em alguns tumores (por exemplo, carcinoma broncogénico). o crescimento ósseo em crianças provoca um aumento dependente da idade dos valores normais, especialmente em crianças de 2 anos. Depois disso, a actividade da fosfatase alcalina diminui, atingindo níveis adultos normais após um surto durante o crescimento adolescente. Ele é ligeiramente maior em pessoas mais velhas. Durante a gravidez, os níveis séricos aumentam duas a quatro vezes por dia 9 mo e, em seguida, voltar ao normal por 21 dias pós-parto.

fosfatase alcalina aumenta acentuadamente em doenças que impedem a formação da bile (colestase) e, em menor medida, na doença hepatocelular. Valores em colestase, seja por causas intra-hepática (cirrose biliar primária, doença hepática induzida por drogas, fígado transplante rejeição) ou doença do enxerto-versus-hospedeiro (GVH), será semelhante elevada e menos distinguíveis de causas extra-hepáticas (obstrução do canal de estenose , pedra ou tumor), todos subindo alguns quádrupla. Na doença hepatocelular (por exemplo, várias formas de hepatite, cirrose, perturbações infiltrativas), níveis tendem a ser mais baixo com uma certa sobreposição. Os aumentos isolados (outros testes hepáticos são normais) ocorrem em doença granulomatosa ou focal do fígado (por exemplo, abscesso, infiltração neoplásica, ou obstrução do ducto biliar parcial). Em algumas doenças malignas extra-hepáticas sem metástases hepáticas, a causa é obscura: carcinoma broncogênico pode produzir seu próprio fosfatase alcalina; hipernefroma em 15% dos casos induz uma hepatite não específica como a origem presumida da elevação das enzimas. Para o linfoma de Hodgkin, a causa do isolado elevação da fosfatase alcalina é desconhecido. Geralmente um isolado fosfatase alcalina elevação encontrada em um adulto de outra forma assintomática, particularmente se idosos, não vale a pena investigar.

Técnicas utilizando inactivação pelo calor ou electroforese pode distinguir óssea comparada origem hepática para a fosfatase alcalina, mas utilizando outra enzima soro proporciona uma discriminação mais simples: 5′-nucleotidase, é um grupo de fosfatases que diferem bioquimicamente a partir alcalino fosfatase; que catalisam a hidrólise de nucleótidos (por exemplo, adenosina 5′-fosfato) para libertar o fosfato inorgânico a partir da posição 5 ‘e são restritas às membranas do plasma da célula do fígado. Esta enzima aumenta em hepatobiliar, mas não óssea, doenças. Na prática, é útil para avaliar o paciente anictérica. Os valores são baixos na infância, aumentar gradualmente durante a adolescência, e plateau após a idade de 50 anos. 5′-Nucleotidase é normalmente elevado em algumas mulheres durante o último trimestre da gravidez. Devido à sua especificidade para a doença do fígado, 5’-nucleotidase, oferece algumas vantagens sobre a fosfatase alcalina, mas também não pode diferenciar doença obstrutiva da hepatocelular. Eles podem ou não podem subir e descer em paralelo.

gama-glutamil-transpeptidase (ou gama-glutamil-transferase –GGT) é uma enzima (presente no fígado, pâncreas e rim) que transfere o grupo gama-glutamilo a partir de um péptido com outro péptido ou a um L-aminoácido. Níveis de GGT são elevados em doenças hepatobiliares e pancreáticas que obstruem o duto comum, mas são normais na gravidez e doença óssea. GGT são idênticas às da fosfatase alcalina e 5′-nucleotidase em condições colestáticas. Porque não é fisiologicamente elevados durante a gravidez ou a infância, GGT tem um papel aqui na detecção de doença hepatobiliar. Drogas e ingestão de álcool, que induzem enzimas microssomais, também elevam GGT; sozinho, é um mau marcador para doença hepática alcoólica. Combinado com transaminases, a detecção de abuso de álcool torna-se mais seguro. A sensibilidade extrema (maior do que a fosfatase alcalina) desta enzima limita a sua utilidade, mas substituindo o ensaio é 5′-nucleotidase, para detectar a doença hepatobiliar como a causa de um aumento em fosfatase alcalina isolado.

transaminases: aspartato-transaminase (AST, SGOT –formerly) está presente no coração, músculo esquelético, cérebro, e rins, bem como o fígado. níveis de AST também aumentar em MI, insuficiência cardíaca, lesão muscular, doença do SNC, e outros distúrbios não hepáticas. Apesar de alguns inespecificidade, níveis elevados indicam lesão de células do fígado. Os valores de 500 UI /L ( 400 u./mL) sugerem hepatite viral aguda ou tóxica. Tais valores altos também ocorrem na insuficiência cardíaca acentuada (hepatite isquêmica) e até mesmo com pedras duto comuns. A magnitude da elevação não tem valor prognóstico e não se correlaciona com o grau de lesão do fígado. AST é de confiança e parte de triagem de rotina para doença hepática. testes em série fornece um bom monitoramento: Uma queda ao normal indica recuperação a menos associada com os estágios finais de necrose hepática maciça.

A alanina transaminase (ALT SGPT –formerly) é encontrada principalmente nas células do fígado e, portanto, tem maior especificidade para doença hepática, mas oferece pouca outra vantagem. Na maioria das doenças do fígado, o aumento de AST é menor do que a de ALT (AST rácio /ALT 1), excepto em lesão hepática relacionada com o álcool em que a razão é frequentemente 2. (A base para isso é a maior necessidade de piridoxal 5′-fosfato como um co-fator para ALT, o co-fator é deficiente no alcoólico, limitar o aumento da ALT.) Muitas exceções limitar a praticidade da relação. No entanto, uma proporção de 3 com o aumento exagerado na GGT ( 2 vezes a fosfatase alcalina) é altamente sugestivo.

láctico desidrogenase: LDH, comumente incluídas na análise automatizada, é insensível como um indicador de lesão hepatocelular, mas é melhor como um marcador para a hemólise ou MI. Ele pode ser bastante elevado com doenças malignas envolvendo o fígado.

A medição da actividade da fosfatase é baseada na obra de Brandenberger e Hanson (1953) e Hofstee (1954). O efeito catalítico da enzima sobre a velocidade inicial da hidrólise de fosfato de o-carboxifenilo é determinada. O ácido salicílico, ao contrário do éster de fosfato, absorve luz no máximo a cerca de 300 nm; por conseguinte, a velocidade de hidrólise pode ser determinada pelo aumento de absorvância. Uma unidade hidrolisa um micromole de fosfato o-carboxifenil por minuto a 25 癈 e pH 8,8 nas condições especificadas.

Reagentes

0,1 M Tris⋅HCl, pH 8,5

0,2 M Glycine , pH 8,8

0,05 M de cloreto de magnésio 3,65 mM

o-carboxifenil fosfato (OCPP)

enzima

Dissolve-se em um mg /ml em Tris-HCl 0,1 M, pH 8,5 (solução de Stock ). Uma diluição adicional pode ser necessário após a activação.

Processo

activar a enzima por incubação da solução mg /ml durante 20-30 minutos num banho a 25 癈 água.

Ajuste espectrofotômetro a 300 nm e 25 癈

Pipetar para cada cuvete da seguinte forma:.

0,2 M de glicina, pH 8,8 2,0 mL

3,65 OCPP mM 1,0 ml

0,05 M MgCl2 0,5 ml

Incubar em espectrofotômetro a 25 癈 para 3-4 minutos para chegar ao equilíbrio de temperatura e estabelecer a taxa em branco, se houver. Adicionar 0,1 ml de solução de estoque e aumento recorde A300 /minuto da porção linear inicial da curva.

Cálculo

Danil Hammoudi.MD

https://sinoemedicalassociation.com

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