Abstract

Os microRNAs (miRNAs) foram encontrados para ser desregulada em câncer epitelial de ovário (EOC) e pode funcionar tanto como genes supressores de tumor (ETG) ou como oncogenes. A hipermetilação de miARN silencia a função supressora de tumores de um miARN ou hipermetilação de um TSG regulação que miARN (ou vice-versa) leva a sua perda de função. O presente estudo tem como objetivo avaliar o impacto da aberrante microRNA-125b expressão (miR-125b) sobre várias características clinicopatológicas em câncer epitelial de ovário e sua associação com metilação anormal de vários ETG. Foram incluídos 70 casos diagnosticados de câncer epitelial de ovário, gravou sua história clínica e 70 voluntários saudáveis ​​do sexo feminino. Os níveis séricos de miR-125b foram determinadas por reacção em cadeia quantitativa reversa da polimerase de transcrição (qRT-PCR) e o estado de metilação de vários ETG foi investigada por PCR específica de metilação. Foram construídas curvas ROC para estimar a utilidade de diagnóstico e prognóstico de miR-125b. O método de Kaplan-Meier foi aplicado para comparar curvas de sobrevida. Expressão de miR-125b foi encontrado para ser significativamente regulada positivamente (p 0,0001) em comparação com controlos saudáveis. O nível de miR-125b expressão foi encontrado para ser significativamente associada com o estágio FIGO, linfonodo e metástases à distância. curva ROC para o potencial de diagnóstico rendeu AUC significativa com uma sensibilidade equitativa e especificidade. curvas ROC para o prognóstico rendeu AUC significativas para grau histológico, metástase distal, status do nó de linfa e sobrevivência. A expressão de miR-125b também se correlacionou significativamente com a hipermetilação do ETG. Os nossos resultados indicam que a hipermetilação do ADN pode ser envolvida na inactivação de miR-125b e miR-125b podem funcionar como um biomarcador potencial independente para o resultado clínico em EOC

citação:. Zuberi M, Khan I, Mir R, Gandhi G, Ray PC, Saxena a (2016) Utilitário de soro miR-125b como um indicador de diagnóstico e prognóstico e sua aliança com um painel de Genes supressores de tumor no epitelial cancro do ovário. PLoS ONE 11 (4): e0153902. doi: 10.1371 /journal.pone.0153902

editor: Ratna B. Ray, Universidade de Saint Louis, Estados Unidos

Recebido: 04 de fevereiro de 2016; Aceito: 05 de abril de 2016; Publicação: 19 de abril de 2016

Direitos de autor: © 2016 Zuberi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. Todos relevante os dados foram incluídos dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

financiamento:. os autores não receberam qualquer financiamento específico para este trabalho

Conflito de interesses:. os autores declararam que não existem interesses conflitantes.

Introdução

o câncer de ovário é a principal causa de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo. A alta taxa de mortalidade pode ser devido a dificuldades no diagnóstico de que, numa fase precoce e falta de tratamentos eficazes para pacientes com uma doença avançada ou recorrente [1]. Portanto, não é um pré-requisito fundamental para o desenvolvimento de marcadores prognósticos e preditivos de sua detecção precoce e para ajudar a otimizar o tratamento.

Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenas moléculas de RNA não-codificantes que poderiam induzir o silenciamento pós-transcricional de genes alvo através da interacção com o seu 3′-UTR (região não traduzida), regulando assim muitos processos biológicos importantes, tais como o desenvolvimento das células, a diferenciação e a apoptose [2]. Tendo em conta as funções reguladoras importantes miRNA desempenhar no desenvolvimento e progressão do cancro, vários estudos têm sido realizados para identificar miRNA como potenciais biomarcadores para o diagnóstico de câncer, prognóstico e terapia personalizada [3].

expressão aberrante miRNA tem sido frequentemente observado em vários tipos de tumores humanos. Estudos sugerem que miARN pode funcionar tanto como genes supressores de tumores (oncogenes ou ETG) [4]. Estudos recentes relataram desregulação do miR-125b em vários tipos de câncer [5,6]. No entanto, o mecanismo pelo qual o miR-125b contribui para epiteliais do cancro do ovário (EOC) não foi documentado e é ainda relativamente pouco claras. Alta expressão de miR-125 tinha sido observado em gliomas e cancro da próstata [7,8] ao passo que os níveis de miR-125 foram observados a diminuir na mama e cancro gástrico [9,10]. Até à data, o nível de expressão de miR-125b no cancro epitelial do ovário não é ainda claro. De acordo com a putativa região do promotor, o promotor de miR-125b é incorporado na ilha CpG [11].

Considerando o que precede, testou-se a expressão de miR-125b no soro de pacientes de cancro do ovário epiteliais para elucidar a sua utilidade como um marcador de diagnóstico /prognóstico. Analisamos também o padrão de metilação em um painel de genes supressores de tumor, tais como DAPK1, p16, RASSF1A, PTEN, BRCA1 e p14 e explorou sua associação com a expressão aberrante de miR-125b.

Materiais e Métodos

amostras de pacientes

As amostras de sangue foram colhidos de pacientes com câncer ovariano epitelial diagnosticados clinicamente. Os pacientes (n = 70) foram recrutados a partir do Departamento de Ginecologia e Obstetrícia, Lok Nayak Hospital, Nova Deli entre Junho de 2012 e Outubro de 2014. O mesmo número (n = 70) dos voluntários do sexo feminino (idade correspondida) serviram como controle. O soro foi separado por centrifugação. Todas as amostras foram recolhidas e armazenadas a -70 ° C e descongeladas imediatamente antes do ensaio. foi obtido dados clínica completa e um plano de terapia atual. O objetivo da amostragem foi explicado para todos os pacientes e consentimento informado por escrito foi obtido antes da inscrição. O estudo foi aprovado pelo Comitê Institucional de Ética em Maulana Azad Medical College, em Nova Deli, na Índia.

Extração de DNA

O DNA genômico foi isolado de amostras de sangue de pacientes e controles usando o DNA Geneaid Kit de isolamento (Taiwan), de acordo com as instruções do fabricante. A qualidade e a integridade do ADN destes tecidos foram verificados por electroforese em gel de agarose a 1%, quantificados por espectrofotometria, e, em seguida, armazenada a -20 ° C para posterior utilização.

Bissulfito Modificação de ADN

tratamento com bissulfito foi efectuado utilizando o kit de ADN BisulFlash modificação (Epigentek, EUA) de acordo com as orientações do fabricante. Este procedimento modifica citosinas não metiladas a nucleótidos de uracilo mas não modifica nucleótidos de citosina metilados. conversão de bissulfito de ADN foi levada a cabo a 95 ° C durante 20 minutos, durante o qual as citosinas não metiladas em uracilo foram convertidos completamente. Isto foi seguido pelo de ADN convertidas de limpeza e de armazenagem a -80 ° C antes de usar.

metilação específicas de PCR

-metilação específica de PCR (MSP) é sensível e específica para a metilação de praticamente qualquer bloco de locais CpG dentro de uma ilha CpG. A frequência dos locais de CpG em ilhas CpG torna esta técnica útil e extremamente sensível para essas regiões. ADN tratado com bisulfito foi amplificada com iniciadores de PCR específicos (Tabela S1) que distinguem ADN metilado e não metilado. Estes iniciadores amplificam diferentes produtos feitos sob medida para DAPK1, p16, RASSF1A, PTEN, BRCA1 e p14 (para sequências metiladas e não metiladas), conforme mostrado no arquivo complementar (S1 Fig). A PCR foi realizada numa mistura de 25 mL contendo 10 mL de Sonho Master Mix Taq (Fermentas) contendo tampão optimizado, MgCl 4 mM de

2, com polimerase de ADN de Taq recombinante, 0,4 mM de cada dNTP, 0,6 uM de cada iniciador, e 4,0 ul de molde de ADN tratado com bissulfito.

Extração de RNA, e de poliadenilação de síntese de ADNc

ARN a partir de amostras de soro foi isolado pelo método de Trizol e armazenado em tubos de RNase livre a -70 ° C. A qualidade e a integridade do ARN foi determinada pela

260/280 proporção. A cauda poli-A foi levada a cabo usando uma enzima polimerase de poli e ATPr (Agilent, Cat # 600036). Transcriptase reversa e outros reagentes necessários para a síntese de ADNc foram subsequentemente adicionados para converter o ARN poli (A) miARNs atado em ADNc utilizando um iniciador adaptador oligo-dT fornecido com o kit. O iniciador adaptador tem uma sequência única na sua extremidade 5 ‘que permite a amplificação de ADNc em reacções de qRT-PCR em tempo real.

detecção de miARN por qPCR

Relativa quantitativa PCR em tempo real (qPCR ) foi usada para medir a expressão de miARN. qPCR foi realizado num Rotor Gene (Qiagen), utilizando Maxima SYBR Green qPCR mastermix (Fermentas), iniciador de miR-125b específico para a frente (Qiagen) (Tabela 1), um iniciador inverso universal comum e snU6 como um controle endógeno. 100 ng do produto de ADNc amplificado na etapa de transcrição inversa acima foram quantificadas num volume de reacção de 20 uL usando o seguinte programa de amplificação: ADN

Taq

activação da polimerase a 95 ° C durante 5 min, seguido de 40 ciclos de amplificação de desnaturação a 95 ° C durante 10 s, hibridação a 61 ° C durante 20 s, e alongamento a 72 ° C durante 10 s. Por último, uma curva de fusão foi gerado por meio de medidas fluorescentes a cada 0,5 ° C durante 25 s a partir de 50 ° C até 95 ° C para assegurar a um único produto de PCR. Os real-time PCR experimentos foram repetidos pelo menos três vezes.

Os valores Ct de limpeza U6 snRNA e testar mir-125b foram utilizados para calcular os valores entre genes teste e referência, tanto delta Ct (ΔCt) normal de controles saudáveis ​​e pacientes de teste. valores Delta delta Ct (ΔΔCt) entre controles saudáveis ​​e pacientes foram baseados na diferença de valores ΔCt entre os dois conjuntos. Isto foi usado para calcular a diferença exponencial baseado em 2

-ΔΔCt. Os valores foram normalizados e expressa em termos de dobra expressão relativa aos controles saudáveis.

Análise Estatística

As correlações entre os níveis de metilação dos genes supressores de tumor e os parâmetros clínicos e patológicos foram analisados ​​com Chi teste quadr ou análise de probabilidade exato de Fisher. A diferença dos níveis de expressão de miR-125b entre pacientes com câncer ovariano epitelial e controles foi examinado por estudante do

t

-teste. Foram construídas curvas ROC usando software XLSTAT. A análise de sobrevida foi realizada utilizando gráficos de Kaplan-Meier e teste log-rank (Mantel-Cox). A análise dos dados por qPCR foi realizado pelo método de ciclo limiar comparativa (Ct). Cada amostra foi analisada em triplicado e as quantidades dos produtos de PCR produzidos foram normalizados para os controlos internos. Gene e os níveis de expressão de miRNA foram obtidos pela quantificação relativa usando o

2 – método (ΔΔCt). Apreciação maior ou menor do que 1 foram considerados para indicar a sobre-expressão ou subexpressão, respectivamente. Todos os valores foram normalizados em relação aos valores de controlo normais, que foram representados como um valor de 1. A relação de miR-125b e estado de metilação de ETG foi examinada por Mann-Whitney

L

teste. SPSS versão 16.0 para Windows (SPSS Inc, IL, EUA) e GraphPad Prism 6 para Windows (versão 6.05) foram utilizados para análise estatística. Os resultados foram considerados significativos quando

p

foi . 0,05

Resultados

As características dos pacientes

características clínico-patológicas, incluindo idade, grau histológico e tipo , tamanho do tumor, estado de menopausa, fase FIGO, o estado do linfonodo, os níveis de CA125 etc são mostrados na Tabela 2. Para elucidar a expressão de miR-125b sobre o aparecimento de cancro, pacientes de cancro do ovário epiteliais foram divididos em dois grupos, ≤ 45 anos (57,1%) e 45 anos (42,8%). Os casos foram divididos de acordo com o estadiamento FIGO da EOC e tipos histopatológicos.

Distribuição de padrão de expressão de miR-125b nos casos e controles

A Tabela 3 apresenta a alocação de miR expressão mudança dobra entre os casos e controles. Houve diferença significativa (p 0,0001) observaram com soro expressão de miR-125b em câncer epitelial de ovário. Uma amostra t-teste foi utilizado para avaliar a expressão de miARN entre pacientes e controlos saudáveis. O nível de expressão de miR nos controlos foi ajustada para um e, em seguida, calculada miR expressão em amostras de carcinoma do ovário combinados. A expressão de soro de miR-125b verificou-se ser 5 dobras menos do que nos controlos correspondentes o paciente epiteliais do cancro do ovário (Tabela 3).

A expressão de miR-125b e o seu potencial de diagnóstico no ovário epitelial cancer

em tempo real de análise de quantificação relativa mostrou que mais de 5 vezes maior no soro expressão de miR-125b entre os pacientes câncer epitelial de ovário do que controles saudáveis ​​(Tabela 3). ROC análises da curva foram realizados para avaliar o poder preditivo de miR-125b para o câncer ovariano maligno e ilustrada na Figura 1. A expressão relativa do soro miR-125b poderia discriminar pacientes com câncer ovariano maligno hígidos, com uma AUC poder de 0,728 ( IC 95% = 0,64-0,81), a uma sensibilidade de 62,3% e especificidade de 77,1% a partir de um ponto de corte de 3,76.

(a) gráfico de pontos que mostra a expressão relativa de miR-125b e em pacientes controles (B) da curva ROC para o miR-125b exibindo seu potencial diagnóstico no câncer epitelial de ovário.

miR-125b regulação positiva em relação às características clinicopatológicas

a Tabela 2 mostra a correlação entre miR expressão -125b e características clínico-patológicas de pacientes com câncer ovariano epitelial. Cerca de 64% dos pacientes de 45 anos de idade mostrou alta expressão de miR-125b. Quase 70% dos pacientes com tumor grau moderado apresentaram aumento da expressão de miR-125b para além de 48% dos pacientes com tumor bem diferenciado e 32% mal tumor diferenciado. elevada expressão de miR-125b foi observada em doentes com adenocarcinoma seroso cerca de 65% e cerca de 50% dos pacientes com adenocarcinoma mucinoso. Quando correlacionado com o tamanho do tumor, foi observada alta expressão de miR-125b quando tumor estava em sua fase inicial ou seja 10 centímetros

3. Além disso, todos os pacientes na fase inicial (fase I e II) mostraram alta expressão de miR-125b. Os pacientes que não tenham metástase ou seja, que envolvem os pacientes na fase inicial, sintetizou-se quase 67% de pacientes com o aumento da expressão de miR-125b, em comparação com pacientes (5%) com doença metastática. Da mesma forma, 65% dos pacientes sem metástases em linfonodos apresentaram maior expressão de miR-125b. estado de menopausa, nuliparidade, os níveis de CA125 no soro e a concentração de hemoglobina (Hb) não se associou significativamente com a expressão de miR-125b. Figura 2 mostra a relação significativa com relação ao encenar, metástases em linfonodos e estado de metástases à distância com a expressão de miR-125b em pacientes câncer epitelial de ovário.

miR-125b em relação ao estágio de epitelial de ovário câncer.

a demarcação lúcida foi observada com relação à expressão de miR-125b ea ​​FIGO estágios em câncer epitelial de ovário. Todos os pacientes em estágios I e II apresentaram maior expressão de miR-125b enquanto os pacientes em estágio III e IV contado apenas 10% e 5% dos pacientes com aumento da expressão respectivamente (Fig 2A).

miR-125b é regulada em tumores não metastáticos.

Um estatisticamente significativa (p = 0,002) foi observada correlação entre o estado de metástase de pacientes com câncer ovariano epiteliais e expressão de miR-125b. Expressão de miR-125b foi encontrado para ser aumentado especificamente em pacientes sem metástase (Fig 2B).

miR-125b é regulada em pacientes sem metástases em linfonodos.

Tal como acontece com metástases à distância , pacientes sem metástases em linfonodos mostrou uma estatisticamente significativa (p = 0,001) com a expressão de miR-125b (Fig 2C).

a expressão de miR-125b e seu potencial prognóstico no câncer epitelial de ovário

miR-125b foi analisada pela sua progressão da doença, significado prognóstico e desfecho sobrevivência no EOC. miR-125b foi avaliada para a progressão da doença pela associação de sua expressão com as fases da FIGO e vários outros parâmetros clínico de câncer epitelial de ovário. O significado prognóstico foi elucidado por curvas ROC. Para usar análise da curva ROC, as características clínicas e tumorais foram feitos binário e, portanto, dicotomizada. Stage foi dicotomizada tão cedo (I + II) ou tardia (III + IV), o grau do tumor um preço tão baixo (G1 + G2) ou alta (G3), participação do nó como nenhum envolvimento de gânglios linfáticos ou qualquer envolvimento de linfonodo, metástases à distância como presente ou ausente, a sobrevivência como a morte devido ao câncer epitelial de ovário ou outro (censurado /vivo)

a expressão de miR-125b e grau histológico produziu uma AUC significativa de 0,676 (IC 95%: 0,558-0,793). com uma sensibilidade de 66,7% e especificidade de 62,6% a partir de um valor de corte ideal de 3,91 (Figura 3A) (Tabela 4). curva ROC para metástases à distância produziu uma AUC de 0,891 (IC 95%: 0,838-0,944), com uma sensibilidade e especificidade de 94,1% e 70,5%, respectivamente, em um valor de corte ideal de 4,34 (Fig 3B). Uma AUC de 0,773 (IC 95%: ,658-,887) foi obtido na curva ROC no que diz respeito ao nó de linfa de metástases e por um valor de corte de 5,85 óptima, a sensibilidade foi de 73,7% e especificidade de 80,8% (Fig 3C). curva ROC para a sobrevivência produziu uma AUC de 0,660 (IC 95%: 0,564-0,756) com uma sensibilidade de 64,3% e especificidade de 67,0% em um ponto de corte ideal de 3,91 (Fig 3D)

A análise de sobrevida foi feita pela curva de Kaplan-Meier e teste log-rank (Fig 4A). Não houve associação significativa entre a expressão de miR-125b e sobrevida global de pacientes com ≤1 expressão dobra de miR-125b. No entanto, quando subgrupos histológicos foram estimados para a sobrevivência separadamente, verificou-se que os pacientes com histotipos mucinosos teve um tempo de sobrevivência de 16 meses, enquanto que, os doentes com histotipos serosas exibiu um tempo de sobrevivência de 9 meses (Fig 4B).

a expressão de miR-125b em associação com a hipermetilação do promotor de genes supressores tumorais

a expressão relativa de miR-125b foi avaliada em relação à hipermetilação do promotor de bem conhecidos genes supressores de tumor-DAPK1, p16, RASSF1A , PTEN, BRCA1 e p14. Destes, RASSF1A e genes PTEN mostrou uma correlação estatisticamente significativa entre a hipermetilação aberrante de seu promotor e a expressão relativa de miR-125b em pacientes câncer epitelial de ovário. Os pacientes com a hipermetilação do promotor RASSF1A demonstrada a regulação negativa da expressão de miR-125b (p = 0,005) (Figura 5). Do mesmo modo, os pacientes com a hipermetilação do promotor de PTEN mostraram regulação negativa da expressão de miR-125b (p = 0,01). Nenhum outro gene supressor tumoral apresentou associação estatisticamente significativa com a expressão de miR-125b.

(A) DAPK1 (B) p16 (C) RASSF1A (D) PTEN (E) BRCA1 (F) p14. Positivo e negativo descreve a presença ou ausência de hipermetilação do promotor do gene supressor de tumor especificado respectivamente.

Discussão

O desenvolvimento da carcinogénese epitelial do ovário é um processo de vários passos que implica a desregulação dos oncogenes e genes supressores de tumor. Estudos contemporâneos têm relatado que a expressão do gene regulado transcricionalmente associada-microARN desempenha um papel crucial na iniciação, desenvolvimento e progressão do cancro epitelial do ovário, mantendo um controlo regulador sobre a proliferação celular, o ciclo celular, apoptose, e metástase. miR-125b tem sido referida como estando envolvida em vários tipos de cancro [12]. funções de miR-125b ou como um gene supressor tumoral ou oncogenes. Ele é regulada positivamente e exibe potencial oncogénico em alguns tipos de cancro, uma vez que provoca a divisão celular, enquanto dificulta a apoptose. Por outro lado, é abertamente regulados negativamente em vários outros tipos de cancro. A nossa compreensão em relação aos papéis contraditórios de miR-125b na infinidade de tipos de câncer ainda é limitada. Um aspecto do nosso objetivo foi explorar a expressão aberrante de miR-125b em câncer epitelial de ovário em relação aos atributos clínico-patológicas. O outro aspecto foi testar a expressão de miR-125b, com referência aos ETG anormalmente metilado a fim de concluir nitidamente o seu possível papel em qualquer regulação ou ser regulado pelo miR-125b.

miR-125b é pensado para segmentar a imagem de marca do cancro, de uma forma ou de outra, que regula vários genes envolvidos na via, conduzindo ao desenvolvimento do fenótipo do cancro. metilação anormal do DNA tem um resultado crítico na iniciação epiteliais do cancro do ovário e progressão. Vários investigadores têm olhado para a hipermetilação do promotor de miRNA em diferentes tipos de câncer como uma razão para a inativação de que determinado miRNA e destacando o papel putativo de perturbação epigenética em produzir os padrões aberrantes de expressão de miRNAs em células de câncer [13]. Diversas linhas de evidência apoiam a ideia de que a desregulação de miRNA pode levar a metilação do DNA aberrante em câncer e que miRNAs capaz de regular

DNMT

genes são supostamente reprimidos no câncer [14,15]. miARNs que actuam como supressores de tumores foram encontrados para ser metilado em células tumorais, indicando a importância do estudo das duas forças JUNTO epigenética e miARNs [16]. Além disso, o perfil de metilação do DNA de tumores pode ser utilizada como uma assinatura para definir o tipo de tumor, o prognóstico clínico e resposta ao tratamento [17,18]. miARNs transcritas a partir de ilhas de CpG ADN submetido a repressão associada a metilação com um contexto semelhante ao da cromatina genes de codificação, tal como a ligação do repressor transcricional metil-CpG de ligação de proteínas de domínio [19,20]. Tais estudos desmascarar genéticos abriram caminho na identificação dos mecanismos responsáveis ​​por causar a destruição do câncer a nível molecular. Com base em linhas semelhantes, que seleccionado um painel de genes supressores de tumores, que são conhecidos por serem susceptíveis de cancro epitelial do ovário para investigar se a sua metilação aberrante directa ou indirectamente afecta a expressão de miR-125b que por sua vez leva ao desenvolvimento de cancro. Dos genes supressores de tumores estudados, os genes emergiu RASSF1A e PTEN como candidatos prováveis ​​que pode desempenhar um papel crucial na modulação da expressão de miR-125b. Poliseno et ai. têm demonstrado o papel dos transcritos de PTEN na modulação miARN segmentação por níveis PTENP1 examinando [21]. A identificação e validação de numerosos

PTEN

-targeting microRNAs indica que a regulação pós-transcricional desempenha um papel central na determinação PTEN abundância em células cancerosas [22-25]. As células são altamente sensíveis ao mesmo ligeira diminuição nos níveis de PTEN, destacando a importância da regulação PTEN mediada por microRNA no câncer [26]. RASSF1A é um supressor de tumor que é um regulador negativo da via de Ras-MAPK e reduziu expressão em vários cancros. Tem sido proposto que RASSF1A participa na proliferação celular e a apoptose através da regulação da via MAPK e tem efeitos na carcinogénese [27]. Outro estudo realizado por Banno et al. relatou que a expressão reduzida do gene RASSF1A ocorre por hipermetilação ou supressão da expressão de genes por miARNs. Expressão do próprio miARN pode ser aumentado ou diminuído por metilação do promotor, com base nas diferenças entre as células normais e cancerosas [28]. Daí o nosso estudo extrapolou esses resultados e pode dar uma nova direção para examinar a expressão de miR-125b em uma nova dimensão.

avanços tecnológicos recentes têm ajudado a detecção de miRNAs em ótima sensibilidade e especificidade. miRNAs circulantes estão surgindo biomarcadores de diagnóstico como promissores para o câncer, embora a sua utilidade para a detecção de início neoplasias ainda permanece obscuro. miR-125b tem sido mostrado para segmentar vários genes que são mais ou menos importante para a formação de tumor em diferentes tipos de células. miR-125b actua como oncogene clássica em uma variedade de tumores, onde a sua sobre-expressão pode levar à supressão de um gene supressor de tumor, ou pode bloquear a maquinaria apoptótica. Esse comportamento é reforçado pela constatação de que os níveis de expressão de miR-125b estão correlacionadas com as taxas de sobrevivência reduzidas [29,30]. Um estudo recente da Yamada et al. tem também relatado um nível elevado de miR-125b no cancro colo-rectal. Eles identificaram miR-125b como um biomarcador detecção precoce em cancro colo-rectal, devido à considerável AUC (0,806) na curva ROC [31]. Giray et ai. encontrada uma regulação positiva da expressão de miR-125b no carcinoma hepatocelular e sugeriu que poderia servir como um romance, biomarcador não invasivo nesta câncer [32]. Jiang e colegas também mostraram uma regulação positiva de miR-125b in vivo e in vitro no carcinoma do endométrio [33]. Além disso, a sobre-expressão de miR-125b tem sido investigada em vários tipos de câncer, como câncer de pâncreas [34], o câncer de próstata [35], o cancro da mama [36,37], câncer de pulmão [38], glioblastoma [39], o cancro oligodendroglial [ ,,,0],7], entre outros tipos de câncer. Por outro lado, o miR-125b tem sido mostrado para ser regulada negativamente em um número de tumores, tais como cancro da bexiga [40], o cancro esofágico [41], osteossarcoma [42], o cancro da próstata [43], do cancro do fígado [44], o cancro da mama [ ,,,0],45], o câncer de pulmão de não pequenas células (CPNPC) [46], o cancro da mama [47], câncer gástrico [48], glioblastoma [49] etc. no cancro do ovário, os estudos contraditórios sobre miR-125b tornaram uma necessidade para examinar o seu papel profundamente. Lee et al. relatou uma regulação baixa de miR-125b em linhas de tecido de câncer e células de ovário em comparação com controles saudáveis ​​[50]. Luo e colegas também relataram recentemente uma regulação negativa de miR-125b em tecido de cancro do ovário e linhas celulares [51]. Gadducci et ai. também observados resultados semelhantes [52]. He et al. sugerido uma nova abordagem terapêutica utilizando o miR-125b imitar no tratamento de cancro do ovário [53]. Guan et al. relataram que a sobre-expressão de miR-125b resultou na inibição da proliferação de células do cancro do ovário [54]. Por outro lado, Kong e colegas relataram uma regulação positiva de miR-125 em cancro do ovário, sugerindo que a sobre-regulação da expressão de miR-125b contribui para a resistência a cisplatina através da supressão da expressão BAK1 [55]. expressão diversa de miR-125b foi relatada em linhas celulares de cancro do ovário resistentes aos medicamentos por Sorrentino et al [56].

A associação de miR-125b com várias características clinicopatológicas refletir que miR-125b pode funcionar como um início biomarcador para o câncer de ovário. A expressão elevada nas fases iniciais em relação ao estágio avançado fala volumes de seu significado no que indica o início da doença. A expressão de miR-125b em relação ao status de estado metástase e linfonodo distante sugerem seu possível potencial no diagnóstico precoce do câncer de ovário.

Conclusão

O aumento do número de estudos têm mostrado que o miR -125b desempenha um papel crucial em diversos processos celulares e muitas doenças, especialmente carcinomas. É importante salientar que as funções de miR-125b são controversos em diferentes tipos de cânceres. Assim, as propriedades controversos de miR-125b em vários tumores sugerem que miR-125b têm funções distintas na patogênese e progressão do câncer, enquanto que os mecanismos subjacentes no contexto célula diferente precisa de maior validação. Os avanços que miR-125b detém em aplicações clínicas precisam de um olhar mais atento para o tratamento futuro do cancro.

Informações de Apoio

S1 Fig. padrão de banda eletroforética para hipermetilação para um painel de genes supressores de tumor visualizados em gel de agarose a 2% num transiluminador UV

doi:. 10.1371 /journal.pone.0153902.s001

(EPS)

S1 Table. Seqüência dos iniciadores com temperaturas de recozimento e tamanho da faixa utilizados para MS-PCR

doi:. 10.1371 /journal.pone.0153902.s002

(RTF)

Reconhecimentos

Estamos grato ao Dr. V Sreenivas por sua ajuda e cooperação na análise estatística deste manuscrito.