Sumário

ensaios urinários precisos para detecção de cancro da bexiga (BCA) beneficiariam pacientes e sistemas de saúde. Através de perfis genómica e proteómica de componentes da urina, que foram previamente identificados um painel de biomarcadores que pode superar os biomarcadores à base de urina actuais para a detecção não invasiva de BCa. Relata-se o utilitário de diagnóstico de várias combinações multivariados destes biomarcadores. Foi realizado um estudo de validação de caso-controle no qual anulado urina de 127 pacientes (sujeitos portadores de 64 tumor) foram analisados. As concentrações urinárias de 14 biomarcadores (IL-8, MMP-9, MMP-10, sdc1, CCL18, PAI-1, CD44, VEGF, Ang, CA9, A1AT, OPN, PTX3, e apoE), foram avaliadas por enzima-ligada immunosorbent assay (ELISA). desempenho diagnóstico de cada biomarcador e multivariada modelos foram comparados utilizando curva ROC e o teste do qui-quadrado. Um modelo de 8-biomarcador conseguido um diagnóstico mais preciso BCA (sensibilidade de 92%, especificidade de 97%), mas uma combinação de 3 dos 8 biomarcadores (IL-8, VEGF, e APOE) também foi altamente preciso (90% de sensibilidade, especificidade 97%). Para efeitos de comparação, o teste BTA-Trak ELISA comercial alcançada uma sensibilidade de 79% e uma especificidade de 83%, e anulado urina citologia detectado apenas 33% dos casos BCa no mesmo grupo. Estes DataShow que um ensaio com base em urina multivariada pode melhorar sensivelmente a precisão da detecção de BCa não-invasiva. Mais estudos de validação estão em andamento para investigar a utilidade clínica deste painel de biomarcadores para o diagnóstico BCa e monitoramento de doenças

Citation:. Goodison S, Chang M, Dai Y, Urquidi V, Rosser CJ (2012) A Multi -Analyte ensaio para a detecção não invasiva de cancro da bexiga. PLoS ONE 7 (10): e47469. doi: 10.1371 /journal.pone.0047469

editor: Irina Agoulnik, Universidade Internacional da Flórida, Estados Unidos da América

Recebido: 28 de junho de 2012; Aceito: 11 de setembro de 2012; Publicação: 19 de outubro de 2012

Direitos de autor: © Goodison et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por bolsas de investigação a partir dos hospedeiros de bordo Instituto de investigação médica (CJR), Departamento de Saúde James Flórida e Esther Rei Equipe Prêmio de Ciência 10KT-01 (CJR) e National Cancer Institute RO1 CA116161 (SG). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Competir interesses:. SG, VU e CJR são empregados /acionistas da Nonagen Bioscience Corp. Além disso, há há patentes emitidas, produtos em desenvolvimento ou produtos comercializados a declarar. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento. MC e YD declararam que eles não têm um interesse competindo.

Introdução

A detecção não invasiva e monitorização do cancro da bexiga (BCA) permanece um desafio. Anulado citologia urinária (VUC) continua a ser o ensaio à base de urina mais estabelecido para esta finalidade, mas enquanto VUC tem uma especificidade de 93%, o ensaio sofre de sensibilidade baixa (25-40%) e variabilidade dependente do observador [1] .Commercial testes de medição da proteína de matriz nuclear (NMP-22) e o antigénio do tumor da bexiga (BTA) surgiram como testes de diagnóstico da proteína urinária de bca, mas estes ensaios de um único marcador não têm a especificidade de VUC [2], [3]. O conceito de que a presença ou ausência de um marcador molecular irá auxiliar a avaliação clínica não tem provado ser o caso. Isto não é surpreendente quando se considera a variação entre os indivíduos, o cross-talk entre as vias moleculares, e a heterogeneidade de tumores sólidos.

O advento de técnicas de alto rendimento tem permitido uma evolução da pesquisa de marcador único para uma estratégia de avaliação mais global, e temos usado os para identificar promissores novos biomarcadores de BCa. Usando a genómica [4] e proteômica [5] aproxima-se ao perfil dos componentes solúveis e celulares da urina anulada, nós identificamos um painel de biomarcadores que mostram a promessa para o desenvolvimento em ensaios precisos para a detecção BCa não-invasivo. Temos realizaram uma série de estudos de validação [6] – [9], para avaliar a potencial utilidade clínica de um certo número destes biomarcadores. Neste estudo, nós combinamos dados sobre 14 dos nossos candidatos a biomarcadores em uma coorte de 127 indivíduos a fim de obter um ensaio multivariada precisa e robusta para a detecção não invasiva de BCa.

Pacientes e Métodos

Specimen e Recolha de dados

de acordo com a aprovação Institutional Review Board e do consentimento informado (IRB # 560-2006), anulada amostras de urina e informações clínicas associadas foram coletados prospectivamente em um banco de tecidos geniturinário. Antes de qualquer tipo de intervenção terapêutica, -100 mL de urina vertida foi obtido a partir de cada sujeito. Cinquenta mililitros de urina foi usada para laboratório de análises clínicas por procedimentos padrão. A alíquota de urina restante foi atribuído um número de identificação único antes do processamento laboratorial imediata. Cada amostra de urina foi centrifugada a 600 ×

g

4 ° C durante 5 min. O sobrenadante foi decantado e aliquotadas, enquanto o sedimento urinário foi congelado rapidamente. Tanto o sobrenadante e sedimento foram guardados a -80 ° C antes da análise. O teor de proteína das alíquotas foi medida utilizando um Pierce 660 nm Kit de ensaio de proteína (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, EUA) e um espectrofotómetro NanoDrop (ND-1000, ThermoScientific, Wilmington, DE, EUA). O banco de tecidos foi consultado para amostras adequadas para análise, que incluiu amostras não-consecutivos de 127 indivíduos. A coorte do estudo consistiu de 63 indivíduos sem história prévia de carcinoma urothelia celular, hematúria macroscópica, infecção do trato urinário ativa ou litíase urinária (65% com esvaziamento sintomas e 35% com hematúria microscópica) e 64 indivíduos com carcinoma urotelial recém-diagnosticados. As amostras de doentes com doença renal ou de insuficiência renal conhecido documentado não foram incluídos. De acordo com o Painel de Consenso Internacional sobre Marcadores Tumorais bexiga [10], esta coorte serviu como um (estudo de validação) Fase II. Os dados são relatados usando a STARD [11]. Todos os indivíduos foram avaliados no ambulatório de Urologia. Exame de urina e VUC foram realizadas em todas as disciplinas. Todos os indivíduos foram submetidos a cistoscopia escritório e imagem axial do abdômen e pelvis.In o grupo câncer, confirmação histológica pós-operatório de carcinoma urotelial, incluindo grau e estágio, foi gravado. informações pertinentes sobre a apresentação clínica, teste, graduação histológica [12], [13] e os resultados são apresentados na Tabela 1. A média de acompanhamento dos nossos grupos de controlo e de câncer foi de 11,5 e 12,0 meses, respectivamente.

imunossorvente ligado a enzima durante 14 Ensaios urinário biomarcadores e hemoglobina

Níveis de interleucina 8 humana (IL-8, Cat # ab46032 Abcam, Cambridge, MA, EUA), metaloproteinase 9 da matriz (MMP-9, gato # DMP900 R D Systems Inc., Minneapolis, MN, EUA), Sindecana (SDC-1, Cat # ab46507 Abcam, Cambridge, MA, EUA), quimiocina (motivo CC) ligando 18 (CCL18, Cat # ab100620 Abcam, Cambridge , MA, EUA), Activador de Plasminogénio Inibidor 1 (PAI-1, Cat # 0207-EA Signosis Inc., Sunnyvale, CA, EUA), CD44 (Cat # AB 45912Abcam, Cambridge, MA, EUA), factor de crescimento endotelial vascular ( VEGF, Cat # 100663 Abcam, Cambridge, MA, EUA), angiogenina (ANG, Cat # CK400 CellSciences, Canton, MA, EUA), anidrase carbônica 9 (CA9, Cat # DCA900 R D Systems Inc., Minneapolis, MN, EUA), alfa 1-antitripsina (A1AT, Cat # ab108799 Abcam, Cambridge, MA, EUA), osteopontina (OPN, Cat # DOST00 R D Systems, Inc., Minneapolis, MN, EUA), pentraxina 3 (PTX3, gato # DPTX30 R D Systems, Inc., Minneapolis, MN, EUA) e humano apolipoproteína e (ApoE, Cat # KA 1031 Abnova, noz, CA, EUA) foram monitorizadas em amostras de urina, utilizando ensaios de imunoabsorção de enzima comercial (ELISA) . Um ensaio comercial (BTA-Trak © Ca # 662150 Polymedco Inc. Cortlandt Manor, Nova Iorque, EUA) para a detecção BCa, e que está disponível em formato ELISA, também foi monitorada em cada amostra de urina. Além disso, um ensaio ELISA disponível comercialmente foi usado para medir os níveis de hemoglobina urinária ensaios .ELISA (Cat # E88-135 Bethyl Laboratories Inc., Montgomery, TX, EUA) foram realizadas de acordo com as instruções do fabricante. As curvas de calibração foram preparadas usando os padrões purificadas para cada proteína avaliada. Ajuste de curva foi realizada por regressão logística linear ou de quatro parâmetros, seguindo as instruções do fabricante. O pessoal do laboratório estavam cegos para diagnóstico final

Devido à variabilidade inevitável de urina vertida em relação ao volume total e tempo dentro da bexiga, cada biomarcador foi normalizada para creatinina urinária como descrito anteriormente [5] – [9]. . A concentração de creatinina urinária foi medida usando um ensaio enzimático disponível comercialmente (Cat # KGE005 R D Systems Inc., Minneapolis, MN, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. Creatinineconcentrations de amostras desconhecidas foram calculadas por comparação com uma curva padrão.

Análise de Dados

Nós investigamos o desempenho diagnóstico de 14 biomarcadores urinários para a detecção BCa, tanto individualmente como em todas as combinações. Nós usamos testes de Wilcoxon para determinar a associação entre cada biomarcador e BCa. Para as análises combinatórias, os objetivos foram identificar os modelos multivariados mais precisos no geral, mas também para definir modelos precisos utilizando um número mínimo de biomarcadores necessárias. Para selecção do modelo, foi aplicado o procedimento de regressão logística com o estatuto de BCA (sim x não) como a variável resposta e os biomarcadores como preditivos variables.We utilizado o método de todo-subconjunto para avaliar o valor preditivo de cada possível subconjunto de biomarcadores. O critério de informação Bayesiano (BIC) foi utilizado para comparar os modelos [14]. O BIC, um critério amplamente utilizado na selecção do modelo, equilibra a probabilidade do modelo eo número de biomarcadores incluídos nos métodos de seleção de variáveis ​​model.Automated, como a seleção passo a passo, pode produzir modelos instáveis ​​[15]. Como sugerido por Austin e Tu [15], foi utilizado o método Bootstrap (utilizando 1000 amostras Bootstrap) para selecionar o modelo mais eficiente e estável para prever a presença de BCa. Para Bootstrap amostragem, foi utilizada a técnica de estratificação: Bootstrap amostras foram retiradas de indivíduos com e sem BCa BCa separadamente, e as duas amostras foram fundidas em conjunto para formar uma amostra global Bootstrap. A técnica de amostragem estratificada assegura que o número de doentes com e sem BCa BCa numa amostra Bootstrap foram os mesmos que no conjunto de dados original. Para cada amostra Bootstrap, avaliamos o valor prognóstico de cada subconjunto candidato de biomarcadores usinga modelo de regressão logística, e todos os subconjuntos de candidatos biomarcadores foram classificados a partir do topo para o fundo do BIC. Em seguida, o subconjunto de biomarcadores que foi classificado no topo com mais frequência entre as amostras 1000 Bootstrap foi escolhida como a melhor combinação de biomarcadores para a predição de BCa.

Depois que o modelo preditivo foi selecionado, geramos operacional receptor não paramétrico characteristic (ROC) curvas que plotados o valor de sensibilidade contra a taxa de falso-positivo (1-especificidade). A capacidade relativa do conjunto de biomarcadores seleccionados para indicar BCa foi estimada pelo cálculo da área sob as curvas ROC (AUC), com uma AUC mais elevados indicando uma melhor preditor. Nós comparamos AUC pelo teste do qui-quadrado. Com cada biomarcador particular, estimou-se a sensibilidade e a especificidade de cada biomarcador no valor óptimo de corte definido pelo índice de Youden [16], isto é, o valor de corte que maximiza a soma de a sensibilidade e a especificidade. Com combinações dos biomarcadores, primeiro usou o método Bootstrap para identificar o modelo mais preciso usando um número mínimo de biomarcadores necessários, conforme descrito na seção de Análise de Dados. Descobrimos que a combinação de IL-8, o VEGF, e APOE foi o melhor subconjunto dos 8 biomarcadores na predição de BCa. Em seguida, realizada a análise de regressão logística com o estado de BCA (sim x não) como variável de resposta e com IL-8, o VEGF, e APOE como as variáveis ​​preditoras. Foram utilizados os coeficientes de regressão estimados na regressão logística, como os coeficientes de modo a formar uma combinação linear de IL-8, o VEGF, e ApoE, e utilizada a combinação linear de prever BCa. A sensibilidade e especificidade da combinação de IL-8, o VEGF, e APOE foi determinada pelo valor de corte ideal para a combinação linear, isto é, o valor de corte que maximiza a soma da sensibilidade e da especificidade. A significância estatística neste estudo foi fixado em

p Art 0,05 e todos os relatados

P valores

eram de 2 lados. Todas as análises foram realizadas utilizando software SAS versão 9.3.

Resultados

características demográficas, clínicas e patológicas dos 127 indivíduos que compunham nosso grupo de estudo estão ilustradas na Tabela 1. Cinco indivíduos (3 no controle grupo 2 em grupo com câncer) com os dados de biomarcadores em falta foram excluídos indivíduos analysis.No finais no grupo de controlo tinha uma cistoscopia anormal ou imagem axial. Além disso, no seguimento, nenhum dos indivíduos do grupo controle foram observados para desenvolver BCa ou mesmo hematúria macroscópica. Na coorte de câncer, 41% dos indivíduos apresentavam doença invasiva não-muscular e 19% dos indivíduos tinham doença de baixo grau. O tamanho médio do tumor foi de 4,5 cm. Em linha com a nossa experiência anterior [4], anulada a citologia urinária (VUC) na coorte alcançado 98% de especificidade, mas apenas sensibilidade de 33%.

Os níveis de média e mediana dos 14 biomarcadores em urina são apresentados em tabela 2. os níveis de 10 dos biomarcadores foram significativamente elevados em indivíduos com bca, comparados com os indivíduos sem BCa. CD44 e OPN foram significativamente, mas de forma negativa, associada a BCa e sdc1 e PTX3 não foram significativamente associados com BCa. Dado o facto de que a maioria dos pacientes apresenta na clínica urologia com hematúria, tem de se considerar se ensaios de biomarcadores específicos são a detecção de um antigénio de tumor ou uma proteína de soro introduzida na amostra de teste através de sangramento. Para controlar essa possibilidade, quantificado o nível de hemoglobina em todas as amostras e avaliou a correlação de todos os 14 biomarcadores com esta medida de hematúria. Esta análise revelou que os níveis de CCL18 e A1AT teve uma alta correlação com a hemoglobina urinária (coeficiente de correlação de Spearman 0,8)., E assim estes não foram incluídos nos modelos multivariados descritos abaixo

A figura 1 ilustra o desempenho diagnóstico de várias combinações de biomarcadores. Quando todos os 8 BCa biomarcadores associados positivamente foram combinadas, a precisão do diagnóstico global foi de 94%, com uma sensibilidade de 92% e uma especificidade de 97%. regressão logística e uma strategywere 1000 amostra Bootstrap realizados para determinar combinações de biomarcadores de diagnóstico ideais, ou seja, de alta precisão com o menor número de biomarcadores como possible.For cada amostra Bootstrap, subconjuntos candidatos foram classificados utilizando critério de informação Bayesiano [15]. As análises descobriram que a combinação de IL-8, o VEGF, e ApoE foram classificou-se uma 410 vezes (41%), a combinação de VEGF e APOE classificou-se uma 379 vezes (38%), e todas as outras combinações classificou-se um menos de 100 vezes ( 10%). A combinação de IL-8, o VEGF, e APOE obteve um desempenho quase tão bom como todos os 8 biomarcadores combinadas (Figura 1). O ensaio de 3 biomarcador teve uma AUC de 0,968 (95% intervalo de confiança [IC], 0,942-0,992), uma sensibilidade de 90% e especificidade de 97% (precisão global de 93%). A combinação de VEGF e APOE tinha uma precisão global reduzida (89%). O ensaio 2-biomarcador tinha uma AUC de 0,957 (95% de intervalo de confiança [IC], 0,927-0,987), uma sensibilidade de 81% e uma especificidade de 97%. Para efeito de comparação, o ensaio comercial BTA-Trak alcançada uma sensibilidade de 79%, especificidade de 83% e precisão global de 81% (Figura 1).

curvas ROC foram plotados para comparar características do total de 8 de desempenho -biomarker combinação, uma combinação de 3-biomarcador (IL-8, o VEGF, APOE), uma combinação de 2-biomarcador (VEGF, ApoE), e o teste de BTA-Trak. Com base na área sob a curva ROC (AUROC), valores de corte índice de Youden que maximizada a soma de sensibilidade e especificidade foram determinadas para cada biomarcador (cruzado quadrado na curva). Tabela fornece valores de desempenho para cada combinação. PPV, valor preditivo positivo. NPV, valor preditivo negativo.

Discussão

Cancro da bexiga urinária está entre os cinco tumores malignos mais comuns em todo o mundo. Na apresentação, mais de 80% dos tumores da bexiga são não-muscular tumores papilares invasivos que têm uma taxa de sobrevivência de 5 anos de 90%, no entanto, aproximadamente 70% dos pacientes com estas lesões desenvolver recorrência do tumor no prazo de dois anos após o diagnóstico inicial . O fenômeno recorrência de não-muscular BCa invasiva torna um dos cânceres mais prevalentes em todo o mundo. Uma vez BCA é detectada e tratada, os pacientes rotineiramente obter cistoscopia vigilância frequente para monitorar a recorrência do tumor. Se deixada sem tratamento, inicialmente tumores não invasivos podem progredir para tumores invasivos musculares-que têm uma taxa de sobrevivência de 5 anos significativamente reduzida. Assim, a detecção precisa de BCa, de preferência através de análises baseadas em urina não-invasivo, continua a ser um objetivo urgente.

A fim de validar um painel de biomarcadores prometendo descobertos usando genômica e proteômica abordagens [4], [5] , que têm realizado uma série de estudos utilizando ensaios baseados em ELISA [6] – [9]. Neste estudo, investigou um alvo adicional e todos os dados combinados -14 biomarcadores numa coorte de 127 Subjects- para derivar os ensaios de múltiplos analitos de diagnóstico mais precisos. Nós também monitorizado o desempenho do ensaio BTA-Trak comercial nos mesmos casos para comparação, e quantificou-hemoglobina em cada caso, a fim de investigar possíveis correlações entre os biomarcadores e hematúria. Dois biomarcadores, CCL18 e A1AT, foram encontrados a ter uma correlação relativamente elevada com a hemoglobina urinária, levantando a possibilidade de que a fonte de tais proteínas é, pelo menos em parte, soro introduzido através de sangramento. Vamos continuar a investigar esses dois biomarcadores em coortes independentes, mas eles não foram incluídos na análises de regressão logística realizada para identificar combinações de biomarcadores de diagnóstico ideais. Um painel de 8-biomarcador (IL-8, MMP-9, PAI-1, VEGF, ANG, CA-9, ApoE, MMP-10) provou ser o mais preciso (precisão global de 94%) ensaio de múltiplos analitos para a detecção de BCa na coorte de 127 sujeitos. Com assinaturas moleculares multiplex, é usual que alguns dos componentes irá fornecer a maior parte da capacidade de previsão, mas marcadores adicionais fará com que o modelo mais robusto a erros [4]. Ao testar todas as combinações possíveis através de uma estratégia de inicialização, que revelou que três de painel de 8 biomarcador (IL-8, VEGF e APOE) contribuiu com a maior parte das informações. Como um stand-alone ensaio painel de 3-biomarcador alcançado uma precisão global de 93% e mantida tanto alta sensibilidade (90%) e especificidade (97%). Para alcançar alta precisão com o menor número de biomarcadores quanto possível é o ideal, por razões práticas, mas é importante que nós monitoramos todos os biomarcadores promissores ainda em maiores e mais diversas coortes, porque diferentes combinações podem ser mais robusta em condições específicas, tais como a presença de infecção, ou ser mais preciso para a recorrência contra diagnóstico inicial.

os componentes do painel de 3-biomarcador (VEGF, IL-8, APOE) têm sido associados a um número de cancros, incluindo cancro da bexiga, em graus variados. Num estudo de 26 pacientes, Crews

et ai.

Demonstraram que os níveis urinários elevados de VEGF correlacionada com os níveis no tecido excisado [17]. Em um estudo de 219 assuntos do Oriente Médio, os níveis urinários de VEGF foram significativamente maiores em pacientes com BCa. Na coorte de VEGF medição superou VUC, alcançar uma sensibilidade de diagnóstico de 76% [18]. Da mesma forma, Bian demonstrada uma melhoria da sensibilidade do VEGF urinária em comparação com VUC, atingir 69% vs 38%, respectivamente [19]. Em outro estudo, os pacientes com níveis de VEGF urinários elevados apresentaram um maior risco de recorrência da doença [20]. Relatórios anteriores têm implicado a IL-8 na biologia do tumor da bexiga e a sua utilização como um biomarcador potencial de BCa foi investigada em alguns estudos. IL-8 tem sido demonstrado que possuem propriedades mitogénicas e angiogénicas, e os níveis elevados resultar num aumento da tumorigenicidade, progressão e metástase em modelos de rato, supostamente por meio de regulação do factor nuclear kappa B [21]. Os estudos clínicos indicaram que os níveis urinários elevados de IL-8 pode ser associada com a presença de cancro da bexiga. Num estudo de 140 indivíduos, de um ensaio de IL-8 alcançada uma sensibilidade de 59% e uma especificidade de 90% [22], e num estudo de 79 pacientes, uma sensibilidade de 50% e uma especificidade de 90% foi relatado [23]. Estes resultados são muito em linha com os nossos achados ao avaliar IL-8 como um biomarcador indivíduo [7]. Os dados são escassos sobre o papel da APOE em cancros. As funções incluem a melhoria do transporte de lípidos em células e mediação da transdução de sinal por ligação a receptores de lipoproteína [24], [25]. APOE foi mostrado para interagir com o gene de transição epitelial resposta (TERE1), um gene supressor tumoral, em células de tumor da bexiga, resultando em aumento de volume celular e resistência à apoptose [26], [27]. Recentemente, tília

et ai. Relatou que

APOE era um componente de um painel de biomarcadores detectados por espectroscopia de massa, e pode ser associado com o músculo não-invasiva BCa [28].

reconhecer que o nosso estudo tem várias limitations.First como uma instalação de cuidados terciários, que tendem a ver mais alto grau, doença de estágio de alta, o que se reflete em nossa coorte de estudo. Para confirmar a robustez da nossa assinatura, estudos subsequentes deve avaliar coortes maiores que incluem indivíduos com baixo grau da doença, de baixo estágio. Em segundo lugar, foram analisados ​​processados, urinas inclinadas. Urinas foram centrifugadas e separadas em pelete e sobrenadante celular antes do armazenamento a -80 ° C. É possível que as amostras de urina recém anuladas podem fornecer resultados diferentes, e é urina fresca que seria o material utilizado para os ensaios de ponto-de-cuidados. Estamos investigando o desempenho de biomarcadores seleccionados em urinas processadas através de um número de diferentes protocolos, incluindo urina recém-cancelada. Em seguida, a sensibilidade de VUC na nossa coorte de predominantemente de alto grau (grau 3) doença (33%) foi mais baixa do que seria esperado. Isto põe em causa a conhecida variabilidade inter-observador de interpretar VUC. Em estudos subsequentes, iremos utilizar dois citopatologistas para interpretar estes resultados. Além disso, não se sabe como a composição de proteína do sobrenadante de urina podem mudar durante o armazenamento congelado. O número de ciclos de congelamento e descongelamento foi mantido a 1-2 pela divisão do sobrenadante de urina em várias pequenas alíquotas. Por último, o nosso tamanho de amostra de 127 é pequeno e os dois grupos que compunham os 127 indivíduos eram relativamente homogênea, ou seja, quer câncer ativo, ou casos de controle sem câncer ativo, sem histórico de câncer, nenhuma infecção do trato urinário, não litíase urinária, e nenhum hematúria macroscópica. Assim, não foram capazes de avaliar a sensibilidade /especificidade dos nossos biomarcadores entre diferentes fases /grades.The especificidade de prometer biomarcadores precisam ser testados em coortes que são conhecidos por ser problemático com outros ensaios baseados em urina (por exemplo, hematúria, infecção do trato urinário , pedras e disfunção miccional).

a identificação de biomarcadores robustos BCA-associados e o estabelecimento de ensaios baseados em urina multiplex terá vários impactos de curto prazo e de longo prazo. Muitos dos biomarcadores validados neste estudo não foram associados com cancro anteriormente. Análise de o papel destas proteínas na biologia de células tumorais podem elucidar os mecanismos de iniciação e progressão tumoral, e pode revelar novos alvos terapêuticos. , ensaios de BCa precisos clinicamente terá um impacto claro sobre o desempenho de diagnóstico inicial, e sobre o manejo clínico de pacientes pós-tratamento. Se os ensaios de biomarcadores de diagnóstico urinário confiáveis ​​podem reduzir o número de cistoscopias invasivos e desconfortáveis ​​necessárias, as melhorias na conformidade e satisfação do paciente seguirá, e aumento da eficiência e redução de custos vai beneficiar o sistema de saúde. O objetivo final é ser capaz de detectar BCa em tempo hábil de modo que o paciente pode esperar uma melhor qualidade de vida e resultado global.

Conclusões

Através de estudos de fase de descoberta que se aplicavam profiling avançado técnicas para a, analito teste clínico reais preferidas, neste caso, a urina anulado, identificamos assinaturas moleculares que podem detectar com precisão excepcional BCa. Validação de combinações destes biomarcadores urinários utilizando ensaios imunoquímicos confirma que os testes múltiplos analitos poderia melhorar significativamente a detecção não invasiva de BCa, e proporcionar uma base racional para maiores, estudos prospectivos a serem realizadas.

Reconhecimentos

os autores são gratos aos 127 indivíduos que participaram deste estudo clínico.