Abstract

O câncer matando eficácia de agentes quimioterápicos padrão, tais como cisplatina (CDDP) é limitada pela sua efeitos colaterais para tecidos normais. Portanto, os esforços de pesquisa otimização da segurança e eficácia desses agentes são clinicamente relevantes. Fizemos tela por agentes que especificamente protegem as células mesoteliais humanas normais contra a CDDP sem reduzir a eficácia de células cancerosas matando. Lovastatina foi identificado a partir da tela. A lovastatina, a uma concentração farmacologicamente relevantes preso fortemente a proliferação de células normais, enquanto que as células cancerosas foram menos afectadas. Induzidas pela CDDP resposta a danos no ADN não foi activado e células normais apresentaram tolerância a CDDP quando as células normais foram tratados com a associação de lovastatina e de CDDP. Nós demonstramos que interferindo com geranilgeranilação proteína está envolvida no efeito protector CDDP mediada por lovastatina em células normais. Em contraste com as células normais, em células cancerosas lovastatina não alterou a resposta induzidas pela CDDP, e as células cancerosas não foram protegidos por lovastatina. Além disso, a lovastatina na concentração farmacológica relevante

per si danos no ADN induzida

, o stress oxidativo e autofagia em células cancerosas mas não em células mesoteliais normais. Portanto, nossos dados sugerem que a lovastatina tem um potencial para melhorar o índice terapêutico da terapia baseada em cisplatina

Citation:. Shi Y, Felley-Bosco E, Marti TM, Stahel RA (2012) Efeitos diferenciais de Lovastatina sobre Respostas cisplatina em células normais mesoteliais humano contra células de câncer: implicações para a terapia. PLoS ONE 7 (9): e45354. doi: 10.1371 /journal.pone.0045354

editor: Abdelilah Aboussekhra, King Faisal Specialist Hospital Research Center, Arábia Saudita

Recebido: 14 de maio de 2012; Aceito: 20 de agosto de 2012; Publicação: 17 de setembro de 2012

Direitos de autor: © Shi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelo Stiftung für Angewande Krebs Forschung (3.41718.14), Winkelwiese 6, 8001 Zurique. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

a cisplatina (CDDP) é um agente quimioterapêutico padrão no tratamento de vários tumores sólidos. No entanto, os efeitos colaterais nos tecidos normais, resultar em tolerância limitada em pacientes [1]. Assim, estratégias terapêuticas da neutralização dos efeitos colaterais tóxicos da CDDP seria bem-vinda e pode melhorar o efeito terapêutico.

Perda ou pontos de verificação do ciclo celular enfraquecidos estão entre as alterações mais universais em células cancerosas, resultando em sensibilidade reduzida para proliferation- sinalização inibidora que normalmente iniciar uma variedade de respostas, incluindo paragem proliferação, a activação de mecanismos de auto-protecção contra tensões, a diferenciação ou morte celular [2]. Sob certas condições limitantes de proliferação, as células normais prender a sua replicação e, assim, podem ser protegidos contra a toxicidade de agentes dependentes de proliferação, v.g. os agentes que danificam o DNA. No entanto, as células de cancro, devido à sua reduzida sensibilidade à sinalização da proliferação de inibição, pode não prender correctamente o seu ciclo celular e são, por conseguinte, selectivamente mortas sob estas condições de [3] – [6].

O nosso objectivo foi encontrar agentes que poderiam proteger as células normais contra citotoxicidade cisplatina e ao mesmo tempo permitir a morte das células cancerosas. Por isso, montamos uma tela de duas etapas: em primeiro lugar, nós analisamos uma série de compostos para efeitos diferenciais sobre a proliferação de mesothelial normais

contra

células de mesotelioma; segundo, ações combinadas de CDDP com esses agentes diferenciadores foram testados em células normais para identificar agentes que fazem as células normais tolerantes a CDDP citotoxicidade, permitindo que as células cancerosas matando.

Lovastatina foi identificado a partir de nossa tela. Como um medicamento para baixar o colesterol, lovastatina actua inibindo a HMG-CoA redutase, a enzima limitante da velocidade da via de biossíntese do colesterol [7]. O bloqueio da via de síntese de colesterol também resulta na depleção de porções de isoprenóides interferindo assim com isoprenilação de proteína, que é um passo regulador crucial em muitos processos biológicos [7]. Portanto, para além da função de redução do colesterol, a lovastatina também desempenha papéis biológicos pleiotrópicos no controlo da proliferação celular, apoptose, sobrevivência, diferenciação, migração e tráfico de vesículas celular [7] – [9]. Os nossos dados mostram que a lovastatina tem um potencial para aumentar o índice terapêutico de CDDP.

O protocolo experimental para a investigação de agentes que protegem as células normais contra a CDDP citotoxicidade é mostrado em (A). perfis do ciclo celular de SDM104 normais (B) e (C), e ZL55 células cancerosas (D) e (E) de controle sem tratamento (B) e (D), ou 24 horas de tratamento com 2 uM de lovastatina (C) e ( E) são mostradas (N = 3). As células foram expostas a 10? M BrdU durante uma hora antes da colheita para análise FACS.

Materiais e Métodos

culturas de células e

células humanas normais Reagentes

mesoteliais primárias e células cancerígenas foram cultivadas em M199 (Invitrogen) /MCDB105 (Sigma) (01:01) meio misturado suplementado com 15% FCS, 10 ng /ml de EGF, e 0,4 ug /ml de hidrocortisona, como descrito [10]. A linha celular humana mesotelioma ZL55 [11] e a cultura primária de células normais SDM104 [12] foram gerados no nosso laboratório. A linha celular de cancro da mama MCF-7 [13] e de adenocarcinoma do pulmão humano A549 linha celular [14] foram adquiridas da American Type Culture Corporation (Manassas, VA). A cultura de células normais primária LP9 [15] era de laboratório do Dr. James Rheinwald. A cultura de células normais primária SDM85 foi estabelecida a partir de um tecido pleural normal, recebeu de um paciente com câncer submetidos à cirurgia torácica não relacionada. O estudo foi aprovado pelo comitê de ética do Hospital Universitário de Zurique e um consentimento informado por escrito foi obtida a partir do paciente. Todas as linhas celulares utilizadas neste estudo foram autenticado por fingerprinting (Microsynth, Balgach, Suíça). Lovastatina (Alexis Biochemicals) foi convertida na forma de ácido activa, tal como descrito [16], e usado numa concentração de 2 uM em maior parte das experiências. A cisplatina (0,5 mg /ml de solução salina) foi adquirido a partir de Ebewe Pharma; mevalonato, GGPP e FTI-277 da Sigma; GGTI-298 a partir de Calbiochem. Anti-ATM-Ser1981 (Epitomics), anti-ATM (2C1) (Gene Tex), anti-γ-H2AX (Ser139) (Millipore), anti-LC3B (Abcam), anti-fosfo-p53 (Ser15) (Cell Signaling tecnologia), anti-p53, anti-β-actina, anti-heme oxigenase 1 (HO 1), anti-p21, anti-H-ras, agentes anti-Rap1a e anti-vinculina (Santa Cruz) foi utilizado de acordo com o produto instruções. Para a detecção de western blot da ATM, extractos de proteínas foram executados em gel de 5% SDS-poliacrilamida enquanto que para foi utilizado o gel de 13,5% SDS-poliacrilamida descanso.

Os resultados dos ensaios de MTT com células normais, principalmente em cultura ( SDM104, SDM85 e LP9) e células cancerosas (ZL55, A549 e MCF-7), após o tratamento com CDDP isolada, a lovastatina (2 ^ M) sozinho, ou os dois juntos são mostrados em (a) (n = 6; * para P 3,0 × 10

-5). Em (B), ensaios MTT foram realizados após as células SDM104 foram tratadas com diferentes concentrações de lovastatina isoladamente, ou lovastatina em conjunto com 20 uM de CDDP (n = 6; * para P 0,002; ** para P 3,0 x 10

-5); L0.5, L1, L2 e L4 representam 0,5 uM, 1 uM, 2 uM e 4μM lovastatina, respectivamente; e C para CDDP. Em (C), ensaios MTT foram realizados após as células SDM104 foram tratados com 2 uM de lovastatina isoladamente, a CDDP de sozinho concentrações diferentes, ou os dois juntos (n = 6; * para P 0,02; ** para P 1,0 × 10

-5); C5, C10 e C20 repousar durante 5 mM, 10 mM e 20 mM CDDP, respectivamente.

Um esquema para a via biossintética do colesterol é mostrada em (A). Em (B) e (C), 20 | iM de CDDP foram adicionados depois de 8 horas de pré-incubação com 2 uM de lovastatina na presença ou ausência de 200 uM do mevalonato (B) ou 100 uM Q10 (C), em seguida, as células foram cultivadas durante mais 16 horas na presença de CDDP e dos outros agentes em conjunto (n = 6; * para P 7,0 × 10

-7). ensaios MTT foram realizados após os tratamentos terminou e as células foram cultivadas novamente em meio fresco durante 24 horas. Em (B) e (C), “L” representa a lovastatina, “H” para mevalonato.

proliferação celular e Ciclo Celular Análise

ensaio de proliferação celular do MTT foi realizado como descrito [17]. Para o composto do ecrã, a análise da distribuição do ciclo celular foi realizada como se segue: células foram recolhidas após tratamento de 24 horas com diferentes agentes, lavadas com PBS e fixadas em etanol a 70% durante a noite a 4 ° C. Depois de iodeto de propídio (PI) (Sigma), a coloração, a citometria de fluxo (FACS) foi executada com o FACSCalibur (FACScan, BD Biosciences) e os dados foram analisados ​​com o software ModFit LT 3.2.1. Para a análise FACS detalhada das células tratadas com lovastatina, as células foram expostas a 10 uM de BrdU durante uma hora antes da colheita. As células foram colhidas após 24 horas de lovastatina-tratamento e fixadas em etanol a 70%. Depois de BrdU anti-anticorpo (BD Biosciences) /secundário Alexa488 de cabra conjugado com anti-ratinho (Invitrogen) e coloração de PI, a análise de FACS foi realizada com FACSCalibur e os dados foram analisados ​​com o software de Cúpula v4.3. A significância estatística foi realizada com bicaudal t-Test.

Os resultados de Western blot com o anticorpo anti-H-Ras (A) e anticorpo anti-Rap1a (C) são mostrados. Os extractos de proteína foram feitas logo após SDM104 células normais foram tratadas com diferentes compostos durante 16 horas. p-actina utilizada como controlo de carga para Ocidental. Em (B), 20 uM de CDDP foram adicionados depois de 8 horas de pré-incubação com 10 ^ M GGTI-298 (GGTI) ou 10 pM FTI-277 (FTI), e, em seguida, as células foram cultivadas durante mais 16 horas na presença de CDDP e os inibidores juntos (n = 6; * para P 3,0 × 10

-4; ** para o P 2,0 × 10

-6). Em (D), 20 uM de CDDP foram adicionados depois de 8 horas de pré-incubação com 2 uM de lovastatina na presença ou na ausência de 10 uM GGPP, e, em seguida, as células foram cultivadas durante mais 16 horas na presença de CDDP e os compostos em conjunto (n = 6; ** para o P 2,0 × 10

-6). Em (B) e (D), ensaios MTT foram realizados após os tratamentos terminou e as células foram cultivadas novamente em meio fresco durante 24 horas. “L” representa a lovastatina.

análise de Western blot de componentes em resposta ADN-danos em células SDM104 normais (A) e células de cancro (B) após tratamento com CDDP na presença ou ausência de lovastatina são mostrados. Vinculina e β-actina foram usados ​​como controlo de carga. Para o tratamento de CDDP, as células foram cultivadas na presença de 8 pM a CDDP, durante 16 horas; por lovastatina, as células foram cultivadas na presença de 2 uM de lovastatina durante 24 horas; para a combinação de CDDP e lovastatina, 8 uM CDDP foram adicionados 8 horas depois de 2 uM de lovastatina pré-incubação, em seguida, as células foram cultivadas durante mais 16 horas na presença de CDDP e lovastatina em conjunto.

resultados

Lovastatin diferentemente afectados a proliferação celular do normal

contra

células cancerosas e células normais especificamente protegidos da CDDP citotoxicidade

in vitro

a tela de agentes que poderiam proteger as células normais contra a citotoxicidade induzida por cisplatina foi realizada em dois passos. Na primeira etapa, estudamos a literatura e agentes candidatos selecionados a partir do qual encontramos indícios de que eles podem afetar diferencialmente proliferação de

contra

células normais cancerosas. perfis do ciclo celular de células de mesotélio humano SDM104 normais e células mesotelioma ZL55 humanos foram analisados ​​24 horas após a exposição a agentes comercialmente disponíveis que se sabe interferirem com a proliferação celular. Alguns dos agentes que mostram diferentes efeitos sobre a distribuição do ciclo celular normal, em

relação

células cancerosas estão listados (Tabela 1). No segundo passo, nós testamos qual dos agentes seleccionados protegido células normais a partir de CDDP (Figura 1A). A lovastatina, um medicamento para baixar o colesterol aprovado pela FDA, foi identificado no segundo passo.

análise de Western blot de autofagia marcador LC3B-II e marcador de estresse oxidativo HO-1 em células normais (SDM104) (A) e cancro (ZL55) células (B) após tratamento com CDDP na presença ou ausência de lovastatina são mostrados. p-actina foram usados ​​como controlo de carga. Para o tratamento de CDDP, as células foram cultivadas na presença de 8 pM a CDDP, durante 16 horas; por lovastatina, as células foram cultivadas na presença de 2¼m lovastatina durante 24 horas; para a combinação de CDDP e lovastatina, 8 uM CDDP foram adicionados 8 horas depois de 2 uM de lovastatina pré-incubação, em seguida, as células foram cultivadas durante mais 16 horas na presença de CDDP e lovastatina em conjunto.

Lovastatina na concentração relevante farmacológica [18] de 2 uM em células normais reduzido em mais de 98% das células em fase S e cerca de 14% de G2 /células M enquanto que houve cerca de 47,8% de aumento de células G0 /G1 (Figura 1C ), como comparado com o controlo não tratado (Figura 1B). Em contraste, em células cancerosas ainda havia cerca de 20% das células em fase S restantes e ambas as células G0 /G1 e de células G2 /M foram aumentados de 58% e 77,7%, respectivamente (Figura 1E) após lovastatina-tratamento, em comparação com controlo não tratado (Figura 1D). Assim, lovastatina mostraram diferentes efeitos sobre a proliferação de células normais

contra células cancerosas. Consistente com as alterações observadas no ciclo celular, o tratamento apenas com lovastatina, suprimiu significativamente a proliferação do normal (P 1,0 × 10

-6), e ZL55 cancro (p 0,001); células e MCF-7 (0,001 P & lt) , em comparação com controlos não tratados (figura 2A).

o número de células SDM104 normais após o tratamento combinado de CDDP e lovastatina foi 3,8 vezes mais elevada em comparação com o número de células observadas após o tratamento com CDDP sozinha. Este efeito protector contra a toxicidade da CDDP também foi observada em duas culturas primárias normais adicionais SDM85 e LP9 (Figura 2A). O efeito protector mediado por lovastatina pareceu específico para células normais, uma vez que nenhuma das linhas celulares tumorais testadas, mesotelioma humano ZL55, cancro da mama humano MCF-7 e A549 adenocarcinoma do pulmão humano, foi protegida (Figura 2A).

Uma resposta à dose de lovastatina para o efeito de protecção contra a CDDP de citotoxicidade foi realizado com células SDM104. dependentemente da dose de lovastatina reduziu o crescimento celular, no entanto, foi já observado o efeito protector máximo a 2 uM (Figura 2B). Assim, 2 concentração lovastatina? M foi utilizado na maioria das nossas experiências. Como a proteção mediada por lovastatina de células normais foi associado à célula parada do ciclo, os efeitos CDDP de proteção só era visível na concentração de CDDP alta (10-20 M) onde a redução no número de células devido à citotoxicidade foi maior do que a redução do número de células induzido por lovastatina devido a prisão de proliferação (Figura 2C).

bloqueio do colesterol biossintética Pathway mas não Ubiquinone Síntese é necessária para a Protecção mediada por Lovastatin de células normais de cisplatina Toxicidade

Como lipídico agente redutor, lovastatina actua para inibir a HMG-CoA redutase, a enzima limitante da velocidade da via biossintética do colesterol [7] (Figura 3A). Examinámos se o bloqueio da via biossintética do colesterol é necessário para a protecção mediada por lovastatina de células normais contra a CDDP, testando os efeitos de mevalonato, que é o produto imediato da reacção catalisada-redutase de HMG-CoA-redutase na via biossintética do colesterol [7] ( Figura 3A). A adição de mevalonato inverteu completamente os efeitos inibitórios da lovastatina na proliferação celular. Lovastatina não protegeu as células contra a CDDP normais na presença de mevalonato (Figura 3B), indicando que a lovastatina protege as células normais, bloqueando a via biossintética do colesterol. A adição de ubiquinona (coenzima Q10) em células normais não se alterou quer o efeito inibitório da lovastatina na proliferação de células, ou a protecção de CDDP (Figura 3C), indicando a interferência com a síntese ubiquinona não está envolvido na protecção observada de células normais.

Protecção das células normais de cisplatina Toxicidade é mediada através da interferência Induzido por Lovastatina da proteína geranilgeranilação

Lovastatin interfere com isoprenilação de proteínas (incluindo farnesilação e geranilgeranilação) através de esgotar a doadores isoprenóides farnesil pirofosfato (FPP) e pirofosfato de geranilgeranilo (GGPP) [7] (Figura 3A, e 4A e 4C). inibidor de farnesil-transferase (FTI-277) inibe especificamente a farnesilação das proteínas G pequenas, por exemplo, da farnesilação de Ras-H (Figura 4A), mas não geranilgeranilação de proteínas, por exemplo, a geranilgeranilação de Rap1a em células SDM104 normais (Figura 4C). FTI-277 mostrou um efeito inibidor muito mais fraco proliferação em células normais (Figura 4B) do que a lovastatina (Figura 3B), e o seu efeito protector CDDP para células normais (Figura 4B) também foi mais fraca do que a lovastatina (Figura 3B). No entanto, a inibição específica da geranilgeranilação por um geranilgeranil-transferases-I de inibidor (GGTI-298) (Figura 4C), que não afectou a farnesilação (Figura 4A), inibiu fortemente a proliferação de células normais e protegeu-os contra a toxicidade da cisplatina (Figura 4B) semelhante a lovastatina (Figura 3B). Consistente com estas observações, os efeitos de proliferação de inibição de células e o efeito protector de CDDP de lovastatina para células normais foram dramaticamente suprimida pela adição de GGPP (Figura 4D), o qual reverteu a inibição mediada por lovastatina de geranilgeranilação (Figura 4C), mas não farnesilação (Figura 4A). Assim, os nossos dados demonstram que a protecção mediada por lovastatina de células normais a partir de toxicidade da CDDP é devido principalmente ao GGPP inibição induzida por depleção de geranilgeranilação.

Lovastatina impede a ativação de respostas danos no ADN induzidas pela CDDP em células normais, mas induz respostas danificar o DNA em células cancerosas

Para explorar ainda mais o mecanismo de efeitos diferenciais mediada por lovastatina no Normal

contra

células cancerosas, as respostas dos normais

contra

células cancerosas foram examinada em mais detalhes. Como esperado, a CDDP activadas as respostas danos de ADN [19] – [22], em células normais: a fosforilação da ATM, a consequente acumulação de danos do ADN marcador fosfo H2AX histona na serina 139 (γ-H2AX), da fosforilação e da acumulação de p53, e a acumulação do ciclo celular inibidor de p21 (Figura 5A). No entanto, excepto para o sobre-regulação de p21, resposta a danos no ADN não foi detectado quando as células foram tratadas com lovastatina 8 horas antes e durante o tratamento com CDDP (Figura 5A), indicando que a lovastatina, prendendo o crescimento celular, suprimiu a resposta a danos no ADN e protegido contra células normais a partir de citotoxicidade induzida CDDP. Lovastatina induzida por sobre-regulação de p21 foi provavelmente através de uma via independente de p53 uma vez que não se observou nenhuma activação de p53 detectável em células normais tratados com lovastatina isoladamente (Figura 5A).

em células de cancro, em contraste com o normal as células, a resposta a danos no ADN induzidas pela CDDP, incluindo a activação da ATM, a acumulação de γ-H2AX e p53 não foram alteradas no tratamento combinado com lovastatina (Figura 5B). Importante, enquanto lovastatina isoladamente não induzir outra resposta excepto supra-regulação de p21 em células normais (Figura 5A), que resultou no aumento dos níveis de P-ATM, p53 e γ-H2AX em células de cancro (Figura 5B), indicando que a lovastatina no relevante farmacológica concentração de 2 mM

per se

induz danos no DNA em células cancerosas.

Lovastatin induz Autophagy e estresse oxidativo em Câncer, mas não as células normais

de acordo com outros estudos que relatam lovastatin- autofagia induzida [23] – [25], observou-se que a lovastatina desencadeou a sobre-regulação do marcador de autofagia LC3B-II [26] em células de cancro (Figura 6B). No entanto, LC3B-II não foi regulada em células normais tratados com lovastatina (Figura 6A). Lovastatina também induziu o stress oxidativo indicado pela expressão de heme oxigenase-1 (HO-1) [27] em células de cancro (Figura 6B), que não foi detectada em células normais, quer SDM104 (Figura 6A). Portanto, lovastatina induz a autofagia e estresse oxidativo em câncer mas não as células normais.

Discussão

Os efeitos colaterais da quimioterapia prejudicar a qualidade e vida dos pacientes afetam a eficácia terapêutica [28]. Identificamos lovastatina a partir de uma tela para os agentes que reduziu a toxicidade induzida pela cisplatina em células normais, enquanto que as células cancerosas, permitindo a ser morto. Lovastatina não só o efeito protector mediado CDDP para células normais, mas também induzida por danos no ADN, o stress oxidativo e autofagia especificamente em células cancerosas.

A protecção de células normais contra a CDDP é, de acordo com as observações anteriores de que a lovastatina protegidas células endoteliais humanas (HUVEC) dos efeitos tóxicos da quimioterapia doxorrubicina e etoposídeo e a matança de radiação ionizante

in vitro

[29], [30]. Lovastatin também reduziu ionizante radiação induzida por danos no tecido normal e protegidos contra a toxicidade cardíaca induzida por antraciclina

in vivo

[31], [32].

Nós mostramos que lovastatina mediada efeito protetor CDDP em condições normais as células a uma concentração de 2 | iM, o que está na gama de concentração farmacologicamente atingível soro de lovastatina (2,3 ± 1,27 ^ M) [18], o que significa que a viabilidade imediata da aplicação clínica de tratamento de lovastatina de doentes com cancro que receberam esta droga. concentração semelhante que tinha sido utilizado para a protecção de células de OHC de rato de doxorrubicina, e a inibição da geranilgeranilação foi sugerida para ser envolvido no efeito protector [33]. Mostramos aqui que um mecanismo semelhante também funciona na protecção mediada por lovastatina de células humanas normais a partir de CDDP. Nós também confirmado que o efeito protector da lovastatina é principalmente devida a um mecanismo dependente de geranilgeranilação desde GGTI mas não FTI mostrou um efeito semelhante ao da lovastatina na protecção de células humanas normais de toxicidade da CDDP.

Geranylgeranylated proteínas estão envolvidas na o controlo da proliferação de células [9]. A redução desta modificação pós-translacional podem ser responsáveis ​​para a prisão proliferação celular observada em células normais depois do tratamento com lovastatina. Sabe-se que o processamento de CDDP-DNA em células em replicação aductos conduz a danos no ADN [19], [34]. Portanto, as células capazes de replicação de repouso ou -inhibited se tornam resistentes à CDDP. Isso também pode explicar por que a lovastatina não protege as células cancerosas, onde os efeitos de proliferação de inibição de lovastatina pode ser antagonizada por mutações oncogênicas [35].

Estudos recentes têm renovado o interesse terapêutico para os inibidores da via biossintética do colesterol em cancros da mama com mutações de p53, uma vez que se tornam altamente dependente desta via [36]. Em duas das linhas celulares tumorais testadas (ZL55 e MCF-7) observou-se uma diminuição significativa da proliferação de células após o tratamento com lovastatina, indicando que tumores mesmo p53-proficientes podem ser sensíveis em certa medida para efeitos inibidores de crescimento de terapia de lovastatina. Em contraste com as células normais, em que o efeito sobre a proliferação resultaram da inibição da replicação do ADN, a diminuição mediada por lovastatina de proliferação celular em células cancerosas pode ser atribuída a ADN dependente de danos L

0 /L

1 detenção . Devido à pequena diminuição em células em fase S, as células cancerosas não foram protegidos por lovastatina a partir do efeito citotóxico da CDDP.

Sabe-se que a lovastatina suprime a proliferação, e o stress oxidativo induzido, autofagia e apoptose em células cancerosas

in vitro

[24], [37] – [45]. Em linha com estas observações, lovastatina inibiu o crescimento do tumor [25] e potenciou a actividade antitumoral da doxorrubicina e CDDP

in vivo

[46], [47] e de longo prazo uso de estatina está associado com menor risco de muitos tipos de câncer [48], [49]. Aqui, nós ainda demonstrar que estes efeitos prejudiciais induzida por lovastatina acontecer especificamente no cancro mas não as células normais.

Por conseguinte, os nossos dados demonstram que a lovastatina tem um potencial para a protecção de células normais a partir de toxicidade da CDDP sem diminuir a sensibilidade do cancro células à base de terapia CDDP melhorando assim o índice terapêutico.

Reconhecimentos

Nossos agradecimentos especiais a todos os membros no Laboratório de Oncologia Molecular USZ para o seu tipo ajuda e estimular discussões. Estamos gratos ao Dr. James Rheinwald (Harvard Medical School) para gentilmente nos fornecer células LP9.