Abstract

Fundo

Achaete scute-like 2 (Ascl2), um fator de transcrição hélice-volta-hélice (bHLH), controla o destino de células-tronco intestinais. No entanto, o papel de Ascl2 em células progenitoras de cancro do cólon permanece desconhecida. A linha de células HT-29 (47,5-95% de CD133

+ população) e LS174T (0,45% do CD133

+ população) foram escolhidos para avaliação funcional do Ascl2 em células progenitoras de cancro do cólon após gene knockdown por interferência de RNA .

Metodologia /Principais achados

a imuno-histoquímica demonstrou que Ascl2 foi significativamente aumentada em adenocarcinomas colorretais. Regulação negativa do Ascl2 usando RNA de interferência em HT-29 e adenocarcinoma LS174T células de cultura do cólon reduziu a proliferação celular, capacidade de formação de colónia, invasão e migração in vitro, e resultou na paragem do crescimento de xenoenxertos de tumores in vivo. O nível de proteína Ascl2 em CD133

+ HT-29 células foi significativamente maior do que no CD133

– células HT-29. Ascl2 bloqueio através de interferência shRNA em células HT-29 (shRNA-Ascl2 /células HT-29) resultou em 26,2% de células coradas CD133

+ em comparação com 54,7% no controle shRNA-Ctr células /HT-29. Os níveis de genes associados ‘stemness’, tais como CD133, Sox2, Oct4, Lgr5, Bmi1, e C-myc, foram significativamente menores no shRNA-Ascl2 /HT-29 e shRNA-Ascl2 /LS174T células in vitro, bem como em o xenotransplante tumoral correspondente (CD133 não foi realizada em células shRNA-Ascl2 /LS174T). O shRNA-Ascl2 /células HT-29 tinha capacidades inibidos para formar tumorspheres em comparação com o controlo. Os microarrays microRNA (miRNAs), identificou 26 miRNAs up-regulamentados e 58 miRNAs regulados negativamente em shRNA-Ascl2 /células HT-29. Os níveis de expressão de let-7b, miRNA-124, miRNA-125b, miRNA-17, miRNA-20a e miRNA-302b, envolvida na regulação da “stemness ‘, foram quantificados com qPCR, que confirmou suas identidades. Restauração de miRNA-302b, através da sua mímica, levou à restauração de características shRNA-Ascl2 /’stemness’ HT-29, incluindo tumorsphere formação e ‘stemness’ níveis de genes associados, ea recuperação de comportamentos celulares, incluindo a capacidade de formação de colónias , invasão e migração in vitro.

Conclusões /Significado

Ascl2 pode ser um alvo potencial para a inibição de células progenitoras do cancro do cólon, e as funções por meio de um mecanismo relacionado com o miR-302b.

Citation: Zhu R, Yang Y, Tian Y, Bai J, Zhang X, Li X, et al. (2012) Ascl2 knockdown Resultados em Arrest Tumor Crescimento por miRNA-302b-Related A inibição de Colon células cancerosas de células progenitoras. PLoS ONE 7 (2): e32170. doi: 10.1371 /journal.pone.0032170

editor: Ilya Ulasov, da Universidade de Chicago, Estados Unidos da América

Recebido: 19 Outubro, 2011; Aceito: 21 de janeiro de 2012; Publicado: February 23, 2012