Abstract

As mutações do polipose adenomatosa coli (

APC

) gene são comuns e fortemente associado com o desenvolvimento de adenomas colorretais e carcinomas. Enquanto extensivamente estudada em populações modernas, relatórios sobre tumores viscerais em populações antigas são escassos. Para o melhor de nosso conhecimento, ainda não foi descrito caracterização genética das mutações associadas com câncer colorretal em espécimes antigos. Neste estudo, foram seqüenciados hotspots para mutações no gene APC isoladas de 18

th século naturalmente preservadas múmias húngaras humanos. Enquanto sequências APC tipo selvagem foram encontrados em duas múmias, descobrimos a mutação E1317Q missense, conhecido por ser um cancro colorectal predisponentes mutação, em um grande tecido intestino de um jovem de 18

th múmia do século. Nossos dados sugerem que esta predisposição genética para o cancro já existia na era pré-industrialização. Este estudo chama para investigações semelhantes de espécimes antigos de diferentes épocas e localizações geográficas para ser realizado e compartilhado com a finalidade de obter uma análise mais ampla escala que vai lançar luz sobre a epidemiologia do câncer passado e sobre a evolução do câncer

Citation.: Feldman M, Hershkovitz I, Sklan EH, Kahila Bar-Gal G, Pap I, Szikossy I, et al. (2016) A detecção de um gene supressor de tumor Variant que predispõem ao câncer colorretal em um século 18 Hungarian Múmia. PLoS ONE 11 (2): e0147217. doi: 10.1371 /journal.pone.0147217

Autor: David Caramelli, da Universidade de Florença, Itália

Recebido: 30 de setembro de 2015; Aceito: 30 de dezembro de 2015; Publicação: 10 de fevereiro de 2016

Direitos de autor: © 2016 Feldman et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. Todos relevante os dados estão dentro do papel

Financiamento: Este trabalho foi apoiado por:. Dan David Foundation; O Tassia e Dr. Joseph Meychan Presidente da História e Filosofia da Medicina. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

O câncer colorretal é uma das principais causas de morbidade e mortalidade nos países ocidentais [1,2]. Melhorias na detecção precoce e tratamento resultaram em declínio das taxas de mortalidade, enquanto as taxas de incidência têm aumentado [3]. Normalmente, os precursores de câncer colorretal são pólipos adenomatosos, que são aglomerados neoplásicas benignas de células [4]. A maioria dos pólipos adenomatosos esporádicos, bem como a maioria dos cânceres colorretais contêm alterações genéticas típicas [5].

polipose adenomatosa coli (APC)

é um importante gene supressor de tumor que está localizado no cromossoma humano 5q21. As mutações em APC está fortemente associada ao desenvolvimento de adenomas colorectais e carcinomas [6]. Cerca de 50% da população irá desenvolver pólipos colorectais iniciadas por tais mutações durante um período normal de vida [7]. mutações somáticas do gene APC foram detectadas não só em pacientes com carcinoma colorectal, mas também em pacientes com câncer de pâncreas [8], câncer gástrico [9], carcinoma de células escamosas oral [10], hepatoblastoma, o cancro da mama, tumor cerebral e desmoid tumor [11]. Cerca de 80% das mutações somáticas do gene APC ocorre no “ponto quente” específica e são agrupadas dentro de uma região desde o codão 764 até o códon 1596 chamado o Cluster região de mutação (MCR). Mais do que 95% são mutações de terminação de cadeia que resultam na expressão da proteína truncada. A inactivação de ambos os alelos de APC é necessária para o desenvolvimento da maioria dos tumores no cólon e no recto [12].

Câncer tem início documentação. Egyptian papiros médicos que datam de 1500 aC foram encontrados para descrever tumores. tanto Heródoto e Hipócrates mencionar câncer [13-15]. A maioria dos relatórios paleopatológicos sobre tumores em populações últimos são baseados em tecido esquelético que é mais abundante em sítios arqueológicos. No entanto, alguns tumores em tecidos moles foram relatados [16-26]. Embora existam muitas teorias sobre a prevalência de câncer em nossos dias, que é necessário câncer associado ao estilo de vida, dieta, sedentarismo e padrões reprodutivos, mais informações a partir de diferentes pontos de tempo na história para entender melhor o papel destes fatores em populações históricas .

mumificação natural permite a preservação de tecido macio. Amostras de tecidos mumificados pode fornecer informações valiosas a partir de pontos antropológicos, históricos e de vista médico. Eles podem nos ensinar lições importantes sobre a evolução de doenças que possam ser de valor para prever futuras mudanças evolutivas. Em 1994 e 1995, mais de 265 múmias foram escavados de criptas seladas na igreja Dominicana em Vac, Hungria. As criptas foram usados ​​continuamente por enterros de várias famílias de classe média e clérigos, 1731-1838. A temperatura nas criptas variou entre oito a onze graus Celsius, as criptas foram mal, mas continuamente ventilados e os restos foram protegidos contra a humidade por aparas de pinho que encheram muitos dos caixões. Estas eram as condições ideais para a preservação natural, causando cerca de 70% dos organismos a ser total ou parcialmente mumificado. O nível de preservação das amostras de tecidos mumificados e abundante informação arquivística contemporânea sobre os indivíduos da coleção múmia húngara, motivou um estudo morfológico e genético dos restos humanos [27]. Estudos anteriores encontraram evidências genéticas de

Mycobacterium tuberculosis

(

M

.

tuberculose

) presença nestes múmias [28-34], indicando que esta coorte pode ser usado para genética estudos. Além disso, este grupo compreende de indivíduos que formam uma distribuição de idades ampla. Assim, é compatível com o estudo de mutações cancro associado, como o risco de tais mutações aumenta com a idade [3]. Aqui usamos as múmias vac para avaliar a existência de predisposição genética para câncer colorretal na era pré-industrialização por sequenciamento de “pontos quentes” no gene APC. Três dessas sequências foram amplificados e sequenciados a partir de 3 múmias diferentes. O E1317Q variante APC, conhecido por predispor ao câncer colorretal foi detectado em uma amostra de cólon de uma múmia. Enquanto apenas algumas sequências APC foram obtidos a presença da variante E1317Q no DNA de um jovem de 18

th indivíduo século sugere que a predisposição genética ao câncer já existia na era pré-industrialização. Este estudo no entanto exige uma análise em maior escala para fins de comparação epidemiológicos.

Materiais e Métodos

Amostras e precauções contra a contaminação

O “Vác Mummy coleção” do século 18 está alojado e curada no Departamento de Antropologia do Museu de História Natural húngaro, em Budapeste, Hungria. A coleção contém 265 amostras naturalmente mumificados, parcialmente mumificados e esqueléticas (registrados sob os números de inventário: 2009.19.1-2009.19.264). Um total de 51 amostras foram obtidas de 20 múmias VCA (Tabela 1). As amostras foram coletadas no Departamento de Museu de História Natural Húngaro Antropologia, em conformidade com a legislação sobre o tratamento do ser humano vestígios arqueológicos na Hungria [35]. Nenhum trabalho de DNA antigo amplificar genes humanos já foi feito no local. A amostragem foi realizado utilizando as medidas para evitar a contaminação contemporânea dos espécimes. As amostras foram tomadas usando uma técnica não-contato com bisturis descartáveis, de órgãos internos. Estas regiões anatómicas não foram previamente expostos ao ambiente externo e, por conseguinte, foram protegidos do contacto com escavadoras ou outros que têm tratado múmias. As amostras foram colocadas em tubos livres de ADN estéreis e armazenada à temperatura ambiente.

O DNA foi extraído num laboratório de ADN antigo designado (aDNA). Para evitar a contaminação por DNA contemporânea os tubos foram abertos apenas em uma capa UV eradiated designada onde a extração do DNA foi realizada. O laboratório aDNA era fisicamente isolado do laboratório onde DNA moderno foi usado. O procedimento foi realizado em câmaras de UV estéreis cada um equipado com conjunto separado de pipetas, tubos estéreis descartáveis, pontas de filtro, reagentes de grau de biologia molecular e soluções. vestuário de protecção descartáveis ​​foi usado e alterado com freqüência. capuzes irradiadas com UV separadas foram utilizadas para preparação de ADN, extracções de ADN e a preparação de PCR. Para minimizar ainda mais a contaminação de ADN contemporânea todos os reagentes, tubos e instrumentos, tais como lâminas de bisturi descartáveis ​​foram irradiados com UV antes da utilização. foram incluídos vários controles negativos de extração e amplificação para garantir a autenticidade dos resultados Adna. protocolos Adna seguiu os requisitos da norma definidos para o campo [36].

DNA extração

O DNA foi extraído a partir de tecido mumificado usando uma modificação do tiocianato de guanidina (GuSCN) método desenvolvido por Boom R et al . [37] e o método de purificação baseado em sílica desenvolvida por Hoess H Pääbo S [38]. Cerca de 500 mg de tecido foi cortado em pequenos fragmentos de aproximadamente 5 mm, colocados num tubo contendo UV irradiados estéreis água duplamente destilada (ddH 2 O) e incubadas a 56 ° C durante a noite. O ddH2O e foram removidos 500 uL de tampão de extracção, consistindo de 4 M de tiocianato de guanidina (GuSCN) (Sigma), 0,1 M de Tris-HCl a pH 6,4 (Sigma), EDTA 0,02 M pH 8 (Biological Industries) e 1,3% de Triton X- 100 (Sigma), em conjunto com 10 uL de 25 mg /ml de proteinase K foram adicionados ao tecido. O tecido foi ainda incubada a 56 ° C durante 48 h. As amostras foram fervidas a 94 ° C durante 10 minutos e depois centrifugada a 13000 rpm durante 3 min. O sobrenadante (que alberga o ADN extraído) foi transferido para um novo tubo de ensaio estéril. Para extrair o ADN a partir do sobrenadante de um iodeto mL de sódio (Nal) (6M, Merck), 10 ul linear acril amida (5mg /ml, Ambion) e sílica 8 mL (1 g /ml, Sigma) foram adicionados. As amostras foram incubadas a 4 ° C durante 1 h para permitir a ligação do DNA para as esferas de sílica. Os grânulos de sílica foram sedimentadas por centrifugação e o sedimento foi lavado duas vezes. A primeira lavagem foi efectuada utilizando tampão de lavagem contendo 0,01 M de Tris-HCl a pH 7,5, cloreto de sódio 0,05 M (NaCl) (Frutarum), EDTA 0,1 M pH 8 e 250 ul de etanol absoluto (Biolabs) e ddH2O até ao volume de 500 uL . A segunda lavagem foi com etanol absoluto. O sedimento de esferas de sílica obtido foi seco ao ar e o aDNA foi eluída a 56 ° C com tampão Tris-EDTA (TE, Tris 1 M, pH 8 e EDTA pH 0,5 H 8). O extracto aDNA foi armazenado a -20 ° C

amplificação

ADN

A amplificação do gene de APC foi realizada numa mistura reaccional de 25 ul incluindo 7μL do extracto aDNA com:. De tampão 10X, 25 mM MgCl

2, 2,5 mM de dNTP, 10 mM de BSA (Biolabs), 12 pmol de cada conjunto de iniciadores e 1,25 unidades de polimerase de ADN AmpliTaq Gold® 360 (Applied Biosystems). O aDNA foi amplificado utilizando um termociclador com uma fase inicial de arranque a quente a 95 ° C durante 10 minutos seguido de 45 ciclos de 15 segundos a 95 ° C desnaturação, 45 segundos hibridação a 60-48 ° C (touch-down) e 45 -60 segundos alongamento à 72 ° C. Um passo de extensão final a 72 ° C durante 10 minutos, foi realizada de acordo com os 45 ciclos.

Os extractos ADNA foram amplificados utilizando dois conjuntos de iniciadores do gene APC que foram concebidos pelos autores desse estudo usando o software Primer 3,0 e utilizando dois conjuntos de iniciadores de publicada a região variável hiper na região mitocondrial humano de controlo (d-circular) [39]. Os conjuntos de iniciadores da APC foram concebidos para amplificar conhecidos pontos quentes na região de mutação do MCR. A amplificação do circuito d-mitocondrial foi utilizado como controlo para extractos de tela para fora que possam estar contaminadas com ADN moderna dos investigadores e como mais uma indicação da autenticidade aDNA. Os conjuntos de iniciadores que foram utilizados para amplificações estão descritos na Tabela 2.

Análise de sequências obtidas

amplificações positivas foram sequenciados na Sequencing Unidade da Faculdade de Ciências da Vida sábio do DNA, Universidade de Tel Aviv utilizando o ABI PRISM® 3100 Genetic Analyzer. As sequências obtidas foram inicialmente verificada por meio do Centro Nacional de Informações sobre Biotecnologia BLAST algoritmo [40]. Cromatogramas foram examinadas individualmente para confirmar a qualidade das sequências, usando Sequencher 4.9 [41]. sequências de sentido e anti- sentido foram gerados a partir de cada conjunto de iniciadores como um controlo adicional para excluir erros de sequenciação. As sequências sentido e anti foram reunidos em um contig em Sequencher 4.9. Cada contig indivíduo foi inspeccionada visualmente e verificada; quaisquer ambiguidades foram visualmente resolvido. Sequências com cromatogramas de baixa qualidade foram excluídos do estudo. Um contig final de todas as sequências foi gerado usando uma referência publicada. perfis mitocondriais parciais foram determinados para as múmias, para todos os funcionários que trabalham no laboratório aDNA e para todos os coletores de amostra. Para controlar a contaminação durante ou após a amostragem, os perfis mitocondriais parciais e sequências APC parciais obtidos a partir de amostras de múmia foram comparadas com as sequências de referência e perfis do pessoal de laboratório (Tabelas 3 e 4). As sequências obtidas a partir de amostras da mamã também foram comparados um com o outro para controlar a contaminação cruzada. Notamos que os antigos perfis mitocondriais parciais e as sequências cromossómicas antigos podem ser influenciados por processos desaminação pós-morte [42]. Assim, algumas transições observadas podem ser atribuídas a danos no ADN e não a herança materna ou substituições cromossómicas respectivamente. danos no DNA pós-morte não influencia a nossa análise teve como objetivo controlar a contaminação por testar se múmias compartilhar o mesmo padrão SNP como pesquisadores e não afeta nenhum transvertions observados. No entanto, as implicações de danos no ADN deve ser considerado no caso de as sequências são utilizadas para outros fins.

Resultados

APC é um importante gene supressor de tumor. As mutações em APC está fortemente associada ao desenvolvimento de adenomas colorectais e carcinomas [6]. Para avaliar a presença de predisposição genética para câncer colorretal na era pré-industrialização nós tentativa para amplificar a região do MCR do gene APC a partir do DNA obtido de órgãos internos das múmias VCA. sequências parciais da região do gene APC MCR foram obtidos com sucesso a partir de três múmias. Duas sequências APC tipo selvagem foram obtidos a partir de duas múmias números 51 e 63 (Tabela 3, Figuras 1 e 2). As sequências do gene APC MCR (posição 4377-4484 e 3956-4068 posição) adquirido a partir de uma amostra de tecido do cólon de mamã 88 (Tabela 3, as Figuras 1 e 2) indicou que este indivíduo era homozigótica para uma mutação sem sentido no códon 1317 ( GAA CAA a) (Figuras 1 e 3). Esta é uma variação genética conhecida APC que substitui um aminoácido glutamina hidrofílico não carregado com glutamato um aminoácido hidrófilo acídico (E1317Q). Esta mutação tem sido associada a uma predisposição para o desenvolvimento de múltiplos colorectal adenomas e cancro colorrectal [43]. O resto da sequência parcial da APC MCR para este mamã era idêntico à referência (NM_000038.5) que codifica para a proteína de tipo selvagem. As sequências de todos os investigadores que manipulados a amostra ou equipamentos foram encontrados para ser idêntico à referência.

APC sequências parciais amplificados com iniciadores APC1309 em comparação com o NCBI NM_000038.5 sequência de referência. os membros do pessoal de laboratório são indicadas com iniciais. amostras antigas são indicados com um número múmia. O iniciador de sequenciação é sublinhado na sequência de referência. Mummy número 88 é o único portador da mutação E1317Q.

sequências APC parciais que foram amplificados com iniciadores APC1450 são comparados com o NCBI NM_000038.5 sequência de referência. O iniciador de sequenciação é sublinhado na sequência de referência. Estas sequências APC parciais das duas múmias eram idênticas à sequência de referência que codifica para a proteína de tipo selvagem.

destacado é a mutação homozigótica missense G → C E1317Q.

aDNA mitocondrial foi preservado em 50% dos múmias testadas (Tabela 1). perfis mitocondriais parciais (posições 16004-16442) foram determinados para os 3 múmias para quem foram obtidas as sequências APC MCR (Tabela 4). Mamã 51 e 63 mostraram um perfil único diferente a partir da sequência de referência de Cambridge (NC_012920.1), diferentes um do outro e diferente dos perfis obtidos a partir de todos os processadores. A amplificação por PCR detecta ADN mitocondrial com maior sensibilidade em comparação com a detecção de ADN cromossómico. Esta diferença de sensibilidade é explicado, principalmente, por um maior número de cópias por célula do DNA mitocondrial [44,45]. Assim, se a amostra tinha sido contaminado com ADN moderna é ADN mitocondrial moderna provável teria sido detectado. Os perfis únicos de múmias indicam que as sequências obtidas para as duas múmias são autêntico e que não houve contaminação cruzada entre as amostras mamã.

A sequência mitocondrial parcial da mamã 88 era idêntica à sequência de referência de Cambridge . Entre os pesquisadores, apenas as sequências mitocondriais parciais de Dr. Rosin-Arbesfeld (R.R.A) e Prof. Hershkovitz (I.H), que participaram da coleta das amostras, foram idêntica à sequência de referência Cambridge como esperado, devido à sua origem europeia. No entanto, a observação da mutação E1317Q não pode ser devido à contaminação da mamã 88 por ADN a partir de Dr. Rosin-Arbesfeld ou prof Hershkovitz uma vez que nem eles ou qualquer outro dos pesquisadores, tem a mutação APC E1317Q (Fig 1).

Discussão

Nós descobrimos que o E1317Q mutação nonsense APC em uma amostra da grande tecido intestinal recuperado de um 18

th múmia do século. As sequências tipo APC selvagens, na mesma posição, foram obtidos a partir de duas outras múmias da mesma coleção.

A capacidade de recuperar materiais genéticos a partir de tecido antigo era um enorme passo em frente na compreensão da história evolutiva de doenças. Enquanto a maioria de doenças estudos Adna focada no DNA do patógeno antiga [46-48], a pesquisa genética de câncer em populações históricas tem sido um pouco negligenciada. Há relatos de tumores ou neoplasias benignas em amostras antigas; alguns até mesmo voltar para a era dos dinossauros [49]. Mas, estes são baseados principalmente na presença de lesões ósseas específicas ou estudos histológicos e de informação não genética. Em casos Hungria de osteossarcoma; mieloma; e carcinoma metastático foram relatados em espécimes históricos [50-53]. Para o melhor de nosso conhecimento, câncer ou mutações associadas ao câncer ainda não foram relatados em estudos de DNA antigo.

A escassez de relatórios sobre tumores em tecidos moles antiga permanece em comparação com o grande número de autópsias realizadas em múmias levaram alguns estudiosos a supor que malignidades foram raras nas populações últimos em comparação com os tempos modernos devido ao curto tempo de vida de indivíduos que impedia o desenvolvimento de câncer [15,24]. Por outro lado, os relatórios paleopatológicos com base na investigação de restos de esqueletos sugerem taxas de tumor foram semelhantes entre as populações modernas passado e examinou [20,23]. Relatos históricos indicam que a expectativa de vida foi estatisticamente reduzido pela mortalidade infantil e materna e ainda que muitos indivíduos a viver até uma idade suficientemente avançada para desenvolver outras doenças idade meados de idade, tais como doenças degenerativas [15]. Outra hipótese tentando explicar a raridade de tumores em tecidos moles antiga é que os tumores não pode ser bem preservado em postmortem tecido mumificado. No entanto, estudos experimentais mostram que a mumificação preserva as características de malignidade [54]. Portanto, numa sociedade antiga sem intervenção cirúrgica, provas de cancro, se existia no tecido, deve permanecer em todas as amostras conservadas mumificados. Os arqueológicos amostras de tecidos moles fatos são escassos em comparação com restos de esqueletos [55] representam um desafio para a análise de câncer antigo relativo dados genéticos devido ao pequeno tamanho da amostra. Isso destaca a importância da acumulação de dados de estudos como este, eventualmente, a criação de um banco de dados suficientes para estudos posteriores. Nos últimos anos, o uso de sequenciamento de próxima geração (NGS) tornou-se comum na pesquisa DNA antigo [56]. seqüenciamento shotgun foi implementado com sucesso por Kay et al. 2015 para gerar

M

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tuberculose

sequências do genoma de tecido esquelético e suave das múmias VAC, demonstrando que os dados do genoma de bactérias podem ser obtidas a partir de tecido mumificado em geral, e da coleção múmia Vác em particular [33]. No entanto, com base nos dados relatados por Kay et al. [33], a cobertura média vezes para os genomas humanos é muito baixo (não mais de 0,09 cobertura média vezes), indicando o enriquecimento de DNA alvo seria necessário analisar regiões cromossômicas específicas, tais como a região do APC MCR. Além disso, os dados do genoma humano inteiro, até agora, não foram obtidos a partir de tecido mumificado. Assim, optou-se por utilizar a abordagem clássica de amplificação por PCR e sequenciação directa para caracterizar mutações no gene APC das múmias VCA. Uma vez que a abordagem clássica é mais limitada na capacidade para tratar a contaminação, foram utilizadas medidas estritas para prevenir a contaminação de ADN durante o processamento da amostra, tal como descrito na parte dos meios; incluindo a comparação das sequências de APC das múmias com as de todos os manipuladores de amostra. Nossos achados confirmam que o isolamento de regiões cromossômicas relacionadas ao câncer específicas de tecido mumificado é viável e pode motivar o desenvolvimento futuro de matrizes de enriquecimento voltadas para capturar regiões de DNA relacionadas a malignidade. Tais abordagens podem aumentar os rendimentos de DNA para essas regiões de interesse e pode ser combinada com técnicas NGS para fornecer meios adicionais de autenticação e uma perspectiva mais ampla sobre a evolução do cancro.

Cancro Colorectal surge como o efeito cumulativo de múltiplas mutações em muitos genes que permitem a célula para escapar de controles regulatórios que levam à proliferação descontrolada. Estas mutações podem ser herdadas ou somática e este último pode ser, em grande medida afectadas por factores ambientais (por exemplo fumar, poluição do ar e nutrição) [57].

Os estudos que examinam a relação entre a mutação APC E1317Q e cancro colorrectal mostraram resultados diferentes. Enquanto alguns estudos sugerem que a mutação contribui para uma predisposição para adenomas colorretais e carcinomas com baixa e variável penetrância [58,59], outros afirmam que a variante está associada com um aumento moderado do risco de cancro colo-rectal [60-62]. A escolha do grupo controle em alguns dos estudos que não encontraram um risco significativamente maior de câncer colorretal devido à E1317Q tem sido criticado e foi proposto para ser a causa da contradição sobre efeito E1317Q sobre o cancro colorectal [43]. Assim, um possível papel para E1317Q na génese do tumor colorretal podem existir e deve ser mais estudada. Tem sido sugerido E1317Q tem efeitos sutis sobre o sequestro de β-catenina ou degradação, mas o mecanismo molecular exato que causa a predisposição para o cancro colorectal é desconhecida [59].

Nossos dados sugerem que o indivíduo 88 pode ter tido uma predisposição para desenvolvimento de adenomas colorretais e carcinomas mas não podemos dizer se essas condições, na verdade manifestada neste indivíduo. A preservação morfológica do tecido do cólon mumificado não foi suficiente para adenomas ou carcinomas distinguir visualmente as de tecido normal. O facto de mamã 88 era homozigótico para a sequência de APC E1317Q tanto aumenta a probabilidade de manifestação como é possível especular que homozygousity foi causada por uma perda de acontecimento heterozigose que é comum na neoplasia e é comumente encontrados em pacientes com cancro colo-rectal que mostram APC a perda da função [63]. Como a variante E1317Q APC é rara na população em geral moderna (0,3%, NCBI SNP rs1801166 base de dados) [40], as probabilidades de herdar um alelo mutante de cada progenitor é muito baixa, o que aumenta a possibilidade de que uma mutação somática tinha de facto ocorreu. No entanto, não temos dados sobre a história da família múmia 88 de ou de frequência de alelos em 18

th século Hungria, portanto, não podemos descartar a herança de homozygousity para E1317Q neste caso. Ausência da mutação em tecidos retirados de outros órgãos restantes, que confirmaram a mutação somática e não sendo uma mutação da linha germinativa hereditária. Infelizmente, o nível de conservação de ADN genómico em outros tecidos amostrados a partir mamã 88 (fígado) não era suficiente para a amplificação bem sucedida das sequências genómicas da APC. Em geral, as mutações somáticas no essa parte do MCR do gene APC são mais comuns em populações modernas do que mutações germinativas [64].

A obesidade, sedentarismo, uma dieta rica em carne vermelha ou processada, álcool consumo e fumar a longo prazo são fatores de risco específicos para o câncer colorretal [3]. Esses fatores de risco foram menos frequentes a inexistente na pré-industrializada 18

th século Hungria [65,66]. Frequências de câncer em populações históricas, como o 18

população húngara século pode estar relacionada com a ausência de fatores ambientais de vida modernos, tais como o uso do tabaco ou da poluição [57,67]. Embora a APC MCR é uma região genômica frequentemente mutado no moderno população dia [68], a única mutação detectada nas sequências APC MCR obtidos a partir dos 3 múmias foi E1317Q na mamã 88. Estes dados combinados com futuros dados de estudos semelhantes, abrangendo tempos diferentes e locais podem elucidar a relação entre a ocorrência de câncer de predisposição mutações colorretais e estilo de vida histórica. A sociedade humana tem sofrido enorme estilo de vida e mudanças ambientais durante os últimos séculos. A capacidade para comparar o espectro de mutações históricos para o espectro moderna parece importante para a compreensão da etiologia e patogénese molecular de neoplasia. Nossos dados, indicando a presença de um câncer predisponentes mutação e, possivelmente, câncer em uma pessoa a partir do 18

th século combinados com os dados que serão acumulados de futuros estudos Adna pode fornecer um quadro mais completo da epidemiologia do câncer.

Agradecimentos

gostaríamos de agradecer Nir Skalka e Hila Maio para ajudar com o trabalho de laboratório.