Abstract

Fundo

A evidência sugere um efeito de confusão de incompatibilidade reparar status (MMR) na resposta imune no câncer colorretal. A identificação das células imune inata e adaptativa, que pode complementar o efeito prognóstico estabelecido de CD8 em pacientes de câncer colorretal MMR-proficientes, representando 85% de todos os casos, não foi realizada.

Metodologia /Apreciação principais

cânceres colorretais de um teste (n = 1.197) e validação externa coorte (n = 209) dos cânceres colorretais MMR-proficientes foram montados em microarrays de tecido soco simples e múltiplas. quantificação imuno-histoquímica (pontuação 0-3) foi realizada para CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD68, CD163, FoxP3, GranzymeB, iNOS, triptase de mastócitos, MUM1, PD1 e células reactivas TIA-1 tumor-infiltrantes (TILs). experimentos co-expressão em amostras de câncer colorretal frescos utilizando marcadores específicos população de células foram realizados. No grupo de teste, os números mais elevados de células CD3 + (p 0,001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (p 0,001), CD45RO + (p = 0,048), FoxP3 + (p 0,001), GranzymeB + (p 0,001), iNOS + (p = 0,035), MUM1 + (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034), TIA-1 + TIL (p 0,001) foram ligados ao resultado favorável. O ajuste para idade, sexo, estágio TNM e terapia pós-operatória, maior CD8 + (p 0,001; HR (IC 95%): 0,66 (0,64-0,68)) e TIA-1 + (p 0,001; HR (IC 95% ): 0,56 (0,5-0,6)) foram fatores prognósticos independentes. Além disso, entre os pacientes com CD8 + infiltrados, TIA-1 ainda mais pacientes estratificados 355 (35,6%) em subgrupos de prognóstico (p 0,001; RH (95% CI): CI 0,89 (95%: 0,8-0,9)). Os resultados foram confirmados na coorte de validação (p = 0,006). TIA-1 + células foram principalmente CD8 + (57%), mas também corados para TCRγδ (22%), CD66b (13%) e apenas raramente de CD4 +, macrófagos e células NK marcadores.

Conclusões

TIA-1 adiciona informações de prognóstico para a fase TNM e terapia adjuvante em pacientes com câncer colorretal MMR-proficientes. O efeito prognóstico da CD8 + TIL é confundida pela presença de TIA-1 + que se traduz em melhor estratificação de risco de aproximadamente 35% de todos os pacientes com câncer colorretal MMR-proficientes

Citation:. Zlobec I, Karamitopoulou E, Terracciano G, Piscuoglio S, Iezzi L, Muraro MG, et al. (2010) TIA-1 citotóxica Granule-Associated RNA Binding Protein melhora o desempenho prognóstico da CD8 no Mismatch Repair-avançado cancro colorectal. PLoS ONE 5 (12): e14282. doi: 10.1371 /journal.pone.0014282

editor: Alfons Navarro, da Universidade de Barcelona, ​​Espanha |

Recebido: 03 de junho de 2010; Aceito: 16 de novembro de 2010; Publicação: 10 de dezembro de 2010

Direitos de autor: © 2010 Zlobec et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Os autores foram financiados pelo Instituto de Patologia, Hospital Universitário de Basel, conta do pool Research. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

O prognóstico dos pacientes com câncer colorretal pode ser visto como uma interação entre fatores tumor-e relacionados ao hospedeiro [1]. Evidências experimentais ao longo dos últimos 20 anos fornece suporte para o conceito de immunosurveilllance em câncer, implicando ambas as respostas imune inata e adaptativa [2]. No cancro colorectal, CD3, CD4, CD8, CD20, granzima B, e FoxP3 + linfócitos infiltrantes de tumor (TILs), foram identificados como potenciais indicadores do resultado, enquanto que a identificação de linfócitos T citotóxicos, mastócitos e células dendríticas como eliciadores de anti -tumor respostas sublinhou novos caminhos para potenciais imunoterapias [3], [4], [5].

no cancro colorectal, o equilíbrio entre host- e fatores relacionados ao tumor é exemplificado por meio de reparação incompatibilidade (MMR) -deficient casos esporádicos, sendo responsável por aproximadamente 15% de todos os tumores e caracterizada por máquinas MMR com defeito [6]. Os pacientes com estes cancros MMR deficientes são descritos como tendo abundante T citotóxicas CD8 +-infiltrado celular [7] e estão muitas vezes ligados a características mais “favoráveis” relacionadas com o tumor, ou seja, a presença de uma configuração de fronteira do tumor empurrar, a presença de um distintivo banda da inflamação linfocítica peritumoral e pouca tumor de brotamento, esta última uma característica histomorfológica da transição epitelial mesenquimal [8]. Esta constelação fenotípica, por “basculamento da escala” a favor de uma defesa forte pode ser em parte responsável pela prognóstico mais favorável de doentes com MMR deficiente em comparação com tumores MMR-proficientes [9]. Curiosamente, apesar do efeito de confusão conhecidos do estado MMR nas respostas imunológicas em câncer colorretal, análises abrangentes de tipos de células envolvidas na resposta imune e inflamação ainda não foram sistematicamente realizadas para cânceres MMR-proficientes, abrangendo 85% de todos os casos de cancro colorrectal.

Portanto, o objetivo deste estudo foi determinar o benefício prognóstico adicional, sobre o desempenho de CD8 sozinho, de 12 biomarcadores imunológicas à base de tecidos em pacientes com câncer colorretal MMR-proficientes. Estes marcadores de proteínas, incluindo CD3, CD4, CD45RO, CD68, CD163, FoxP3, GranzymeB, iNOS, triptase de mastócitos, MUM1p, PD1 e TIA-1 foram selecionados especificamente para cobrir a mais ampla gama de possíveis tipos de células envolvidas na inata e adaptativa respostas imunes . Isto foi conseguido através de um grupo de teste inicial de 1197 pacientes e uma coorte de validação externa de 209 pacientes, respectivamente com os dados clínico-patológicas e acompanhamento completos.

Métodos

Ética Declaração

consentimento escrito foi determinada a partir dos pacientes para a sua informação a ser armazenada na base de dados do hospital e utilizadas para a investigação. O uso de tecido foi aprovado pelos Comitês do Hospital Universitário de Basel e Universidade de Atenas Ética correspondentes. espécimes clínicos recentemente excisadas incluídos neste estudo foram coletados de consentindo pacientes submetidos ao tratamento cirúrgico no Hospital Universitário de Basel.

grupo de teste

Pacientes e os espécimes características.

1420 pré-primário , pacientes com câncer operatório não tratados não selecionados esporádicos colorectal atendidos no Hospital Universitário de Basel entre os anos de 1987 e 1996 foram incluídos neste estudo. Hematoxilina e eosina (H E) manchado lâminas foram analisadas por um patologista gastrointestinal experiente (L.T.) e dados clínicos foram obtidos em prontuários de pacientes, sempre que disponíveis. Evolução clínica de interesse foi o tempo de sobrevida específica para o câncer. A tissue microarray destes 1420 pacientes foi construído. De cada paciente, a uma quadra do tumor representativo foi perfurado utilizando um cilindro de tecido de 0,6 mm de diâmetro. O tecido foi trazido em um bloco de parafina receptor (3 × 2,5 cm) usando um arrayer tecido semi-automatizado caseiro. 57 tecidos de mucosa colorretal normal foram incluídos como controle.

Métodos de Ensaio.

O tissue microarray foi histoquímica para 13 marcadores de proteínas imunológicas e marcadores reparação incompatibilidade. Protocolos para MLH1, MSH2, MSH6, CD8 e FoxP3 foram descritos em outro [10]. Resumidamente, os protocolos restantes foram realizados como se segue: CD163; NeoMarkers, MS-1103, anticorpos monoclonais, 1:40, tampão de citrato de pH 6, 100 ° C, 30 ‘; CD20; Dako, M0755, monoclonais, 01:50 pH 6 tampão de citrato, 100 ° C, 30 ‘; CD4; NeoMarkers, MS-1528, anticorpos monoclonais, 1:40, tampão de citrato de pH 6, 100 ° C, 60 ‘; CD68; Dako, M0876, monoclonais, 1:200, tampão de citrato pH 6, 100 ° C, 15 ‘; GranzymeB; Novocastra, NCL-L-gran-B, 1:10, tampão de citrato de pH 6, 120 ° C, 10 ‘, iNOS; Abcam, ab15323, policlonal, 1:100 tampão ER1, 20 ‘, triptase de mastócitos; Dako, M7052, monoclonal, 1:2000, sem recuperação; MUM1; Dako, M7259, monoclonais, 1:50, tampão de citrato de pH 6, 100 ° C, 30 ‘; PD1; R D Systems, AF1086, 01:40 monoclonal tampão de citrato pH 6, 120 ° C, 10 ‘; TIA-1; Immunotech, IM2550, monoclonal, 1:250, sem recuperação; CD3; Dako, monoclonais, tampão de citrato; 01:50; e CD45RO; Thermo Scientific UCHL-1, anticorpo monoclonal, tampão de citrato, 1:500. tecidos de controlo negativo foram testados e foram submetidos ao mesmo protocolo, com o anticorpo primário omitido.

marcadores de proteína foram marcados por três observadores (A.L., S. P., A.T.), analisando o número de células positivas por punção tissue microarray. Não foi utilizado nenhum software de análise de imagem. O número total de células imunorreactivas dentro do microambiente do tumor foi avaliada, independente da localização (intratumoral ou estromal). O número total de células por punção tissue microarray receberam notas de 0, quando não há células positivas estavam presentes, e os escores 1, 2 e 3, quando 1-10 células positivas, 11-50 células positivas e 50 células positivas por soco poderia ser observado, respectivamente. Para PD1 e iNOS, os casos foram classificados como a completa ausência ou presença de células positivas.

Grupo Validação

221, não consecutivos pacientes com câncer colorretal não selecionados tratados no Hospital Universitário Attikon, Universidade de Atenas, na Grécia, entre os anos de 2004 e 2006 foram incluídos como um grupo de validação independente. H E as lâminas foram revistos e os dados clínicos obtidos em prontuários de pacientes (Tabela 1). Evolução clínica de interesse foi o tempo de sobrevida específica para o câncer. A tissue microarray de ressecções de câncer colorretal primário destes 221 pacientes foi construído. A fim de excluir viés devido à possível heterogeneidade do tumor, cada paciente tinha vários tecidos tumorais e socos tomadas a partir de blocos fixados em formalina, embebidos em parafina usando um cilindro de tecido com um diâmetro de 0,6 mm, que foram posteriormente transferidos para bloco de parafina um destinatário usando um caseira arrayer tecido semi-automático. Cada paciente teve uma média de 4 socos tumorais incluídos na área, incluindo 2 do centro do tumor e 2 a partir da frente invasiva. A imuno-histoquímica foi realizada para o tissue microarray de acordo com os protocolos descritos acima para o grupo de teste. a expressão da proteína foi avaliada de acordo com o método de pontuação descrito acima por um patologista gastro-intestinal experiente (EK).

citometria de fluxo em amostras clínicas frescas

Dez amostras clínicas recentemente foram excisadas Os fragmentos recolhidos e tumorais foram picadas e enzimaticamente digerido, de modo a obter suspensões de células únicas. As células foram coradas superfície com isotiocianato de fluoresceina (FITC) marcado com anticorpos específicos para moléculas de CD4, CD16 ou CD66b (BD Pharmingen, San Diego, CA) ou γδ células T do receptor (TCR) (eBioscience, La Jolla, CA) e com anticorpos específicos para CD56 ou Vα24-Jα18 TCR (BD Pharmingen) APC-rotulados. Após lavagem, as células foram fixadas com 2% de formaldeído e, subsequentemente, permeabilizadas com saponina a 0,5% antes da coloração intracelular com anticorpos específicos-TIA-1 marcado com PE (Immunotech, Marselha, França).

Desenho do Estudo

o desenho do estudo é descrito na Figura 1. Resumidamente, após a exclusão de casos MMR-deficientes da coorte de teste, análise uni e modelos de tempo de sobrevivência multivariados foram avaliados para identificar as proteínas marcadores prognósticos independentes mais fortes e seu valor combinado. O valor prognóstico independente foi posteriormente avaliada em pacientes com câncer colorretal MMR-proficientes do grupo de validação.

(A) 1420 cânceres colorretais foram montados em microarrays de tecido e histoquímica para 13 marcadores de proteínas e proteínas de reparo incompatível (MMR). Foram excluídos os tumores deficientes em MMR. (B) 221 cânceres colorretais foram montados em um tissue microarray de vários socos e histoquímica para fatores prognósticos independentes referidos no Grupo de teste. tumores MMR-deficientes foram excluídos da análise e validação de efeitos prognósticos realizados nos 209 pacientes restantes.

Análise Estatística

A fim de evitar viés de dicotomizando imunorreatividade de proteínas, as análises foram realizada por análise de pontuação de 0, 1, 2 e 3 [11]. As curvas de Kaplan-Meier foram usadas para avaliar a influência da expressão da proteína sobre a sobrevivência global específico do cancro. A significância foi avaliada na análise univariada com o teste log-rank. Cox modelos de riscos proporcionais foram usadas para testar a influência em simultâneo sobre a sobrevivência global específico do cancro da expressão da proteína, juntamente com factores prognósticos conhecidos e a assunção de riscos proporcionais foi testada avaliando o log (-log (sobrevivência)) em função de log do tempo de sobrevivência gráficos. Em vez de executar a análise split-grupo, todos os modelos multivariados foram validados e IC 95% obtidos por meio de 200 repetições bootstrap dos dados [12], [13]. Todos os testes foram em frente e verso. variáveis ​​em falta foram considerados como estando em falta de forma aleatória. Nenhuma imputação foi feita em vez eliminação caso-wise foi realizado quando necessário. Os valores de p são relatados sem ajuste para múltiplas correções [14]. Todas as análises foram realizadas com o SAS V9.1 (O SAS Institute, Cary, NC, EUA).

Resultados

Grupo de teste

específicas de sobrevivência Cancer Analysis univariada ( Figura 2)

o tempo de sobrevivência mais favorável foi observada em doentes com elevado número de células CD3 + (p . 0,001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (p 0,001), CD45RO + (p = 0,048), FoxP3 + (p 0,001), GranzymeB + (p 0,001), iNOS + (p = 0,035), MUM + 1 (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034), TIA-1 + TIL (p 0,001). fotomicrografias representativas destes marcadores de proteínas e células imunorreactivas são mostrados na Figura 3.

Destaque marcadores são aqueles que mostram uma associação significativa com o prognóstico.

A) CD3, B) CD4, C ) CD8, D) CD45RO, E) FoxP3, F) granzima B, G) iNOS, H) MUM1, I) PD1, J) TIA-1.

sobrevivência Análisis- Multivariable específico do cancro .

marcadores significativos foram testados em dois modelos multivariados. O primeiro avaliou o efeito prognóstico dos marcadores de ajuste para os efeitos da idade no momento do diagnóstico, sexo, pT, pN, o grau do tumor e invasão vascular. CD3 (n = 945; 434 mortes, p = 0,128), CD4 (n = 1026; 491 mortes, p = 0,463), CD45RO (n = 866; 401 mortes, p = 0,181), FoxP3 (n = 1091; 519 mortes ; p = 0,185), GranzymeB (n = 987; 479 mortes, p = 0,091), iNOS (n = 1023; 493 mortes, p = 727), MUM1 (n = 1082; 516 mortes, p = 0,173), e PD1 (n = 1.096; 523 mortes; p = 0,389) não apresentaram um efeito sobre o tempo de sobrevivência após o ajuste para esses parâmetros prognósticos estabelecidos. Em contraste, CD8 (n = 1.019; 489 mortes; p 0,001) e TIA-1 (n = 1.005; 481 mortes; p 0,001) mantiveram o seu impacto altamente positivo e significativo sobre o resultado do paciente

Na. um modelo segundo tempo de sobrevivência (Tabela 2) o efeito de CD8 e TIA-1 foi novamente testado desta vez junto com a idade do paciente no momento do diagnóstico, sexo, pT, pN, metástase e terapia adjuvante. Os resultados sublinham um efeito positivo altamente significativo de dois marcadores: (1) células CD8 + (n = 292; 75 mortes; RH: CI 0,66 (95%: 0,64-0,68) e (2) TIA-1 + (n = 290; 82 mortes ; HR: (IC 95%: 0,5-0,6) 0,56)

Caracterização de células TIA-1-expressando

Dado que TIA-1 é a hipótese como um marcador para.. as células T CD8 + activadas, verificou-se a co-expressão de TIA-1 em células T CD8 + por citometria de fluxo em linfócitos infiltrados no tumor (TIL) a partir de 10 amostras clínicas recentemente excisadas. as percentagens do total de células TIA-1 + variou 0,86-6,52 (média :. 3,7 ± 1,6) (Figura 4A) Costaining com marcadores específicos para populações de células definidas confirmou que a maior população de TIA-1 + células é representado por células T CD8 + (57 ± 8%), seguido por células TCRγδ (22 ± 10% ) e CD66b + neutrófilos (13 ± 12%). em contraste percentagens negligenciáveis ​​de células T CD4 +, os macrófagos (identificadas como células CD16 + CD56-), células NK (identificada como células CD56 +) e células NK /T, (expressando Va24-Ja18 TCR), foram observados (Figura 4 B, C). TIA-1 foi detectada expressão na maioria dos infiltrante células CD8 + (64 ± 22%), ao passo que a parte restante (35 ± 22%) foi TIA-1 negativo (Figura 4C, D).

única célula as suspensões obtidas a partir de espécimes de tumor excisadas de fresco (n = 10) foram coradas com FITC superfície ou APC marcadas com anticorpos específicos para os marcadores de superfície indicados e intracelularmente marcadas com anticorpos anti-TIA-1 marcado com PE. A) percentagens do total TIA-1 células + b) as percentagens de células CD8 +, células TCRγδ, neutrófilos (identificado como CD66b + células), as células CD4 +, os macrófagos (identificado como + células CD16 CD56-), células NK (CD16 + CD56 +) e células NKT (Vα24-Jα18 TCR +) observada no interior das células TIA-1 + fechado. C) dot-gráfico representativo ilustrando a co-expressão de moléculas de TIA-1 e CD8 dentro linfócitos capturados nas células totais obtidos a partir de uma amostra clínica. D) Percentagens de TIA-1 + e as células TIA-1 em células CD8 + fechado.

combinações fenotípicas de CD8 /TIA-1.

A seguir, analisadas as frequências fenotípicas os 1019 cânceres colorretais com tanto avaliável CD8 e TIA-1 coloração. Foram observadas três fenótipos principais: tumores negativos tanto para CD8 (Pontuação 0), TIA-1 (Pontuação 0) (n = 223; 21,9%), tumores positivos para CD8, mas negativa para TIA-1 (n = 366; 36%) e tumores positivos tanto para CD8, TIA-1 (n = 350; 34,3%). Apenas 80 tumores foram negativos para a CD8 e positiva para o TIA-1 (7,8%). Devido a estes números pequenos, o grupo de tumores CD8 negativas foi classificado como um único subgrupo independentemente da TIA-1 expressão.

análise de sobrevida específica para o câncer de células T CD8 + TIL estratificada por TIA-1.

foram analisadas diferenças de tempo de sobrevivência para os três CD8 /TIA-1 fenótipos em 998 pacientes para os quais o tempo de sobrevida foi também disponíveis. Em geral, observou-se uma diferença significativa no tempo de sobrevivência específicos de cancro entre os três grupos de pacientes com valores mais elevados de CD8 + /TIA-1 + TIL experimentando o resultado mais favorável, seguido de CD8 + /TIA-1- casos e, finalmente, por CD8- pacientes (p 0,0001; Figura 5). A seguir, realizada análise multivariada incluindo a idade fatores prognósticos, sexo, pT, pN estágio pM, bem como terapia pós-operatória e determinou o benefício adicional de estratificar pacientes com tumores com maior quantidade de CD8 + TIL por TIA-1. Entre os pacientes com tumores CD8-positivas, um risco relativo de morte de 0,89: foi observada para aqueles com tumores simultâneos TIA-1-positivos (p 0,001, Tabela 2) (IC 95% 0,8-0,9). Estes resultados indicam que a adição de TIA-1 em casos de CD8-positividade melhora a estratificação de risco de 35,6% (n = 355) dos pacientes.

Grupo Validação

Um externo conjunto de validação foi analisada para CD8 + e TIA-1 + TIL. Neste grupo de cancro colorectal MMR-proficientes, apenas 7 pacientes tinham tumores com CD8 + /TIA-1- TIL Na análise univariável, a diferença de tempo de sobrevida para pacientes com CD8 + /TIA-1 + TIL foram significativamente maiores em comparação com pacientes com ausência de CD8 + TILs (p 0,0001). diferenças de tempo de sobrevivência entre os pacientes com diferentes CD8 /TIA-1 fenótipos foram avaliados em análise multivariada com a fase pT, pN fase, o PM e terapia adjuvante. Entre os pacientes com tumores CD8-positivas, TIA-1 positividade levou a um risco relativo de 0,79 (IC de 95%: 0,7-0,9). Em comparação com os pacientes com cancros TIA-1-negativos (p = 0,006)

discussão

Os novos achados deste estudo em pacientes com câncer colorretal 1406 MMR-proficientes sugerir em primeiro lugar, que os números mais elevados de TIL TIA-1 + representam um parâmetro de prognóstico favorável e independente e segundo que, além de CD8, TIA 1 melhora a estratificação prognóstica dos pacientes em 35%.

Embora o significado prognóstico da abundante CD8 + TIL tenha sido previamente estabelecida [3], [5], [15], [16], [17], este estudo vai um passo além de identificar o marcador TIA-1 como um parâmetro de prognóstico de grande relevância no câncer colorretal e em particular em tumores com citotóxico CD8 + marcada TIL. TIA-1 é uma proteína associada ARN-grânulo citoplasmático ligação declaradamente expressa em células com potencial citolítico, incluindo 50-60% de células T CD8 + de linfócitos T [18]. TIA-1 tem sido mostrado para ser envolvido em apoptose mediada por Fas em uma variedade de doenças malignas humanas, e para sensibilizar células endoteliais a estímulos pró-apoptóticos e ao mesmo tempo aumenta a actividade citotóxica das células NK [19], [20], [21]. Nossos resultados estão de acordo com estes resultados. Aqui, mostramos que 64% dos CD8 + TIL co-expressam TIA-1. Além disso, identificamos uma pequena população de CD8- mas TIA-1 + células tumorais que representam populações de células TCRγδ e neutrófilos e células T CD4 + em menor grau, macrófagos, células NK, e células NK /T infiltrantes.

as investigações sobre as implicações clínicas e prognósticos do TIA-1 linfócitos + é principalmente restrita a doenças malignas hematológicas com efeitos favoráveis ​​e desfavoráveis ​​atribuídos a sobre-expressão desta proteína [22], [23]. Apenas um punhado de estudos avaliaram TIA-1 expressão em TIL no cancro colorectal, relacionando-se-regulação à apoptose e aumento do número de TIA-1 + TIL no MMR deficiente tumores [24], [25]. Curiosamente, em nossos casos MMR-proficientes, não foi possível encontrar qualquer correlação entre os números mais elevados de TIA-1 + células e expressão tumoral do marcador anti-apoptótica Bcl-2, marcadores pró-apoptóticos apoptose Factor de Activação-1 (APAF-1 ) e mamíferos como Sterile20-quinase 1 (MST-1), nem com p53 ou o marcador de proliferação Ki67 (dados não mostrados). No entanto, nós não só relatório que o aumento do número de TIA-1 + TIL está fortemente associada com um resultado clínico melhorado, mas representam um fator prognóstico independente, em coortes de testes e estudos de validação. Mais importante ainda, os nossos resultados indicam que o efeito de TIA-1 em resultado é aditiva para CD8, um resultado que tem implicações para 35% de todos os pacientes. Por isso, o resultado significativamente mais favorável de pacientes com CD8 + /TIA-1 + TIL em comparação com casos com CD8 + /TIA-1- TILs pode ser indicativo de uma vigilância imunológica mais eficiente por TILs com um potencial activado e altamente citotóxico.

os resultados deste estudo também identificou vários outros tipos de TIL dentro do centro de tumor como tendo um impacto positivo sobre o prognóstico, por exemplo FoxP3. O papel prognóstico de Tregs parece variar significativamente pelo tipo de tumor, possivelmente indicando papéis diferenciais destas células de um modo dependente do tecido [26] – [28]. No cancro colorectal, a maioria dos estudos estão em linha com os nossos resultados, indicando que um número elevado de FoxP3 Tregs é um fator prognóstico favorável para livre de doença e sobrevida global tempo [10], [29], [30]. No entanto, este efeito, como destacado aqui, não parece ser independente de CD8 +.

Embora nosso estudo pode ser limitado pela informação clínica incompleta em alguns casos, podemos ainda confirmar o efeito prognóstico independente da TIA-1 e modificar o seu efeito em células CD8 em 500 pacientes com TNM completa e informações sobre a terapia. O estado MMR foi analisada por expressão de marcadores de proteínas MLH1, MSH2 e MSH6 e apenas tumores com positividade em todos os três marcadores foram incluídos nesta análise. Estes marcadores, bem como TIA-1 e CD8 são rotineiramente utilizados na patologia de diagnóstico, os dois últimos para a determinação da linhagem de células T e subtipagem de linfomas apoiando assim o seu valor como ferramentas de pesquisa bem fiáveis ​​[31], [32]. O uso de TMAs muitas vezes levanta a preocupação de que a expressão da proteína de tumores heterogêneos não é adequadamente representada usando esta técnica. No entanto, no trabalho de diagnóstico diária, a ocorrência de TIL é conhecido por ser bastante homogêneo e enquanto um soco tumor foi amostrado no grupo teste, a inclusão adicional de uma coorte de validação com uma média de 4 socos tumorais por tumor na amostragem devem minimizar o viés de possível heterogeneidade do tumor [33]. Além disso, nossos benefícios do estudo sobre a utilização de grupos de teste e de validação, estes últimos representando, um subconjunto de validação externa independente sobre a qual marcadores de proteína foram avaliados por vários patologistas independentes, assim, confirmando ainda mais a reprodutibilidade do-1 TIA sistema de CD8 /scoring e efeito sobre o resultado.

para resumir, TIA-1 é um biomarcador de prognóstico imunológica robusta que contribui para o resultado clínico em pacientes com câncer colorretal MMR-proficientes independentemente do estágio TNM e terapia adjuvante. A análise combinada de CD8 /TIA-1 identifica um grande subgrupo de pacientes, que se beneficiam de uma melhor estratificação de risco, o que deverá ajudar a adaptar o manejo clínico mais individual para pacientes com paciente com câncer colorretal, ao fornecer uma nova avenida potencial da investigação para o desenvolvimento da imunoterapia alvejada.