Abstract
Objectivo
Baixa níveis séricos de 25 níveis (OH) D estão associados com fatores de risco cardiovascular, e também prever o futuro de infarto do miocárdio (MI), diabetes tipo 2 (DM2 ), câncer e mortalidade por todas as causas. Recentemente, vários polimorfismos nucleotídicos singulares (SNPs) associadas com níveis séricos de 25-hidroxivitamina D (25 (OH) D) nível foram identificados. Se essas relações são uma causal seria de esperar uma associação semelhante entre esses SNPs e saúde.
Métodos
DNA foi preparado a partir sujeitos que participaram da quarta pesquisa do Estudo de Tromsø em 1994-1995 e que foram registrados com os pontos finais MI, DM2, câncer ou de morte, bem como um grupo de controle selecionados aleatoriamente. Os registros de ponto de extremidade estavam completos até 2007-2010. A genotipagem foi realizada por 17 SNPs relacionados com a 25 (OH) D no soro.
Resultados
Um total de 9528 indivíduos foram selecionados para análises genéticas que foram realizadas com sucesso há pelo menos um SNP em 9471 assuntos. Entre estes, 2.025 foram registrados MI, 1092 com DM2, 2924 com câncer e 3.828 morreram. As diferenças entre as médias no soro de 25 (OH) D níveis entre genótipos de SNP com o mais baixo e mais elevado de soro de 25 (OH) D níveis variaram 0,1-7,8 nmol /L. A pontuação genótipo baseado em alelos de risco ponderados sobre baixos níveis séricos de 25 (OH) D níveis foi estabelecida. Não houve associação consistente entre a pontuação genótipo ou indivíduos SNPs e MI, DM2, o câncer, a mortalidade ou fatores de risco para a doença. No entanto, para genótipos rs6013897 (localizado no gene 24-hidroxilase (
CYP24A1
)), houve uma associação significativa com o cancro da mama (P 0,05).
Conclusão
nossos resultados não suportam nem excluir uma relação causal entre níveis séricos de 25 (OH) D níveis e MI, DM2, câncer ou mortalidade e nossa observação sobre a confirmação necessidades de câncer de mama. Mais estudos genéticos são necessários, particularmente em populações com deficiência de vitamina D
Registro de Estudos
ClinicalTrials.gov NCT01395303
Citation:. Jorde R, Schirmer H, Wilsgaard T, Joakimsen RM, Mathiesen EB, Njølstad I, et al. (2012) Polimorfismos relacionadas ao D no soro de 25-hidroxivitamina Nível e Risco de Infarto do Miocárdio, diabetes, câncer e mortalidade. O Estudo de Tromsø. PLoS ONE 7 (5): e37295. doi: 10.1371 /journal.pone.0037295
Autor: John R. B. Perry, Peninsula College de Medicina e Odontologia, Reino Unido
Recebido: 10 de fevereiro de 2012; Aceito: 17 de abril de 2012; Publicado em: 23 de maio de 2012
Direitos de autor: © 2012 Jorde et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. O presente estudo foi suportado por concessões do Norte da Noruega Autoridade Regional de Saúde (htpp /: www.helse-nord.no), o Diabetes Association norueguês (htpp /: www.diabetes.no), e da Universidade de Tromsø (htpp /: www .uit.no). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
a vitamina D é um hormônio antiga com indiscutível importância no metabolismo do cálcio e osso. O receptor da vitamina D (VDR) é um receptor nuclear localizada em células num certo número de órgãos indicando as funções importantes também em tecidos extra-esquelético [1].
Assim, em relatórios anteriores do estudo Tromsø encontrámos baixo teor de soro de 25-hidroxivitamina D (25 (OH) D) níveis (o qual é o metabolito da vitamina D utilizada para avaliar o estado de vitamina D de um objecto) estar fortemente relacionada com a hipertensão [2], a obesidade [3], hemoglobina glicada elevada (HbA
1c) [4] e um perfil lipídico desfavorável [5]. Em linha com este encontrámos baixo teor de soro de 25 (OH) D níveis de ser associada com o risco de desenvolvimento de diabetes mellitus tipo 2 (DM2) [6], bem como com o aumento da mortalidade por qualquer causa [7]. Observações semelhantes foram relatados a partir de outros estudos [8], [9], e soro de 25 (OH) D níveis também têm sido associadas com o cancro [10]. Por conseguinte, o nível de D no soro de 25 (OH) parece ser um factor de risco importante para a doença em geral. No entanto, se existe uma relação causal entre baixos níveis séricos de 25 (OH) D e da doença é incerta e aguarda os resultados de ensaios clínicos randomizados adequadamente realizados (RCT).
A ingestão de vitamina D e exposição ao sol são os principais determinantes D nível do soro de 25 (OH), mas não pode explicar inteiramente as diferenças no soro de 25 (OH) D entre indivíduos [11]. Com base em estudos de famílias e duplos estima-se que mais de 50% da variabilidade pode ser atribuído a factores genéticos [12], e, recentemente, vários polimorfismos de um único nucleótido (SNPs) relacionados com níveis de 25 (OH) D foram identificadas [13 ], [14]. Estes SNPs, onde as freqüências alélicas menores variam entre 16 e 40%, aparecem como importante para a 25 (OH) D níveis séricos como o efeito da suplementação de vitamina D e quase tão importante quanto o efeito da época [13]. Por conseguinte, se o soro de 25 (OH) D é causalmente relacionados com a saúde, seria de esperar que os sujeitos com polimorfismos associados com baixo teor de soro de 25 (OH) D níveis seria mais propensos à doença do que os indivíduos com polimorfismos presumivelmente mais favoráveis.
O estudo de Tromsø é um estudo epidemiológico longitudinal saúde da população com pesquisas repetidas realizados em intervalos de 6-7 anos [15]. Na quarta pesquisa realizada em 1994-1995, amostras de sangue para preparação de DNA foram coletadas em perto de 27 000 indivíduos. Os participantes são acompanhados com registro de incidente infarto do miocárdio (MI), DM2, câncer e morte, e, portanto, teve a oportunidade de testar se SNPs no sistema de vitamina D estão relacionados com endpoints rígidos, bem como doença cardiovascular (DCV) fatores de risco. No entanto, o estudo não fornecem evidências consistentes de tais relações.
Materiais e Métodos
O estudo
Tromsø
O Estudo de Tromsø, realizado pela Universidade de Tromsø em cooperação com o serviço de triagem Nacional de Saúde, é um estudo de múltiplos propósitos de base populacional longitudinal com foco em doenças relacionadas com estilo de vida. A quarta pesquisa foi realizada em 1994-1995, o quinto em 2001-2002 eo sexto em 2007-2008; 27 158, 8130 e 12984 indivíduos atendidos, respectivamente (Tabela 1) [15], [16].
Definição de endpoints DM2
possíveis casos de DM2 foram identificados através de auto diabetes relatados em questionários na quarta (1994-1995), quinta (2001-2002) e sexto (2007-2008) levantamentos do Estudo de Tromsø, através de elevada HbA
1c ( 6,5%) em um dos dois ex inquéritos de saúde, por ligação da quarta lista de inquérito participante para o Hospital Universitário de registro diagnóstico de alta digitais Norte da Noruega (códigos CID-9 250, 357,2, 362,0, 583,8, 648,0, 648,8, 790,2, CID-10 códigos E10.0- E14, O24 e R73) em conjunto com o registo CVD concorrente, ou por ligação para as Causas dos Registry Morte. Além disso, fizemos o manual sistemática e buscas eletrônicas através de prontuários para a diabetes (antes de 2001 de papel, a partir de 2001 os registros digitais) em todos os participantes inscritos com o seguinte cardiovascular diagnosticar códigos da Classificação Internacional de Doenças versão 9 e 10: códigos CID-9 410-414 (doença isquêmica do coração), 427 (arritmia cardíaca), 430-438 (doença cerebrovascular), 798 (morte súbita) e 799 (outras causas não especificadas mal definidas e de mortalidade) e códigos CID-10 I20-I25 (doença cardíaca isquêmica), I47 (taquicardia paroxística), I47 (fibrilação atrial e flutter), I60-I69 (doença cerebrovascular), R96 (outra morte súbita, de causa desconhecida) e R98 (morte autônoma) e R99 (outros maus-definida e as causas não especificadas de mortalidade). Casos de diabetes registradas por meio de um destes procedimentos foram verificadas por informações de registro médico no Hospital Universitário do Norte da Noruega, o único hospital local que serve a população Tromsø. Casos de tipo desconhecido de diabetes não foram incluídos nas análises, e foram utilizados apenas os casos de DM2 verificada. A diferenciação entre o tipo 1 e diabetes mellitus tipo 2 foi baseada na avaliação clínica e em medições de péptido-C e /ou anticorpos ácido glutâmico descarboxilase (anti-GAD). Os endpoints DM2 foram incluídas até o final de 2008 [17].
Definição de endpoints MI
casos hospitalizados de incidente MI foram identificados através da ligação a lista de participantes Estudo Tromsø ao diagnóstico de alta registar no Hospital Universitário do Norte da Noruega. Para identificar todos os possíveis casos MI primeira vez, a nossa estratégia de pesquisa incluiu os seguintes códigos de diagnóstico: a partir de 1980-1998 ICD 9 códigos 410-414 e 798-7998; e, posteriormente, ICD 10 códigos I20-I25, e R96 e R98-99. Quanto à diabetes, que também procurou sistematicamente registros médicos de MI em participantes registrados com códigos CID-9 427, 430-438 e 798-799, e CID-10 códigos I47-48, I60-I69, R96 e R98-99. O registro médico hospitalar foi depois recuperado para validação caso. letras de descarga de internações em outros hospitais também foram coletadas quando apropriado. Além disso, a lista de participantes Estudo Tromsø estava ligada com as causas em todo o país de registro da Morte no Statistics Norway e os atestados de óbito foram recuperados para aqueles com um diagnóstico subjacentes ou contribuindo de DCV ou morte súbita. as informações pertinentes foram recolhidos a partir de fontes adicionais, tais como relatórios de autópsia e registros de lares de idosos, serviços de ambulância e médicos de clínica geral. Este procedimento identificou casos incidentes fatais de MI que ocorreram como mortes fora do hospital, incluindo as mortes que ocorrem fora Tromsø. Casos que preenchem os critérios diagnósticos de definida ou provável fatal ou não fatal primeira vez MI foram classificados como MI. OMS critérios MONICA /Morgam foram utilizados nos algoritmos e incluiu sintomas e sinais clínicos, achados do eletrocardiograma, valores de biomarcadores cardíacos e (quando aplicável) relatórios de autópsia [18]. Infartos silenciosos, conforme definido pelo ECG só que não foram incluídas como casos por causa de dificuldades em determinar a data exata do evento. Os pontos finais MI foram incluídas até o final de 2007.
Definição de endpoints e mortalidade por cancro
As informações sobre a incidência de câncer e localização do câncer foi recuperado do Registro de Câncer da Noruega atualizados até o final de 2008 . informações sobre a morte foi obtida a partir das Causas dos Registry morte, e as informações sobre se deslocam para fora da área de Tromsø e emigração da Noruega foi obtida a partir do Registro Norueguês de Estatísticas vitais atualizados até o final de 2010.
Seleção de coorte de estudo e cálculo de potência
Além de MI, DM2, registros de ponto final para as fraturas do curso, quadril e radiais, e estenose aórtica foram criados como parte do estudo de Tromsø. Quando os assuntos para o presente estudo foram selecionados em dezembro de 2010, 1874 indivíduos foram registrados com MI, 1136 com DM2, 1150 com acidente vascular cerebral, 754 com fractura da anca, 1177 com fratura radial, 569 com estenose aórtica, 2932 com câncer e 3850 estavam mortos . Além disso, 769 indivíduos com uma área total placa de carótida no quartil superior na medição de ultra-som da carótida na segunda visita do quarto inquérito foram incluídas como casos. Como todos estes parâmetros foram de potencial interesse sobre polimorfismos genéticos e financiamento limitado não permite a preparação de DNA e análises genéticas de toda a coorte Estudo Tromsø, decidimos em um design de caso-coorte. Com esta abordagem, o mesmo “grupo de controlo”, selecionadas aleatoriamente a partir de toda a coorte que participou da quarta pesquisa realizada em 1994-1995, poderia ser usado como “grupo de controle” para todos os diferentes pontos finais [19].
no cálculo de energia para decidir sobre o tamanho do grupo de controlo, assumiu-se uma diferença no soro de 25 (OH) D de 20 nmol /L entre aqueles com o genótipo mais favorável e desfavorável [13], que esta diferença resultaria numa diferença em risco relativo de cerca de 1,3 em relação MI [20], e que 20% dos controlos tinham o polimorfismo exposta. Com essas premissas e a = 0,05, incluindo 3655 controles e 1218 casos daria uma potência de 0,9 para detectar uma diferença entre os genótipos para MI. Decidimos, portanto, em uma coorte de 4000 indivíduos controle, mas incluiu temas adicionais no caso de algumas das análises genéticas ou as extrações de DNA foram infrutíferas. O controle dos terminais de registro e qualidade continuou até agosto de 2011 e os números finais de indivíduos com pontos finais eram, portanto, diferente de quando foram selecionados os temas para análises de DNA.
Medidas
No levantamento em 1994 -1995, os participantes preencheram questionários sobre história médica e fatores de estilo de vida. A pressão arterial, altura e peso, o colesterol total no soro e os triglicéridos foram analisados como descrito anteriormente [15].
Os soros a partir da segunda visita foram armazenadas a -70 ° C, e depois de um tempo de armazenamento mediana de 13 anos, descongelados em março 2008 e analisadas para 25 (OH) D usando um analisador de química clínica automatizado (Modular E170, Roche Diagnostics®, Mannheim, Alemanha) [21].
na primeira visita foi recolhido sangue total para a preparação de coágulos de sangue que depois foram armazenados no HUNT /NTNU Biobank em Levanger, Mid-Noruega, onde o DNA também foi preparado por um método de isolamento manual com base nas Clotted Lysate Preparação Protocolo para 8 ou 16 amostras no LS Instrumento Autopure de Gentra (Gentra Systems Inc. MN, EUA), utilizando reagentes de Qiagen (Qiagen NV, Venlo, Holanda).
na quinta pesquisa no estudo Tromsø em 2001-2002 paratormônio sérico (PTH) foi medido de forma conclusiva como anteriormente descrito [22] e incluídos no presente estudo como um marcador estabelecido de efeito biológico da vitamina D [1].
com base em dados disponíveis a partir de dois estudos genômicos de associação [13], [14], e um análise de associação abrangente [23], 17 SNPs localizados em ou perto os seguintes genes com importância para o metabolismo da vitamina D e relatado para ser o mais fortemente associado com o soro 25 (OH) D níveis, foram selecionados para análise no presente estudo:
– a proteína de ligação da vitamina D (DBP) gene (
DBP ou GC
): os seis SNPs topo de acordo com Wang et al. [13] (rs2282679, rs7041, rs1155563, rs3755967, rs17467825, rs2298850) e um SNP promissora adicional relatado por Bu et ai. [23] (rs222020)
– O gene 25-hidroxilase (
CYP2R1
) envolvidos na conversão da vitamina D em 25 (OH) D:. Os três principais SNPs de acordo com Wang et ai. [13] (rs10741657, rs2060793, rs12794714 (rs1993116 provavelmente proxy para rs2060793 e não incluídas)), e um SNP promissora adicional relatado por Bu et al. [23] (rs1562902)
– A sintetase 1 gene reductase 7 dehydrocholesterol /NAD (
NADSYN1
) responsável pela disponibilidade de 7-dehydrocholesterol na pele:. Os dois principais SNPs acordo Wang et al. [13] (rs12785878, rs3794060) e os dois SNPs de topo de acordo com Ahn et al. [14] (rs3829251, rs11234027)
– O gene 24-hidroxilase (
CYP24A1
) envolvidas na degradação de 25 (OH) D:. Rs6013897 [13]. Rs2762939 não está relacionado com o nível de 25 D sérica (OH), mas ainda assim foi incluído por causa de uma relação potencial de calcificação arterial [24], o que poderia ser relevante no presente estudo.
Todos os genotipagem foi realizada por KBioscience (https://www.kbioscience.co.uk) usando Kasp (Polimorfismo KBioScience específica de alelo) sistema de genotipagem de SNP. Kasp é um PCR específico de alelo competitiva incorporando um TERF (transferência de energia de ressonância de fluorescência) quencher cassete. O sistema de comunicação Kasp é constituído pelos seguintes oligonucleótidos constituintes:
– dois iniciadores específicos para o alelo (um para cada alelo de SNP). Cada iniciador contém uma sequência de cauda única não marcado na sua extremidade 5 ‘
-. Um iniciador comum (reverso)
-. 5′ Dois oligonucleótidos marcados com flúor, um marcado com FAM, com um HEX. Estas sequências de oligonucleótidos são concebidos para interagir com as sequências das caudas dos iniciadores específicos dos alelos
-. Dois oligonucleótidos adicionais, com supressores ligado a suas extremidades 3 ‘. Estas sequências de oligonucleótidos são complementares às dos oligonucleótidos marcados com flúor (e portanto também complementares para as caudas dos iniciadores específicos dos alelos). Estes oligonucleótidos temperados, por conseguinte, ligam-se os seus complementos fluor-rotulado e todos os sinais de fluorescência é extinta até ser necessário.
Na fase inicial de PCR, o iniciador específico de alelo adequado se liga à sua região complementar directamente a montante do SNP (com a extremidade 3 ‘do iniciador posicionado no nucleótido SNP). O iniciador inverso comum também se liga e rendimentos de PCR, com o iniciador específico de alelo se tornar incorporado no molde. Durante esta fase, os oligonucleótidos marcados com flúor permanecem ligados aos seus oligonucleótidos complementares ligados quencher, e nenhum sinal fluorescente é gerado.
Como produto de PCR, um dos oligonucleótidos marcados com flúor correspondente à amplificado alelo também é incorporado no modelo e é, portanto, não está mais ligado a seu complemento-bound quencher. À medida que o flúor não é temperada, o sinal fluorescente é gerado adequada e detectado pelos meios habituais. Se o genótipo de um determinado SNP é homozigótica, apenas um ou outro dos possíveis sinais fluorescentes serão gerados. Se o indivíduo é heterozigótico, o resultado será um sinal fluorescente misto.
Em todas as placas de genotipagem não-molde controlos (NTC) são incluídos para demonstrar que qualquer amplificação nos poços de amostra é unicamente devida à presença de o ADN da amostra. Dois cheques de controle manual da qualidade separadas são executadas, e os dados também é verificada pelo software específico para determinar que não existem atribuições de chamadas incorretas, há amostras muito perto ou muito longe da origem, há NTCs amplificados, ou quaisquer chamadas incorretas.
análise estatística
A relação entre genótipos SNP e os pontos finais MI, DM2, cancro e mortalidade foram avaliados em regressão de Cox análises com idade, sexo, índice de massa corporal (IMC), e vitamina /suplementação de óleo de fígado de bacalhau D como co-variáveis. Para MI os fatores de risco a pressão arterial sistólica e colesterol sérico foram incluídos, bem como em uma análise separada para examinar se as relações poderia ser explicada por esses fatores de risco. Para a mortalidade, o tempo de observação foi definido a partir de 1994, para os outros parâmetros de nascimento. O período de observação foi cortado até o final de 2007 para o MI, 2008 para diabetes e câncer, e 2010 para a mortalidade. O grupo de controlo predefinido foi usada como controle para os indivíduos com um terminal específico (casos). Uma vez que este grupo de controlo foi selecionado aleatoriamente a partir de toda a coorte, que também incluiu um número considerável de indivíduos com um ou mais parâmetros. Ao analisar um parâmetro específico, sujeitos no grupo de controlo com essa terminal específico foram transferidos para o grupo caso (que incluiu apenas indivíduos com que endpoint específico). Portanto, o tamanho do grupo de controlo variar dependendo do nó de extremidade em questão. Por causa do tamanho do controle-coorte, nós não fazer o ajuste com a probabilidade parcial nas análises de regressão de Cox [19].
Distribuição das variáveis contínuas níveis séricos de 25 (OH) D, a pressão arterial, lipídios , IMC e HbA
1c foi avaliada para assimetria e curtose e inspeção visual dos histogramas e encontrou normal, exceto para os triglicérides, HbA
1c e PTH, que foram normalizados pela transformação logarítmica antes da sua utilização como variáveis dependentes. Tendências ao longo dos genótipos foram avaliadas com regressão linear com a idade, sexo, IMC, mês do exame (com o uso de variáveis dummy) e ingestão de suplementos de vitamina D ou óleo de fígado de bacalhau como co-variáveis. Os fatores de risco de DCV foram avaliadas dentro de toda a coorte.
O genótipo frequências foram examinados pelo cumprimento de Hardy-Weinberg usando a análise de qui-quadrado [25]. desequilíbrio de ligação (LD) entre SNPs foi avaliado com r
2 e as estatísticas de Lewontin D ‘[26], [27].
Com base nos coeficientes beta de análises de regressão com soro 25 (OH) D, variável dependente, os alelos de risco (aqueles associados a baixos níveis séricos de 25 (OH) D níveis) foram pesados e uma pontuação genótipo construída [13]. Por esta pontuação única SNP significativamente relacionados com a concentração sérica de 25 (OH) D níveis foram incluídos, e apenas SNPs que foram não correlacionadas (r
2 0,40) [28]. Na regressão Cox analisa a coorte foi dividida em pontuação genótipo quartis com o quartil mais baixo (aquele com a 25 (OH) mais alto nível sérico D) como referência. Além disso, os SNPs individuais também foram avaliados na regressão de Cox com a maior genótipo homozigoto usado como referência.
Os dados são apresentados como média ± DP. Todos os testes foram feitos nos dois lados, e um valor de P 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Onde foram analisados os SNPs individuais, correções para múltiplos testes foram realizados com o método de Bonferroni. Assim, na regressão Cox analisa os valores P foram multiplicados por um fator de 32 (4 SNPs e 8 pontos de extremidade) e para a relação entre os fatores de risco de DCV e SNPs com um factor de 4.
Ética
o estudo foi aprovado pelo Comitê Regional de Medicina e Saúde Ética em Pesquisa (REK nord) (referência 2010 /2913-4). Apenas os participantes com o consentimento por escrito válida foram incluídos.
Resultados
Foram selecionados um total de 9528 indivíduos para a participação no estudo e DNA preparado e analisado por pelo menos um SNP em 9471 indivíduos com sucesso. Entre estes, 4175 foram incluídos como grupo de controlo, 2025 indivíduos foram finalmente registrado com os pontos finais MI, 1092 com DM2, 2924 com câncer e 3.828 morreram (Tabela 1). A distribuição por idade, sexo, tabagismo e dados de laboratório retiradas 1994-1995 nestes assuntos são apresentados na Tabela 2. Os genótipos para todos os SNPs foram em Hardy-Weinberg em todas as análises, exceto para os quatro SNPs no
NADSYN1
gene onde o teste do qui-quadrado deu P . 0,05
as análises SNP individuais foram bem sucedidos em 98,8-99,5% dos sujeitos. Os níveis séricos de 25 níveis (OH) D em relação ao genótipo são mostrados na Tabela 3. Em geral, as diferenças médias no soro de 25 (OH) D, entre os maiores e menores genótipos eram homozigotas para SNPs relacionados com o
GC
,
CYP2R1
,
NADSYN1
e
CYP24A1
genes 0,3-7,8 nmol /L, 0,6-2,4 nmol /L, 1,8-2,9 nmol /L, e 2.3- 2,7 nmol /L, respectivamente.
o SNPs com a mesma localização do gene, e que, além disso foram significativamente relacionados com níveis séricos de 25 níveis (OH) D, foram altamente correlacionados. Assim, para o
GC
gene, rs2298850, que foi o SNP com a maior diferença na média no soro de 25 (OH) D entre homozigotos maiores e menores, foi em LD com rs2282679, rs1155563, rs3755967, rs17467825 (r
2 = 0,90, 0,59, 0,92, 0,92, respectivamente), mas não com rs7041 (r
2 = 0,38). Da mesma forma, para o
gene CYP2R1
, rs10741657 estava em LD com rs2060793 e rs12794714 (r
2 = 1,00 e 0,49, respectivamente), e para o
NADSYN1
rs3794060 do gene estava em LD com rs12785878 (r
2 = 1,00). No entanto, nenhum dos SNPs rs2298850, rs7041, rs10741657, rs3794060 e rs6013897 foi em LD com o outro, e estes cinco SNPs foram utilizados para a construção da pontuação genótipo. A média no soro 25 (OH) D níveis nos quatro quartis desta pontuação genótipo foram 62,5 ± 20,7, 59,1 ± 19,8, 57,3 ± 19,5 e 54,7 ± 19,5 nmol /L, respectivamente.
Nas Tabelas 4 e 5 os resultados referentes aos pontos finais em relação a essas pontuação genótipo quartis, juntamente com os quatro SNPs seleccionados por causa da diferença significativa e mais elevada no soro 25 (OH) D entre homozigotos maiores e menores dentro de cada gene, são apresentados.
a pontuação genótipo não foi relacionado ao soro PTH, mas rs6013897 localizado no
CYP24A1
gene mostrou uma relação significativa com menor nível de PTH séricos médios para o polimorfismo com a maior média de soro 25 (OH) D (Tabela 6 ).
principais endpoints
nem a pontuação genótipo nem qualquer um dos quatro SNPs seleccionados foram significativamente associados com MI, DM2, câncer e mortalidade após correção para testes múltiplos (Tabela 4) . Para IM inclusão de factores de risco da pressão arterial sistólica e colesterol no soro não afectou estes resultados (dados não mostrados). Quando o câncer foi subdividido de acordo com a localização (mama, pulmão, colorretal e próstata), rs6013897 no
CYP24A1
gene mostrou uma relação significativa com cancro da mama (P 0,05), onde o homozigoto menor, que era o único com o nível D menor níveis séricos de 25 (OH), tiveram um risco 86% maior de desenvolver câncer de mama do que os principais e referência homozigoto (Figura 1). Este foi o único dos quatro SNPs seleccionados, bem como a pontuação do genótipo, que mostrou uma relação significativa com um câncer específico.
fatores de risco para DCV
Não houve significativa relação entre os fatores de risco de DCV e a pontuação genótipo ou os quatro SNPs seleccionados (Tabela 6). Não houve diferença nos hábitos de fumo em relação a qualquer dos genótipos SNP (dados não mostrados).
Discussão
Para nosso conhecimento, este é o primeiro estudo de base populacional grande, onde SNPs associado com o soro 25 (OH) D níveis têm sido relatados em relação às principais doenças CVD, DM2, cancro, mortalidade e fatores de risco para a doença. Como esperado, encontramos uma relação significativa entre os SNPs e níveis séricos de 25 (OH) D níveis [13], [14] selecionados, enquanto que as relações com os pontos de extremidade rígidos e fatores de risco cardiovascular não foram consistentes.
O SNPs analisados por nós estão todos envolvidos em passos importantes no metabolismo da vitamina D como disponibilidade de substrato para a produção de vitamina D na pele (
NADSYN1
gene), hidroxilação de 25 (OH) D (
CYP2R1
gene), o transporte de 25 (OH) D na circulação (
PAD
ou
gene GC
) e degradação de metabólitos inativos (
CYP24A1
gene) [13]. Os SNPs não são influenciados pelo estilo de vida e os seus efeitos são de longa vida. Assim, eles podem ser potencialmente melhores marcadores de status da vitamina D de um sujeito do que um 25 (OH) D única medição soro. Embora nenhum substituto para ensaios clínicos randomizados, a identificação desses SNPs tornou possível para testar indirectamente a relação entre os níveis séricos e doenças D 25 (OH). Em particular, pode-se esperar para ver uma relação com as doenças que se desenvolvem durante um longo período de tempo, como CVD, DM2, o cancro e, finalmente, também a morte.
Em relação à mortalidade, em que um soro baixo 25 (OH) D é um preditor [7], [9], todas as taxas de risco foram perto de 1,00, sem tendência para a baixa pontuação genótipo, nem os genótipos individuais associados a elevados níveis séricos de 25 níveis (OH) D, para ter um efeito protetor. Da mesma forma, baixos níveis séricos de 25 (OH) D é um preditor de MI [29], mas nenhum dos genótipos para os SNPs analisados apareceu relacionado ao risco de MI. Este não foi alterada pela inclusão dos factores de risco de pressão arterial sistólica e colesterol no soro em análises de regressão de Cox. Apesar de não ser estatisticamente significativa, foi também de salientar que para rs2298850 (que era o SNP com a maior diferença entre o maior e menor homozigotos sobre níveis séricos de 25 (OH) D)), houve 17% de redução do risco de MI para o genótipo com o menor soro 25 (OH) D. Uma associação entre SNPs no
gene CYP24A1 Comprar e MI poderia ter sido esperado como Sehn et al. [24] relataram um tal SNP (rs2762939) estar relacionada com a calcificação da artéria coronária, que novamente prevê DCV [30]. No entanto, nenhum dos
SNPs CYP24A1
genes, (incluindo rs2762939) apareceu relacionado com MI em nossa coorte.
A relação entre a vitamina D e câncer é plausível como VDR, que é um receptor nuclear , é encontrada em células num certo número de tecidos e a forma activa da vitamina D, 1,25-di-hidroxivitamina D (1,25 (OH)
2D), parece ter efeitos anti-proliferativos [31]. Dados epidemiológicos indicam um papel prognóstico negativo para baixos níveis séricos de 25 (OH) D níveis em relação ao cancro [32], mas até agora uma relação de causa e efeito não foi estabelecida [33]. Em linha com esta, para os quartis pontuação genótipo ea maioria dos SNPs analisados por nós as taxas de risco para o câncer foram perto de 1,00 exceto para rs6013897. Para este SNP o genótipo associado com o menor níveis séricos de 25 (OH) D tinha um 20% maior risco de câncer, mas esta não foi significativa após ajuste para comparações múltiplas.
Como a nossa coorte incluiu todos quantos 2924 casos de cancro, também investigamos da mama, colo-rectal, do pulmão e cancro da próstata separadamente. Para o câncer de pulmão [34], bem como para o câncer de próstata [35] há indicações de fraco nível para uma relação com a vitamina D, e nem para a pontuação genótipo quartis nem os SNPs analisados por nós estavam lá quaisquer associações significativas. Para o câncer de mama, a situação é semelhante com nenhum consenso sobre se níveis séricos de 25 (OH) D é preditiva de futuras doenças ou não [36]. No entanto, para os rs6013897 SNP, indivíduos com o genótipo menor homozigoto (que era o único com a 25 (OH) D menor soro), tinha quase o dobro do risco de câncer de mama em desenvolvimento, em comparação com indivíduos com a maior genótipo homozigoto.
o rs6013897 está relacionado com o
gene
CYP24A1 que é considerado como um oncogene. Este gene (a enzima 24-hidroxilase) converte 25 (OH) D, bem como 1,25 (OH)
2D para as suas formas inactivas, também está presente em tecidos periféricos. Produzidos localmente 1,25 (OH)
2D é suposto para ter um efeito anti-câncer, e um aumento da expressão local do
CYP24A1
gene (e, assim, aumento da degradação de 1,25 (OH)
2D) tem sido associado com a sobrevivência pobre [37]. É razoável, portanto, que também polimorfismos nesse gene pode afetar o risco de câncer. No entanto, Anderson et al. [38] que examinou 1560 pacientes com cancro da mama e 1633 controles não encontraram nenhuma relação entre SNPs em
CYP24A1
gene e câncer de mama, enquanto eles relataram uma associação entre câncer de mama e rs7041 que não foi observado em nosso estudo (dados não mostrado). E para aumentar a confusão, em um estudo da China, incluindo 2919 casos e 2323 controles, nem rs7041 nem rs2762932 (proxy para rs6013897) foram considerados significativamente relacionada ao câncer de mama [39].
Para o cancro colorectal não aparece ser uma relação inversa com a ingestão de vitamina D, bem como com 25 (OH) D níveis séricos [40]. No entanto, RCT evidência é limitada, e nenhum dos SNPs examinados por nós, ou a pontuação genótipo, mostrou uma associação significativa com cancro colo-rectal. Semelhante aos outros parâmetros, não houve tendência consistente para um efeito protetor de genótipos associados a elevados níveis séricos de 25 níveis (OH) D.
As associações transversais entre níveis séricos de 25 níveis (OH) D e fatores de risco