Abstract

Há evidências crescentes sugerindo que a desregulação de alguns microRNAs (miRNAs) podem contribuir para a progressão do tumor ea metástase e que tenham sido proposto para ser reguladores-chave de diversos processos biológicos, tais como a regulação da transcrição, o crescimento celular e a tumorigénese. Estudos anteriores demonstraram que o miR-137 é desregulada em algumas malignidades, mas o seu papel no cancro da bexiga ainda é desconhecido. Em nosso estudo, descobrimos que miR-137 é regulado para cima em tecidos de câncer de bexiga humanos e linhas celulares. Além disso, o nível mais elevado de miR-137 foi associada com pM ou pTNM fase em doentes com cancro da bexiga clínicos. expressão forçada de miR-137 em células de cancro da bexiga aumentou significativamente a sua proliferação, migração e invasão. análise bioinformática identificado o PAQR3 gene supressor de tumor como um potencial gene alvo de miR-137. Estudos adicionais indicaram que o miR-137 suprimiu a expressão de PAQR3 ligando-se a sua região 3 ‘não traduzida. Silenciamento de PAQR3 por pequenos RNAs de interferência phenocopied os efeitos de miR-137 superexpressão, considerando que o restabelecimento da PAQR3 em células de cancro da bexiga células cancerosas da bexiga superexpressam miR-137, parcialmente reverteu os efeitos supressores de miR-137. Estes resultados indicam que o miR-137 poderia ser um oncogene potencial no cancro da bexiga

citação:. Xiu Y, Z Liu, S Xia, Jin C, Yin H, W Zhao, et ai. (2014) MicroRNA-137 Upregulation Aumenta o cancro de bexiga proliferação celular e invasão por Segmentação PAQR3. PLoS ONE 9 (10): e109734. doi: 10.1371 /journal.pone.0109734

editor: Alfons Navarro, da Universidade de Barcelona, ​​Espanha |

Recebido: 15 Abril de 2014; Aceito: 08 de setembro de 2014; Publicação: 16 de outubro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Xiu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. O financiamento do National Science Foundation Natural da China (81170534) (https://www.nsfc.gov.cn/). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de bexiga é o quinto câncer mais comum na população em geral e a segunda causa mais comum de morte em pacientes com neoplasias do trato geniturinário [1], [2]. Mais de 90% dos tumores da bexiga são compostos de carcinoma de células transicionais (TCC) que surge a partir do epitélio de transição [3]. tumores da bexiga podem ser classificados em duas categorias distintas: o músculo da bexiga invasivo do cancro não-muscular e [4], [5]. A maioria dos tumores da bexiga (75-80%) são diagnosticados como tumores não-músculo invasivo de que as taxas de recorrência são elevados (50-70%) [6]. O resto são tumores de alto grau musculares invasivos (15%), que podem rapidamente progredir para metástases e levar à morte [7]. Embora avanços consideráveis ​​no tratamento foram feitas, incluindo a melhoria da operação cirúrgica, radioterapia e quimioterapia, o câncer de bexiga continua a ser uma doença comum, com alta taxa de mortalidade [8], [9].

Recentemente, evidências crescentes sugerem que uma nova classe de RNAs, conhecido como microARNs (miARNs), pode regular vários genes alvo, incluindo oncogenes e supressor de tumores [10]. miARNs são endógenas 19~22 de nucleótidos (nt) não-codificante RNAs que pode regular negativamente a expressão de proteína por indução de degradação de ARNm alvo, prejudicando a sua tradução ou por ambas se ligarem especificamente às regiões 3’untranslated (3’UTR) de mRNAs alvo [ ,,,0],11], [12]. Um crescente número de estudos demonstraram que miARNs contribuir para a maior parte, se não todos, processos biológicos fundamentais, tais como o desenvolvimento, diferenciação, a apoptose e a proliferação de células [13] – [16]. As mutações de genes de miARN ou desregulação da expressão miARNs têm sido bem descritos em muitos tipos de tumores, incluindo o cancro gástrico, linfoma, da mama, do pulmão, do cólon e cancros do fígado [17] – [22]. No entanto, o papel de miARN no cancro da bexiga permanece em grande parte desconhecida.

miR-137 tem atraído muita atenção porque é frequentemente sub-regulada e funciona como um supressor tumoral em muitos cancros, tais como cancro do ovário, cancro gástrico, glioblastoma, cancro do pulmão, cancro colo-rectal e neuroblastoma [23] – [28]. Um estudo anterior por Shimuzu et al. Também mostrou que o miR-137 foi metilado frequentemente em tumores da bexiga primárias e a expressão ectópica de miR-137 a proliferação das células do cancro da bexiga suprimida [29]. No entanto, temos aqui relatar a expressão contraditória e função de miR-137 no cancro da bexiga, que se opõem ao relatado na literatura. Neste estudo, detectou sobre-regulação frequentes de miR-137 em tecidos de cancro da bexiga humanos e linhas celulares. Superexpressão de miR-137 promoveu a proliferação celular, migração e invasão das células cancerosas da bexiga. Além disso, descobrimos que PAQR3, um gene supressor tumoral novela, era o alvo direto de miR-137 no cancro da bexiga. Assim, nossos resultados sugerem um papel importante para o miR-137 na patogénese do cancro de bexiga e indicar sua potencial aplicação na terapia do cancro.

Materiais e Métodos

Ética declaração

Tudo isso pacientes concordaram em participar do estudo e deram consentimento informado por escrito. Tanto este estudo e consentimento foram aprovados pelo conselho de ética do Instituto de O Primeiro Hospital Afiliado da Universidade Médica Harbin e cumpriu com a Declaração de Helsinki.

Os tecidos humanos

As biópsias de câncer de bexiga e urotélio normal adjacente foram obtidas de pacientes submetidos a cistectomia radical para câncer de bexiga no primeiro Hospital Afiliado da Universidade médica Harbin, China. As cirurgias ocorreram a partir de abril de 2010 a abril de 2013, e todos os pacientes assinaram documento de consentimento informado. As biópsias foram armazenados em azoto líquido imediatamente após a ressecção até à extracção do ARN. Os dados patológicos demográficos e clínicos estão listados na tabela S1.

As linhas celulares, cultura de células e miRNA transfecção

Quatro linhas celulares de cancro de bexiga humana T24, J82, 5637 e UMUC3 e uma célula normal da bexiga linha, SV-HUC-1, foram adquiridos do Instituto Xangai de Bioquímica e Biologia celular da Academia chinesa de Ciências [30]. As linhas de células foram cultivadas em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal de bovino inactivado pelo calor sob uma atmosfera humidificada de 5% de CO2 a 37 ° C. O dia antes da transfecção, as células foram plaqueadas em meio de crescimento sem antibiótico a uma densidade de 30-40%. A transfecção de HSA-miR-137 mímico, inibidor, e precipitação, quimicamente sintetizados por GenePharma (Xangai, China) foi efectuada utilizando Lipofectamina 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acordo com o protocolo do fabricante e foram transfectadas para dentro das células com um definitiva concentração de oligonucleotídeo de 20 nmol /L.

isolamento do RNA e qRT-PCR

O RNA total de amostras de tecidos e células em cultura foi isolado usando TRIzol reagente (Takara, Dalian, China). Antes de realizar ensaios de RT-PCR quantitativo (qPCR), RNA foi reverso-transcrito em miRNA cDNA e cDNA total utilizando One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara, Dalian, China) e PrimeScript RT Kit reagente (Takara, Dalian, China), respectivamente. sequências iniciadoras de PCR em tempo real e as condições foram listados na Tabela S2 e S3 Tabela, respectivamente, de acordo com a directriz MIQE. Os níveis de expressão de ARNm e de miARN foram detectados por qPCR com Applied Biosystems 7500 rápida Real-Time PCR System em tempo real, PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, EUA) com SYBR Premix Ex Taq (Takara, Dalian, China) de acordo com as instruções do fabricante e foram normalizados contra ARNm de GAPDH e pequeno U6 ARN nuclear, respectivamente. O valor Ct de miR-137 e PAQR3 foi quantificada com o 2

-ΔΔCt método.

Migração e ensaios de invasão

invasão celular e migração foram testadas usando uma câmara de Transwell (Millipore, EUA) com e sem Matrigel (BD, Franklin Lakes, EUA). Para o ensaio de invasão, uma câmara de Transwell foi colocada numa placa de 24 poços e foi revestida com 30 uL de Matrigel e foi incubada durante quarenta minutos a 37 ° C. Em ambos ensaio Transwell, as células, 48 ​​horas após a transf ectadas, foram tripsinizadas e semeadas em câmaras com a densidade de 8 × 10

4 células por poço e cultivadas em meio com RPMI 1640 com 2% de soro, enquanto que 600 ul de 10 % de FBS-1640 foi adicionado à câmara inferior. Twentyfour hora mais tarde, as células migradas foram fixadas com metanol a 100% durante 30 min. As células que não migraram foram removidos por cotonetes. Em seguida, as células na superfície inferior da membrana foram coradas com violeta de cristal a 0,1% (Sigma) durante 20 min. imagens de células foram obtidas sob um microscópio de contraste de fase (Olympus, Tóquio, Japão).

A proliferação celular

ensaios de proliferação celular foram realizadas utilizando um celular Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japão ). células cancerosas da bexiga foram plaqueadas em placas de 24 poços a 2 x 10

5 células por poço. As células foram incubadas em 10% de CCK-8 (Dojindo; Kumamoto, Japão) que foi diluída em meio de cultura normal a 37 ° C até que ocorreu a conversão de cor visual. taxas de proliferação foram determinados a 0, 24, 48 e 72 horas após a transfecção.

Western blot

quantidades equivalentes (30-50 g) de proteína foram separados por 10% de gel de poliacrilamida SDS e transferidos para fluoreto de polivinilideno (PVDF) membranas. As membranas foram bloqueadas com 5% de leite seco não gordo e incubadas durante a noite com o anticorpo primário adequado em diluições especificadas pelo fabricante. Em seguida, as membranas foram lavadas três vezes em TBST e incubadas com peroxidase de rábano a correspondente (HRP) -conjugated anticorpo secundário em 1:5,0000 diluição durante 1 h. anticorpo secundário ligado foi detectado utilizando o sistema de quimioluminescência aumentada (ECL) (Pierce Biotechnology Inc, EUA). immunoblotting anticorpos primários foram:. anti-GAPDH, anti-PAQR3 (Santa Cruz Biotechnology, EUA)

ensaio da luciferase

T24 células foram semeadas em placas de 24 poços (1 × 10

5 células /poço) e incubou-se durante 24 h antes da transfecção. Para o ensaio do gene repórter, as células foram co-transfectadas com 0,5 ug de pGL3-PAQR3-3’UTR ou plasmídeo pGL3- PAQR3-3’UTR Mut, 0,05 ng do vector de controlo phRL-SV40 (Promega, EUA), e 100 nM miR-137 ou ARN de controlo utilizando Lipofectamina 2000 (Invitrogen, EUA). As actividades de luciferase de firefly e renilla foram medidos consecutivamente através de um ensaio de luciferase duplo (Promega, EUA) em 24 h após transfecção.

A análise estatística

Cada experiência foi repetida pelo menos três vezes. As análises estatísticas foram realizadas utilizando SPSS 15.0. Os dados são apresentados como a média ± desvio padrão. As análises estatísticas foram realizadas com qualquer uma análise de variância (ANOVA) ou teste t de Student, eo nível de significância estatística foi estabelecido em α = 0,05 (dois lados).

Resultados

Expression de miR-137 é regulado para cima em linhas celulares de cancro da bexiga

A expressão de miR-137 foi avaliada primeiro por quantitativa de transcrição reversa-PCR (qRT-PCR) em linhas celulares de cancro da bexiga e uma linha de células da bexiga normais SV-HUC-1. Como mostrado na Fig. 1, miR-137 foi significativamente sobre-regulada em todas as linhas celulares de cancro da bexiga em comparação com SV-HUC-1. Foram quantificados ainda mais o nível de miR-137 na expressão 6 pares de tecidos de cancro da bexiga e tecidos humanos normais adjacentes das mucosas por qRT-PCR (Fig. 1). Os resultados mostraram que o nível de expressão de miR-137 foi geralmente mais elevada em tecidos tumorais em comparação com tecidos não tumorais correspondentes. Assim, especulamos que o miR-137 pode ser um oncogene putativo no cancro da bexiga.

(A). A sobre-regulação da expressão de miR-137 em linhas celulares de cancro da bexiga e tecidos em comparação com os controlos correspondentes. A expressão relativa de miR-137 em quatro linhas celulares de cancro da bexiga e uma linha de células de bexiga normal de SV-HUC-1 foi determinada por qRT-PCR. U6 snRNA foi usado como controlo interno. (B) A expressão relativa de miR-137 em 6 espécimes cirúrgicos de tecidos de cancro da bexiga e tecidos não tumorais combinados foi determinada por qRTPCR. U6 snRNA foi utilizado como controle interno.

A expressão de miR-137 em doentes com cancro da bexiga clínicas e sua análise de correlação com características clinicopatológicas

Para estudar a relação de miR-137 com bexiga ocorrência de cancro, a expressão de miR-137 foi detectado em 50 pacientes clínicos utilizando PCR em tempo real. Dentre 50 amostras de cancro da bexiga, miR-137 foi regulada em 45 casos (45/50, 90%) em comparação com os tecidos adjacentes (Fig. 2B). Enquanto isso, o miR-137 foi regulada para baixo em 5 casos (5/50, 10%). Em geral, a expressão de miR-137 em tecidos de cancro da bexiga era significativamente maior do que nos tecidos adjacentes (Fig 2A, p 0,001).. O nível de expressão mais elevado do miR-137 foi associada a fase pTNM (Fig 2C.), E um nível mais elevado de miR-137 foi associada a fase pM (p = 0,05, metástase vs não metastssis) em doentes com cancro da bexiga (fig . 2D). Estes dados sugerem que as alterações de miR-137 pode ser envolvida na progressão do cancro da bexiga.

(A) em relação miR-137 em níveis de expressão tecidos cancro de bexiga e tecidos normais adjacentes foram determinados por qRT-PCR. U6 snRNA foi usado como controlo interno. (B) o miR-137 foi detectado em 50 pares de tecidos de cancro da bexiga e dos respectivos controlos normais adjacentes por RT-PCR quantitativo. Os dados são apresentados como log2 da mudança dobra de tecidos de câncer de bexiga em relação a regiões normais adjacentes; (C) e (D) A análise estatística da associação entre o nível de miRNA e estágio pTNM (I, II, III e IV) e estágio PM (Sem metástase e metástase); * P 0,05, e ** p 0,01, *** p . 0.001

A superexpressão de miR-137 a proliferação de células de câncer de bexiga promovido, migração e invasão

Nós exploramos o impacto potencial de miR-137 na proliferação de células de câncer de bexiga, migração e invasão. As células foram transfectadas com oligos controlo mexidos ou miR-137 imita e inibidor, que mostraram alta eficiência de transfecção (fig. 3A). CCK-8 Ensaio de proliferação mostraram que a proliferação de células foi promovida em miR-137 células de cancro da bexiga mimetiza-transfectados em comparação com células transfectadas com oligo mexidos ou células não tratadas (Fig. 3B). Por outro lado, o miR-137 inibidor inibiu significativamente a proliferação das células T24 (Fig. 3C). Curiosamente, migração e invasão ensaio mostrou que a sobre-expressão de miR-137 promoveu significativamente a migração e a invasão de células T24 em comparação com o controlo ao passo que o miR-137 inibidor inibida tanto a migração celular e invasão (Fig. 3D e E).

os níveis de (A) Expressão de miR-137 foram analisados ​​por PCR em tempo real após a transfecção de miR-137 imita ou sramble ou nenhuma transfecção. (B) O crescimento de células T24 foi mostrado após a transfecção com o miR-137 imita ou sramble ou sem transfecção. O índice de crescimento como avaliado em 0, 24, 48 e 72 h. (C) Os níveis de expressão de miR-137 foram analisados ​​por PCR em tempo real após a transfecção de miR-137 inibidor ou controlo ou nenhuma transfecção. (D) O crescimento de células T24 foi mostrado após a transfecção com o miR-137 inibidor ou controlo ou nenhuma transfecção. O índice de crescimento como avaliado em 0, 24, 48 e 72 h. análise (E) Transwell de células T24 após o tratamento com miR-137 imita, inibidores ou corrida ou controle; a proporção relativa de células que migraram por campo é mostrado abaixo. (D) Análise Transwell de células T24 após o tratamento com miR-137 imita, inibidores ou corrida ou controle; a proporção relativa de células invasivas por campo é mostrado a seguir, * p 0,05, ** p 0,01, *** p e. 0,001

miR-137 alvos PAQR3 em células cancerosas da bexiga

Como previsto por PicTar, houve complementaridade entre has-miR-137 e a 3’UTR PAQR3 (Fig. 4A). A sobre-expressão de miR-137 reduziu o teor de proteína e de ARNm de PAQR3 em células cancerosas da bexiga (Fig. 4C e D). O efeito de miR-137 sobre a tradução do ARNm em proteína PAQR3 foi, em seguida, avaliada utilizando um ensaio de repórter de luciferase (Fig. 4B). expressão forçada de miR-137 notavelmente reduzida a actividade da luciferase do gene repórter com a construção de tipo selvagem, mas não com o mutante PAQR3 3’UTR construção, o que indica que o miR-137 orientada directamente a PAQR3 3’UTR.

(A) representação esquemática do PAQR3 3 ‘UTRs mostrando local putativo alvo miRNA. (B) A análise das actividades de luciferase relativas de PAQR3-WT, PAQR3-MUT em células T24. As barras de erro são derivados de expriments em triplicado. (C) Análise de qRT-PCR da expressão de ARNm em células T24 PAQR3 após o tratamento com o miR-137 imita ou precipitação ou sem transfecção. A expressão de PAQR3 foi normalizado para GAPDH. (D) Análise de Western blot de expressão PAQR3 em células T24 transfectadas com miR-137 imita ou corrida ou não transfecção. GAPDH foi também detectada como um controle de carga.

proliferação celular expressão antigo PAQR3 parcialmente resgatado miR-137-reforçada e invasão

Em primeiro lugar, analisou a função de PAQR3 em células de cancro da bexiga . Como mostrado na Fig. 5A, transfecção de ARN interferente pequeno contra PAQR3 em células T24 levaram a uma diminuição da expressão da proteína dramaticamente PAQR3. O silenciamento de PAQR3 melhorou significativamente a proliferação de células cancerosas da bexiga (fig. 5B), que phenocopied os efeitos de miR-137 sobre a proliferação de células cancerosas da bexiga. A co-transfecção de uma construção que expressa PAQR3 e miR-137 em células T24 levou à restauração da expressão PAQR3, tal como confirmado por Western blot (Fig. 5C). Esta restauração da PAQR3 inibiu significativamente a proliferação ea capacidade invasiva de células de câncer de bexiga. Mais importante, verificou-se que a reparação de PAQR3 poderia reverter significativamente a proliferação e invasão promovida por miR-137 (Fig. 5D e 5E). Em resumo, estes dados indicam que a inibição da expressão PAQR3 por miR-137 é responsável, pelo menos em parte, para os efeitos promotores de miR-137 sobre a proliferação celular e a invasão no cancro da bexiga humana.

(A) a análise western blot mostrou que a transfecção de ARN interferente pequeno contra PAQR3 em células T24 levaram a uma diminuição da expressão da proteína dramaticamente PAQR3. GAPDH foi também detectado como um controlo de carga. (B) O silenciamento de PAQR3 melhorou significativamente a proliferação de células cancerosas da bexiga. O índice de crescimento como avaliado em 0, 24, 48 e 72 h. (C) análise de transferência de Western de células T24 PAQR3 em co-transfectadas quer com miR-137 mímica ou precipitação e 2,0 ug pCDNA- PAQR3 ou pCDNA vector vazio. GAPDH foi também detectado como um controlo de carga. curvas (D) de crescimento celular em células T24 transfectadas com combinações diferentes, a 0, 24, 48 e 72 h. Análise (E) Transwell de células T24 tratados com combinações diferentes. A proporção relativa de células invasivas por campo é mostrado à direita. * P 0,05, ** p 0,01, *** p . 0.001

Discussão

Durante as últimas décadas, os miRNAs têm surgido como importantes reguladores envolvidos em diversos processos biológicos tais como a regulação da transcrição, diferenciação celular e a tumorigénese [31]. Globalmente aberrantes perfis de expressão de miRNA de tumores têm fornecido informações valiosas sobre as vias moleculares de oncogênese [32]. Como um dos mais proeminentes miARNs implicados na tumorigénese, miR-137 apresentou com um papel controverso durante a progressão tumoral [33]. MiR-137 foi encontrado para ser reduzida em numerosos cancros humanos, incluindo cancro gástrico, glioblastoma e cancro da mama [24], [25], [34]. O papel exacto de miR-137 em cancro da bexiga ainda não era clara, embora a sua função supressora de tumor tem sido implicado [29]. Assim, o nosso estudo destina-se a esclarecer a expressão e função biológica de miR-137 no cancro da bexiga. Contrariamente às conclusões de Shimuzu et al. [29], o nosso estudo mostrou que o miR-137 foi frequentemente regulados positivamente em linhas celulares de cancro da bexiga e tecidos em relação à linha de células da bexiga e tecidos normais. Com base nestes resultados, a hipótese de que o miR-137 pode ser um oncogene potencial no cancro da bexiga. Como esperado, a expressão forçada de miR-137 promoveu a proliferação, a migração e a invasão de células T24. As razões das discrepâncias entre os achados do presente estudo e que de Shimuzu et al. permanecem obscuros, mas a origem étnica de amostras clínicas podem desempenhar um papel. Além disso, a função oncogénica de miR-137 pode ser específica para o tecido da bexiga, desde a sua função supressora de tumor tem sido amplamente relatado em outros tipos de tecidos. Os nossos resultados actuais sugerem que o miR-137 desempenha um papel crítico no potencial invasivo e metastático de cancro da bexiga e podem ser potenciais biomarcadores preditivos e de diagnóstico.

Em seguida, dirigiu-se ao mecanismo molecular de miR-137 na promoção da proliferação , migração e invasão em células de câncer de bexiga. Neste estudo, a PCR em tempo real, manchas de Western e ensaios de luciferase mostraram que PAQR3 é um alvo de miR-137. Importante, PAQR3 específica knockdown com siRNA phenocopied os efeitos migration- e de promoção da invasão de miR-137 sobre-expressão. Nós também mostrou que, quando as células miR-137 expressando retomou expressão PAQR3, suas deficiências de invasão foram parcialmente revertida. Por conseguinte, acreditamos que o miR-137 desempenha um papel na promoção de metástases em cancros da bexiga, pelo menos em parte, pela regulação negativa da expressão da proteína de PAQR3. PAQR3 pertence à progesterona e o receptor de AdipoQ família (PAQR) e é uma proteína transmembranar de sete especificamente localizada no aparelho de Golgi de células de mamíferos [35]. Estudos anteriores mostraram que PAQR3, também conhecido como RKTG (quinase Raf para aprisionamento de Golgi), poderia actuar como um regulador espacial da Raf quinase Raf sequestrando para o aparelho de Golgi [36]. PAQR3 funções como um supressor de tumor, devido à sua actividade inibidora da Raf /MEK sinalização /ERK [37]. Quando sobre-expresso em células de melanoma humano A375, uma linha celular de melanoma maligno humano com mutação B-Raf, PAQR3 /RKTG inibe a activação de ERK, a proliferação celular e a transformação das células [37]. Além disso, a deleção de PAQR3 em ratos levou a um aumento da incidência de tumorigénese da pele. PAQR3 /RKTG também pode inibir a proliferação celular, migração, germinação e angiogénese de células endoteliais, e o nível de expressão PAQR3 é significativamente regulada negativamente em amostras de carcinoma de células renais de células claras clínicos, com uma correlação inversa com o nível de expressão de VEGF [38]. Além disso, estudos anteriores indicaram também que PAQR3 tem uma interacção com p53 funcional na formação do cancro e epitelial para mesenquimal transição [39]. O nível de PAQR3 expressão foi significativamente diminuída em amostras de câncer colorretal em comparação com os tecidos normais adjacentes e do nível de PAQR3 expressão foi inversamente associado com o grau do tumor nas amostras de cancro colorrectal [40]. Os nossos estudos também mostraram que a sobre-expressão de PAQR3 pode inibir a proliferação celular e a invasão. A sobre-regulação destes miARNs em cancro pode facilitar a expressão de PAQR3, levando a uma maior metástase do cancro

Em conclusão., Os nossos resultados mostraram que o miR-137 foi significativamente regulada positivamente em células cancerosas da bexiga e tecidos. expressão forçada de miR-137 promoveu a proliferação de células de câncer de bexiga, migração e invasão orientando diretamente PAQR3. Este romance eixo miR-137 /PAQR3 pode fornecer novos insights sobre os mecanismos subjacentes a metástase do tumor, ea repressão de miR-137 expressão pode ser uma estratégia terapêutica potencial para o tratamento de cancro da bexiga no futuro.

Informações de Suporte

Tabela S1. charateristics

clinicopatológico de pacientes com câncer de bexiga

DOI: 10.1371. /journal.pone.0109734.s001

(DOCX)

Tabela S2. .

As sequências dos iniciadores

doi: 10.1371 /journal.pone.0109734.s002

(DOC)

Tabela S3.

Checklist de MIQE orientação

doi:. 10.1371 /journal.pone.0109734.s003

(DOC)