Sumário
Fundo
PTEN supressor do tumor é conhecida para controlar uma variedade de processos relacionados com a sobrevivência celular, a proliferação e crescimento. expressão de PTEN é considerada como fator prognóstico em algumas neoplasias humanas, como mama, próstata e cancro da tiróide.
Metodologia /Principais Achados
Neste estudo analisou a influência de expressão de PTEN sobre o resultado de um ensaio clínico randomizado de contra 7 dias por semana radioterapia pós-operatória convencional para o câncer de células escamosas da cabeça e pescoço. Os pacientes com câncer da cavidade oral, orofaringe e laringe foram randomizados para receber 63 Gy em frações de 1,8 Gy dado 5 dias por semana (CF) ou 7 dias por semana (p-CAIR). Fora de 279 pacientes incluídos no estudo, 147 blocos de parafina estavam disponíveis para a avaliação imunohistoquímica da PTEN. Para avaliar o valor prognóstico da expressão de PTEN e o efeito de fracionamento em relação ao PTEN, foram analisados os dados sobre o resultado de um ensaio clínico randomizado. Tumores com uma alta intensidade de coloração PTEN tinha ganho significativo no controle loco-regional (LRC) da p-CAIR (5 anos LRC 92,7% vs. 70,8%, para p-CAIR vs. CF, p = 0,016, RR = 0,26). Em contraste, os tumores com baixa intensidade de PTEN não ganhou a partir de p-CAIR (5-anos LRC 56,2% versus 47,2%, p = 0,49, RR = 0,94). A intensidade da PTEN altamente afetado o LRC em todo um grupo de 147 pacientes (5 anos LRC 80,9% vs. 52,3% em alta vs. baixa PTEN, p = 0,0007, RR = 0,32). Na análise multivariada de Cox, incluindo envolvimento de gânglios do pescoço, EGFR, nm23, Ki-67, p53, ciclina D1, local do tumor e margens, PTEN permaneceu um preditor independente de LRC (RR = 2,8 p = 0,004).
conclusões /Significado
Estes resultados sugerem que PTEN pode servir como um marcador de prognóstico e preditivo potente na radioterapia pós-operatória para câncer de células escamosas de alto risco da cabeça e pescoço
Citation:. Snietura M, Jaworska H, Mlynarczyk-Liszka J, Goraj-Zajac A, W Piglowski, Lange D, et al. (2012) PTEN como prognósticos e preditivos marcador no pós-operatório radioterapia para câncer de células escamosas da cabeça e pescoço. PLoS ONE 7 (3): e33396. doi: 10.1371 /journal.pone.0033396
editor: Torbjorn Ramqvist, Karolinska Institutet, na Suécia
Recebido: 16 de setembro de 2011; Aceito: 14 de fevereiro de 2012; Publicação: 07 de março de 2012
Direitos de autor: © 2012 Snietura et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Esta pesquisa foi apoiado pela bolsa de pesquisa MN 402 108 134 fornecido pelo Ministério da Ciência e Education.The Superior financiador polaca não teve nenhum papel no desenho do estudo, recolha e análise de dados, decisão de publicar ou preparação do manuscrito.
Competindo interesses: Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
Tumor supressor PTEN (fosfatase e tensina homólogo excluída no cromossomo 10) é uma fosfatase de especificidade dupla que atua como um regulador negativo. da via PI3K-AKT-mTOR, controlando, assim, uma variedade de processos relacionados com a sobrevivência celular, a proliferação e crescimento. PTEN desempenha um papel crucial no silenciamento de transdução de sinal de receptores de factor de crescimento de membrana (EGFR, HER-2, IGFR) através da cascata de sinalização de AKT [1], [2].
mutações e deleções ou somática PTEN silenciamento epigenético são comuns em vários tipos de tumor, incluindo mama, endométrio, e tiróide, mas também de tumores do sistema nervoso central, próstata, pulmão, melanoma, leucemia e linfoma [3] – [11]. A perda de PTEN pode levar a efeitos específicos de tecidos, incluindo tumores rápida ou lenta, ou não há tumores. Em muitos neoplasias eliminação PTEN coopera com outras alternâncias genéticos para melhorar a neoplasias e podem determinar o comportamento clínico agressivo do tumor (por exemplo, carcinomas da tiróide anaplásico ou grau IV astrocitomas invasiva) [12].
Uma vez que a via AKT dita múltipla a jusante processos, incluindo a inibição de apoptose, proliferação de células de tumor [13], e a reparação do ADN [14], e também é conhecida por estar associada a mecanismos radiorresistência, tais como radiorresistência intrínseca e hipoxia [15], a inactivação de PTEN podem afectar a eficácia da terapia anticancro.
Esses fatores formam a base de um interesse crescente em PTEN e outros elementos da via AKT como potenciais marcadores prognósticos e preditivos em modalidade de tratamento combinado, bem como os alvos para novas drogas [16 ].
Enquanto as funções moleculares de PTEN dentro da célula são relativamente bem estabelecida, existem poucos estudos clínicos que abordam o seu valor prognóstico e preditivo em radioterapia para cancro da cabeça e pescoço. Recentemente, publicou resultados de um estudo sobre preditores moleculares do efeito de aceleração (7 dias por semana) a radioterapia pós-operatória. Foi com base na análise das taxas de controlo loco-regional obtidos num ensaio de p-CAIR (irradiação acelerada contínua de pós-operatório) na cabeça e pescoço [17] em relação à expressão de cinco marcadores moleculares (EGFR, Ki-67, P-53 , nm23, e ciclina D) [18] e a presença de infecção por HPV [19].
Métodos
Objetivos
o objetivo do presente estudo é avaliar a papel da PTEN como fator prognóstico e preditivo de radioterapia pós-operatória para câncer de cabeça e pescoço. Além disso, nós também examinar a relação entre a expressão de PTEN e os marcadores previamente estudados neste tipo de câncer.
fundo Clínica do estudo
O julgamento p-CAIR foi realizada entre 2001 e 2004 e recrutou 279 pacientes com câncer de células escamosas de alto risco da laringe (158 pacientes) ou o cancro da cavidade oral /orofaringe (121 pacientes). As características clínicas de todo o grupo de 279 pacientes, uma apresentação detalhada da escala de avaliação de risco, descrição do tratamento, e os resultados clínicos têm sido apresentados em outros lugares [17]. Os pacientes foram randomizados para receber 63 Gy em frações de 1,8 Gy, receberam ou 5 dias por semana (140 pacientes: p-CF, no pós-operatório de fraccionamento convencional) ou 7 dias por semana (139 pacientes: p-CAIR).
recentemente, apresentamos a análise da expressão imunohistoquímica avaliada de cinco marcadores moleculares (EGFR, nm23, Ki-67, p53 e ciclina D1) [18] e presença real-Time PCR-avaliado da infecção pelo HPV [19] em relação ao o resultado do julgamento. Para efeitos de avaliação de PTEN, que era possível a obtenção de material a partir de 147 de 279 pacientes que foram inicialmente incluídos. Os dados de acompanhamento foram atualizados no presente estudo e apresentar o estado dos pacientes a partir de janeiro de 2010 (tempo médio de follow-up: 87 meses).
Note-se que a atualização não afeta a qualitativa resultado da análise, porque novos recorrências loco-regional não foram registrados desde a última publicação.
participantes
a Tabela 1 apresenta as características clínicas de 147 pacientes incluídos na análise. As características gerais do subgrupo analisado no presente estudo não diferem consideravelmente dos que a da população de 279 pacientes [17].
A maioria das pessoas que participam em ambos os braços do estudo eram do sexo masculino ( ~ 90%). Tal preponderância do sexo é representativa para uma população de HNSCC na Polónia e está associado com o hábito de fumar e consumo de álcool.
É importante ressaltar que os fatores de risco para a recorrência foram distribuídos uniformemente entre os braços do estudo. O tempo total médio real tratamento de radiação entre 131 pacientes foi de 48,4 dias (DP = 6,3) em CF vs 35,6 (DP = 6,8) em p-CAIR. Quatro pacientes em p-CF e quatro em p-CAIR receberam doses de radiação total menor do que o previsto, devido à deterioração do desempenho geral antes ou durante a radioterapia. Quatro pacientes em p-CF e três em p-CAIR receberam doses totais mais elevados do que no protocolo, devido à progressão do tumor local /nodal durante o tratamento ou o planejamento do tratamento. Um paciente no braço p-CAIR morreu antes de radioterapia foi iniciado. Os outros 131 pacientes receberam 63 Gy em fracções de 1,8 Gy. Nenhum dos pacientes recebeu quimioterapia. A análise, como mostrado, foi realizada com base na intenção de tratar.
A análise de expressão de PTEN
O padrão de expressão de PTEN foi examinado imunohistoquímica em, tumor embebido em parafina fixado em formalina amostras de todos os doentes envolvidos.
o anticorpo monoclonal, de coelho, anticorpo anti-humano de PTEN, clone 138G6, induzido contra os últimos aminoácidos C-terminais da proteína 100, foi utilizado em todas as análises (Signaling Technology celular, Denver ). A especificidade deste anticorpo PTEN foi confirmada utilizando técnicas de transferência Western em imuno-histoquímica e várias linhas de células com o estatuto de PTEN conhecida. A imunocoloração foi realizada de acordo com as diretrizes padrão: seções de quatro micrômetros foram cortadas, montadas em lâminas, desparafinados, e reidratadas em xilol, e em uma série graduada de etanol. Epitopo recuperação foi realizada durante 20 minutos a 98 ° C em tampão Tris /EDTA a 10 mmol /L, pH 9,0. A actividade da peroxidase endógena foi inactivado por solução a 3% de H
2O
2 durante 5 min. Em seguida, aplicou-se o anticorpo primário às lâminas (1:100 diluição no fundo Reduzindo Diluente de Anticorpo, Dako, Dinamarca) e incubadas durante a noite a 4 ° C. Finalmente, uma mistura do polímero conjugado com peroxidase de rábano e fragmentos de anticorpo de cabra anti-coelho Fab ‘purificado por afinidade e DAB cromogénio foi usado para visualizar a reacção (EnVision + Dako, Dinamarca). Após contracoloração em hematoxilina, as amostras foram cobertas com AquaMount (Dako, Dinamarca), meio de montagem.
intensidade da coloração foi avaliada por um patologista, que desconhecia as informações clínicas referentes aos pacientes. Pontuação foi realizada de acordo com um método semi-quantificação relativa descrita originalmente por Perren [20] e amplamente utilizado em muitos estudos recentes acerca tumores da cabeça e pescoço [21], o melanoma [22], da mama [3], [23], do ovário [ ,,,0],24], e colorretal [25] cânceres. áreas representativas do tumor foram selecionados e marcou sob ampliação original × 200. As lâminas foram classificados em dois grupos, dependendo da intensidade da coloração de células tumorais em relação à expressão de PTEN em epitélio ou estroma aparência normal adjacente, que serve também como um controlo interno, positivo. Os tumores que não apresentam manchas ou com intensidade de coloração menor do que em tecido normal correspondente foram classificados como baixo PTEN (Fig. 1B), enquanto que aqueles com expressão aumentada ou igual foram considerados de alto PTEN (Fig. 1A).
Uma gama de PTEN expressão no tecido tumoral: a – alto, B – baixo. coloração positiva visível da matriz circundante, em ambas as amostras. ampliação original:. 100 ×
Uma série de preparações histológicas com o estatuto de PTEN conhecido serviu como controlo positivo. secções de tumor adicionais, tratados como descrito antes, mas sem aplicação anticorpo primário, não revelaram qualquer coloração (controle negativo).
Ética
O Comitê de Ética da Maria Sklodowska-Curie Memorial Cancer Center e Instituto de Oncology, Gliwice ramo aprovado especificamente neste estudo de acordo com os regulamentos nacionais. A escrita, consentimento informado foi obtido de todos os participantes do estudo.
Métodos estatísticos
falha Loco-regional foi definida como a recorrência de câncer no local do tumor primário, no pescoço ou supraclavicular gânglios e metástases distantes como a recorrência em outros lugares. As curvas de sobrevivência foram plotados utilizando o método de Kaplan-Meier e comparadas pelo teste de f Cox. Tendo em conta o objecto exploratório desta pesquisa e o relativamente pequeno número de pacientes, o teste F de Cox foi considerado mais adequado para testar as diferenças entre os dois grupos, que era o teste log-rank mais comumente utilizada, concebido para ser utilizado em estudos maiores. Para explorar ainda mais o significado prognóstico de variáveis de importância, foi realizada uma análise de regressão de riscos proporcionais de Cox univariada e multivariada. Apenas as variáveis que apareciam estatisticamente significativa na análise univariada foram incluídas no modelo multivariado. O modelo foi otimizado usando uma regressão backward.
Resultados
O valor prognóstico da expressão de PTEN
expressão Baixa PTEN foi detectada em 88/147 tumores (59,9%). Entre 74 pacientes com câncer de laringe, 46 (62,2%) tiveram baixa expressão de PTEN em comparação com 42/73 (57,3%) pacientes com câncer de cavidade oral /orofaringe. Nem estágio T (p = 0,10), nem estágio N no momento do diagnóstico (p = 0,86) foram relacionadas a expressão de PTEN, avaliada pelo teste U-Mann Whitney. expressão de PTEN foi, no entanto, significativamente afetados por sexo dos pacientes. baixa expressão de PTEN foi detectado em 4/15 (26,7%) do sexo feminino, em comparação com 84/132 (63,6%) do sexo masculino (p = 0,006, teste U-Mann Whitney).
controle do tumor
Loco-regional foi altamente afectada pela expressão de PTEN: 5 anos LRC foi de 52,3% em doentes com baixa expressão de PTEN, em comparação com 80,9% em doentes com expressão elevada de PTEN (p = 0,0007, Fig. 2A). O significado prognóstico da PTEN foi evidente tanto para o controle local (5 anos LC 63,9% vs. 84,8% para baixo vs alta PTEN, p = 0,01) e para o controle regional (nodal) (5 anos NC 74,6% vs. 87,9 % para baixo vs alta PTEN, p = 0,05).
Loco-regional de controlo (a), metástases-livres distantes sobrevivência (B), e liberdade de cancro secundário (C), de acordo com a expressão de PTEN em 147 pacientes com carcinoma epidermóide de alto risco tratados no ensaio p-CAIR.
Cinco anos de sobrevida metástases-livres foi de 81,4% em pacientes com baixa expressão de PTEN, contra 84,3% em pacientes com alta expressão de PTEN ; a diferença não pareceu significativa (p = 0,49, Fig. 2B). Além disso, a taxa acumulada de tumores metacrônicos não foi significativamente afetada pela expressão de PTEN (p = 0,15, Fig. 2C).
O valor preditivo da expressão de PTEN
Porque julgamento p-CAIR foi projetado comparar tumor controle loco-regional acelerada vs. radioterapia pós-operatória convencional, foi possível avaliar o potencial preditivo da PTEN expressão relativa ao fracionamento. O resultado clínico em um subgrupo de 147 pacientes apareceu representante para o resultado observado em todos os 279 pacientes: 5 anos tumor controle loco-regional foi de 57,6% em CF, em comparação com 70,6% em p-CAIR; a diferença não foi estatisticamente significativa (Fig. 3A, p = 0,19).
controle Loco-regional (LRC), de acordo com o fraccionamento em subgrupo de 147 pacientes do ensaio p-CAIR utilizado no presente estudo ( a), de acordo com a LRC fraccionamento e expressão de PTEN em subconjunto de 147 pacientes do ensaio P-CAIR utilizado no presente estudo:. PTEN expressão ALTA (B), a expressão de PTEN BAIXA (C)
Num subgrupo de 88 pacientes com baixa expressão de PTEN, 5-LRC ano foi de 47,2% em CF, em comparação com 56,2% em p-CAIR (Fig. 3C, p = 0,19). Num subgrupo de 59 pacientes com expressão elevada de PTEN, 5-LRC ano foi de 70,8% em FC, em comparação com 92,7% em p-CAIR (Fig. 3B; p = 0,016). Assim, a baixa expressão de PTEN foi relacionada não só com LRC desfavorável, mas também à falta de melhoria na LRC de fracionamento acelerado.
PTEN em relação a outras variáveis e marcadores
A expressão de PTEN correlacionado nem com infecção pelo HPV, nem com a expressão de qualquer um dos cinco marcadores previamente estudadas (EGFR, nm23, Ki-67, p53, ciclina D1), como indicado por p . 0,05 em todos os testes U-Mann Whitney realizados
a modelo multivariado concebido para avaliar a significância prognóstica independente de variáveis de importância potencial para LRC inicialmente incorporados vários fatores, incluindo a expressão de PTEN, EGFR, nm23, Ki-67, P-53 e ciclina D1; variáveis clínicas, tais como idade, sexo, estado de desempenho, local do tumor; e fatores de risco patológicos clássicos, como envolvimento de gânglios do pescoço, margens e grau do tumor. infecção pelo HPV não foi incorporada ao modelo, porque apenas nove pacientes parecia ser HPV-positivos neste grupo, e todos foram controlados localmente (sem dados não censurados no grupo de HPV-positivos) [19].
Depois que nós eliminadas as variáveis não-significativas e confusão a partir do modelo, apenas quatro variáveis parecia ser significativa e independentemente relacionada com LRC: expressão de PTEN (RR = 2,84, p = 0,004), envolvimento de gânglios do pescoço (RR = 2,05, p = 0,035), EGFR expressão (RR = 1,91, p = 0,033) e de expressão nm23 (RR = 1,88, p = 0,041, Tabela 2).
Discussão
PTEN como um marcador de prognóstico
Vários fatores clínicos e patológicos foram identificados para prognosticar risco de recorrência após a cirurgia para HNSCC localmente avançado [26], [27]. Esses fatores são usados para selecionar candidatos para a radioterapia pós-operatória e para otimizar a dose de radiação. Mais recentemente, com base em resultados de grandes ensaios clínicos randomizados, [28], [29], os pacientes em alto risco de recorrência são considerados em radioquimioterapia no pós-operatório. Os fatores de risco “convencionais”, como margens positivas cirúrgicos, invasão de mais de um nó no pescoço, disseminação extracapsular da doença nodal e cavidade oral /local do tumor primário da orofaringe, exceto T1N0, foram incluídos entre os critérios de selecção para um julgamento p-CAIR [ ,,,0],17].
os recentes avanços na imunoquímica e biologia molecular têm facilitado a identificação de novos marcadores que ajudam a prognosticar risco de recorrência. Pelo menos duas delas (a infecção por HPV e expressão do EGFR) são cada vez mais reconhecidas na prática clínica de rotina [30], [31]. Os resultados do presente estudo sugerem que PTEN pode tornar-se um outro marcador de grande importância clínica.
Em nosso estudo, foi mais longe e testou um modelo multivariado, incluindo outros potenciais marcadores (Tabela 2). PTEN parece ter um valor prognóstico mais forte do que qualquer uma das outras variáveis consideradas, incluindo a participação do nó pescoço e expressão de EGFR. Apenas uma das variáveis utilizadas numa avaliação “convencional” de fatores de risco permaneceu significativo quando confrontado com novos marcadores. Nós não poderia comparar o valor prognóstico da PTEN e infecção pelo HPV no presente estudo, porque a falta de dados não censurados no grupo HPV-positivos impedida tal análise. No entanto, a falta de correlação entre a expressão de PTEN e infecção pelo HPV indicam que estas duas variáveis são independentes.
A análise, como mostrado, consulte nossos resultados publicados recentemente sobre o valor prognóstico e preditivo de cinco marcadores moleculares (EGFR, Ki-67, P53, nm23, e ciclina D) [18] e a presença de infecção pelo HPV [19]. Nós tinha proposto um índice prognóstico para a recorrência após a radioterapia pós-operatória que incorporou três factores da maior importância: expressão de EGFR, expressão de nm23 e invasão dos gânglios do pescoço [18]. Os resultados da presente análise e os dados emergentes sobre a infecção pelo HPV [19], [30] levam-nos a propor uma nova pontuação, melhor que incorporaria cinco fatores de risco de maior importância para o resultado da radioterapia pós-operatória para HNSCC:
ausência de infecção por HPV em tumor
baixa expressão de PTEN
envolvimento de gânglios do pescoço
alta expressão de EGFR
alta expressão nm23
a Figura 4 ilustra LRC no ensaio de p-CAIR, de acordo com o número de tais factores de risco definidos. Porque nem todos os pacientes incluídos no estudo tinham estabelecido o status do HPV, apenas os dados de 123 pacientes com estado conhecido de todos os cinco marcadores foram usadas para traçar o gráfico. Nenhum dos pacientes tinha zero factores de risco no grupo analisado, principalmente porque a prevalência da infecção por HPV foi baixa (6,9%) neste grupo. Esperamos que a investigação em curso sobre marcadores moleculares no câncer realizados por outros investigadores ajudará a validar e melhorar ainda mais esse escore prognóstico
Loco-regional de controlo de acordo com o número de fatores de risco:. Ausência de infecção por HPV em tumor , baixa expressão de PTEN, o envolvimento pescoço nó, a alta expressão de EGFR, e elevada expressão nm23. A análise foi restrita a 123 pacientes do ensaio p-CAIR com o estatuto de HPV conhecidos e conhecido estatuto dos outros 4 marcadores.
PTEN como um marcador preditivo
Vários estudos clínicos demonstraram o potencial de perfis moleculares para prever o benefício de radioterapia acelerada [31] -. [33], incluindo o nosso relatório anterior sobre os marcadores moleculares no ensaio de p-CAIR [18]
os resultados do presente estudo indicam que a expressão de PTEN pode ser útil na previsão de o benefício de radioterapia acelerada:. os pacientes com expressão elevada de PTEN ter um resultado favorável após a radioterapia pós-operatória acelerada, em comparação com os pacientes tratados com fraccionamento convencional e para aqueles com baixa expressão de PTEN (Fig 3B , C)
O significado clínico desta descoberta é limitado pela atual prática de prescrição baseada em evidências que favoreceria radioquimioterapia pós-operatória mais de radioterapia pós-operatória sozinho em HNSCC de alto risco [27] – [29].. No entanto, os dados emergentes sobre marcadores moleculares e infecção pelo HPV levantam várias questões sobre necessidade real de quimioradioterapia em pacientes que seria, provavelmente, têm resultado favorável após a radioterapia pós-operatória sozinho. Esperamos que os futuros ensaios clínicos e pesquisas sobre marcadores moleculares irá abordar ainda mais esta importante preocupação.
O fundo biológica do presente estudo
Uma possível papel da perda de PTEN na patogênese da HNSCC tem sido descrito por Califano [34] em seu modelo de múltiplas etapas da carcinogênese. Mais tarde, toda uma gama de disfunções funcionais e estruturais de PTEN em HNSCC foi demonstrado, incluindo mutações, as perdas de heterozigose (LOH), e silenciamento epigenético [35] – [38]. A maioria destes distúrbios levam a uma diminuição ou perda de expressão de proteínas, dando, assim, o fundamento lógico para a detecção de PTEN defeituoso por imuno-histoquímica.
Recentemente, foi proposto e confirmado in vivo de um novo modelo de PTEN papel no desenvolvimento do cancro . De acordo com este modelo, a redução subtil (20%) na dose de PTEN, alterou a biologia do cancro e os perfis de genes envolvidos na proliferação de células de cancro [39] expressão, [40].
Devido à expressão diversificada de PTEN em tecidos normais e de tumores individuais, bem como o papel crucial das variações subtis de concentração para o desenvolvimento de PTEN fenótipo do cancro [12], existe uma necessidade de um método imuno-histoquímica de pontuação mais sofisticada. Uma estratégia, proposta por Perren e colegas [20], para usar o tecido normal ou estroma como uma referência comum que fornece um ponto de corte para PTEN normais /disfuncional, garante resultados comparáveis caso-a-caso e foi implementado em nosso estudo. A mesma metodologia foi usada por Lee e colegas de trabalho [21], que investigou a expressão de PTEN em pacientes com câncer de língua e mostrou que a perda de PTEN está conectado com menor tempo de sobrevivência sobrevida global e livre de eventos. Além disso, o status PTEN permaneceu um preditor independente de mau prognóstico, quando comparado com o estágio do tumor e do estado nodal. Do mesmo modo, o significado da expressão de PTEN como um marcador de resultados favoráveis modalidades combinadas compreendendo irradiação foi reportado para muitos outros tipos de cancro, incluindo astrocitomas [41], do colo do útero [4], [42] e do cancro da mama [20], da próstata [7 ], [8] e cancro colorrectal [43].
resultados mais ambíguas foram mostrados por Tsutsui [23] e Perez-Tonorio [3] no contexto do cancro da mama. Eles demonstraram que o prognóstico mais claramente dependia do estado combinado de PTEN /P53 e /fracção da fase S PTEN, respectivamente.
Por outro lado, Pattje e colaboradores [44], recentemente mostrou que existe um risco aumentado de locorregional falha após radioterapia pós-operatória em pacientes com câncer de cabeça e pescoço de células escamosas expressar PTEN. Como prova do conceito, os autores demonstraram uma diminuição da radiossensibilidade de uma linha de células de rim embrionário humano (Hek293) com um gene sobre-expresso de PTEN. Apesar das semelhanças superficiais para os actuais estudos, incluindo locais de tumor, modalidade de tratamento ou a frequência da infecção pelo HPV, há muitas diferenças essenciais no grupo experimental e design, entre nossa abordagem e a pesquisa acima citada. O presente estudo foi realizado em um ambiente ensaio clínico prospectivo, assegurando critérios estritamente definidos de recrutamento de pacientes, a uniformidade de doses, e fracionamento entre os pacientes. Além disso, o género de pessoas que participam em ambos os braços do estudo foi fortemente enviesada em direção machos (~ 90%) e correlacionados com o fumo do tabaco, ao contrário do artigo citado, onde ambos os sexos foram distribuídos uniformemente.
A different metodologia de pontuação imuno-histoquímica é outra diferença substancial que poderia contribuir para um resultado conflituoso. Pattje e colegas usaram um método menos popular, absoluto de semi-quantificação [44], [45], onde qualquer coloração positiva acima do fundo foi considerado como positivo. Este facto é de importância crucial na luz dos novos elementos, demonstrando que, mesmo um pequeno decréscimo da actividade de PTEN pode alterar a biologia do tumor e que a perda completa da funcionalidade pode levar a efeitos opostos, em seguida, uma variação subtil [40] em a sua actividade. A metodologia implementada por Pattje pode causar, que apenas os casos com perda completa da expressão de proteína são classificados como PTEN-disfuncional. No presente estudo, um método semi-quantificação relativa foi utilizado; Assim, os tumores com expressão diminuída de PTEN em relação ao tecido normal foram consideradas como PTEN-disfuncional. Esta abordagem parece ser consistente com novos conceitos de PTEN funcionamento. Também é interessante notar que semi-quantificação relativa pode ser difícil de implementar no caso da matriz de tecido utilizado no estudo de Pattje, devido ao conteúdo escassos de tecido normal em núcleos TMA.
Um conceito interessante, ou seja, “paradigma PTEN” ou “obrigatório haplo-insuficiência” introduzido recentemente, podem fornecer uma explicação adicional destes resultados conflitantes. Segundo esta teoria, as funções celulares PTEN está fortemente ligada ao status P53. No caso de perda de PTEN completa, p53 funcional dirige a célula para a senescência celular aguda. Assim, a perda de PTEN heterozigótica é mais tumorigénico do que a perda completa de PTEN no contexto de p53 de tipo selvagem. Este padrão muda no cenário de células P53 mutantes que são incapazes de ativar P53 não sejam objecto de PTEN senescência celular induzida pela perda [46]. Como resultado, a perda completa de PTEN coopera em sinergia com perda parcial ou completa da p53 [47]. Muito provavelmente, devido ao elevado consumo de tabaco e de baixa proporção de casos de HPV-positivas (que são mutuamente exclusivos à p53 mutações), uma prevalência de P53 mutações nos grupos de estudo de doentes era elevada (75,4%, tal como confirmado por imuno-histoquímica) [18]. De acordo com o paradigma de PTEN, efeitos sinérgicos poderia ser esperada em caso de pacientes /p53 defeituosa PTEN, que conduz ao prognóstico nos indivíduos PTEN-positiva.
Em conclusão, os resultados do presente estudo e outros estudos demonstram que a utilidade clínica de PTEN como o marcador de prognóstico ou previsão para a radioterapia ainda não foi robustamente definida. Portanto, há uma clara necessidade de novas pesquisas que iria aprofundar estas questões interessantes com referência às modalidades de tratamento combinado.