Abstract

O fator inibidor da migração de macrófagos (MIF) tem sido cada vez mais implicado no desenvolvimento e progressão do cancro, promovendo a inflamação, angiogénese, a sobrevivência de células de tumor e imunossupressão. MIF é sobre-expresso numa variedade de tipos de tumores sólidos em parte devido à sua capacidade de resposta ao factor de hipóxia indutível (HIF) activação da transcrição dirigida. secreção de MIF, no entanto, é um processo pouco compreendido, devido ao fato de que as CIM é um polipéptido sem líder que se segue de uma via secretora não clássica. Melhor compreensão do processamento de MIF e liberação poderia ter implicações terapêuticas. Aqui, nós descobrimos que a radiação (IV) e outros stresses que danificam o ADN ionizante pode induzir a secreção de MIF robusta em várias linhas celulares de cancro. secreção de MIF por IV parece independente de ABCA1, uma bomba de efluxo de colesterol que tenha sido previamente implicado na secreção de MIF. No entanto, a secreção de MIF é robustamente induzida pelo estresse oxidativo. Importante, a secreção de MIF pode ser observada tanto em modelos de cultura celular, bem como em tumores em ratos in vivo. esgotamento rápido de MIF a partir de células tumorais observados imuno-histoquimicamente é coincidente com o MIF em circulação elevada detectados no soro de sangue de ratos irradiados. Dado o tumor robusta promoção de atividades de MIF, nossos resultados sugerem que uma resposta imune inata ao estresse genotóxico podem mitigar os efeitos benéficos da terapia de câncer, e que a inibição MIF pode melhorar as respostas terapêuticas

Citation:. Gupta Y, Pasupuleti V, W Du, Welford SM (2016) macrófagos migração inibitória factor de secreção é induzida por radiação ionizante e estresse oxidativo em células cancerosas. PLoS ONE 11 (1): e0146482. doi: 10.1371 /journal.pone.0146482

editor: Ester Hammond, da Universidade de Oxford, Reino Unido

Recebido: 14 de maio de 2015; Aceito: 17 de dezembro de 2015; Publicação: 07 de janeiro de 2016

Direitos de autor: © 2016 Gupta et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Dados Disponibilidade: Todos os dados necessários para replicar as descobertas deste estudo estão incluídos no papel

Financiamento:. este trabalho foi financiado por doações do NCI (CA178157), a American Cancer Society (RSG-12-097-01-CCG), e o AACR (14-60-36WELF). instalações centrais do Processo Comprehensive Cancer Center foram apoiados por P30CA043703. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

fator inibidor da migração de macrófagos (MIF) é uma citocina pró-inflamatória pleiotropic com e efeitos prosurvival envolveu uma variedade de estados de doenças humanas, incluindo câncer [1]. MIF é sobre-expresso em muitos tipos de tumores, incluindo o câncer de pâncreas, carcinoma de células escamosas oral, melanoma, glioblastoma, e carcinoma de células renais de células claras (ccRCC) [2-4]. Apreciação de níveis elevados MIF levou a segmentação estratégias e estudos de biomarcadores que detêm promessa de melhorar terapias contra o câncer.

MIF é uma proteína pró-tumorigénico influenciando as células tumorais e estroma tumoral através de vários mecanismos. Funcionando como um trimero, MIF tem mostrado induzir a sinalização através do receptor CD74-CD44 complexo de [5,6] e os receptores de quimiocina CXCR2 e CXCR4 [7] para sinalizar vias anti-apoptóticas e prosurvival via de MAPK, AKT, e Src numa vasta variedade de tipos de células [8]. MIF tem sido mostrado para modular a estabilidade da proteína p53 [11/09], a migração efeito em células tumorais [12], promover a infiltração de células inflamatórias /imunossupressores em tumores [13,14], e para promover a vasculogénese e a angiogénese através de recrutamento e a expansão do células endoteliais progenitoras (EPC) [15,16]. Juntas, as complexidades das funções MIF-associados no câncer de destacar a importância de compreender os novos aspectos da MIF biologia.

Os nossos estudos identificaram um papel crítico para a MIF no cancro renal [12,17]. ccRCC é um fenótipo tumoral comum de doença de von Hippel-Lindau em que os indivíduos herdam inativação heterozigoto do gene supressor de tumor de von Hippel-Lindau (VHL), e desenvolver perda de heterozigosidade ao longo das suas vidas. casos esporádicos de ccRCC também comumente abrigar defeitos na BVS, destacando sua importância no cancro do rim [18]. A função mais bem entendido de VHL é para servir como uma ubiquitina ligase E3 controlar a estabilidade do factor indutível hipoxia HIF e subunidades 1α 2α de uma forma dependente de oxigénio. Perda de VHL conduz à activação constitutiva de complexos de transcrição HIF, e a sobre-expressão de genes alvo de HIF canónicos, como GLUT1, VEGF, e CAIX, em cancros renais. Nós e outros autores mostraram que as CIM é um gene alvo directo HIF [19,20], que os níveis circulantes de MIF estão aumentadas em doentes com ccRCC, e que as CIM knockdown tumores crescem muito mais lenta do que os seus controlos em modelos animais [17]. O receptor de MIF, CD74, também tem sido demonstrado que ser regulada positivamente em ccRCC [21].

Embora os mecanismos que controlam a expressão de MIF foram documentadas, a secreção de MIF ocorre através de uma via pobremente descrita. A estimulação com LPS, a hipoxia, a exposição de UV e a terapia fotodinâmica tem sido mostrado para levar a secreção de MIF em células tão variados como macrófagos, células T, os dendritos, células endoteliais e epiteliais [15,22-26]. MIF é um polipeptídeo secretado liderança através de mecanismos não-clássicos potencialmente semelhantes a IL-1β e FGF1 e FGF2 [27]. IL-1β tem sido proposto para ser segregada através inflammasomes, exocitose de lisossomas secretoras, microvesículas, exossomas, e autofagossomas [28]. A inibição da ligação de ATP-transportador de cassete (ABCA1) pode prejudicar a secreção de IL-1β [29]. Similarmente, as experiências de inibição ABCA1 têm mostrado para bloquear a secreção de MIF [27]. A redução da secreção de MIF devido à 17β-estradiol mostrou correlacionar-se com uma redução no ARNm de ABCA1 e proteína [30]. Como a secreção de MIF é regulada no cancro é desconhecida, e visando MIF ao nível da secreção poderia ter significado terapêutico.

No presente estudo, descobrimos que a secreção de MIF pode ser induzida por radiação (IR) e outros ionizante agentes que danificam o DNA em células renal, mama e cancro do pulmão. Investigou-se a ligação entre a via de danos no ADN e secreção de MIF, como o supressor de tumores p53 é regulada positivamente na presença de danos no ADN e é evidenciado a ser inibida por MIF [11]; mas descobriu que a secreção MIF é p53 independente, porque a secreção ocorre no mutante p53 ou células nulas. Em contraste, a secreção de MIF foi induzida por stress oxidativo, um mediador comum de uma variedade de estimulantes de secreção de MIF. Finalmente, encontramos aumento da secreção MIF em ratinhos portadores de tumor após a exposição à radiação. Assim, sugerimos que a secreção de MIF em tumores sólidos pode ser um fator atenuante para controle do tumor em terapias contra o câncer comuns.

Métodos

Declaração de Ética

Todo o trabalho animal foi conduzido de acordo com as diretrizes padrão e foi aprovado pela Case Western Reserve University IACUC, aprovação 2.012-0.183. Ketamina /xilazina anestesia foi usada para minimizar o desconforto dos animais durante tratamentos de radiação. Os ratos foram alojados em gaiolas microisolator e foram cuidadas por CWRU veterinários e de pecuária em instalações animais designados. Os ratinhos foram alimentados com uma dieta normal, a água estéril, e foram dadas cama padrão. A aderência às diretrizes CHEGAM estão descritos na Tabela S1.

Reagentes

A camptotecina (C9911) e adriamicina (D1515) foram adquiridos da Sigma Aldrich. ELISA MIF humano foi realizada utilizando o Kit de Desenvolvimento DuoSet ELISA de R D Systems (DY289; Minneapolis, MN, EUA), seguindo o protocolo dado

As células, cultura de células e constrói

RCC4. , 786-0, e células MCF7 foram adquiridos da American Type Culture Collection. As células foram cultivadas em DMEM (Thermo Scientific, Logan, UT) com FBS a 10% (Invitrogen), e mantidas em 5% de CO

2 incubadora humidificada a 37 ° C. shABCA1 e shGFP foram obtidos a partir de Abrir Biosystems (Thermo Scientific, Logan, UT): TRCN0000276420 e RHS4459, respectivamente. Para tratamentos de radiação, 500000 células foram plaqueadas em placas de 6 cm e deixadas a aderir durante a noite. 2 horas antes da irradiação, o meio foi mudado para minimizar a contribuição da secreção basal de MIF. Irradiações foram realizadas em um pastor Mark I

137Cs irradiador fonte fixa no Centro de Processo Comprehensive Cancer Center da radiação Recursos Core.

separação de proteínas, análise de Western blot, imuno-histoquímica

lisados ​​de proteína foram colhidas nos 9M Urea, tampão 0,075 M de Tris (pH 7,6) e quantificado utilizando o ensaio BCA. As amostras foram corridas em geles de SDS-PAGE usando o protocolo padrão. Os anticorpos utilizados foram: anti-MIF (1: 2500) (Santa Cruz, SC-20121), anti-p53 (1: 500) (Santa Cruz; SC-1315), anti-PS15 p53 (1: 1000) (Cell Signaling ; 9284S), ABCA1 (1: 1000) (Genscript, A00121) e anti-β-actina (1: 50.000) (Santa Cruz; SC-47778). Tumor seção de coloração para MIF foram realizados como descrito anteriormente [12,17].

Os estudos em animais

3X10

6 786-0 células foram implantadas subcutaneamente em 40 de 8-10 semanas de idade do sexo feminino camundongos nu nu /NCR comprados na Facility atímicos Núcleo de processo Comprehensive Cancer Center. Controle e grupos experimentais foram randomizados e irradiados uma vez os tumores atingiram 1 cm

3. tamanhos finais das amostras eram controle (sem IR) n = 7, 0,5 horas após 4 Gy IR n = 7, 2 horas pós-IR n = 10, 6 horas pós-IR n = 8 e 24 horas pós-IR n = 8 . o soro foi recolhido por punção cardíaca pouco antes de sacrificar no final de cada ponto de tempo.

análises estatísticas

as análises estatísticas foram realizadas em GraphPad Prism com os testes t de Student para todos os valores de p apresentados, excepto para o animal dados de ELISA em que uma ANOVA one-way foi usada, como indicado. valores de p menores que 0,05 foram considerados significativos. Todas as barras de erro indicam desvios padrão. Todas as experiências foram repetidas pelo menos duas vezes, mas geralmente três ou mais vezes.

Resultados

Radiação ionizante induz a secreção MIF

A fim de determinar o efeito da radiação sobre a expressão MIF em células de cancro renal, análises de western blot de linhas celulares ccRCC RCC4 e 786-S foram executadas. Depois de 4 Gy de radiação, encontramos uma diminuição significativa nos níveis intracelulares de MIF dentro de 15-30 min (Fig 1A e 1B). A diminuição dos níveis de MIF recuperado após 1hr em células 786-O, mas levou 24 horas em células RCC4. Como um controlo para sinalização de danos no ADN, avaliou-se a p53 fosfoserina 15 níveis (PS15-p53) em células RCC4. Curiosamente, os níveis de MIF e PS15-p53 parecia estar anticorrelated, ambos demonstrando respostas rápidas dentro de minutos de exposição. Para determinar o destino do MIF a seguir à irradiação, foi medido o MIF em meios condicionados por ELISA. Na verdade, uma hora após a irradiação, encontramos aumentos robustos e estatisticamente significativas nos níveis de MIF secretada em ambas as linhas celulares (Fig 1D e 1E).

A) Western blot de células RCC4 tratada com 4 Gy IR e lisadas em vários pontos de tempo após a exposição coradas com fosfo-serina 15 de p53, MIF, e anticorpos de p-actina. níveis da CIM foram encontrados para diminuir dentro de 0,25 horas e recuperar por 24 horas. B) Western blot de células 786-S tratadas com 4 Gy IR e lisadas em vários pontos de tempo após a exposição. C) Western blot de células MCF-7 tratadas com 4 Gy IR e lisadas em vários pontos de tempo após a exposição. DF) análise MIF ELISA para células irradiadas em painéis (AC) no ponto de tempo de uma hora.

Para estender nossas observações para além das linhas de cancro renal, nós também testou os efeitos da exposição à radiação sobre os níveis de MIF em a linha celular de cancro da mama MCF-7 e a linha de cancro do pulmão H1299. De acordo com as linhas de células renais, encontramos radiação causou uma queda nos níveis de MIF celulares dentro de 30-60 minutos, e um aumento associado na MIF extracelular nos meios de comunicação (Fig 1C, 1D, 1E e 1H). Assim, os dados argumentar a favor de um efeito generalizado sobre a secreção de MIF seguinte IR.

secreção MIF é induzida por DNA tensões prejudiciais

Para estudar ainda mais a ligação entre a secreção de MIF e DNA danificando tensões, nós submetidas RCC4 células a vários factores de stress celular que são conhecidos por causarem danos no ADN. As células foram tratadas com adriamicina ou 10 uM 4μM camptotecina, topoisomerase I e II, inibidores, respectivamente, durante quatro horas, e, em seguida, colhidas para western blot. Como radiação, tanto adriamicina e camptotecina levou a estabilização e a fosforilação da p53 na serina 15, bem como uma diminuição significativa nos níveis celulares de MIF em comparação com as células tratadas com controlo de DMSO (Figura 2A). Como as células 786-O são conhecidas por serem p53 mutante [31], nós suspeitamos que a secreção MIF seguinte dano ao DNA é p53 independente. Para testar formalmente o papel da p53, expusemos a linha celular de cancro do pulmão H1299 deficientes em p53 [32] para a secreção de MIF de IR e de novo avaliadas. Como ambas as linhas de cancro renal e a linha MCF7, a secreção de MIF foi eficientemente induzida (Fig 2B). Assim, a hipótese de que, em vez de um mediador comum de estresse danos poderia ser o culpado da secreção de MIF. Uma variedade de tensões têm sido relatados para levar à secreção de MIF, incluindo hipoxia [15], LPS [23], a terapia fotodinâmica (TFD) [24], UV [25], e agora IR. Um tema comum em todas estas tensões é a indução de espécies reactivas de oxigénio (ROS), que por si só tem sido demonstrado directamente para induzir a secreção de MIF em cardiomiócitos [33]. Notavelmente, adriamicina e camptotecina também são conhecidos por induzir ROS [34-36]. Portanto, testou-se se a secreção de MIF em células tumorais poderia ser induzida por H

2O

2 mediada por estresse oxidativo. RCC4, 786-0 e células H1299 foram estimuladas com 10 mM H

2O

2 por 2 horas, uma dose relativamente equivalente a 4 Gy radiação ionizante por medidas de dobrar a produção vertente pausa e de sobrevivência [37], após o que a mídia foi recolhida e analisada para a secreção de MIF por ELISA. Observou-se um aumento de 6,9 ​​vezes na secreção a partir de células de MIF RCC4, um aumento de 5,2 vezes 786-0, e um aumento de 11,2 vezes de H1299 (Figura 2C). Assim, o stress de células tumorais por quimioterapia e radiação podem induzir a secreção de MIF através de uma via de stresse oxidativo.

A) Western blot de células RCC4 seguintes 4 horas de tratamento com 10 uM adriamicina, 4 uM camptotecina, ou apalpada 4 Gy IR com fosfo-serina 15 de p53, p53 total de MIF, e anticorpos de p-actina. B) Análise de MIF ELISA para células H1299 irradiadas e testadas no ponto de tempo de uma hora. C) MIF ELISA em RCC4, 786-O, e meios de comunicação celular H1299 condicionado após estimulação com 10 mM H

2O

2 por 2 horas. D) mancha de Western de lisados ​​de células com RCC4 ABCA1 knockdown por shRNA comparação para controlar shGFP sondadas com anticorpos ABCA1 e de p-actina. E) A secreção de MIF medido por ELISA a partir de células shABCA1 e shGFP RCC4 em 30 minutos e 60 minutos após 4 Gy IR. F) Secreção de MIF medidos por ELISA a partir de células shABCA1 e shGFP RCC4 em 60 minutos após exposição a 10 mM de H

2O

2. G) Secreção de MIF medidos por ELISA a partir de células RCC4 e 786-O com ou sem resonstitution VHL a 60 minutos após exposição a 4 Gy IR.

A radiação e ROS induzida secreção MIF ocorre independentemente de ABCA1

MIF tem sido relatada a residir em piscinas intracelulares pré-formados, mas o mecanismo pelo qual MIF é secretado há muito tem sido difícil [38]. Dado o papel de MIF em vários cancros, incluindo ccRCC, e a sua utilização como marcador de diagnóstico para o cancro da próstata [39], para identificar o mecanismo pode produzir potenciais alvos terapêuticos. Desde o transportador ABCA1 foi implicado na via de exportação MIF, decidimos testar diretamente o papel de ABCA1 na secreção induzida por radiação. ABCA1 foi batido para baixo através do uso de shRNA em células RCC4, tal como confirmado por Western blot (Figura 2D). células knockdown RCC4 controle shGFP e shABCA1 foram então expostos a 4 Gy de radiação, e os meios de comunicação foi testado em 30 minutos e 60 minutos para a secreção MIF por ELISA (Fig 2E). Os resultados mostraram secreção de MIF não foi afectada pela knockdown do transportador ABCA1. Nós ainda testado se H

2O

2 mediada estresse ROS teria efeito a secreção de uma forma dependente do ABCA1. Semelhante a IR, ROS estresse parece induzir a secreção de uma forma independente ABCA1 (Figura 2F). Finalmente, porque a expressão MIF é anotado para ser elevados em ccRCC, incluindo em células RCC4 e 786-S utilizados aqui, devido a inativação do supressor de tumor VHL e subsequente hiperativação dos fatores HIF transcrição [17], o próximo perguntou se a ativação constitutiva de HIF teve um impacto sobre a secreção de MIF. RCC4 e 786-S células reconstituídas parentais e BVS foram, assim, sujeito a H

2O

2 tratamento e meios condicionados foram testados para a secreção MIF. Outros que níveis reduzidos esperados da MIF devido a regulação para baixo dos HIF, secreção de MIF era, evidentemente, não afetado pela BVS (Fig 2G). Ele continua a ser possível, assim que a produção de MIF é afetado após o evento secretora inicial após o estresse oxidativo. Assim, em conclusão, a secreção de MIF seguinte IR parece ser ROS dependente, mas ABCA1 e BVS independente.

exposição IR para xenotransplantes tumorais ccRCC leva a níveis elevados de circulando MIF

Os níveis séricos de MIF no cancro tornaram-se de interesse significativo no ambiente clínico [40]. Nossas observações sugerem terapias tumorais podem afetar os níveis de MIF funcionais além da elevação simples pelo desenvolvimento do câncer, e mais importante, pode potencialmente levar a mitigação dos efeitos tumoricidas. Para validar nosso

in vitro

conclusões do ionizante secreção induzida por radiação de MIF, foi utilizado um modelo de xenoenxerto subcutâneo mouse. As células 786-S tumorigénicas foram implantados em ratinhos nus, devido ao seu crescimento rápido do tumor e expressão abundante de MIF e deixadas a crescer até um tamanho de ~ 1 cm

3. Os animais foram randomizados e irradiados com 4,0 Gy de IV. A 0,5, 2, 6, e 24 horas após a radiação, os animais foram sacrificados e os tecidos e soros tumorais foram recolhidas. secções de tecido de tumor coradas para MIF mostrou uma diminuição dramática na coloração MIF em 30 minutos e 2 horas em comparação com tumores não irradiados, com um retorno aos níveis basais às 24 horas (Fig 3A). Em seguida, testamos o soro do sangue para a detecção de circulação de MIF. Encontramos, de uma forma temporalmente coordenada, que houve um aumento na circulação de MIF em 2 horas, uma redução de 6 horas e retornando aos níveis basais, às 24h, espelhando eficazmente o efeito ao nível do tecido tumoral (Fig 3B). Assim, a análise dos tumores demonstra que o efeito de radiação sobre a secreção de MIF não está limitada a células em cultura, mas, se condensa em tumores in vivo.

A) Coloração imuno-histoquímica em secções de tumores de MIF 786-o de 0,5, 2, 6 ou 24 horas após 4 Gy IR. tumores diferentes foram utilizadas para cada ponto de tempo. Barra de escala = 50 uM B) por ELISA de níveis circulantes de MIF humanos em soros de rato a partir de 786-S portadores de tumor ratinhos a 0,5, 2, 6, ou 24 horas após a 4 Gy IR. O número de animais para cada ponto são indicados. A significância estatística medida pelo one-way ANOVA.

Discussão

A recorrência de tumores após a radiação é um grande obstáculo terapêutico que pode ser atribuída a vários fatores, incluindo a sobrevivência das células tumorais radioresistentes, respostas inflamatórias e imunossupressão e revascularização do campo irradiado [41]. A natureza pleiotropic da sinalização MIF implica um amplo papel para o MIF na promoção do câncer e, em recorrência do câncer. No papel atual, nós descobrimos novos estímulos de secreção de MIF no câncer que poderia ter implicações clínicas. Descobrimos que a radiação e outros agentes que danificam o ADN ionizante pode conduzir a reduções drásticas nos níveis de MIF celulares através da indução de secreção para o meio extracelular. A secreção pode ser induzida em células de carcinoma de, pelo menos, clara de células renais, cancro da mama, cancro do pulmão e de origem, e ocorre tanto in vitro como in vivo. Secreção parece ser tanto p53 e ABCA1 independente, mas a evidência sugere uma comunhão de estímulos reconhecidos de secreção MIF para ser um mecanismo mediado estresse oxidativo. No contexto da terapia do cancro, secreção elevada de MIF pode promover a sobrevivência potente-célula tumoral, inflamação, e complicações angiogénicos. Os dados, portanto, destacar o benefício potencial de inibição MIF adjuvante para realizar o pleno potencial da terapia anticancro.

Curiosamente, enquanto observamos a secreção de MIF em várias linhas celulares após IR, outros já não se viam essas diminuições na MIF celular. Youn et ai. têm investigado recentemente o efeito da radiação sobre a interação da MIF com rp53 no A549, e as células de câncer de pulmão NCI-H358, e não observaram diminuições na MIF celular após a exposição [42]. Esta contradição sugere parâmetros genéticos podem levar a diferenças nos níveis de MIF ou secreção que poderiam iluminar ainda mais o mecanismo de secreção de MIF. Da mesma forma a observação aqui que ABCA1 não regula a secreção de MIF por estresse IR ou ROS em nossos experimentos sugere existe um ainda mais complexo mecanismo de secreção MIF, e pode depender do contexto e stress, embora permaneça formalmente possível que os restantes níveis ABCA1 após knockdown são envolvidos. Decifrar os mediadores da secreção de MIF pode ter implicações importantes em uma variedade de configurações e claramente merece maior investigação.

MIF é um sinal de sobrevivência bem descrita para uma variedade de tipos de células, e as provas tem, de facto, sugeriu o seu papel para atenuar o estresse genotóxico [43]. MIF é também uma molécula pró-inflamatória e angiogénica potente. MIF pode efectivamente neutralizar os efeitos anti-inflamatórios dos glicocorticóides. Na presença de infecção bacteriana, por exemplo, a inflamação é normalmente desencadeada, e a libertação subsequente de MIF permite a inflamação prolongada através da libertação de outras citocinas pró-inflamatórias, como o TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-2 e IFN-γ [22,44]. No contexto da biologia do tumor, a MIF tem sido demonstrado que induzem a infiltração de vários tipos de células em tumores, incluindo células mielóides derivadas supressoras (MDSC) [13], neutrófilos [45], e células mastro [46], bem como a afectar a polarização de macrófagos associados a tumores [47]. O microambiente do tumor torna-se imunocomprometidos, reduzindo respostas antitumorais de acolhimento.

A terapia de primeira linha para ccRCC é a inibição de VEGF, mas as respostas dos pacientes permanecem relativamente pobre, com sobrevida média de 7-11 meses e apenas 10% vivem nos últimos 5 anos [ ,,,0],48]. As respostas a inibidores de VEGF poderia também ser em parte atribuída aos efeitos pró-angiogénico de MIF, já que ficou demonstrado que a secreção de MIF pode induzir recrutamento de células progenitoras endoteliais, que pode conduzir desenvolvimento de nova vasculatura. Estimulação com MIF tem sido demonstrado que afetam diretamente a diferenciação da célula endotelial, induzindo a formação do tubo em

in vitro

e

Ensaios in vivo

Matrigel [49]. Mielóides células supressoras derivadas têm também sido implicada na no desenvolvimento de novos vasos sanguíneos à medida que segregam factores angiogénicos. Kozin

et al

. mostrou que uma rápida infiltração de MDSCs facilitado reincidência do tumor [50], e na verdade Finke

et al

. têm implicado diretamente infiltração MDSC com resistência a sunitinib [14].

Outros modos de ação MIF têm sido relatados recentemente. Demonstrou-se que se pode ligar MIF S3 proteína ribossomal e dissocia-se em cima da exposição IR [51]. MIF dissociação activada de NF-kB, o aumento da secreção de citoquinas pró-inflamatórias, expressão regulada e de marcadores de transição epitelial-mesenquimal. Os resultados foram corroborados com

In vivo

dados de xenotransplante que mostram aumento da metástase, ainda que ligam MIF no seu papel de uma proteína tumorigénico. Dadas as muitas formas de ação MIF, é evidente que a inibição MIF pode ter vastas implicações para a terapia do cancro e recorrência do tumor.

Em resumo, os dados revelam que a secreção de MIF em resposta a terapia do câncer poderia ter efeitos negativos significativos na evolução de pacientes. Nós supomos que agentes de direccionamento MIF eficazes poderiam melhorar a eficácia da radiação e, potencialmente, outros agentes quimioterapêuticos, reduzindo os efeitos de sinalização protumorigenic MIF. Monitorização de secreção MIF após a radiação também pode ter utilidade em predizer os resultados dos pacientes e, portanto, tem significado prognóstico de maneiras anteriormente unappreciated.

Informações de Apoio

S1 Table. . CHEGAR diretrizes

Adesão chegar diretrizes é descrito

doi:. 10.1371 /journal.pone.0146482.s001

(PDF)

Reconhecimentos

A radiação recursos básicos facilidade do Centro de Câncer de caso abrangente foi utilizado para este estudo.