Abstract
Fundo
A associação entre o antigénio do linfócito T citotóxico 4 (
CTLA-4
) gene -1722T /C polimorfismo (rs733618) e câncer tem sido amplamente avaliados e uma conclusão definitiva permanece indefinida . Nós primeiro realizado um estudo de caso-controle de base hospitalar para medir essa associação de câncer de esôfago com o
CTLA-4
-1722T /C polimorfismo na população Han chinesa, e, em seguida, realizou uma meta-análise para obter uma avaliação global para este problema.
Metodologia /Principais achados
este estudo de caso-controle envolveu 629 de carcinoma de células escamosas do esôfago casos (CCEE) e 686 controles sem câncer bem combinadas idade e sexo. PCR-LDR (reacções de detecção de reacção em cadeia da polimerase-ligase) método foi usado para identificar os genótipos. Meta-análise foi realizada pelo software STATA (v12.0). Este estudo de caso-controle não apresentaram diferença significativa nas distribuições genotípicas e alélicas de
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C entre os casos de câncer de esôfago e indivíduos de controlo, de acordo com as conclusões do mais meta-análise em todos os modelos genéticos. foi observada evidência de grande heterogeneidade entre todos os estudos elegíveis no modelo recessivo. Outras análises de subgrupos por etnia, tipo e sistema de câncer, detectado associações nulos nesta meta-análise.
Conclusão
Este estudo de caso-controle e uma maior meta-análise, não conseguiu identificar a associação entre
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C e risco de câncer
Citation:. Tang W, Qiu H, Jiang H, Sun B, Wang L, Yin J, et al. (2014) Ausência de associação entre linfócitos T citotóxicos Antigen 4 (
CTLA-4
) -1722T /C (rs733618) Polimorfismo e Risco de Câncer: A partir de um caso-controle estudo a uma meta-análise. PLoS ONE 9 (4): e94039. doi: 10.1371 /journal.pone.0094039
editor: Junwen Wang, da Universidade de Hong Kong, Hong Kong
Recebido: 08 de novembro de 2013; Aceito: 11 de março de 2014; Publicação: 07 de abril de 2014
Direitos de autor: © 2014 Tang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi financiado pela Universidade Jiangsu medicina clínica fundo de ciência e tecnologia para o desenvolvimento (JLY20120004), National Natural Science Foundation da China (81370001, 81101889, 81000028), província de Jiangsu Natural Science Foundation (BK2010333, BK2011481), Fundação para o desenvolvimento social da Zhenjiang (SH2010017), talentos Changzhou Jovens e Ciência-Tecnologia Fundação de Serviços de Saúde (QN201102) e Hospital da Affiliated Popular da Universidade fundo de Jiangsu (Y200913). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
Estima-se que cerca de 12,7 milhões de múltiplos casos de câncer e 7,6 milhões de mortes por câncer de ter ocorrido em 2008 em todo o mundo, com mais de metade dos casos e cerca de dois terços das mortes nos países em desenvolvimento [1]. A evidência está montando que o câncer é um complexo de doença resulta de interacções entre várias origens genéticas e fatores ambientais [2], [3]. De tarde, uma série de estudos demonstram que as variantes genéticas dos genes que regulam a activação e proliferação de linfócitos T e da natureza assassino (NK) podem influenciar o risco de cancro [4], [5]. Na última década, os polimorfismos de um único nucleótido (SNPs) foram extensivamente investigados, e muitos estudos examinaram a hipótese de que as variantes genéticas dos genes imunes podem ser relevantes para o risco de uma variedade de cancros [6], [7].
antigénio do linfócito T citotóxico 4 (CTLA-4), também denominado CD152, é um membro da superfamília das imunoglobulinas. CTLA-4 é expresso principalmente nas células T activadas, actua como um regulador de retenção vital da proliferação de células T e a activação, e induz a apoptose Fas-independente de células T activadas para inibir ainda mais a função imunitária de células T [6], [8 ]. O bloqueio CTLA-4 e a função reforçar a activação da célula T, vários tipos diferentes de tumores malignos em ratos transplantados-tumorais foram inibidas ou curado, e de propriedade de imunidade anti-tumor de longa duração [9]. Ele sugere que o CTLA-4 desempenha um papel importante na carcinogénese.
CTLA-4
gene está localizado no cromossoma 2q33, e é composta de quatro exões que codificam vários domínios funcionais da proteína CTLA-4 e possuem vários SNPs vitais, tais como o + 49A /L (rs231775), -318C /T (rs5742909), A /C (rs733618) SNPs CT60G /A (rs3087243), -1661A /G (rs4553808) e -1722T, etc [6], [10].
A meta -a análise mostrou que
CTLA-4
+ 49A /G polimorfismo pode ser um fator de risco para o câncer, enquanto -318C /T e + 6230G /a (CT60) polimorfismos foram a falta de associação com o câncer [4]. De tarde, Geng e colegas relataram uma meta-análise com um resultado negativo sobre a associação entre o
CTLA-4
-1722T /C polimorfismo eo risco de câncer [11]. desequilíbrio de ligação (LD) lote de
CTLA-4
(envolvendo rs733618, rs4553808, rs5742909, rs231775 e rs3087243) foi gerado utilizando o programa Haploview 4.2 e os resultados sugerem que -1661A /G (rs4553808) e -318C /T (rs5742909) estão em alta LD; os outros estão em baixo LD [11]. O
CTLA-4
-1722T polimorfismo /C não foi investigada em câncer de esôfago. Para investigar mais esta relação potencial, decidimos avaliar a associação da
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C com o risco de câncer de esôfago em um estudo de caso-controle de base hospitalar, e em seguida realizaram uma meta-análise abrangente para derivar um resultado mais preciso.
Materiais e Métodos
assuntos
Este estudo de caso-controle de base hospitalar incluídos 629 carcinoma esporádica de esôfago de células escamosas (CCEE) casos e 686 de câncer assuntos -free consecutivamente recrutamento do Hospital Popular afiliada da Universidade de Jiangsu e Affiliated Hospital da Universidade de Jiangsu (Zhenjiang City, província de Jiangsu, China), entre outubro de 2008 e dezembro de 2010. todos os recrutados indivíduos eram residentes locais de população Han chinês, e todos CICAc indivíduos foram diagnosticados através de ressecção cirúrgica e exame patológico. Os sujeitos CICAc que tiveram uma história de tumor maligno pessoal ou doença auto-imune, ou tinham sido submetidos a radioterapia ou a quimioterapia foram excluídos. Etnia, sexo e idade média (± 5 anos) dos controles foram bem adaptado aos casos de câncer de esôfago. Os indivíduos controles foram selecionados entre os dois hospitais para a cura da fratura. No recrutamento, este estudo de caso-controle de base hospitalar foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade de Jiangsu (Zhenjiang, China). Informações de todos os sujeitos foram coletados a partir de um questionário estruturado que foi administrado por dois médicos de investigação experientes. As informações de dados demográficos (por exemplo, idade, sexo) e fatores de risco relacionados (como, tabagismo e consumo de álcool) está listada na Tabela 1. Cada sujeito assinou o termo de consentimento informado e doou amostra de 2 ml de sangue periférico.
extração de DNA, a seleção SNP, e genotipagem
As amostras de sangue foram coletadas com ácido etilenodiamino tetra-acético (EDTA) tubos anticoagulante vacutainer (BD Franklin Lakes NJ, EUA). O ADN genómico foi extraído de linfócitos utilizando o kit DNA QIAamp sangue Mini (Qiagen, Berlim, Alemanha) e de ADN amostras foram congeladas a -80 ° C. Genotipagem de
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C, foi levada a cabo utilizando as reacções em cadeia de polimerase de reacção, detecção de ligase (LDR) por PCR method [12]. O Shanghai Biowing Applied Biotechnology empresa fornece suporte técnico para genotipagem. Cento e sessenta amostras foram selecionados aleatoriamente e reciprocamente testado com diretamente sequenciamento para controle de qualidade, e a reprodutibilidade foram de 100%. Os iniciadores de sequenciamento diretamente utilizado para
CTLA-4
-1722T /C genotipagem foram as seguintes: F: 5 ‘GCAATAACAACCTAATGGGCAC 3’; R:. 5 ‘ACTTCCACAGGCTGAACCACT 3’ (figura S1)
A análise estatística
test
Qui-quadrado (
χ
2) foi realizado para medir as diferenças de as distribuições de genótipos, características demográficas e variáveis selecionadas entre os casos de câncer de esôfago e controles. freqüências genotípicas de
CTLA-4
-1722T /C polimorfismo entre os controles foram testados para Hardy-Weinberg (HWE) usando uma calculadora baseada na Internet (https://ihg.gsf.de/cgi-bin /hw/hwa1.pl). As associações entre
CTLA-4
-1722T /C lócus eo risco de ESCC foram analisados por meio de regressão logística não condicional para as RUP brutos e ajustados RUP quando era apropriado. As análises estatísticas foram implementados em SAS 9.1.3 software (SAS Institute, Cary, NC). A
P
. 0,05 (bicaudal) foi definido como critério de significância estatística
análise Meta
A meta-análise é relatado na base do Itens de relatório preferidos para meta-análises (PRISMA) orientação (Checklist S1) [13].
Embase, PubMed e CBM (chinês BioMedical Disc), bem como CNKI (Knowledge National Infrastructure China) do banco de dados foram pesquisados até 01 de agosto de 2013 para publicações que investigaram a associação de
CTLA-4
-1722T polimorfismo /C com o risco de câncer. Os termos de combinação eram “cancro” ou “tumor” ou “carcinoma” ou “neoplasia” e “antigénio de linfócito T citotóxico 4 ‘ou’
CTLA-4
‘ou’ CD152 ‘, anexa com” mutação ” ou “variante” ou “SNP” ou “polimorfismo”. Além disso, a linguagem de publicação foi restrito a Inglês e Chinês, e foram identificados todos os estudos realizados em seres humanos. Os resultados da pesquisa foram complementados por verificar todas as referências listadas nesses estudos e comentários publicados. Os estudos incluídos foram qualificados se eles preencheram os principais critérios incluídos: (1) concebido como um estudo de caso-controle retrospectivo ou aninhado, (2) avaliaram a
CTLA-4
-1722T /C polimorfismo eo risco de câncer, ( 3) fornecer contagens de genótipos de
CTLA-4
-1722T /C polimorfismo entre casos e controles de câncer, e distribuições (4) controle de genótipos consistentes com HWE. Os principais critérios de exclusão foram: (1) estudos de caso-controle não, (2) Comente publicações e (3) os dados sobrepostos. A informação foi cuidadosamente e independentemente extraídos por três revisores (W. Tang, H. Qiu, e H. Jiang). No caso de avaliações conflitantes, as diferenças foram resolvidas por uma discussão mais aprofundada entre todos os autores. Os dados a seguir foi extraído:. Primeiro autor, ano de publicação, tipo de câncer, país, etnia, número de casos e controles, o método de genótipo, alelos e genótipos frequência e HWE nos controles
Nesta meta-análise , o odds ratio brutas (OR) com os intervalos de confiança de 95% (IC 95%) foi utilizado para avaliar a força da associação entre o risco
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C e câncer. O Z-teste e
P
-valor (bicaudal) foi utilizado para medir a importância do OR reunidas, ea significância estatística foi definida como
P Art 0,05 (bicaudal ). Heterogeneidade entre os estudos foi avaliada por um I-quadrado com base em Chi
2 teste, eu
2 25% indicaram baixa heterogeneidade, 25% ≤I
2≤50% indicaram heterogeneidade moderada, e eu
2 50% indicaram grande heterogeneidade [14]. Se eu
2 50% ou
P Art 0,10, as RUP reunidas foram calculados pelo modelo de efeitos aleatórios (o método DerSimonian-Laird), caso contrário, o modelo de efeitos fixos foi implementado (o Mantel-Haenszel método). análises de subgrupos foram implementadas para medir específicos de etnia, de tipo específico de câncer e efeitos específicos de um sistema de acordo com a etnia, tipo de câncer (se qualquer tipo de câncer avaliados por menos de três investigações individuais, foi combinado em “outros tipos de câncer”) e sistema. O gráfico de funil e teste de Egger foram realizadas para medir o viés de publicação, que foi avaliada por inspeção visual de uma trama assimétrica. Para heterogeneidade, gráfico de funil e teste de Egger, a significância estatística foi considerada em
P Art 0,1. Nesta meta-análise, todas as análises estatísticas foram realizadas pelo software STATA (versão 12.0).
Resultados
As características basais
Os dados demográficos e fatores de risco de todos os assuntos são apresentados na Tabela 1. Os resultados indicaram que casos e controles foram totalmente pareados por idade e sexo. No entanto, houve diferença significativa sobre o estado de beber e fumar entre pacientes e controles (
P Art 0,001). A informação primária de
CTLA-4
-1722T /C polimorfismo foi mostrada na Tabela 2. Para o SNP, a taxa de sucesso genotipagem foi 96,43% em todas as amostras. frequência do alelo menor (MAF) dos controlos em nosso estudo, foi semelhante à base de dados de chinês para este SNP (Tabela 2). As freqüências genotípicas para
CTLA-4
-1722T /C polimorfismo entre os controles foram usadas para desvio avaliado a partir da HWE, e o resultado foi em HWE (
P
= 0,284) (Tabela 2) .
single-lócus de análise
Em analisa o único locus, as freqüências genotípicas de
CTLA-4
-1722T /C foram 16,53% (CC), 49,10% (TC) e 34,37% (TT) nos pacientes e 17,50% (CC), 47,79% (TC) e 34,70% (TT) nos controles, ea diferença foi estatisticamente significativa (
P
= 0,862) (Tabela 3). Neste estudo de caso-controle, análises de regressão logística mostrou que o
CTLA-4
-1722T /C SNP não foi associado com o risco de ESCC. O uso do tabaco eo consumo de álcool são dois fortes fatores ambientais, que examinaram a associação em uma análise estratificada por estes dois fatores e os resultados foram associação nula (Tabela 4).
artigos elegíveis para meta -Análise
A busca inicial resultou em um total de 345 publicações potencialmente relevantes. Depois de aplicar filtros adicionais, 12 estudos de caso-controle em 11 publicações e nosso estudo foram elegíveis para inclusão. O processo detalhado de seleção e exclusão de artigos é apresentado na Figura 1.
características do estudo
Havia dois grupos em um artigo conduzida por Hadinia et al. [15], nós tratados-los separadamente. No total, 12 estudos separados além de nosso estudo de caso-controle envolvendo um total de 3420 casos de câncer e 3675 controles foram incluídos nesta meta-análise. Entre os estudos de caso-controle 13, três investigou o cancro da mama [16] – [18], três câncer gástrico investigado [15], [19], [20], e os outros estudos investigaram o cancro do colo do útero, cancro do pulmão, cancro do esófago, cancro colorectal, e cancro oral [6], [15], [21] – [24]. Quanto aos assuntos nestes estudos, 8 eram asiáticos [6], [17] – [21], [24] e 5 eram caucasianos [15], [16] [22], [23]. As características de cada incluiu o estudo são apresentados na Tabela 5. A distribuição detalhada do
CTLA-4
-1722T /C e polimorfismo de alelos entre casos e controlos é apresentada na Tabela 6.
meta-análise
Depois de combinar todos os estudos qualificados, foram incluídos um total de 3420 casos de câncer e 3675 controles de 13 estudos de caso-controle elegíveis para meta-análise da associação entre a CTLA-4 -1722T /polimorfismo C e risco de câncer. Não havia associação nula de
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C com risco global de cancro em todos os modelos genéticos (Tabela 7, Tabela 8, Tabela 9, Figura 2, e Figura 3). Em uma análise estratificada por etnia, os resultados semelhantes foram observados em ambos os asiáticos e caucasianos (Tabela 7). Em uma análise estratificada por tipo de câncer, houve uma diminuição do risco de câncer gástrico em dois modelos genéticos: CC vs TC + TT (OR, 0,36; IC 95%, 0,19-0,66;
P
= 0,001) e CC vs. TT (OR, 0,45; IC 95%, 0,23-0,86;
P
= 0,016) (Tabela 8). Em uma análise estratificada por sistema, associação nula também foi observada (Tabela 9).
Os testes de viés de publicação, análises de sensibilidade e heterogeneidade
Nesta meta-análise, o viés de publicação potencial foi detectada pelo lote de Begg funil e teste de Egger (Figura 4), e a forma de funil foi simetria em todos modelo genético. Ele sugeriu que não houvesse viés de publicação para o cancro geral nesta meta-análise (C vs. T: teste de Begg
P
= 0,855, teste de Egger
P
= 0,675; CC vs. TT : teste de Begg
P
= 0,350, teste de Egger
P
= 0,709; TC vs. TT: teste de Begg
P
= 0,583, teste de Egger
P
= 0,702; CC + TC vs. TT: teste de Begg
P
= 0,161, teste de Egger
P
= 0,576; CC vs. TT + TC: teste de Begg
P
= 0,533, teste de Egger
P
= 0,845).
análises de sensibilidade foram realizados para detectar a influência de cada conjunto de dados individual no pool ou, com cada conjunto estudo conjunto de dados caiu de uma vez. Os resultados não se alterou quando qualquer estudo individual foi omitido, o que sugere a estabilidade dos nossos resultados (Figura 5) (dados não mostrados).
grandes heterogeneidades entre os estudos foram identificados no modelo recessivo e homozigotos modelo. Desde origem do tumor, etnia e sistema pode influenciar os resultados da meta-análises, foram realizadas análises de subgrupo e os resultados foram apresentados na Tabela 7, Tabela 8 e Tabela 9. Os resultados indicaram que o cancro da mama, cancro do sistema digestivo e subgrupo população asiática pode contribuir para a maior heterogeneidade. Como mostrado na Tabela 7, foi heterogeneidade significativa no modelo recessiva. Uma análise adicional foi realizada por Galbraith trama radial no modelo recessiva (Figura 6), e o resultado mostrou um outlier pode contribuir para as principais fontes de heterogeneidade. A partir da parcela florestal no modelo recessivo (Figura 2), é possível identificar que um estudo de caso-controle conduzido por Erfani et al. [16] contribui a heterogeneidade principal.
Discussão
de tarde, vários estudos investigaram a associação entre o
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C e vários tipos de câncer, uma resposta decisiva está faltando. Neste estudo, um estudo de caso-controle na população chinesa Han, juntamente com uma meta-análise sobre o câncer em geral, tentou obter uma avaliação abrangente e os resultados foram não significância. Para o melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro estudo de caso-controle investigar a associação entre o
CTLA-4
-1722T /C polimorfismo eo risco de câncer de esôfago.
Cancro e doenças auto-imunes são ambos distúrbios multifatoriais que resultam de interacções complexas entre origens genéticas e fatores ambientais. O
CTLA-4
-1722T /C polimorfismo (t → C) reduziria um local de ligação para o factor de transcrição nuclear factor 1 e enfraquecer a expressão de superfície celular da CTLA-4 [11], [25], que pode desempenhar um papel importante no cancro e susceptibilidade à doença auto-imune. Várias meta-análises mostraram que
CTLA-4
-1722T polimorfismo /C pode ser um fator de risco para a susceptibilidade lúpus eritematoso sistêmico [26] – [29]. No entanto, a associação entre esse locus e cancro risco foi inconclusivo. Com um interesse crescente nas associações de polimorfismos genéticos e câncer, vários estudos examinaram a hipótese de que
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C é relevante para o risco de vários tipos de câncer; no entanto, os resultados são ainda imperceptíveis. Considerando o fato de que SNPs mais comuns costumam fazer baixa suscetibilidade ao câncer de penetrância, este estudo inclui 13 estudos de caso-controle com relativamente grandes tamanhos de amostra para obter uma avaliação precisa entre
CTLA-4
-1722T /variação genética C e câncer risco. Um estudo individual relatou sinal positivo de
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C com câncer [18]; outro estudo individual relatou sinal negativo [20]; No entanto, como demonstrado nos resultados globais modelo genética entre indivíduos 7098, houve não-significado, mesmo em diferentes subgrupos da população e sistema diferente. Em uma análise estratificada por tipo de câncer, o efeito protetor conferido pelo modelo recessivo e modelo homozigoto foi sensivelmente óbvia no subgrupo câncer gástrico. Considerando-se apenas três estudos de caso-controle foram realizadas no subgrupo câncer gástrico e esses estudos eram pequenos tamanhos de amostra, o que pode restringir o poder de confirmar uma influência real ou gerar uma avaliação oscilou. Todos os resultados devem ser interpretados com muito cuidado. É também possível que a função potencial desta polimorfismo é diluída ou recobertos por outros fundo genético ou factores ambientais, e estes factores importantes que não devem ser ignoradas. Considerando apenas 13 estudos de caso-controle foram recrutados neste meta-análise e a maioria desses estudos foram pequenos tamanhos de amostra, no futuro, novas investigações com amostras grandes devem ser realizados para confirmar ou refutar esses resultados.
Alguns mérito do estudo deve ser tomada em consideração adequada. Em primeiro lugar, este é até à data o primeiro estudo de caso-controle detectar a associação de
CTLA-4
gene -1722T /polimorfismo C com câncer de esôfago. Em segundo lugar, os resultados de nosso estudo de caso-controle em conformidade com a da meta-análise subsequente. Em terceiro lugar, no nosso estudo de caso-controle, as distribuições de genótipos de controle foram consistentes com HWE mostramos nossos resultados foram menos propensas a viés de seleção, a forma do gráfico de funil indicaram que não houve viés de publicação na meta-análise atual. Em quarto lugar, foi observado relativamente baixa heterogeneidade entre publicações para
CTLA-4
-1722T polimorfismo /C.
Além disso, algumas limitações em estudo deve ser reconhecido na interpretação dos resultados. Em primeiro lugar, neste estudo de caso-controle, todos os casos e controles foram recrutados de dois hospitais e podem não representar plenamente as populações chinesas gerais. Em segundo lugar, todos os estudos de caso-controle incluídos para meta-análise foram de asiáticos e caucasianos; Assim, os nossos resultados podem ser apenas adequado para estas duas populações. Terceiro estudos, única publicados foram recrutados nesta meta-análise, o viés de publicação pode ter inevitavelmente ocorreu. Em quarto lugar, devido à falta de dados de base uniformes para estudos recrutados, os dados não foram ainda estratificada por outros fatores (tais como, idade, sexo, tabagismo, consumo de álcool, e outros fatores de estilo de vida). Em quinto lugar, no presente estudo, nós nos concentramos apenas em -1722T /polimorfismo C em
CTLA-4
, e não considerou outros genes de susceptibilidade ou polimorfismos. Para os efeitos de genes de suscetibilidade ao câncer baixa penetrância de SNP, estes fatores genéticos e ambientais importantes devem ser devidamente considerados.
Em resumo, este estudo de caso-controle, juntamente com uma meta-análise, não conseguiu confirmar a associação entre
CTLA-4
-1722T /polimorfismo C e risco de câncer, mesmo entre diferentes subgrupos étnicos e sistemas diferentes. No futuro, novas investigações com grandes amostras e dados detalhados gene-ambiente, devem ser realizados para confirmar ou refutar esses resultados.
Informações de Apoio
Figura S1.
sequenciação directa análises para genótipos de CTLA-4 -1722T /C SNP (Os três gráficos representam três genótipos)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0094039.s001
(TIF)
Checklist S1.
PRISMA lista de verificação, lista de verificação de itens para incluir ao relatar uma revisão sistemática ou meta-análise (revisão de diagnóstico que consiste em estudos de coorte)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0094039.s002
(DOCX)