Abstract

No câncer colorretal esporádico (CRC), a

BRAF

V600E

mutação está associada com o estado deficiente de reparo incompatível (MMR) e inversamente associado com a mutações KRAS. Em contraste com deficiente MMR (dMMR) CRC, os dados sobre a presença de

KRAS

mutações oncogênicas em CRC proficiente MMR (pMMR) e sua relação com a progressão do tumor são escassos. Estudámos, portanto, o status de MMR em combinação com

KRAS

mutações em 913 pacientes chineses e correlacionaram os resultados obtidos com as características clínicas e patológicas. O estado MMR foi determinada com base na detecção de MLH1, MSH2, MSH6 e expressão PMS2.

KRAS

mutação e estado dMMR foram detectados em 36,9% e 7,5% dos casos, respectivamente. Quatro subtipos foram determinadas por MMR e

KRAS

estado de mutação:

KRAS

(+) /pMMR (34,0%),

KRAS

(+) /dMMR (2,9%) ,

KRAS

(-) /pMMR (58,5%) e

KRAS

(-) /dMMR (4,6%). A percentagem mais elevada de tumores pMMR com

KRAS

mutação tinham maior probabilidade de ser do sexo feminino (49,0%), proximal localizada (45,5%), a histologia mucinoso (38,4%), e de ter aumentado metástase linfonodal (60,3 %), em comparação com tumores pMMR sem

BRAF

V600E

e

KRAS

mutações (36,0%, 29,3%, 29,4% e 50,7%, respectivamente; todos

P

0,01). Ao contrário, em comparação com aqueles com

KRAS

(-) /tumores dMMR, os pacientes com

KRAS

(+) /tumores dMMR não demonstrou diferenças estatisticamente significativas no sexo, localização do tumor, profundidade pT da invasão, metástase linfonodal, estágio pTNM e grau histológico. Este estudo revelou que as características epidemiológicas e clínico-patológicas específicos estão associados com status de MMR estratificada por

KRAS

mutação. Conhecimento de MMR e

KRAS

estado de mutação pode aumentar o estadiamento patológico molecular de pacientes com CCR e progressão metastática no CRC pode ser estimado com base na combinação desses biomarcadores

Citation:. Li W, Zhi W , Zou S, T Qiu, Y Ling, Shan L, et ai. (2015) Patterns clinicopatológica distinta de incompatibilidade Estado Reparação em Colorectal Cancer estratificada por

KRAS

Mutações. PLoS ONE 10 (6): e0128202. doi: 10.1371 /journal.pone.0128202

Editor do Academic: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, JAPÃO

Recebido: 03 de fevereiro de 2015; Aceito: 24 de abril de 2015; Publicação: 04 de junho de 2015

Direitos de autor: © 2015 Li et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa do programa Backbone da Juventude (a Jianming Ying) do Hospital do Câncer, webcams, Beijing, China, o programa de Pesquisa Natural básico da China a partir de (973 programa 2014CB542002 ), e da National Science Foundation Natural da China (81.401.984). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer colorretal (CRC) é uma doença heterogênea evoluindo de diversas vias genéticas e uma avaliação precisa do câncer com base nas características do tumor permitiria o tratamento do câncer [1,2,3] personalizado. Atualmente, encenação anatômica e patológica ainda é o indicador mais preciso do resultado do paciente [4]. A descoberta e validação de marcadores genéticos que determinam a eficiência da progressão metastática do CRC é, portanto, uma importante área de pesquisa, com o valor potencial de definir o subconjunto de pacientes com maior ou menor risco de recaída. Um dos marcadores moleculares promissores investigados em CRC é a presença de instabilidade microssatélite tumoral (MSI) [5,6,7,8].

CRC é geralmente dividido em duas vias moleculares bem conhecidas, incluindo a cromossómico instabilidade (CIN) via e via de instabilidade de microssatélites (MSI). MSI é o resultado de deficiência de reparo incompatível DNA (dMMR) [9]. A mutação germinativa em um dos genes MMR, incluindo

MLH1

,

MSH2

,

MSH6

ou

PMS2

, é a causa de dMMR em pacientes com síndrome de Lynch, que é uma doença hereditária que aumenta o risco de desenvolvimento de CRC [10,11]. Deficiência MMR também é observada em 10% a 20% dos pacientes com esporádica CRC, dos quais a maioria dos tumores são dMMR devido à hipermetilação de

MLH1

promotor do gene, com

MSH2

e

MSH6

representam uma percentagem muito menor [5]. tumores dMMR esporádicos, mas a síndrome de Lynch não, muitas vezes são portadores da mutação V600E somática ativando no exão 15 do

BRAF

oncogene [12,13,14]. Ambos os tumores esporádicos e Lynch associada à síndrome com status dMMR têm características clínico-patológicas distintas, tais como localização preferencial no cólon proximal, infiltrado linfocítico proeminente, diferenciação anel mucinoso ou anel e associação com um prognóstico favorável. Dados da trilha PETACC-3 informou que amostras tumorais com status dMMR são mais comuns em estágio II da doença do que em estágio III da doença (22%

vs

12%,

P Art 0,001) e com uma percentagem de 3,5% em tumores estágio IV. Estes resultados indicam que os tumores dMMR têm um risco diminuído para metastizar e sugerem um resultado mais favorável [9,15].

O /ERK-quinase de cascata Ras /Raf /MEK está envolvido no controlo da proliferação de células, de células sobrevivência e invasão de células cancerosas CRC [16].

KRAS

é mutado em 35% -40% CRC e mutação do

KRAS

proto-oncogene é um evento precoce no desenvolvimento destes cancros, exercendo uma forte influência sobre o crescimento de pólipos do cólon e início cancros [17,18]. Provas contundentes sugere o valor preditivo da

KRAS

mutação no CRC metastático tratados com anti-EGFR terapia-alvo [19,20]. No entanto, o significado clínico da

KRAS

mutação como marcador prognóstico é controversa. Alguns estudos relataram nenhuma associação com a sobrevivência, enquanto outros sugeriram que os pacientes com

KRAS

tumores mutantes têm pior resultado para qualquer subtipo mutação [21,22,23,24].

A associação de MMR status,

KRAS Comprar e

BRAF

mutações no resultado clínico são frequentemente documentado. No entanto, o desenvolvimento de uma previsão mais precisa sobre os resultados clínicos usando combinações de biomarcadores continua a ser uma área digno de investigação. Além disso, em contraste com dMMR CRC, os dados sobre a presença de

KRAS

mutações oncogênicas em CRC proficiente MMR (pMMR) e sua relação com a progressão do tumor são escassos. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel prognóstico do estado de MMR em combinação com

KRAS

mutações em 913 pacientes chineses e caracterizar os subtipos especificados no que diz respeito às características clínico-patológicas.

Materiais e Métodos

população do estudo

Os pacientes com ressecado, histologicamente comprovada CRC eram elegíveis. Os registros clínico-patológicos de 913 pacientes com correspondentes materiais embebidos em parafina disponíveis para análise molecular foram retrospectivamente coletados do Departamento de Patologia, Hospital do Câncer, da Academia Chinesa de Ciências Médicas, Beijing, China, de 2011 a 2013. A avaliação patologia central foi realizada. fatores de estratificação foram: número de linfonodos regionais metastáticos (N1: 1-3

vs

N2: ≥4), grau histológico (G1-2: bem /moderadamente diferenciado

vs

G3: mal diferenciada /indiferenciado), o diâmetro do tumor, classificação pt, subtipo histológico, localização do tumor, o tamanho do tumor, bem como a fase pTNM. Foi utilizado o sistema de pTNM realização da 7ª edição estadiamento do câncer AJCC. Avaliação de M palco foi, principalmente, de acordo com resultados patológicos confirmados e /ou dados radiológicos. local do tumor proximal incluídos ceco, ascendente, flexão hepática e cólon transverso; sítio distal incluída flexão do baço, descendente e cólon sigmóide. mucinoso diferenciação no tumor foi definida pela presença de grupos de aglomerados contendo mucina extracelulares de células cancerosas. Quando o 50% dos tumores analisados ​​demonstraram diferenciação mucinoso, o tumor foi classificado como carcinoma mucinoso. O estudo foi aprovado pelo Instituto Review Board do Hospital do Câncer, da Academia Chinesa de Ciências Médicas. Cada participante assinou um Conselho de Revisão Institucional aprovado consentimento informado, de acordo com as diretrizes atuais.

KRAS Comprar e

BRAF

V600E

análise de mutação

Avaliação da

KRAS Comprar e

BRAF V600E

de status mutacional foi realizada na Molecular Laboratório de Patologia do Departamento de Patologia, Hospital do Câncer, webcams, usando procedimentos de controle de qualidade adequado. estado de mutação foi determinada utilizando ADN genómico extraído a partir de, o tecido de tumor embebido em parafina fixado em formalina macrodissected. Ambos

KRAS

(códons 12 e 13) e

BRAF

(p.V600E) testes de mutação foram realizadas utilizando um ensaio baseado em PCR multiplex alelo-específico (ACCB, Beijing, China), em conjunto com o Stratagene Mx3000P (Agilent Technologies Inc, Santa Clara, CA), que avalia sete mutações potenciais diferentes no

KRAS

códons 12 e 13 (

Gly12Ala

,

Gly12Asp

,

Gly12Arg

,

Gly12Cys

,

Gly12Ser

,

Gly12Val

, e

Gly13Asp

). Nem

KRAS

nem

BRAF

V600E

tumores mutantes foram designados como do tipo selvagem

KRAS

subtipo.

DNA reparo incompatível proteínas expressão

proteína MMR (MLH1, PMS2, MSH2 e MSH6) expressão foi realizada como uma prática rotineira em nosso departamento patológico. Todas as amostras foram coradas numa Autostainer (Autostainer ligação 48, Dako, Dinamarca). Quatro uM secções de tecido de espessura foram desparafinados em xileno, re-hidratadas em álcool graduado e lavadas em água destilada. Ready-to-use anticorpos monoclonais de rato primária incluídos anticorpo MLH1 (ES05, ​​Dako) e anticorpo MSH2 (FE11, Dako). anticorpos monoclonais de coelho principal ready-to-use incluídos anticorpo MSH6 (EP49, Dako) e PMS2 anticorpo (EP51, Dako). MMR perda de proteína foi definida como a ausência de coloração nuclear de células tumorais, mas coloração nuclear positiva em células epiteliais do cólon normais e linfócitos. Os tumores foram designados como estatuto dMMR se foi detectada perda de pelo menos uma proteína MMR e pMMR se todas as proteínas estavam intactos.

análise de metilação do promotor MLH1

Todas as amostras de DNA foram submetido a modificação com bissulfito utilizando o Kit EZ Metilação de DNA (Zymo Research, CA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. Um ug de ADN genómico a partir de cada amostra foi convertida bissulfito e eluída em tampão de eluição 18μl. metilação específicas de PCR (MSP) foi realizado como previamente descrito [25]. Os iniciadores utilizados para esta análise foram: 5′-AAT TAA TAG GAA GAG CGG ATA GC-3 ‘e 5′-CCT CCC TAA AAC GAC TAC TAC CCG-3’ para metilado

MLH1

promotor e 5 ‘ -TGA ATT AAT AGG AAG AGT GGA TAG T-3 ‘e 5′-TCC CTC CCT AAA ACA ACT ACT ACC CA-3’ para não metilado

MLH1

promotor. MSP PCR especificidade iniciador foi confirmado como eles não amplificar modelos de DNA genómico não de bissulfito-tratados, e os produtos de MSP de vários tumores primários foram confirmados através de sequenciação directa com BigDye v3.1 (Applied Biosystems), o que indica que o nosso sistema de MSP é específico.

a análise estatística

O objetivo principal deste estudo foi identificar características clínico-patológicas distintas associadas com o estado de MMR e

KRAS

mutação. Modelos de regressão logística foram usados ​​para detectar associações destas características com cada um dos

KRAS

mutações e status de MMR. Kruskal-Wallis e χ

2 (ou exato de Fisher) testes foram utilizados para comparar variáveis ​​contínuas e categóricas, respectivamente. modelos de regressão logística univariadas foram usadas para categorizar ainda mais e definir as co-variáveis ​​finais utilizados para análise multivariada. Os testes estatísticos foram em frente e verso, e

P valores

de 0,05 foram considerados significativos. Para comparações múltiplas, Bonferroni ajustado

foram relatados valores

P para as diferenças entre o

KRAS

mutação e estado MMR (α = 0,05 /6). características estatisticamente significativas baseadas em modelos univariados foram incluídos em modelos multivariados usando gradual e para trás procedimentos de selecção do modelo. Odds ratio e seus intervalos de confiança de 95% foram calculados. As estatísticas foram realizadas utilizando o software SPSS (versão 16.0 de SPSS, Chicago, IL, EUA).

Resultados

Um total de 913 casos foram avaliados por imuno-histoquímica (IHQ) para a presença ou ausência de MLH1, MSH2, MSH6 e expressão da proteína PMS2. Dos 69 casos (69/913, 7,5%) com dMMR, 49 tiveram uma ausência de expressão da proteína para MLH1 /PMS2, 9 para MSH2 /MSH6, 5 para MSH6 e 6 para somente PMS2. A fim de CRC relacionadas com a síndrome de Lynch distinto de cancros MSI esporádicos, foi realizado o

MLH1

estudo promotor metilação. Entre 49 casos com uma ausência de expressão da proteína para MLH1 /PMS2, 32,6% (16/49) dos casos teve

MLH1

metilação do promotor. Destes,

KRAS

mutações no

MLH1

tumores MSI esporádicos metilados eram 25% (4/16) e a frequência de mutação era muito mais baixa do que a de mutações globais, 36,9% (337/913 ) (Fig 1).

paciente e do tumor características com relação à situação MMR foram apresentados na Tabela 1. a idade média de apresentação para tumores dMMR foi de 53,3 ± 12,7 anos, o que era mais jovem do que isso de tumores pMMR (

P

= 0,003). No geral, os tumores com dMMR foram mais frequentemente localizado no lado proximal do cólon (72,4%

vs

18,9%,

P Art 0,0001) e eram mais propensos a ser pouco diferenciado (34,8 %

vs

18,0%,

P Art 0,001), em comparação com tumores pMMR. Além disso, os tumores com dMMR também foram significativamente associados com subtipo histológico mucinoso (63,8%

vs

32,7%,

P Art 0,0001) e reduziu metástases em linfonodos (39,1%

vs

54,6%,

P

= 0,01). Não houve diferenças estatisticamente significativas em gênero e estágio PT.

As mutações no

KRAS Comprar e

BRAF

V600E

eram mutuamente exclusivo. Houve 6 casos com tumores dMMR que abrigavam

BRAF

V600E

mutações e esses casos foram excluídos da análise.

KRAS

mutações nos códons 12 e 13 foram observados em 36,9% (337/913) de todos os tumores. A maior frequência de

KRAS

mutações foram detectadas em tumores dMMR (27/69, 39,1%) em comparação com tumores pMMR (310/844, 36,7%), embora essa diferença não atingiu significância estatística. Dos 27 dMMR e

KRAS

tumores -mutated, 16 casos foram definidos com perda de MLH1 /PMS2, 7 com MSH2 /MSH6 e 4 apenas com PMS2.

Características

paciente e do tumor no que diz respeito tanto para a MMR e

KRAS

estado de mutação foram resumidos na Tabela 2. dos 913 casos em casos tanto a MMR e

KRAS

estado de mutação foram definidos, 27 (2,9%) com dMMR foram

KRAS

(+) e 42 (4,6%) foram

KRAS

(-), enquanto 310 (34,0%) casos com pMMR foram

KRAS

(+) e 534 (58,5%) eram

KRAS

(-). Entre estes quatro grupos, foram observadas diferenças significativas por sexo {

KRAS

(+) /casos dMMR mais propensos a ser do sexo masculino,

P Art 0,0001}, idade {

KRAS

(+) /dMMR mais propensos a ter uma idade mais jovem no momento do diagnóstico da doença,

P

= 0,0001}, grau {

KRAS

( -) /dMMR mais propensos a ter doença menor grau,

P = 0,002

}, localização do tumor {

KRAS

(+) e

KRAS

(-) /casos dMMR mais provável para ser localizado no cólon proximal,

P

0,0001} e metástases em linfonodos {

KRAS

(+) /casos pMMR mais propensos a ter maior palco PN,

P = 0,004

}. No entanto, não foram observadas diferenças na fase pT entre esses quatro grupos

Quando comparado com aqueles com

KRAS

. (-) /Tumores pMMR, pacientes com

KRAS

(+) /tumores pMMR tinham maior probabilidade de ser do sexo feminino (49,0%

vs

36,0%; OR = 1,85; IC95% = 1,39 a 2,46;

P Art 0,0001) , a ser proximal localizada (45,5%

vs

29,3%; OR = 2,00; IC95% = 1,30 a 3,08;

P

= 0,002), ter uma histologia mucinoso (38,4%

vs

29,4%; OR = 1,50; IC95% = 1,11 a 2,01;

P

= 0,007), e ter aumentado linfonodo metástases (60,3%

vs

50,7 %; OR = 1,48; IC95% = 1,11-1,96;

P

= 0,007) (Tabela 3). Ao contrário, em comparação com aqueles com

KRAS

(-) /tumores dMMR, os pacientes com

KRAS

(+) /tumores dMMR não demonstrou diferenças estatisticamente significativas no sexo, localização do tumor, profundidade pT da invasão, metástase linfonodal, estágio pTNM e grau histológico. No entanto, a idade média de apresentação para

KRAS

(+) /tumores dMMR foi 51.051.051.0 apresentação para s, n, do que a de

KRAS

(-) /tumores dMMR (

P

= 0,001).

na análise utilizando modelos de regressão logística multivariada, analisamos as características clínico-patológicas na Tabela 4. Como mostrado multivariably, tumores com

KRAS

(+ ) /pMMR foram estatisticamente associados com a localização proximal, histologia mucinoso e aumento de metástases em linfonodos.

Discussão

a definição de subtipos de tumor de CRC com base em alterações orientada por via tem o potencial de melhorar prognostication e guia de terapia-alvo. características clínicas e patológicas distintas de CRC com status MMR diferentes têm sido identificados [6,26,27,28]. Neste estudo, demonstramos características moleculares e clínico-patológicos de tumores pMMR e dMMR estratificados por

KRAS

estado de mutação em uma grande coorte de pacientes com CCR chineses consecutivos. tumores MMR proficientes que foram nonmutated para

KRAS Comprar e

BRAF

V600E

foram o subtipo mais prevalente e representou 58,5% (534/913) do nosso estudo de coorte . Comparado com este subtipo, os pacientes com

KRAS

(+) /tumores pMMR foram mais comuns no cólon proximal e ter uma histologia mucinoso. Mais importante ainda, os pacientes com

KRAS

(+) /tumores pMMR mostraram aumento metástases em linfonodos entre os quatro subtipos e pode ter taxa de sobrevivência pior.

De acordo com as conclusões anteriores, nossos dados sugerem que os tumores com o estatuto de dMMR muitas vezes apresentam baixa diferenciação, tipo de célula mucinoso, localização proximal e reduziu metástases em linfonodos. Em adição ao seu papel na identificação de características patológicas únicas de CRC, estado dMMR também tem sido utilizada como um marcador de prognóstico e a orientação para a quimioterapia adjuvante à base de Fluorouracilo [8]. Evidências recentes indicaram que a CRC pode ser classificada em cinco subtipos pré-especificados usando uma combinação biomarcador de

KRAS Comprar e

BRAF

V600E

mutações, estado MMR e

MLH1

metilação com diferenças estatisticamente significativas nas características clínico-patológicas e sobrevida dos pacientes [29]. Assim, um classificador baseado em biomarcador fornece informação prognóstica importante no CRC, com implicações para a gestão do paciente. Evidências de outros relatórios apoiaram a ideia de que

KRAS

mutação e estado MMR são marcadores genéticos que surgem cedo e permanecem biologicamente relevante em todas as fases de progressão do tumor [30,31]. Além disso,

KRAS

mutações encontradas em tumores primários são preservados em recidivas e metástases. Consequentemente, avaliamos os subtipos de tumores pré-especificados no que diz respeito às características clínico-patológicas em combinações de biomarcadores de

KRAS

mutações e status de MMR.

cancros Deficiente MMR normalmente se originam no cólon proximal [15]. Como esperado, a grande maioria dos tumores dMMR neste estudo (72,4%) eram do cólon proximal e essa distribuição não foi influenciada pela

KRAS

mutações. Embora a maioria dos tumores pMMR não eram susceptíveis de ser proximal localizado, é interessante que quando os tumores pMMR estratificada por

KRAS

mutações,

KRAS

tumores mutantes (20,9% proximais) eram mais propensos a ser proximal em relação ao

KRAS

(-) /tumores pMMR (14,7% proximais). Tradicionalmente, os cancros do cólon desenvolvidas no intestino proximal, muitas vezes criado um ambiente no qual CIMP (CpG Ilha Methylator Fenótipo) é mais provável que surjam, e este estabeleça sinergias com a

BRAF

mutação para permitir a progressão de pólipos serrilhados [32]. No entanto, evidências recentes sugerem que

KRAS

mutações podem também ser encontrados em CIMP alta e CIMP tumores de baixo que foram muitas vezes localizadas no cólon proximal [33]. Isto indicou que havia mecanismos mais abrangentes subjacentes a localização do câncer de cólon e os padrões de mutação. carcinoma mucinoso é diagnosticada quando pelo menos 50% do tumor compreende mucina secretoras e é frequentemente associada com o status dMMR e adenocarcinoma serrilhada [34]. Isto é consistente com a nossa conclusão de que os tumores dMMR demonstrou diferenciação mais mucinoso do que os tumores pMMR (63,8%

vs

32,7%). No entanto, quando estratificada por

KRAS

estado de mutação, observou-se que os tumores pMMR com mutante

KRAS

fenótipo exibido diferenciação mais mucinoso de tipo selvagem

KRAS

subtipo (38,4%

vs

29,4%). Isto é em grande parte porque

KRAS

mutação é não só ligada a adenomas convencionais, mas também associado com adenomas serrilhadas no desenvolvimento do cancro colo-rectal [35].

Uma associação significativa foi encontrada entre a presença de As metástases linfonodais e tumores pMMR estratificados por

KRAS

estado de mutação. Nossos resultados revelaram que os tumores pMMR com

KRAS

mutação demonstrou gânglios linfáticos mais positivas e pTNM estadio III-IV da doença do que os tumores com

KRAS

(-) /status pMMR. Isto é consistente com os resultados de um relatório menor, o que demonstrou que a frequência de

KRAS

mutações foi maior em tumores positivos nódulos linfáticos pMMR em comparação com pMMR de linfonodos negativos tumores [36,37]. Os nossos resultados indicam que a maioria dos tumores pMMR necessários

KRAS

mutação para ser capaz de metástase e esta activação foi essencial para células neoplásicas para adquirir potencial invasivo. Mutações no

KRAS

chumbo oncogene a alterações nos aminoácidos codificados adjacentes à cavidade de ligação GTP e reduziu a atividade GTPase da

KRAS

proteína após o nucleótido guanina proteína ativadora (GAP) de ligação [38]. Ambos

in vitro

e

in vivo

modelos experimentais, transfecção de mutantes formas, constitutivamente activas de

KRAS

oncogene em células anteriormente não cancerosas podem levar a fenótipos invasivos e metastáticos. A expressão ectópica de activo

KRAS

na linha de células de fibroblastos NIH 3T3 de murino resultou num aumento da invasão e a aquisição de propriedades metastáticas [39]. Usando injecção na veia da cauda de células transformadas,

in vivo

modelos foram observados por fígado e metástase pulmonar [40]. Além da evidência obtida a partir de experimentos com células e animais, os estudos clínicos também têm demonstrado significativa metástases em linfonodos em

KRAS

(+) /tumores pMMR [36,41]. perfil de expressão gênica revela que genes involoving mesenquimais transição epitelial e remodelamento da matriz que pode facilitar a invasão tumoral e metástase são regulados positivamente em

KRAS

tumores mutantes -pMMR [42]. Consequentemente,

KRAS

activação oncogénica mostrou ser um importante mediador da invasão de células de tumores e metástases em tumores pMMR.

A frequência de

KRAS

mutações no Lynch síndrome relacionada CRC e esporádica CRC é quase o mesmo. No entanto,

KRAS

mutações são significativamente mais frequente em Lynch CRC relacionadas com a síndrome do que na esporádicos MSI-H CRCs [37,43]. síndrome relacionada com Lynch CRC tendem a ser de início precoce e localização proximal. Então, isso pode explicar a idade mais jovem e localização proximal observado em

tumores KRAS

+ /MSI. Apesar destes resultados positivos, o nosso estudo tem algumas limitações. Em primeiro lugar, porque esta é uma retrospectivamente estudar, é difícil para recolher a amostra de sangue ou saliva de pacientes para detectar mutações germinativas para distinguir ainda mais o CRC relacionadas com a síndrome de Lynch de câncer esporádico. Portanto, não poderia calcular a frequência precisa de

KRAS

mutações em CRCs hereditárias, no entanto, é certo que a síndrome relacionada com Lynch CRC em nosso estudo mostrou preferencialmente

KRAS

mutações. Em segundo lugar, não examinou outras mutações menos comuns em

KRAS

códons 61, 117 e 146, que também contribuíram para a transformação oncogénica de células tumorais.

Este estudo sugere que epidemiológico e clínico-patológico específico características são associadas com o estado MMR estratificada por

mutação KRAS

no CRC. Conhecimento de MMR e

KRAS

estado de mutação pode aumentar o estadiamento patológico molecular de pacientes com CCR e progressão metastática pode também ser estimada com base na combinação desses biomarcadores. Validação de biomarcadores genéticos adicionais ajudarão a refinar as decisões de gestão para pacientes individuais com base na biologia do tumor. Importante, isso também pode auxiliar no desenvolvimento de novos alvos terapêuticos para auxiliar o tratamento destes cancros agressivos.

Reconhecimentos

Agradecemos a todos os participantes do estudo do Departamento de Patologia por suas contribuições para este projecto. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa do Programa Backbone Juventude de (para Jianming Ying) do Hospital do Câncer, webcams, Beijing, China, o Programa Natural Pesquisa Básica da China (973 programa 2014CB542002) e da National Natural Science Foundation da China (81.401.984).