Abstract

Fundo

kinase1 proteína associada a morte (

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) é um importante gene supressor de tumor. metilação do DNA podem inativar genes, que tem sido frequentemente observadas na carcinogênese do câncer cervical. Durante as últimas décadas, muitos estudos têm explorado a associação entre o

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metilação do promotor e câncer cervical. No entanto, muitos estudos foram limitados pelo pequeno tamanho da amostra e os resultados foram inconsistentes entre eles. Assim, foi realizada uma meta-análise para avaliar a associação entre o

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metilação do promotor e câncer cervical.

Métodos

Nós pesquisados ​​sistematicamente estudos elegíveis no PubMed, Web of ciência, Embase e CNKI bancos de dados. Utilizando meta-regressão, análise de subgrupo e análise de sensibilidade, que explorou as potenciais fontes de heterogeneidade. O odds ratio (OR) e intervalo de confiança de 95% (IC 95%) foram calculados por Meta-Analysis em R.

Resultados

Um total de 15 estudos 2001-2012, compreendendo 818 amostras de tecidos tumorais e 671 amostras de tecidos normais, foram analisados ​​neste meta-análise. As frequências de

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metilação do promotor variou de 30,0% para 78,6% (mediana, 59,3%) no tecido do cancro do colo do útero e de 0,0% para 46,7% (mediana, 7,8%) no tecido cervical normal. O pool ou foi 19,66 (IC 95% = 8,72-44,31), com o modelo de efeitos aleatórios, ea heterogeneidade foi encontrado através da análise de sensibilidade. O

I

2

= 60% (

P

= 0,002) diminuiu para

I

2

= 29,2% (

P

= 0,144), quando um estudo heterogénea foi excluído, eo pool ou aumentada para 21,80 (IC95% = 13,44-35,36) com o modelo de efeitos fixos.

Conclusão

os resultados sugerem uma forte associação entre

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metilação do promotor e câncer cervical. Este estudo também indicou que

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metilação do promotor pode ser um biomarcador durante a carcinogênese cervical que pode servir como uma indicação precoce de câncer cervical

Citation:. Xiong J, Li Y, Huang K, Lu H, Shi H, Ma L, et ai. (2014) Associação entre

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metilação do promotor e do cancro do colo: A Meta-Analysis. PLoS ONE 9 (9): e107272. doi: 10.1371 /journal.pone.0107272

editor: Xuefeng Liu, da Universidade de Georgetown, Estados Unidos da América

Recebido: 17 Março, 2014; Aceito: 13 de agosto de 2014; Publicação: 30 de setembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Xiong et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada pela National Science Foundation Natural da China (No. 81.071.663). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer cervical é o terceiro câncer mais comum, depois de mama e cancro colorectal, entre as mulheres em todo o mundo, com 529,500 novos casos estimados e 275.000 mortes em 2008 de acordo com Ferlay et al. [1]. O desenvolvimento de câncer cervical invasivo é um processo gradual que ocorre durante um longo período, a partir de lesões cervicais neoplásico intra-epitelial (CIN) para o câncer cervical. Assim, é extremamente importante para detectar lesões pré-cancerosas para prevenir o desenvolvimento de cancro cervical. Embora a infecção com o vírus do papiloma humano (HPV) é um importante fator de risco aceitos para câncer [2] cervical, apenas uma pequena proporção de pacientes infectados pelo HPV desenvolvem câncer cervical invasivo [3]. Outros fatores de risco também podem contribuir para a génese deste tipo de câncer.

Hipermetilação das regiões promotoras dos genes supressores de tumor pode causar inativação do gene, o que é importante na patogénese do cancro, e geralmente ocorre nos estágios iniciais de desenvolvimento de câncer em vários tipos de cancro, incluindo o cancro do colo do útero [4], [5]. rmethylation ADN é um evento precoce na carcinogénese, e está muitas vezes relacionada com um bloco de transcrição e a perda de uma proteína relevante [6]. Porque

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é um importante gene supressor de tumor que tem sido estudado extensivamente, foi realizada uma meta-análise para avaliar a associação entre o

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metilação do promotor e câncer cervical.

materiais e Métodos

critérios

busca Estudo e seleção

Nós sistematicamente revisados ​​os estudos de

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metilação do promotor em câncer cervical, e tentou encontrar os estudos elegíveis dentro PubMed, EMBASE , web of Science e CNKI, utilizando várias combinações de Medical Subject Headings (MeSH) e não de malha termos. As palavras-chave são “o cancro do colo do útero”, “

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“, e “metilação”, enquanto a estratégia de busca foi realizada no PubMed com “neoplasias do colo uterino” (mesh), “

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” e “metilação”. O estudo foi realizado até 01 de novembro de 2013, sem qualquer limitação linguagem

Os estudos para inclusão na presente meta-análise teve de cumprir as seguintes normas:. (I) os estudos avaliaram a associação de

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metilação e câncer cervical, (ii) os estudos forneceram informações detalhadas sobre a frequência de

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metilação tanto para o grupo de câncer e do grupo de controlo normal, (iii) métodos para a detecção de

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metilação foram limitados à reacção de metilação específicas de cadeia de polimerase (MSP) e reacção em cadeia da polimerase em tempo real quantitativo (QMSP)

os estudos foram excluídos com base nos seguintes critérios:. (i) os estudos fez não ter um grupo normal (grupo de controlo), (ii) os dados em bruto não pode ser isolado a partir de estudos em que o grupo de cancro (grupo caso) também contidos indivíduos com diferentes tipos de lesões pré-cancerosas, tais como células escamosas atípicas de significado indeterminado ( ASCUS), Low-grade intraepiteliais escamosas lesões (LSIL) e alto grau intraepiteliais escamosas lesões (HSIL), (iii) um estudo de caso-controle não apresentam a frequência de

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metilação.

Data Extraction

conduzida Dois autores de forma independente a extração de dados dos estudos selecionados. A informação extraída continha o seguinte: Nome do primeiro autor, ano de publicação, etnias dos pacientes, os métodos utilizados na medição de

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metilação, o tecido fonte do grupo de controle, a média de idade do grupo caso e o número de participantes nos grupos de estudo e controle. Toda a informação foi verificada por três colaboradores.

Para avaliar a qualidade dos estudos, a escala de Newcastle-Ottawa (NOS) (https://www.ohri.ca/programs/clinical_epidemiology/oxford.asp) foi implementado para avaliação dos estudos observacionais de qualidade. O SOE é uma ferramenta de avaliação da qualidade que é frequentemente utilizado para estudos não randomizados, especificamente estudos de caso-controle e coorte, incluídos em revisões sistemáticas. Ele também tem sido amplamente utilizado em revisões sistemáticas de estudos não randomizados pela Colaboração Cochrane

Há um máximo de nove ‘estrelas’ para cada item:. Quatro estrelas para a selecção dos grupos de estudo, duas estrelas para o comparabilidade dos grupos, e três estrelas para a apuração do resultado de interesse. A avaliação foi realizada de forma independente por dois revisores. Estudos com índices de qualidade iguais ou superiores a 6 foram incluídos.

A análise estatística

As RUP e 95% IC foram calculados para avaliar a associação entre o

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promotor metilação e o risco de câncer cervical. O

x

2-baseado no teste e Estatística de Cochran Q

I

2 estatísticas foram utilizadas para testar a heterogeneidade entre os estudos incluídos [7]. heterogeneidade significativa foi confirmado se

P Art 0,05;

I

2 50% também foi considerada para demonstrar heterogeneidade significativa [8]. Em seguida, foi utilizado um modelo de efeitos aleatórios (o estimador DerSimonian-Laird) para calcular as RUP conjuntas; Caso contrário, foi aplicado um modelo de efeitos fixos (o método de Mantel-Haenszel) [9]. Uma meta-regressão (restrito método estimador de probabilidade máxima) foi utilizado para explorar a fonte de heterogeneidade. Além disso, uma análise de subgrupo foi realizada para avaliar a origem da heterogeneidade, e t

2 foi utilizado para determinar a quantidade de heterogeneidade pode ser explicada pelas diferenças de subgrupos. A análise de sensibilidade foi usado para encontrar relativamente estudos de baixa qualidade pela omissão de um único estudo de cada vez e ver se uma omissão particular poderia afetar o geral ou valor. As parcelas funil [10] e teste de Egger foram utilizados para avaliar o viés de publicação. O número de falhas também foi um indicador para avaliar o viés de publicação. Uma trama assimétrica sugeriu um possível viés de publicação eo

P valor

de ensaio inferior a 0,05 de Egger foi considerada representativa de um viés de publicação estatisticamente significativa [10].

Todas as análises estatísticas foram calculadas com o pacote de Meta (versão 2.5-1) em R (versão 3.0.1; https://www.r-project.org/).

resultados

resultados da pesquisa e estudar as características

Um total de 15 estudos que incorporaram 1489 pacientes foram incluídos nesta meta-análise (Fig 1). Ao todo, 110 estudos foram inicialmente encontrados depois de uma pesquisa de banco de dados acima, mas 34 estudos foram excluídos por causa da duplicação. Pela triagem dos títulos e resumos dos estudos remaining76, foram excluídos outros 45 estudos (8 documentos de reuniões, uma avaliação, um papel patente, 1 linhas celulares, 3 estudos com terapia e 31 artigos irrelevantes). Onze estudos sem grupo controle e 5 estudos que incluíram tecidos pré-cancerosos, como ASCUS, LSIL e HSIL no grupo caso, o que significava que os dados brutos dos pacientes com câncer não pode ser isolado, foram excluídos durante o processo de full-text avaliação. Finalmente, 15 estudos foram incluídos nesta meta-análise [3], [11] – [24]. O número de casos variou entre 22 e 350 entre os estudos com participantes de, Ásia (8 estudos), África do Norte (1 estudo), Europa e América do Norte (7 estudos). Para os 15 estudos, 5 estudos utilizaram em tempo real da polimerase quantitativa reação em cadeia (QMSP) e os outros 10 estudos utilizados reação em cadeia da polimerase específicas de metilação (MSP) para detectar

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metilação no grupo caso e na grupo controle (Tabela 1).

avaliação da qualidade

o resultado da NOS demonstrou que a pontuação mais baixa foi de 6 e maior pontuação foi de 9, com uma pontuação média de 7,2. A maioria dos estudos utilizados voluntários saudáveis ​​do hospital como controlos, excepto as de Feng et al. [12] e Sun et ai. [21]. O estudo de Leung et al. [17] foi o único em que os tecidos de controle foram derivadas de tecidos normais adjacentes (Tabela 2).

Meta-regressão e análises de subgrupos

O

x

2

teste baseado estatística Cochran Q e

I

2 estatísticas encontrada uma heterogeneidade significativa entre os 15 estudos (

I

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= 60,0%,

P

= 0,002). Observou-se uma forte associação entre o

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metilação do promotor e cancro do colo do útero com um pool ou of = 19,66 (IC 95% = 8,72-44,31) com base no modelo de efeitos aleatórios (Fig. 2). Para este resultado, tentamos encontrar a possível fonte da heterogeneidade. Com base em estudos anteriores e actual dos nossos conhecimentos, foi utilizado pela primeira vez um modelo de regressão múltipla, com cinco variáveis ​​com base no ano de publicação, etnia, método, fonte de controles, eo tamanho da amostra caso. Os grupos caso cujo tamanho da amostra foi de menos de 60, foram classificadas no grupo A, enquanto os outros grupos foram classificados como grupo B. Por meio do modelo de regressão, não encontramos uma heterogeneidade significativa para as cinco variáveis ​​listadas acima (Tabela 3). Em seguida, realizou uma análise de subgrupo para avaliar mais detalhadamente a origem da heterogeneidade.

Foi realizada uma análise de subgrupo de acordo com a etnia, método e o tamanho da amostra caso. A OR foi 18,22 em caucasianos (IC 95% = 3,35-99,03; modelo de efeitos aleatórios) e 17,88 (IC95% = 10,29-31,07; modelo de efeitos fixos) em não-caucasianos, a

I

2

valor foram obtidos separadamente e foram determinados como sendo 75,9% e 42,6% em comparação com todo o grupo de estudo (

I

2

= 60%). Com este método, as RUP dos estudos que utilizaram MSP foi 19,10 (IC95% = 11,11-32,84; modelo de efeitos fixos) e 15,30 (IC 95% = 2,34-99,66; modelo de efeitos aleatórios). Da mesma forma, o OR no grupo A foi 25,80 (IC 95% = 12.56-53.02; efeitos fixos modelo), enquanto o OR no grupo B foi 13,55 (IC 95% = 3,93-46,73; modelo de efeitos aleatórios). (Tabela 4)

análise de sensibilidade e análises de subgrupos

o resultado da análise de sensibilidade mostrou que o OR valor variou de 13,97 (IC 95% = 8,94-21,83) CI para 21,80 (95% = 13.44- 35.36) com um pool ou of = 15,32 (IC 95% = 9,97-23,66), com o modelo de efeitos fixos (Fig. 3). Após a omissão do estudo heterogénea (Yang et al., 2010), o pool ou mudou dramaticamente quando comparado com outros estudos foram removidos. Além disso, a heterogeneidade inicial (

I

2

= 60,0%,

P

= 0,002) diminuiu para

I

2

= 29,2% (

P

= 0,144) com um pool ou of = 21,80 (IC95% = 13,44-35,36;. modelo de efeitos fixos) quando o estudo heterogénea foi removido (Yang et al, 2010) (Fig 4).. Quando, fizemos uma análise mais aprofundada com base na etnia, método e o tamanho da amostra caso, os resultados mostraram que a heterogeneidade em caucasianos, método QMSP e tamanho de amostra maior desapareceu quando os dados do estudo heterogénea foi removido (Yang et al., 2010) (Tabela 5).

o viés de publicação

parcelas funil e teste de Egger foram realizados para avaliar o viés de publicação da literatura. A forma do gráfico de funil na Figura 5 mostra uma possível assimetria, mas o teste de Egger resultou em

P

= 0,551, o que indica que o viés de publicação foi muito baixa; sem viés significativa foi encontrada entre os estudos incluídos. O número de falhas (Z = 61,12, NFS

0,05 = 1374,98, NFS

0,01 = 674,13) também indicou que o grau de viés de publicação era muito pequena.

Discussão

kinase1 proteína associada a morte (

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) podem mediar a morte celular via IFN-gama e pode levar a patogênese de tumores e metástases, quando inativado [25]. Recentemente, vários estudos têm demonstrado que as alterações de metilação do DNA estão envolvidos na iniciação e progressão do cancro, e poderia ser utilizado para prever o diagnóstico e o prognóstico de doenças e tumores malignos humanos [26], [27]. A perda de

expressão DAPK1

, principalmente por hipermetilação da sua região promotora, aumenta o potencial metastático das células cancerosas e tem sido comprovada para ocorrer em uma variedade de cancros, incluindo o cancro do colo do útero [14], [ ,,,0],24]. Embora a infecção por HPV é um dos factores de risco mais importantes, a maioria dos pacientes com infecção pelo HPV não desenvolvem cancro cervical. infecção pelo HPV por si só é insuficiente para a transformação maligna das células do colo do útero, o que sugere possíveis papéis de outros eventos genéticos e epigenéticos na carcinogênese cervical [11].

o resultado do pool ou foi 19,66 (IC 95% = 8.72- 44.31) com o modelo de efeitos aleatórios (Fig 1), que mostrou que

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metilação do promotor está associado ao câncer do colo do útero e, portanto, que poderia desempenhar um papel importante na patogênese do câncer cervical. Este resultado foi consistente com os resultados de estudos anteriores [11], [20]. No entanto, a heterogeneidade significativa foi observada nos 15 estudos, ea razão para heterogeneidade não poderia ser explicado no início. Para explorar a possível fonte da heterogeneidade, implementamos uma análise de meta-regressão e subgrupo. Os resultados mostraram alguma heterogeneidade em caucasianos, o método QMSP e em um maior tamanho da amostra através da análise de subgrupo (Tabela 4); em seguida, foi realizada uma análise de sensibilidade para encontrar a fonte da heterogeneidade. O estudo de Yang et al. (2010) parece ser o estudo heterogêneo que afetou a meta-análise, como

I

2

= 60% (

P

= 0,002) foi reduzida para

I

2

= 29,2% (

P

= 0,144), quando este estudo foi omitido (Fig 4). Além disso, a análise estatística confirmaram a heterogeneidade do estudo de Yang et ai. (2010), e não há heterogeneidade significativa dos 14 estudos restantes (Tabela 5).

Quando o estudo heterogénea foi omitido, o valor em pool ou foi aumentada 15,32-21,80 (o modelo de efeitos fixos), que sugeriu uma associação mais forte entre a

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metilação do promotor e câncer cervical. A heterogeneidade apresentada em QMSP foi diminuída de

I

2

= 78,8% a

I

2

= 0,0%, o que indica que o método de QMSP é melhor do que a de MSP. Esta conclusão foi consistente com o estudo de Eads et al. [28]. A heterogeneidade em caucasianos também diminuiu de

I

2

= 75,9% a

I

2

= 0,0%, o que pode ter sido causado por duas razões principais. Em primeiro lugar, a detecção de

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metilação do promotor em caucasianos pelo método QMSP excluídos do estudo por Flatley et ai .. A outra razão pode ser que a heterogeneidade em caucasianos é relativamente pequena. viés de publicação foi avaliada através de parcelas funil e teste de Egger, e o teste de Egger mostrou

P

= 0,551, o que indica que não houve viés de publicação significativa. O número de falhas confirmou ainda que a tendência para o viés de publicação era muito pequena.

Esta meta-análise teve algumas limitações. A primeira limitação era que alguns estudos não forneceu informações detalhadas sobre a idade das pessoas nos grupos de caso e grupos de controle. A segunda limitação nesta meta-análise foi a de que alguns estudos não revelam o palco dos cancros do colo do útero ou o subtipo, que também podem ser fontes de heterogeneidade. Considerando o pequeno número de artigos que descrevem a fase e o tipo de cancro do colo do útero, a potência era demasiado pequeno para fazer um subgrupo para eles. Outras variáveis ​​de confusão, como método, etnia, tamanho da amostra e a fonte de controle também podem existir. viés de publicação foi a terceira limitação. Alguns estudos não publicados e negativos podem contribuir para algum viés que nenhum viés de publicação significativa foi detectada pelo teste de Egger.

Em conclusão, observou-se uma forte associação entre o

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metilação do promotor e câncer cervical, e, portanto,

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metilação do promotor pode ser valioso como um biomarcador. Considerando que a qualidade ea quantidade dos artigos revisados ​​foram limitados, estudos mais amplos e bem desenhados deve ser empregada no futuro para confirmação da associação entre o

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metilação do promotor e câncer cervical.

Informações de Apoio

Checklist S1.

PRISMA Checklist

doi:. 10.1371 /journal.pone.0107272.s001

(DOC)

Reconhecimentos

Gostaríamos de agradecer Shen Wei, Wang Man, Xiaofang Du e Deng Song for a sua assistência útil.