Abstract
Fundo
A sinalização angiogênico independente de VEGF desempenha um papel importante no desenvolvimento do câncer colorretal (CRC). No entanto, a sua implicação no resultado clínico de CRC não foi relatada. Este estudo teve como objetivo investigar a associação entre variações genéticas em várias grandes genes da via de sinalização independente de VEGF ea sobrevida global dos pacientes com CCR.
Métodos
Sete polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) em quatro importantes genes angiogénicos independente de VEGF (
ANGPT1
,
AMOT
,
DLL4
e
ENG
) foram genotipados em uma população chinesa com 408 pacientes com CCR.
resultados
Um SNP, rs1954727 no
ANGPT1
, foi significativamente associada à sobrevida global CRC. Em comparação com os pacientes com o tipo selvagem homozigoto genótipo rs1954727, aqueles com genótipos variantes heterozigotos e homozigotos exibiu uma sobrevida global favorável, com uma taxa de risco (HR) de 0,89 (95% intervalo de confiança [IC] de 0,55-1,43,
P
= 0,623) e 0,32 (IC 95% 0,15-0,71,
P
= 0,005), respectivamente (
P
tendência = 0,008). Na análise estratificada, essa associação permaneceu significativa em pacientes que receberam quimioterapia (
P
tendência = 0,012), mas não naqueles sem quimioterapia. Nós ainda avaliados os efeitos da quimioterapia sobre a sobrevivência CRC que foi estratificada pelos genótipos rs1954727. Descobrimos que a quimioterapia resultou em um significativamente melhor sobrevida global em pacientes com CCR (HR = 0,44, 95% CI ,26-,75,
P
= 0,002), que foi especialmente proeminente nos pacientes com o genótipo heterozigoto de rs1954727 (HR = 0,45, 95% CI ,22-,92,
P
= 0,028).
Conclusão
Nossos dados sugerem que rs1954727 no
ANGPT1
gene pode ser um biomarcador prognóstico para a sobrevida global dos pacientes com CCR, especialmente naqueles submetidas à quimioterapia, uma descoberta que garante validação em populações independentes maiores
Citation:. Dai J, Wan S, Zhou F, Myers RE, Guo X, Li B, et al. (2012) polimorfismo genético em uma ressecção cirúrgica VEGF-Independent Angiogenesis Gene ANGPT1 e sobrevida global de pacientes com câncer colorretal em seguida. PLoS ONE 7 (4): e34758. doi: 10.1371 /journal.pone.0034758
editor: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japão
Recebido: 07 de outubro de 2011; Aceito: 05 de março de 2012; Publicação: 04 de abril de 2012
Direitos de autor: © 2012 Dai et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. O trabalho relatado aqui é apoiado por uma bolsa de arranque entre Thomas Jefferson University, conceder 2009CB521704 do Programa Nacional de Pesquisa básica da China, e concede 30.872.927 da National Natural Science Foundation da China. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
em todo o mundo, o cancro colorectal (CRC) é a terceira neoplasia maligna mais comum e a quarta principal causa de morte por câncer com uma estimativa de 1,234,000 novos casos e 608.000 mortes em 2008 [1]. CRC é uma doença que é largamente influenciado pelo estilo de vida e factores dietéticos [2], no entanto, estudos recentes sugeriram que as variações genéticas inter-individuais podem afectar significativamente o risco de CRC [3], [4], [5]. Além disso, a acumulação de provas, incluindo aqueles dos seus próprios estudos, também tem mostrado que polimorfismos de um único nucleótido (SNPs) podem ser utilizados como biomarcadores substitutos do fundo genético de pacientes de CRC para prever a resposta terapêutica e prognóstico [6], [7], [8], [9].
a angiogénese tumoral, a geração de novos vasos sanguíneos, é um processo celular fundamental que influencia o crescimento de células de tumor, invasão, recorrência loco-regional, e disseminação metastática de CRC, tornando- um alvo atraente para o desenvolvimento de drogas anticâncer crescimento celular [10] .O tumor, invasão e metástases são fortemente influenciados pelo equilíbrio das funções de fatores angiogênicos e anti-angiogénicos endógenos [10]. Os factores de crescimento vascular endotelial (VEGFs) e seus receptores (VEGFRs) desempenham um papel central na via de angiogénese [11]. Os inibidores funcionais de VEGF e VEGFR, tais como anti-VEGF neutralizantes de anticorpos e moléculas pequenas que bloqueiam a actividade de tirosina-quinase de VEGFR, foram aprovados como terapias anti-angiogénese para muitos cancros, incluindo CRC [12]. No entanto, a grande resistência às terapias anti-angiogénicas de segmentação da via VEGF estimulada a busca de tratamentos destinados a via angiogénese independente de FCEV [12], [13], tais como as vias pró-angiogénicos mediadas por angiopoietinas /TIE-2 e Delta /Notch [14], [15], bem como anti-angiogênico vias mediadas por proteínas angiomotin e endoglina [16], [17].
variações genéticas no
gene VEGF
têm foi relatado que modulam a expressão do gene de VEGF [18], [19], [20]. Eles também têm sido associadas com a etiologia e a evolução clínica da CRC [21], [22], [23]. No entanto, embora os estudos básicos revelaram um papel essencial dos genes da via independente de VEGF na etiologia e evolução clínica de CRC, nenhum estudo foi relatado na associação entre as variações genéticas destes genes e CRC prognóstico. O objetivo do estudo piloto foi avaliar a associação entre SNPs em várias grandes genes da via angiogênico independente de VEGF com a sobrevida global dos pacientes com CCR.
Materiais e Métodos
Ética
Este estudo foi aprovado pelos conselhos de revisão institucionais da Quarta Universidade médica Militar. Um consentimento informado por escrito com uma assinatura foi obtida para cada paciente.
população de pacientes e coleta de dados clínicos
Este estudo incidiu sobre os SNPs gene angiogênese independente de VEGF como potenciais preditores de CRC prognóstico. Portanto, todos os indivíduos incluídos no estudo tinham histologicamente confirmados CRC. Originalmente, 496 pacientes com CCR foram recrutados entre fevereiro de 2006 e abril de 2010 a partir dos Departamentos de Cirurgia Geral no Hospital Xijing eo Hospital Tangdu que são filiados com a Quarta Universidade Médica Militar, em Xi’an, China. Não houve restrições de recrutamento sobre idade, sexo e estágio do câncer. Todos os pacientes de CRC não tinha história prévia de outros tipos de câncer, quimioterapia ou radioterapia. Todos os pacientes com CCR foram recentemente diagnosticados e histologicamente confirmados como tendo adenocarcinoma. Para os fins deste estudo, 88 pacientes foram excluídos, pelas seguintes razões: não foi submetido a cirurgia ou operação paliativa só recebeu (26 pacientes), tinha informação incompleta clínica ou não tinham seguimento (48 pacientes), morreu dentro de um mês cirurgia (6 doentes) e tinha baixa qualidade e /ou quantidade da amostra de ADN (8 pacientes). Finalmente, 408 pacientes cirurgicamente ressecados com completa clínica e acompanhamento de dados, bem como amostras de DNA de alta qualidade foram incluídos no presente estudo. Todos os pacientes eram chineses han.
Os dados demográficos e clínicos
informação demográfica e clínica detalhada foi recolhida através de entrevista pessoal, revisão de prontuários médicos, ou consulta com o tratamento médicos. Os dados demográficos recolhidos incluem idade, sexo, etnia, tabagismo, status de beber, e índice de massa corporal (IMC). Os dados clínicos recolhidos incluem momento do diagnóstico, tempo de cirurgia e /ou quimioterapias, momento da morte, o estágio do tumor, diferenciação, local localização, linfonodo invasão, protocolo de tratamento, e CEA sérico (antígeno carcinoembrionário). Um padrão de acompanhamento foi realizado por um especialista clínico treinado por meio de entrevista no local, chamada direta ou revisão de prontuários médicos. Os últimos dados de acompanhamento nesta análise foi obtida em fevereiro de 2011. Para paciente inscrito a partir de agosto de 2008, de 5 ml de sangue estava disponível para extração do DNA genômico utilizando o E.Z.N.A. Sangue DNA Midi Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA). Para pacientes inscritos antes de Agosto de 2008, o DNA genómico foi extraído de cerca de 100 mg de tecidos normais adjacentes obtidos por um patologista, após a cirurgia utilizando a E.Z.N.A. Kit DNA de tecidos (Omega Bio-Tek).
selecção SNP e genotipagem
Quatro genes importantes na via angiogênico independente de VEGF foram estudados, incluindo
AGNPT1
que codifica uma TIE2 agonista que estimula a via de sinalização de PI3K-Akt como um sinal de sobrevivência e estabiliza vasos sanguíneos,
Dll4
(Delta-4 como ligando), que codifica uma proteína que é segregada a partir de células endoteliais promove a angiogénese e não pela supressão -funcional surgimento de células endoteliais vasculares,
(Angiomotin) AMOT
que codifica um inibidor da angiostatina que medeia a formação de tubos e a migração de células endoteliais em relação a factores de crescimento, durante a formação de novos vasos sanguíneos, e
PRT
(Endoglin) que codifica um componente do complexo receptor do factor de crescimento transformador beta envolvido na angiogénese, desenvolvimento cardiovascular, e a homeostase vascular. SNPs potencialmente funcionais, em regiões funcionais, incluindo promotores, exons e regiões não traduzidas (UTRs) foram selecionados usando um conjunto de ferramentas de seleção SNP baseados na Web (disponível gratuitamente em https://snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) , pelos quais se pode seleccionar os SNPs baseado em desequilíbrio de ligação (LD) e previu características funcionais tanto de SNPs de codificação e não de codificação. As ‘e 3’ que flanqueiam regiões 5 foram arbitrariamente fixada em 1000 pb para todos os genes. SNPs validados Apenas foram seleccionados e SNPs com frequência menor alelo (FAM) 5% da população Asiática foram excluídos. No caso de vários SNPs potencialmente funcionais dentro do mesmo bloco de haplótipo (definido pelo coeficiente de ligação r
2 0,8), apenas um foi incluído SNP. Finalmente, um total de sete SNPs foram identificados para os quatro genes, incluindo dois SNPs em
ANGPT1
(rs1954727 e rs9297395), três SNPs em
AMOT
(rs2286064, rs2286063, rs640009), um SNP em
DLL4
(rs12439845) e um SNP em
ENG
(rs7865146). A genotipagem foi realizada utilizando o sistema de genotipagem Sequenom Iplex (Sequenom Inc, CA). O pessoal do laboratório que realizam genotipagem estavam cegos à informação dos pacientes. A taxa média de chamadas para a genotipagem foi de 99,4%. medidas de controle de qualidade rigoroso foram implementadas durante a genotipagem com mais de 99% de concordância entre as amostras genotipados em duplicado.
A análise estatística
O desfecho avaliado neste estudo foi a sobrevida global, definida como o tempo desde a cirurgia inicial à morte ou último follow-up. taxa de risco (HR) e intervalo de confiança de 95% (IC 95%) foram estimadas usando um multivariada Cox modelo de riscos proporcionais, o ajuste para idade, sexo, tabagismo, status de beber, o IMC, a posição do tumor, diferenciação do tumor, estágio do tumor e quimioterapia , onde apropriado. Haplótipo /diplotype foi determinada utilizando o software HelixTree (dourado Helix, Inc.) e HR foi estimada pela multivariada Cox modelo de riscos proporcionais, usando o haplótipo /diplotype contendo todos os alelos de tipo selvagem como referência. Os testes para interações entre SNPs e fonte de DNA foram realizados através da inclusão de um termo de produto cruzado para o modelo de riscos proporcionais de Cox. Teste log-rank foi utilizado para avaliar as diferenças de sobrevida global entre diferentes grupos de pacientes. pacote estatístico SAS (SAS versão 9.2, Cary, NC) foi utilizado para as análises. Todos os
valores P
neste estudo foram de dois lados.
P
≤0.05 foi considerado o limiar de significância estatística.
Resultados
Pacientes Características
Um total de 408 pacientes com CCR cirurgicamente ressecados foram incluídos neste estudar, com uma idade média de 59,4 anos (variando de 22 a 90 anos) e IMC médio de 22,7 (variação de 15,8-32,9). Entre os pacientes, 56,4% (n = 230) eram do sexo masculino e 46,6% (n = 178) eram do sexo feminino. A maioria dos pacientes nunca eram fumantes (70,8%) e nunca bebedores (89,5%). A percentagem das pacientes com cancro do cólon (47,1%) foi ligeiramente menor do que os doentes de cancro do recto (52,9%). Cerca de 47,1% dos doentes tinham tumor estádio II, enquanto fase 0, I, III e IV os tumores estavam presentes em 2,0%, 14,2%, 27,2% e 9,6% dos pacientes, respectivamente. Cerca de 66,4% dos pacientes tinham tumores moderadamente diferenciado e 78,2% pacientes foram tratados com quimioterapia após a cirurgia. Em um tempo médio de acompanhamento de 22,9 meses, cerca de 23,0% (n = 94) dos pacientes foram falecidos a partir do último acompanhamento (Fevereiro de 2011) (Tabela 1).
Associação entre SNPs individuais e sobrevida global em pacientes com CCR
as associações dos sete SNPs selecionados com a sobrevivência CRC foram analisados utilizando uni e análises multivariadas o ajuste para idade, sexo, tabagismo, status de beber, o IMC, a posição do tumor, diferenciação tumoral , estágio do tumor e quimioterapia. Os resultados foram resumidos na Tabela 2. Entre eles, um SNP, rs1954727 localizado na região 3 ‘UTR do
ANGPT1
gene, foi significativamente associada com a sobrevida global em pacientes com CCR, tanto univariada e multivariada. Na análise multivariada, em comparação com o tipo selvagem homozigótico genótipo (WW), o heterozigoto (WV) e genótipo homozigoto variante (VV) da rs1954727 foi associada com uma HR de 0,89 (IC de 95% 0,55-1,43,
P
= 0,623) e 0,32 (95% CI 0,15-0,71,
P
= 0,005), respectivamente, com um efeito significativo dose-resposta observada (
P
tendência = 0,008, Tabela 2 ). Teste logarítmico indicou uma diferença significativa na sobrevida global entre o tipo selvagem e genótipos variantes homozigotos de rs1954727 (log rank
P
= 0,019, Figura 1). Estes resultados indicaram que rs1954727 foi um preditor independente de sobrevida CRC em nossa população de estudo. Além disso, foram selecionados aleatoriamente 50 pacientes incluídos no estudo com tanto sangue e nos tecidos normais disponíveis e genotipados todos os sete SNPs em ambos os DNAs de sangue e tecidos para esses pacientes. Os resultados de genotipagem foram 100% concordantes entre as amostras de sangue e de tecido de DNA. Além disso, para cada um dos sete SNPs, foi realizado um teste de interação (heterogeneidade) entre a fonte de SNP e DNA e não identificou nenhuma interação significativa (
P Compra de interação para a sobrevida global varia de 0,143 para rs1954727 para 0,651 para rs2286063, dados não mostrados). Em conjunto, estas linhas de evidências indicam que as diferentes fontes de DNA não afetou os resultados identificados neste estudo.
Associação de rs1954727 com sobrevida global dos pacientes CRC estratificados por características do hospedeiro
Foram analisados ainda mais o efeito de rs1954727 na sobrevida global em pacientes com CCR estratificados por características demográficas e clínicas. Como mostrado na Tabela S1, o melhor sobrevida global significativa conferida pela rs1954727 foi observado em pacientes mais velhos (HR = 0,12, 95% CI, 0,03-0,60,
P
= 0,010), pacientes do sexo masculino (HR = 0.20, 95% CI, 0,05-0,75,
P
= 0,017), que nunca fumaram (HR = 0,28, 95% CI, 0,11-0,73,
P
= 0,009), nunca bebedores (HR = 0,35, 95% CI, 0,15-0,84,
P
= 0,018), e os pacientes com menor nível de escolaridade (HR = 0,28, 95% CI, 0,08-0,94,
P = 0,040
), com a quimioterapia (HR = 0,33, 95% CI, 0,14-0,79,
P
= 0,012), com câncer de cólon (HR = 0,09, 95% CI, 0,02-0,40,
P
= 0,002), com a diferenciação pobre e moderada tumor (HR = 0,32 CI, 95%, 0,13-0,78,
P
= 0,012), com estágio 3 ou 4 tumores (CI HR = 0,16, 95%, 0,04-0,65,
P
= 0,011), e com tanto maior ou menor IMC (HR = 0,20, 95% CI, 0,04-0,97,
P
= 0,045, ou HR = 0,32, IC 95%, 0,11-0,92,
P
= 0,035, respectivamente). O efeito dose-dependente significativa conferida pela rs1954727 foi evidente em pacientes que eram mais velhos (
P
tendência = 0,006), do sexo masculino (
P
tendência = 0,012), não fumador (
P
tendência = 0,021), não bebedor (
P
tendência = 0,025), e os pacientes com maior IMC (
P
tendência = 0,025), com a quimioterapia (
P
tendência = 0,012), com a posição do tumor de câncer de cólon (
P
tendência = 0,012), com fraca e moderada diferenciação tumoral (
P
tendência = 0,016), e com o estágio do tumor avançado de 3-4 (
P
tendência = 0,003). Entre os 319 pacientes que receberam quimioterapia, 308 (96,6%) foram submetidos ao regime FOLFOX, incluindo o ácido folínico (FOL), fluorouracil (F) e oxaliplatina (OX). Restringindo a análise a doentes a receber a FOLFOX produziu resultados semelhantes aos da análise de corrente (dados não mostrados).
efeitos da quimioterapia modulador sobre a sobrevivência global CRC por rs1954727
Como a maioria de pacientes com CCR neste estudo foram tratados com quimioterapia, avaliamos ainda mais os efeitos moduladores sobre a associação entre quimioterapia e sobrevida global paciente, estratificada por rs1954727. Como mostrado na Tabela 3, os pacientes submetidos a quimioterapia teve um significativamente melhor sobrevida global com uma HR de (IC 95%, 0,26-0,75,
P
= 0,002) 0,44, em comparação com pacientes sem quimioterapia. Este efeito significativo na sobrevida dos pacientes conferido pela quimioterapia foi observada apenas em pacientes com o genótipo heterozigoto de rs1954727 na análise estratificada (HR = 0,45, 95% CI 0,22-0,92,
P
= 0,028), mas não em os portadores do homozigoto de tipo selvagem ou variante genótipo.
o haplótipo e diplotype de
ANGPT1
gene e CRC sobrevida global
as análises de haplótipos e diplotype foram conduzidos para avaliar o efeito combinado dos dois SNPs no
ANGPT1
gene na sobrevida global CRC. Como mostrado na Tabela 4, havia quatro haplótipos na ordem de rs9297395 e rs1954727 (W_W: 52,5%, W_V: 42,2%, V_W: 4,3%, e V_V: 1,0%) e três diplotypes (W_W-W_W: 28,8%, W_W-W_V: 44,3%, e W_V-W_V: 19,7%), com uma frequência 1% na população estudada. Quando comparado com o haplótipo contendo o alelo de tipo selvagem para os dois SNPs (W_W), os pacientes com o haplótipo de W_V exibiu um significativamente melhor sobrevida global (HR = 0,59, 95% CI 0,42-0,83,
P
= 0,002), o que foi consistente com a análise principal efeito do SNP rs1954727. Para a análise diplotype, quando comparado com o diplotype contendo o homozigoto genótipo tipo selvagem para ambos SNPs (W_W-W_W), diplotype contendo uma cópia do haplótipo W_V (W_W-W_V) e duas cópias do W_V haplótipo (W_V-W_V) exibiram uma sobrevida progressivamente melhorado global com um HR de 0,74 (IC 95% 0,44-1,24, P = 0,247) e 0,30 (IC 95% 0,13-0,67,
P
= 0,004), respectivamente. Também realizamos o haplótipo e analisa diplotype para os três SNPs em
AMOT
gene, no entanto, não foram observados resultados significativos (dados não mostrados).
Discussão
neste estudo, foi observada uma associação significativa da sobrevida global em uma coorte de 408 pacientes CRC-tratados cirurgicamente com uma variante genética, rs1954727, no
ANGPT1
, um gene crucial na sinalização angiogênico independente de VEGF via. Além disso, foi identificada uma interação plausível entre este SNP e quimioterapia na modulação sobrevida do paciente CRC.
inibidores da angiogênese visando o VEGF via, tais como bevacizumab, sunitinib, sorafenib e sinalização, têm demonstrado eficácia terapêutica significativa em vários tipos de câncer e foi aprovado pela Food and Drug Administration dos Estados Unidos no tratamento do câncer [24]. No entanto, estes tratamentos anti-angiogénese-VEGF como alvo frequentemente resultará em apenas respostas transientes em doentes com cancro, principalmente devido aos dois modos de resistência à inibição da angiogénese, resistência adaptável e não responsividade intrínseca [13]. Ambos os modos de resistência pode ser atribuído à heterogeneidade inerente das células tumorais geneticamente instáveis, a presença de factores angiogénicos redundantes, e o recrutamento de células hematopoiéticas e células inflamatórias para dentro da massa do tumor [13]. É concebível que as abordagens terapêuticas visando simultaneamente vários fatores angiogênicos, vias inflamatórias e processos de metástase poderia induzir clinicamente mais respostas significativas [25]. A via ANGPT-TIE apresenta uma oportunidade atraente para tal intervenção terapêutica, uma vez que não só é crucial para a angiogênese e homeostase vascular de forma independente-VEGF, mas também fornece uma ligação importante entre a angiogênese e as vias de inflamação [25].
família de proteínas humano de TIE-ANGPT é composto de três ligandos, ANGPT1, ANGPT2 e ANGPT4, bem como dois receptores, Tie1 e de TIE2. ANGPT1 é o mediador mais importante da via independente de VEGF-pró-angiogénico de sinalização, o qual activa a via de PI3K /Akt a jusante através da interacção com a proteína de TIE2 [26], [27]. ANGPT2 ANGPT1 inibe a ligação ao receptor de TIE2 e que impede a sua activação [28]. O equilíbrio dinâmico e expressão sequencial de ANGPTs e VEGF é necessário para manter a angiogénese [29], [30]. A sobre-regulação de ANGPT1 tem sido investigada em muitos cancros, o que sugere que ANGPT1 está fortemente correlacionada com a malignidade de tumores [25]. No entanto, vários estudos relataram um efeito inibidor de ANGPT1 na expansão vascular patológico, indicando que ANGPT1 também pode funcionar como um supressor do tumor em vários cancros, incluindo CRC [31], [32], [33], [34]. Estes resultados foram consistentes com os relatórios de vários estudos independentes que mostram que a maior proporção de ANGPT2 /ANGTP1 foi associada com mau prognóstico de várias doenças malignas incluindo CRC [25]. Estes resultados paradoxais sugerem os efeitos da ANGPT1 sobre as características do tumor eo prognóstico pode ser específico do câncer e também depende de outros genes relacionados com a angiogénese.
variações genéticas em genes ANGPT pode levar à produção de gene alterado e resultar em ativação /inactivação do gene. SNPs em
ANGPT1
gene têm sido associados com o risco de doenças, tais como doenças auto-imunes, artrite juvenil idiopática, e hipertensão portopulmonar [35], [36]. No entanto, até à data, não houve nenhum relato de uma associação de
ANGPT1
SNPs com o risco e evolução clínica de cânceres estudo. Neste estudo, identificamos um
ANGPT1
SNP, rs1954727, que pode prever a sobrevida global dos pacientes com CCR após a cirurgia. Este SNP está localizado na 3 ‘UTR de
ANGPT1
gene. SNPs funcionais nessa região pode afetar messenger estabilidade RNA ou a ligação microRNA. Uma pesquisa bioinformática do banco de dados PolymiRTS não identificou nenhum sítio de ligação potencial miRNA na região do entorno imediato deste SNP [37]. No entanto, mais uma pesquisa conduziu à identificação de quatro SNP na 3’UTR de
ANGPT1
gene que estão localizados dentro de regiões de ligação putativo miARN (dados não mostrados). O SNP mais próxima fica a cerca de 600 nucleótidos de distância do rs1954727. caracterizações funcionais, tais como PCR em tempo real, seguido de ensaio de luciferase serão necessários para determinar se rs1954727 tem qualquer impacto fisiológico direto na expressão do RNA mensageiro de
ANGPT1
.
Na análise estratificada, encontramos o efeito protetor conferido pelo rs1954727 foi mais proeminente em pacientes submetidos a quimioterapia (Tabela S1). Estudos anteriores relataram um aumento significativo da atividade antitumoral sobre a utilização conjunta de anticorpo ANGPT1 e quimioterapia no tratamento de tumores sólidos, incluindo CRC [38]. Estas linhas de evidência nos leva a avaliar ainda mais o efeito modulador da quimioterapia na sobrevida dos pacientes estratificados pelos genótipos de rs1954727. Consistente com a constatação de que os genótipos variantes de rs1954727 conferido melhor sobrevida global em doentes tratados com quimioterapia, encontramos a sobrevivência melhorada conferida pela quimioterapia permaneceu evidente em pacientes com o genótipo heterozigoto de rs1954727 (Tabela 4). Observamos, também, que, em pacientes com o genótipo homozigoto variante de rs1954727, a
P valor
não foi significativa (P = 0,297), embora a sobrevida global melhorada conferida pela quimioterapia foi muito mais proeminente (HR = 0,19). Isto pode ser devido a uma estimativa instável resultante do pequeno número de pacientes neste grupo (apenas uma morte em pacientes sem quimioterapia, Tabela 3) estudos .Future com maior tamanho da amostra são necessários para proporcionar um poder estatístico suficiente para a análise das interacções entre rs1954727 e quimioterapia na sobrevida dos pacientes.
Há vários pontos fortes deste estudo. Os pacientes foram inscritos de Xi’an e área adjacente, uma região que é altamente atraente para a realização de pesquisas de base populacional devido à estabilidade geográfica com taxa baixa mobilidade. Além disso, os pacientes analisados neste estudo foram altamente homogêneo, em que todos os pacientes tinham adenocarcinoma e foram tratados cirurgicamente para remover os tumores primários. Além disso, todos os tratamentos de quimioterapia foram iniciadas dentro de 2 meses da cirurgia e quase 80% dos pacientes receberam quimioterapia. As características muito homogêneas de pacientes e tratamentos, bem como a baixa taxa de perda de paciente para acompanhamento, bastante reduzido os efeitos de confusão das modalidades terapêuticas heterogéneas em muitos outros estudos de biomarcadores semelhantes de CRC prognóstico. As limitações deste estudo incluem a questão de generalização, porque o nosso estudo foi restrita aos chineses han. Uma avaliação mais adicional é necessário determinar se estes resultados podem ser generalizados para outros grupos étnicos. Além disso, o tamanho da amostra moderada limitado a validade de algumas análises estratificadas com pequeno tamanho da amostra. Analisou-se o poder do estudo para a análise do efeito principal, bem como a análise estratificada por quimioterapia. Sob a condição de um modelo de genética aditiva (usado na análise deste estudo), com efeito monotônica, um MAF de 43,5% para rs1954727, o único SNP significativa identificados neste estudo, 23,0% da taxa de mortalidade entre a população total do estudo, a tempo médio para a morte de 15,2 meses em pacientes falecidos e um tempo médio de seguimento de 23,9 meses em pacientes censurados, temos cerca de potência de 82% para detectar uma HR de 0,6 (genótipo heterozigoto vs. homozigoto de tipo selvagem genótipo) e 0,4 (genótipo homozigoto variante vs. genotipo selvagem). O poder é um pouco maior se estiver usando um teste de tendência. Quando a análise é restrita aos pacientes que receberam quimioterapia, o nosso poder é de aproximadamente 70% para detectar os tamanhos de efeito acima mencionados. No entanto, o nosso poder é limitado quando a análise é restrita a 89 pacientes sem quimioterapia ou alguns outros SNPs não significativos neste estudo que têm um baixo MAF, e os resultados dessas sub-alimentado análises são exploratório e devem ser interpretados com cautela . No entanto, a inscrição desta população ainda está em curso com uma baixa taxa de perda paciente, o que nos permitirá obter maior poder estatístico para análises em profundidade no futuro.
Em conclusão, nosso achado sugere que uma polimorfismo genético no
ANGPT1
gene está associada com uma significativamente melhor sobrevivência global em pacientes de CRC após a cirurgia. Futuros estudos com populações maiores são necessários para validar esta conclusão.
Informações de Apoio
Tabela S1.
Associação de rs1954727 em ANGPT1with sobrevida global em pacientes com CCR estratificados por características do hospedeiro.
doi: 10.1371 /journal.pone.0034758.s001
(DOC)
Reconhecimentos
Agradecemos ao Dr. Marie Dennis e Ms. Heidi Swan (Divisão de Ciência da População, Departamento de Oncologia médica, Thomas Jefferson University) para a editoração científica.