sinalização -β1
Abstract
Purpose
fator de crescimento transformante (TGF) está envolvido na metástase das células do câncer. Nós investigamos se polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) em
TGF-p1
foram associados com sobrevida global (SG) e sobrevida livre de metástases à distância (CPOS) em doentes com cancro do pulmão de células não pequenas (NSCLC) tratados com radioterapia definitiva , com ou sem quimioterapia.
Métodos
Foram genotipados
TGF-p1
SNPs em rs1800469 (C-509T), rs1800471 (G915C), e rs1982073 (T + 29C) por em cadeia da polimerase polimorfismo de fragmentos de reacção restrição em amostras de sangue de 205 pacientes com NSCLC que tiveram a radioterapia definitiva em uma instituição em Novembro de 1998-janeiro de 2005. Nós também testamos se o
TGF-β1
rs1982073 (T + 29C) SNP afetou a migração e invasão de células A549 e câncer de pulmão PC9
resultados
a mediana do tempo de seguimento para todos os pacientes foi de 17 meses (variação, 1-97 meses;. 39 meses para os pacientes vivo no momento da análise). A análise multivariada mostrou que o
TGF-p1
rs1800469 CT /CC genótipo foi associado com má OS (hazard ratio [HR] = 1.463 [95% intervalo de confiança {CI} = 1,012-2,114],
P
= 0,043) e mais curtos CPOS (HR = 1,601 [IC95% = 1,042-2,459],
P =
0,032) e que o
TGF-p1
rs1982073 CT /CC genótipo previu CPOS pobres ( HR [IC 95% = 1,009-2,502] = 1.589,
P
= 0,046) e pobre cérebro MFS (HR = 2,567 [IC95% = 1,155-5,702],
P = 0,021
) após ajuste para idade, sexo, raça, estado de desempenho, tabagismo, histologia e do volume tumoral, estágio, o recebimento de radioquimioterapia simultânea, número de ciclos de quimioterapia, e dose de radiação. Transfecção com
TGF-p1
+ 29C (vs. + 29T) estimulou a migração e invasão de células A549 e PC9, sugerindo que a TGF-p1 + 29C pode estar ligado com o aumento do potencial metastático.
Conclusões
TGF-p1
genótipos, rs1800469 e rs1982073 poderia ser útil para prever CPOS entre os pacientes com NSCLC tratados com radioterapia definitiva. Estes achados necessitam de validação em grandes estudos prospectivos e estudos sobre os mecanismos completos
Citation:. Yuan X, Wei Q, Komaki R, Liu Z, Yang J, Tucker SL, et al. (2013)
TGF-p1
Polimorfismos prever a sobrevida Metástase-Free Distante em Pacientes com Inoperable Non-Small-Cell Lung Cancer após a radioterapia definitiva. PLoS ONE 8 (6): e65659. doi: 10.1371 /journal.pone.0065659
Edição: Natasha Kyprianou, da Universidade de Kentucky College of Medicine, Estados Unidos da América
Recebido: 08 de novembro de 2012; Aceito: 25 de abril de 2013; Publicação: 19 de junho de 2013
Direitos de autor: © 2013 Yuan et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Compatível com parte pelo Cancer Support Center (core) Grant CA016672 a MD Anderson Cancer Center. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito. Sem financiamento externo adicional recebida para este estudo
Conflito de interesses:. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
O cancro do pulmão continua a ser a principal causa de morte por câncer. , com uma estimativa de 160,340 mortes nos Estados Unidos em 2012 [1]. O padrão atual de tratamento para o câncer de pulmão de não-pequenas células não operável (NSCLC), de longe a forma mais comum no momento do diagnóstico, é a radioterapia em combinação com quimioterapia. No entanto, as taxas de sobrevivência após tal terapia continuam pobres por causa de altas taxas de recorrência, locais e distantes. de rádio (quimio) regimes terapêuticos comumente utilizados também estão associados com uma toxicidade significativa tecido normal, incluindo pneumonite por radiação, que pode ser letal. Melhores estratégias de tratamento projetado de acordo com a sensibilidade intrínseca de cada paciente individual e risco de toxicidade, são urgentemente necessários expressão única do tumor de alvo molecular (s), e os riscos de loco-regional ou recorrência da doença distante.
Um biomarcador molecular potencial para predizer o resultado do tratamento após a radioquimioterapia para NSCLC, tanto em termos de resposta do tumor e danos no tecido normal, é factor de crescimento transformante β1 (TGF-p1). Os membros da superfamília TGF-p de citocinas provocam uma grande variedade de respostas celulares, incluindo a proliferação, a migração, a fibrose, a apoptose, a inflamação do tecido, reparação de feridas, angiogénese e [2] – [4]. Alterações na sinalização de TGF-p têm sido relatados em vários tipos de cancro nos seres humanos, incluindo NSCLC [5], [6]. Embora o TGF-p actua tipicamente como um supressor de tumores [7], [8], como o desenvolvimento do tumor progride, as células de tumor adquirirem resistência para a paragem do crescimento induzida por TGF-p. Dos três isoformas de TGF-p conhecidas, TGF-p1 parece estar directamente envolvida na mediação da actividade metastática de células cancerosas [9]. estudos pré-clínicos mostram que a inibição da sinalização de TGF-p1 regula negativamente a migração de células tumorais e inibe o desenvolvimento de metástases [10], [11]. Assim, TGF-p1 pode ter um duplo papel no desenvolvimento do câncer, suprimindo o crescimento do tumor durante as fases iniciais da carcinogênese, mas promover a progressão de tumores e metástases em estágios mais avançados [12], [13]. De facto, cada vez mais provas demonstra que a sinalização de TGF-p tem um papel no desenvolvimento de cancro do pulmão [14], [15]. TGF-p1, também tem sido demonstrado que induz a transição epitelial-mesenquimal-a, que tem um papel crucial na invasão e metástase de alguns tipos de células de tumor [16]. TGFp foi ainda implicados na sensibilidade das células de tumor à radiação e drogas quimioterapêuticas [17] – [19].
Em adição aos seus efeitos sobre as células tumorais, TGF-p1, também está envolvido na resposta de tecidos normais de radiação ou radioquimioterapia. Dois grupos têm mostrado evidências preliminares de que alterações nos níveis plasmáticos de TGF-p1 durante a radioterapia pode prever o risco de desenvolver toxicidade pulmonar induzida por radiação [20], [21]. Fortes associações também têm sido relatados entre os polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) em
TGF-p1
e fibrose induzida por radiação em pacientes com cancro da mama ou cânceres ginecológicos [22], [23] e entre SNPs e pneumonite por radiação em pacientes com câncer de pulmão tratados com radioterapia ou radioquimioterapia [24]. Explorações do valor prognóstico da
TGF-p1
SNPs em uma variedade de tipos de câncer [25], [26] sugerem que alguns
TGF-p1
genótipos prever fenótipos de tumor mais agressivo e prognóstico adverso.
Nós já avaliou a relação entre três diferentes SNPs de
TGF-p1
[rs1800469 (C-509T), rs1800471 (G915C), e rs1982073 (T + 29C)] e no desenvolvimento de pneumonite por radiação em pacientes com NSCLC tratados com radioquimioterapia e observou que os genótipos /CC CT de
TGF-p1
rs1982073 (T + 29C) foram associados com um risco significativamente menor de pneumonite por radiação [24]. Além disso, rs1982073 (T + 29C) e rs1800469 (C-509T) foram ligados com o aumento dos níveis séricos de TGF-p1 [26], e com a incidência de cancro da mama [27]; rs1800469 (C-509T) também tem sido associada com cancro em fase avançada da próstata [26] e o cancro do cólon [28]. Com base nestes resultados publicados, investigamos se essas variantes genéticas funcionais de
TGF-p1 também
afetar a resposta do tumor e resultado em pacientes com NSCLC inoperável tratados por radiação definitiva ou radioquimioterapia, avaliada em termos de sobrevida global (OS) ea sobrevida livre de metástases à distância (CPOS).
Métodos
assuntos para esta análise retrospectiva foram selecionados de um grande banco de dados de 740 pacientes com NSCLC que tinham sido tratados na Universidade do Texas MD Anderson Centro de câncer de novembro de 1998 a 2009. Um total de 261 pacientes foram identificados como tendo amostras de sangue total disponíveis para análise; todos estes pacientes tinham sido tratados em novembro de 1998 a janeiro de 2005. A partir desses 261 pacientes, 56 foram excluídos: 25 que tinha morrido de outras doenças ou cujo estado vital era desconhecido; 16 que morreu de NSCLC, sem informações sobre metástases à distância ou doença loco-regional, 2 que tiveram a cirurgia, um que tinha tido câncer de pulmão de pequenas células, e 12 que tiveram doença em estágio IV, deixando um total de 205 pacientes com informação completa para a análise actual.
a genotipagem
o ADN genómico foi extraído de leucócitos a partir de amostras de sangue total com um ADN de sangue Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) de acordo com as instruções do fabricante. A pureza do ADN e a concentração foi determinada por medição espectrofotométrica da absorvância a 260 e 280 nm. SNPs em TGF-p1 foram escolhidos que se reuniu pelo menos dois dos três critérios seguintes: (1) relataram associações com pulmão ou outros tipos de câncer; (2) a freqüência do alelo menor de 5% em indivíduos de ascendência caucasiana; e (3) no local do promotor ou região de codificação do gene. Foram genotipados três desses SNPs: rs1800469 (C-509T, na região promotora), rs1800471 (G915C, no exon 1), e rs1982073 (T + 29C, também no exon 1), através de reacção em cadeia da polimerase (PCR) do comprimento do fragmento -restriction polimorfismo, como descrito em outros lugares [24].
In vitro Avaliação do rs1982073
TGF-p1 + 29C
ou
TGF-p1 + 29T
transfectantes estáveis
também testamos se
TGF-p1
rs1982073 (T + 29C) C genótipos variantes influenciou o potencial metastático de células de câncer de pulmão in vitro como se segue. Para estas células experiências, A549 e PC9, ambos provenientes de adenocarcinoma do pulmão humano, foram cultivadas em meio F12 de Ham (A549) ou meio RPMI 1640 (PC9) contendo 10% de soro bovino fetal e antibióticos (100 unidades /ml de penicilina e 100 unidades /ml de estreptomicina ) a 37 ° C com 5% de CO
2, andmedium foi atualizado a cada 2-3 dias. Quando as culturas de células atingiram cerca de 50% de confluência em meio isento de soro fresco, que foram transfectadas com um vírus de controlo ou com um TGF-p1 (+ 29C ou + 29T) -overexpressing lentivírus (construído como descrito abaixo) a uma multiplicidade de infecção de 100 , incubadas durante 48 horas, e ainda mais cultivadas em meio F12 de Ham (A549) ou meio RPMI 1640 (PC9). A eficiência de transfecção, medido em termos de expressão celular da proteína verde fluorescente por microscopia de fluorescência (Leica DMI4000B), verificou-se ser 99%. As células transfectadas foram então testados quanto à sua capacidade invasiva e motilidade, tal como descrito abaixo.
TGF-p1 ADNc foram amplificadas por PCR, com uma biblioteca de ADNc a partir de células do músculo liso brônquico foi utilizado como o molde de ADN. Os iniciadores foram 5′-CCAAGCTTATGCCGCCCTCCGGGCTG-3 ‘e 5′-CGGAATTCTCAGCTGCACTTGCAGGAG-3’ (sequências sublinhadas indicam os locais de restrição HindIII e EcoRI). O TGF-p1 com cDNAs + 29C e + 29T foram enviados para Genechem Company (Xangai, China) para a construção dos sistemas de lentivírus relevantes.
Após a transfecção, as células A549 e PC9 foram extraídas em tampão de lise frio [Tris 50 mM -HCl (pH 7,5), NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, MgCl2 1 mM, 0,5% de Triton X-100, e mistura de inibidor de protease (PMSF 1 mM, 2 ug /mL de aprotinina, 1 ug /mL de leupeptina, e 1 ug /mL de pepstatina A)]. Os lisados celulares foram então clarificados por centrifugação a 10.000 ×
g
durante 20 minutos, os sobrenadantes foram recolhidos, e a concentração de proteína de cada ligado foi determinada com um kit de ensaio de BCA Protein. Uma quantidade igual de proteínas em lisados foram separados em 12% de sulfato de dodecilo de sódio para a electroforese em gel de poliacrilamida e transferidos para membranas de difluoreto de polivinilideno (Bio-Rad). TGF-p1 foi detectado por anticorpos específicos # 3709 a partir de Cell Signaling Technology.
A migração celular foi avaliada com um ensaio de zero e invasividade celular com um ensaio Transwell como se segue. Para o ensaio de zero, as células A549 e PC9 foram semeadas em placas de cultura de 24 poços a 2 x 10
5 células /poço e incubadas durante 24 horas, após o que a monocamada foi arranhadas com uma agulha estéril ponta da pipeta de 200 ul, os as placas foram lavadas duas vezes com solução salina tamponada com fosfato, e as células foram incubadas com F12 de Ham livre de soro (A549) ou isento de soro RPMI (PC9) durante 24 horas, após o que as imagens foram capturadas por microscopia de 100 vezes e a “cura “zonas foram medidas com um microscópio de contraste de fase (Leica DMI4000B). Para cada tipo de célula, três experiências de transfecção independentes foram realizados, e todas as experiências foram realizadas em triplicado.
para os ensaios de Transwell, células A549 e PC9 foi suspensa em F12 de Ham livre de soro ou meio RPMI 1640 isento de soro a uma densidade de 3 x 10
5 por mL, e 100 uL-se alíquotas foram adicionados aos compartimentos superiores de um de 24 cavidades que contém filtros Transwell câmara de policarbonato com poros de 8 ^ m e revestida com 60 uL de Matrigel (1: 9 diluição, Sigma Aldrich). Cinco alíquotas de cem microlitros de F12 ou meio RPMI 1640 com FBS a 10% de Ham foram adicionados às câmaras inferiores, e as câmaras foram incubadas durante 24 horas. Nessa altura, as células do compartimento superior foram removidas com um cotonete de algodão, lavadas com PBS, e fixado em 100% de metanol. As células que tinham invadido através do Matrigel à superfície inferior foram corados com 4 ‘, 6-diamidino-2-fenilindole e quantificadas por contagem do número de células fluorescentes em 5 campos aleatórios por filtro a 400 x de ampliação. Três experimentos independentes foram realizadas.
Análise Estatística
Nos estudos de correlação amostra clínica, o tempo OS foi calculado a partir do primeiro dia de tratamento de radiação até a morte ou a última conhecido follow-up. vezes CPOS foram calculadas a partir do primeiro dia do tratamento com radiação para o primeiro dia observada de metástases distantes ou o Ultimo seguimento. As associações entre a distribuição de
TGF-p1
genótipos e características clínicas foram avaliados pelo teste exato de Fisher ou χ de Pearson
2 testes. Cox análise de riscos proporcionais foi utilizado para avaliar a influência de vários
TGF-p1
genótipos no OS e CPOS, calculadas como taxas de risco (HR) com os correspondentes intervalos de confiança de 95% (IC). Todos os RHs foram ajustados para idade, sexo, raça, índice de Karnofsky, tabagismo, histologia do tumor, o volume do tumor bruto, estágio da doença, o recebimento de quimioterapia ou radioquimioterapia simultânea, número de ciclos de quimioterapia, e dose de radiação recebida. A análise de Kaplan-Meier foi utilizado para avaliar o efeito de
TGF-p1
genótipo sobre a probabilidade cumulativa de CPOS. Todos os
P valores
relatadas foram em frente e verso, e
P Art 0,05 foi considerado para indicar significância estatística. As análises estatísticas foram realizadas com SPSS 16.0 (SPSS Inc. Chicago, IL).
Os dados in vitro foram expressos em média ± SD de três experiências independentes (cada um dos quais tinha sido realizados em triplicado) e comparados com
t
testes de Student.
valores de P
. 0,05 foram considerados para indicar diferenças estatisticamente significativas
Resultados
Clinical Correlação Amostra Estudos
As características clínicas dos 205 analisados pacientes estão resumidos na Tabela 1. paciente-, doença- e características relacionadas com o tratamento de acordo com a
TGF-p1
polimorfismos foram bem equilibradas em termos de idade, raça, sexo, índice de Karnofsky, o uso do tabaco, histologia do tumor, volume total do tumor, estágio da doença, número de ciclos de quimioterapia, o recebimento de quimioterapia vs. apenas a radiação, e dose de radiação recebida (não mostrado).
a mediana vezes seguimento foram de 17 meses para o todo o grupo e 39 meses para os pacientes que estavam vivos no momento da análise (variação, 1-97 meses). O tempo de sobrevida média foi de 21 meses. Um total de 103 pacientes (50%) MS desenvolvido em 134 unidades; 27 pacientes apresentavam DM em mais de 1 local (23 em 2 locais e 4 em 3 locais). Os locais de metástases incluídos cerebral (n = 39), osso (n = 26), pulmão (n = 26), supra-renais (n = 13), fígado (n = 14), e outros locais não especificados (N = 16).
a figura 1 ilustra a análise de Kaplan-Meier do efeito da
TGF-p1
genótipo e cumulativa probabilidade de CPOS. O
TGF-p1
rs1800469 (C-509T) genótipos CT + TT foram associados com CPOS significativamente menores médias (11 meses versus 31 meses para o genótipo CC,
P
= 0,010; A Fig. 1A ). O
TGF-p1
rs1982073 genótipos (T + 29C) CT + CC também foram associados com CPOS medianos significativamente mais curtos (em comparação com o genótipo TT) (
P
= 0,013; A Fig. 1C). No entanto, não foram encontradas associações entre qualquer genótipo (AP, AC, CC ou CG + CC) do SNP
TGF-p1
rs1800471 (G915C) e CPOS (Fig. 1B).
valores
P foram calculados por meio de testes de log-rank.
Os resultados de análises multivariadas de
TGF-p1
polimorfismos e os resultados clínicos ajustados para-paciente, doença- e tratamento factores relacionados com são apresentados na Tabela 2. o
TGF-p1
rs1800469 (C-509T) genótipos CT + TT foram associados com o aumento horas para oS e CPOS comparação com o genótipo CC (HR para oS = 1.463, 95% IC = 1,012-2,114,
P
= 0,043; RH para CPOS = 1,601, IC 95% = 1,042-2,459,
P
= 0,032). O
TGF-p1
rs1982073 (T + 29C) genótipos CT + CC também foram associados com um aumento de RH para CPOS comparação com o genótipo CC (HR = 1,589, IC 95% = 1,009-2,502,
P
= 0,046). Não foram encontradas associações entre quaisquer genótipos (AP, AC, CC ou CG + CC) do SNP
TGF-p1
rs1800471 (G915C) e OS ou CPOS.
Nós ainda analisados a associação de
TGF-p1
rs1800469 (C-509T), rs1800471 genótipos (G915C), e rs1982073 (T + 29C) com os sites de órgãos em que desenvolveram metástases usando modelos de risco proporcional de Cox. Os genótipos CT ou TT de rs1800469 (vs. CC) e da TC ou CC genótipos rs1982073 pf (vs. TT), foram ambos associados com um aumento de duas vezes em horas para o cérebro, ossos e metástases pulmonares nas análises univariadas. No entanto, na análise multivariada, a única associação significativa foi entre CT rs1982073 ou CC (vs. TT) e metástases cerebrais (HR = 2.567 [IC = 1,155-5,702],
P
= 0,021) (Tabela 3) .
achados in vitro
a eficiência de transfecção para as duas linhas celulares de cancro do pulmão A549 e PC9 foi de aproximadamente 99% (fig. 2A, B). A transfecção de células A549 e PC9 com
TGF-β1
+ 29C ou + 29T induziu os aumentos esperados na expressão de ambas precursoras e ativos formas de TGF-p1 (Fig. 2C, D). Ambas as linhas celulares, por transfecção com o TGF-p1 + 29C construto, demonstraram aumento da motilidade (Figs. 3A, B, C, E) e aumento da invasão (Fig. 3D, F), em relação aos transfectantes + 29T. Estes resultados sugerem que o genótipo TGF-p1 + 29C, em ambas as linhas celulares de cancro de pulmão induzido um fenótipo com potencial aumentado para a metástase
(A, B) de rotulagem de fluorescência indicaram a eficiência de transfecção foi de . 99% para ambos linhas de celular. (C, D) análise de Western blot confirmou que a transfecção quer com ou + 27C + 29T levou a sobre-expressão de TGF-p1, em ambos precursor e formas activas. Con, controlar construção lentivírus; gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GADPH), foi utilizado como um controlo de carga.
(A, B) de fluorescência de contraste de fase imagens microscópicas mostram que em 24 horas, mais de + 29C a transfectantes migraram para uma área de “cura” em um ensaio de zero do que + 29T transfectantes. Estes resultados estão representados quantitativamente como a distância migrada durante o ensaio de zero em painéis C e E. (D, F), a + 29C transfectantes mostrou maior capacidade invasiva, tal como indicado pelo número de células de penetração de uma membrana num ensaio Transwell. Os resultados são dados como médias de 3 experiências independentes; barras de erro representam o desvio padrão.
Discussão
A metástase continua a ser uma das principais causas de falha do tratamento para pacientes com NSCLC tratados com radioterapia, com ou sem quimioterapia [29], [30]. Fatores que predizem o comportamento biológico eo potencial metastático das NSCLC foram activamente procurados nos últimos 3 décadas. A descoberta mais significativa do estudo atual é a associação entre a variante
TGF-p1
genótipos, rs1800469 e rs1982073 e piores CPOS entre os pacientes com NSCLC dada radioterapia; Esta descoberta sugere que SNPs em
TGF-p1
genes poderiam ser usados como biomarcadores para prescrever radioquimioterapia personalizada de acordo com o padrão esperado de recorrência antes do início do tratamento. Nós ainda validada a associação do
TGF-β1
SNP rs1982073 T + 29C com a migração avançada e capacidade de invasão de linhas celulares de cancro do pulmão, dois A549 e PC9, in vitro.
Outras análises do nosso resultados mostraram uma estatisticamente maior risco de metástases cerebrais em pacientes com os
TGF-p1
rs1982073 (T + 29C) genótipos variantes C. Metástase cerebral é uma complicação comum de NSCLC localmente avançado, com 21% a 54% de pacientes que desenvolvem metástases cerebrais durante o curso da doença [31], [32]. O tempo operacional de pacientes com metástases cerebrais geralmente varia desde cerca de 3 a 6 meses [33] – [35], e 30% -50% dos pacientes com metástases do cérebro morrem de causas neurológicas [36], [37]. irradiação craniana profilática (PCI) foi demonstrada em dois estudos ao acaso para reduzir a incidência ou retardar o aparecimento de metástases cerebrais em pacientes com NSCLC localmente avançado após terapia primária, e o uso de ICP pode prolongar OS nestes doentes [38], [39 ]. O Radiation Therapy Oncology Group (RTOG), em uma tentativa de estender estes resultados, abriu um grande ensaio (RTOG 0214) do PCI versus a observação para pacientes com NSCLC localmente avançado. Em pacientes com doença em estágio III, sem progressão da doença após a terapia, PCI diminuiu a taxa de metástases cerebrais, mas não melhorou OS ou sobrevida livre de doença [40]. Idealmente, seria prescrever PCI apenas para pacientes com alto risco de desenvolver metástases cerebrais. No entanto, até agora, nenhuma maneira confiável foi encontrado para identificar quais pacientes irão desenvolver metástases cerebrais e que não vai, daí a intensa busca de biomarcadores. Portanto, a nossa conclusão de que
TGF-p1
rs1982073 (+ 29C T) genótipos variante C foram associados com metástase cerebral é de particular importância na gestão das NSCLC, porque este SNP pode servir como um biomarcador para identificar pacientes que se beneficiariam do PCI.
A possibilidade de usar
TGF-p1
SNPs como biomarcadores preditivos em outros tipos de câncer tem sido estudada por outros. Num desses estudos, o
TGF-p1
rs1800469 C-509T homozigoto TT genótipo foi encontrado para ser associado com um aumento do risco de ter uma forma agressiva do cancro da próstata, mas o rs1982073 T + 29C (T + 29C) C genótipos variantes não foram [26]. Em contraste, um outro grupo mostrou que os pacientes com câncer de mama que carregavam o alelo T + 29C C tiveram menores taxas de sobrevivência de 5 anos livres da doença do que aqueles com o genótipo TT [25]. Outra evidência é emergente que SNPs em alguns outros genes podem prever o resultado em NSCLC. Por exemplo, as aberrações genéticas nos genes para metaloproteinase de matriz (MMP) -3 e MMP-9 ou o XRCC1 proteína de reparação de raios-x têm sido relatados para influenciar o comportamento clínico e risco de metástases de cancro do pulmão [41] – [43]. Esses biomarcadores têm ainda a ser amplamente traduzido para a prática clínica. Nossos resultados estão de acordo com estes relatórios: DM foi um grande padrão de fracasso em nosso estudo (taxa de CPOS, 50,2%), e os genótipos variantes no
TGF-p1
rs1800469 (C-509T) e
TGF-p1
rs1982073 (T + 29C) parecia estar associado com menor tempo de CPOS. Se validado em estudos maiores, nossas descobertas podem servir de base para a utilização desses genótipos como um marcador de prognóstico da evolução clínica, em especial predisposição para metástases cerebrais, em pacientes com NSCLC.
A base mecanicista dos resultados da estudo precisa de mais investigação. Alguns pesquisadores sugeriram que os níveis de proteína TGβ1 pode prever de forma independente a sobrevivência em pacientes com adenocarcinoma do pulmão [18], [44] – [46]. Nesses estudos, a expressão TGF-p1 em tecidos de câncer de pulmão primário foi maior entre os pacientes com metástases pulmonares do que entre os pacientes sem essas metástases. Relatórios anteriores sugeriram que os polimorfismos na sequência de sinal em 915 [47], C-509T [48], e T + 29C (que codifica Leu10Pro) no gene
TGF-p1 foram associados com o aumento da produção de TGF-p1. Estes estudos podem lançar luz sobre nossa conclusão de que genótipos variantes em
TGF-p1
rs1800469 (C-509T) e
TGF-p1
rs1982073 (T + 29C) foram associados com menor tempo de CPOS em pacientes com NSCLC tratados com radioterapia definitiva.
em nosso estudo, tendo os genótipos
TGF-p1
rs1800469 (C-509T) CT ou TT parecia na análise univariada a ser associado com menor oS, e não foram encontradas associações entre os genótipos
TGF-p1
rs1982073 (T + 29C) OS e. Este achado é inconsistente com um relatório do Mu et al. [49] mostrando que pacientes com câncer de mama em estágio inicial e o genótipo T /T ou altos níveis de TGF-p1 intratumorais teve vezes OS mais curtos do que aqueles sem T /T ou com baixos níveis de TGF-p1 intratumorial. No entanto, esta associação foi diferente para os pacientes com doença em estágio final: para aqueles pacientes, tendo a T /T genótipo foi associado com menor risco de recorrência da doença. Estes resultados indicam que
TGFB1
tem funções complexas na progressão do câncer de mama, que apoia as conclusões de outros estudos que
TGF-p1
tem efeitos conflitantes sobre o crescimento de tumores e metástases.
A nossa estudo teve várias limitações; sua única instituição, a natureza retrospectiva exigir que as suas conclusões sejam validados em maiores, de preferência multi-institucionais estudos prospectivos. Outra limitação foi que nós não medir os níveis de proteína TGF-p1 no plasma antes, durante ou após a terapia de radiação, e por isso não poderia determinar se ter o
TGF-p1
rs1982073 (T + 29C) CT genótipo influenciou a expressão de TGF-p1 níveis de proteína in vivo, nem poderíamos determinar se o risco de DM correlaciona com mudanças nesta variável antes ou depois do tratamento. Assim esclarecimentos ainda é necessária a respeito das relações entre polimorfismos em
TGF-p1
e os níveis da proteína TGF-p1 no plasma e prognóstico em pacientes com NSCLC. Finalmente, nossa pesquisa foi limitada a pacientes que receberam radioterapia definitiva. Se o
TGF-p1
rs1982073 genótipos variantes também prever o resultado entre os pacientes que se submetem a cirurgia ou outras terapias não baseados em radiação permanece obscuro.
O nosso trabalho anterior [24] mostrou que ter o CT ou CC variantes em
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rs1982073 foi associado com menor risco de grave (grau ≥3) pneumonite por radiação, uma observação que sugere que a intensificação da dose de radiação para aumentar o controle do tumor loco-regional em pacientes com este genótipo seria viável. No entanto, os resultados que se reportam aqui mostrou que pacientes com esses genótipos foram em maior risco de DM, especificamente metástases cerebrais, uma observação sugerindo que o tratamento sistémico e PCI são indicados. Os resultados do nosso estudo sugerem, pela primeira vez, que o
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rs1982073 genótipos variantes pode ser útil como um biomarcador genética para ajudar os médicos adequar o tratamento de acordo com o risco de pneumonite por radiação e DM do paciente. Como são necessários tais, estudos adicionais para validar essa descoberta e investigar os mecanismos pelos quais
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polimorfismos influenciam o curso do desenvolvimento e progressão do câncer de pulmão. Estes tipos de estudos irá ajudar a fornecer uma melhor compreensão do microambiente e metástases de cancro e pode ser um instrumento para a adaptação para o tratamento de NSCLC.