Abstract
Fundo
Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenos RNAs não-codificantes que regulam a expressão do gene. Eles são expressas de forma aberrante em muitos tipos de cânceres. Neste estudo, foram determinados os perfis de miRNA do genoma no carcinoma urotelial de bexiga por sequenciamento de profundidade.
Metodologia /Principais Achados
Detectamos 656 diferencialmente expressos conhecido miRNAs humanos e sequências anti-sentido de miRNA (miRNA * s) em nove bexiga pacientes com carcinoma urotelial por sequenciamento de profundidade. Muitos miARNs e miARN s * foram significativamente regulada positivamente ou regulados negativamente em carcinoma da bexiga em comparação com urotelial combinados urotélio histologicamente normais.
hsa-miR-96
foi o miRNA mais significativamente regulada e
hsa-miR-490-5p foi regulada negativamente o mais significativamente um. miRNAs regulados positivamente eram mais comuns do que os reprimidos. O
hsa-miR-183
,
hsa-miR-200b~429
,
hsa-miR-200c~141
e
hsa-miR-17~ 92
grupos foram significativamente regulada. O
hsa-miR-143~145
agrupamento foi significativamente reprimidos.
hsa-miR-182
,
hsa-miR-183
,
hsa-miR-200a
,
hsa-miR-143 Comprar e
HSA-miR-195
foram avaliadas por qPCR em tempo real em um total de pacientes de carcinoma urotelial cinquenta e uma bexiga. Eles foram expressas de forma aberrante em carcinoma urotelial de bexiga em comparação com urothelium histologicamente normais combinado (p 0,001 para cada miRNA).
Conclusões /Significado
Até o momento, este é o primeiro estudo para determinar genome- padrões de expressão miRNA largos no carcinoma urotelial de bexiga humana por sequenciamento de profundidade. Descobrimos que uma colecção de miARNs foram expressas de forma aberrante em carcinoma da bexiga em comparação com urotelial combinados urotélio histologicamente normais, sugerindo que pode desempenhar um papel como oncogenes ou supressores de tumor em desenvolvimento e /ou a progressão deste cancro. Nossos dados fornecem novos insights sobre biologia do câncer
Citation:. Han Y, Chen J, Zhao X, Liang C, Wang Y, Sun L, et al. (2011) MicroRNA Expressão Assinaturas de cancro da bexiga Revelado pelo Sequenciamento profundo. PLoS ONE 6 (3): e18286. doi: 10.1371 /journal.pone.0018286
Autor: Stefan Wölfl, Universität Heidelberg, Alemanha |
Recebido: 16 de julho de 2010; Aceito: 02 de março de 2011; Publicado: 28 Março 2011 |
Direitos de autor: © 2011 Han et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por doações do Programa de alta Tecnologia Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento da China (Programa 863, 2006AA02A302 e 2009AA022707) e do Programa de Promoção de Shenzhen Laboratory Key, Shenzhen, China (CXB200903090055A), Banco de dados clínicos das doenças graves e amostras biológicas de Shenzhen (CXC201005260001A). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer de bexiga é uma das neoplasias mais prevalentes no mundo. Cerca de 357.000 casos de câncer de bexiga foram recentemente diagnosticados e 145.000 mortes relacionadas ao câncer foram estimados em 2002 [1]. carcinoma urotelial da bexiga, o tipo histológico mais comum de cancro da bexiga, tem uma variedade de características fenotípicas e genéticas. Muitos fatores, tais como anomalias cromossômicas, polimorfismos genéticos, alterações genéticas e epigenéticas, contribuem para a tumorigênese e progressão do carcinoma urotelial da bexiga [2].
Os microRNAs (miRNAs) são endógenas, não codificadores moléculas de RNA de cerca de 22 nucleótidos de comprimento que regulam a expressão do gene de [3]. Juntam-se ao silenciamento complexos para regular o seu RNA mensageiro alvejado (mRNA) reprimindo tradução do mRNA e /ou dirigir mRNA clivagem induzida por RNA [4]. miARNs desempenhar papéis importantes no desenvolvimento normal, o crescimento celular, diferenciação e apoptose em mamíferos [5].
Mais de metade de miARN genes estão localizados em regiões genómicas ou associados ao cancro em locais frágeis [6]. miARNs expressas de forma aberrante tem sido mostrado para ser associada com vários tipos de cancros. Ambas as perdas e os ganhos de função miRNA contribuir para o desenvolvimento do câncer. miARNs actuar como oncogenes ou supressores de tumores [7]. Mais importante ainda, os tipos de câncer diferentes, estágios ou estados de diferenciação têm perfis de expressão miRNA exclusivos, sugerindo que miRNAs pode funcionar como novos biomarcadores para o diagnóstico do cancro [8], [9].
Várias pesquisas anteriores utilizados microarrays miRNA com limitada e sondas variadas ao perfil da expressão miRNA no cancro da bexiga e seus resultados nem sempre indicam resultados consistentes [10] – [13]. Para entender melhor o papel dos miRNAs no desenvolvimento do câncer da bexiga e progressão, é necessário uma análise abrangente da expressão e abundância de miRNAs na esse tipo de câncer. Com o mérito do high-throughput tecnologia de sequenciamento de profundidade, miRNAs câncer do genoma pode ser quantitativamente e precisamente determinada. Aqui, apresentamos os perfis de miRNA do genoma em nove pares de carcinoma urotelial de bexiga snap-congelados e combinados urothelium histologicamente normais por sequenciamento de profundidade. Descobrimos que uma coleção de miRNAs foram expressas de forma aberrante em carcinoma urotelial de bexiga em comparação com pareados urothelium histologicamente normal, vários dos quais foram avaliados por Real-Time qPCR em um total de pacientes com carcinoma urotelial cinquenta e um da bexiga.
Resultados
Visão geral de miRNA perfis
arquivos de expressão miRNA conhecidas entre carcinoma urotelial de bexiga e combinados urothelium histologicamente normais de cada paciente foram comparados para descobrir os miRNAs diferencialmente expressos. A expressão de miRNAs em amostras pareadas foram mostrados por meio do cálculo de log
2Ratio. Os procedimentos são apresentados como a seguir: (1) Normalizar a expressão de miARN em duas amostras (de tumor contra o normal) para obter a expressão da transcrição por milhão (TPM). expressão normalizada = contagem miRNA real /contagem total de limpa lê * 1000000. (2) Calcule fold-change e valor de p a partir da expressão normalizada. Em seguida, calcule log
2Ratio. Fold-change = log
2Ratio (tumor /normal). Nós determinamos 656 diferencialmente expressos conhecido miRNAs humanos e sequências anti-sentido de miRNA (miRNA * s) em miRBase14.0 em nove pacientes com carcinoma da bexiga urothelial (Tabela S1).
Identificamos um grande número de miRNAs e miRNA * s que foram signicantly regulada ou regulada negativamente nestes pacientes e poderia discriminar carcinoma urotelial da bexiga do urotélio normal de correspondência.
hsa-miR-96
(log
2Ratio = 4,664328) foi o mais significativamente regulada miRNA e
hsa-miR-490-5p
(log
2Ratio = -5,79794) foi o mais significativamente regulada negativamente (Tabela 1). Selecionados miRNAs diferencialmente expressos foram validados por Real-Time qPCR. Os resultados qPCR em tempo real correlacionados bem com a análise de sequenciação. A comparação entre os resultados de qPCR em tempo real e os resultados de sequenciação de profundidade é mostrado na Figura 1. As contagens de miARNs upregulated e regulados negativamente variar em pacientes diferentes. miRNAs regulados positivamente eram mais comuns do que os reprimidos (Figura 2). Além disso, foi identificada uma divergência notável dos níveis de expressão entre miRNA e emparelhado miRNA *. Os níveis de miRNAs de expressão eram geralmente mais elevada do que a de emparelhado miRNA * s (Figura 3).
Para a comparação entre os dados de sequenciamento de profundidade e resultados qPCR em Tempo Real,
hsa-miR-182
,
hsa-miR-183
,
hsa-miR-200a
,
hsa-miR-143 Comprar e
hsa-miR-195
determinada a ser diferencialmente expressos em carcinoma urotelial de bexiga em comparação com pareados urothelium histologicamente normal em nove pacientes por sequenciamento de profundidade foram validados utilizando real-Time qPCR. As alturas das colunas no gráfico representam as mudanças transformação logarítmica média de vezes (tumor /normal) na expressão através dos nove pacientes para cada um dos cinco miRNAs validados; As barras representam erros padrão. Os resultados de validação dos cinco miRNAs indicou que os dados de sequenciamento profundas correlacionadas bem com os resultados em tempo real qPCR.
Muitos miRNAs estava determinada a ser significativamente regulada ou reprimidos no carcinoma urotelial de bexiga em comparação com histologicamente combinado urotélio normal em nove pacientes por sequenciamento de profundidade. As contagens de miRNAs regulados positivamente e reprimidos variou entre os nove pacientes. Em oito dos nove pacientes com carcinoma da bexiga urothelial miRNAs regulados positivamente eram mais comuns do que os reprimidos. Em apenas um paciente (Paciente No. B13), miRNAs regulados positivamente eram menos comuns do que os reprimidos.
Uma coleção de miRNAs e sequências anti-sentido miRNA emparelhados (miRNA * s) estavam determinados a ser expressa em nove pacientes bexiga urothelial carcinoma por sequenciamento de profundidade. Identificamos uma divergência marcante de expressão entre miRNA e emparelhado miRNA *. A expressão de miRNA /miRNA * pares é mostrado no gráfico de dispersão com logaritmo sistema de coordenadas; Cada ponto representa a expressão de um miARN /miARN * par. Na maioria dos miARN /* miARN pares, o nível de expressão de miARN foi maior do que a de miARN * emparelhado. Em um pequeno número de miRNA /miRNA * pares, miRNA foi menos abundante do que emparelhado miRNA *.
Além dos miRNAs conhecidos e miRNA * s, 92 novos miRNA candidatos seqüência foram detectados em nosso estudo (Tabela S2). A maioria deles foram expressos em níveis muito baixos e apenas em determinadas amostras. Seus padrões de expressão e possíveis papéis necessitam de mais pesquisas.
A expressão de miRNAs em cluster
Nós descobrimos que uma coleção de clusters miRNA desregulados foram expressos. O
hsa-miR-183
,
hsa-miR-200b~429
,
hsa-miR-200c~141
e
hsa-miR-17~ 92
grupos foram significativamente regulada. O
hsa-miR-143~145
agrupamento foi significativamente reprimidos.
Real-Time qPCR validação
hsa-miR-182
,
hsa-miR-183
,
hsa-miR-200a
,
hsa-miR-143 Comprar e
hsa-miR-195
foram avaliados por Real- tempo de qPCR em um total de pacientes de carcinoma urotelial cinquenta e uma bexiga.
hsa-miR-182
,
hsa-miR-183 Comprar e
hsa-miR-200a
foram overexpressed
HSA-miR-143
e
HSA-miR-195
foram underexpressed no carcinoma urotelial de bexiga em comparação com urothelium histologicamente normais combinado (p 0,001 para cada miRNA). (Tabela S3)
Discussão
O desenvolvimento de alta tecnologia de sequenciamento profundo débito oferece a possibilidade de uma visão quase completa de perfis de miRNA. tecnologia de sequenciação de profundidade tem o potencial para identificar miARNs específicos de tecido novo [14]. Ele determina a abundância absoluta de miRNAs e pode descobrir novos miRNAs que foram perdidas por métodos de clonagem e sequenciamento comuns [15]. tecnologia de sequenciamento de profundidade é superior a microarrays que determinam miRNAs conhecidos limitados e, geralmente, não contêm a lista completa de sequências anti-sentido miRNA conhecidos. Até agora a tecnologia de sequenciamento de profundidade tem sido o padrão ouro para a análise abrangente de miRNAs.
As investigações têm revelado que miRNAs podem ser usados como biomarcadores para diferentes tipos de cancro [8], [9]. Alguns miRNAs como biomarcadores são capazes de rastrear o tecido de origem dos cancros de origem primária desconhecida [16]. assinaturas de miRNA específicos são superiores às assinaturas de mRNA em predizer o prognóstico de câncer de pulmão [17].
Neste trabalho, utilizou-se tecnologia de sequenciação profunda para determinar os perfis completos de expressão miRNA em nove pares de urothelial bexiga snap-congelados o carcinoma e combinados urotélio histologicamente normais. Muitos miARNs foram significativamente regulada positivamente ou regulados negativamente em carcinoma da bexiga em comparação com urotelial combinados urotélio histologicamente normais nestes pacientes, sugerindo que estes miARNs expressas de forma aberrante pode desempenhar papéis nestes cancros. O mais significativamente regulada miRNA
hsa-miR-96
foi relatado para ser oncogénico [18], mas o papel do miRNA mais significativamente subregulado
hsa-miR-490-5p
não é Claro. Um lote de miARN * s foram significativamente desregulado no carcinoma urotelial de bexiga em comparação com correspondência urotélio histologicamente normais neste estudo. Alguns miRNA * s pode se juntar ao silenciamento complexos e têm função inibitória [19] induzida pelo RNA.
Muitos grupos de miRNA desregulados foram expressos de acordo com nossa análise de sequenciação de profundidade. Descobrimos que o
hsa-miR-183
agrupamento foi sobre-expresso em cancro da bexiga. Este cluster consiste em
hsa-miR-96
,
hsa-miR-182 Comprar e
hsa-miR-183 Comprar e está localizado no cromossomo 7. Estes três miRNAs são regulada positivamente no carcinoma da próstata [18]. O padrão de co-expressão dos miRNAs deste agrupamento em cancros sugere que eles podem desempenhar papéis juntos. O
hsa-miR-200
família de miRNAs (
hsa-miR-200a /b /c
,
hsa-miR-141 Comprar e
hsa-miR -429
) foram sobre-expressos em câncer de bexiga. O
hsa-miR-200b~429
cluster está localizado no cromossomo 1 e
hsa-miR-200c~141
cluster está localizado no cromossoma 12. A co-expressão destes aglomerados sugere que eles pode ser controlado por fatores comuns e desempenham papéis juntos.
hsa-miR-200b
,
hsa-miR-200a
e
hsa-miR-429
miRNAs são codificados por um único transcrito policistr�ica e negativamente regulada por ZEB1 e SIP1 [20]. TGFß 1 pode regular negativamente o
hsa-miR-200
família que conduz à regulação positiva de ZEB1 e ZEB2 [21]. O
hsa-miR-200
família também são sobre-expresso em cancros do ovário e do colo do útero [22] – [24], sugerindo esta família miRNA são oncogênicos em cancros seveval. O
hsa-miR-17-92
cluster está localizado no cromossomo 13 e atua como oncogenes. E2F1 e E2F3 pode ativar diretamente a transcrição destes miRNAs [25]. O
hsa-miR-143~145
cluster está localizado no cromossomo 5 e regulados negativamente em muitos cancros, incluindo cancros da bexiga e suas linhas de células [13], [26]. Nossos resultados forneceram mais evidências para apoiar que o
hsa-miR-143~145
cluster é tumor-supressor no cancro da bexiga.
Neste estudo, Real-Time qPCR foi realizado para avaliar a padrões de
hsa-miR-182
,
hsa-miR-183
,
hsa-miR-200a
,
hsa-miR-143
expressão e
hsa-miR-195
num total de pacientes com carcinoma urotelial cinquenta e um da bexiga.
hsa-miR-182
,
hsa-miR-183 Comprar e
hsa-miR-200a
foram overexpressed
HSA-miR-143
e
HSA-miR-195 foram
underexpressed no carcinoma urotelial de bexiga em comparação com correspondência urotélio histologicamente normais. Estas descobertas apoiado a nossa análise de sequenciação de profundidade.
Nós comparamos os nossos resultados com dados publicados para seacrch para validações externas independentes.
hsa-miR-182
,
HSA-miR-183
e
hsa-miR-224
está regulada e
hsa-miR-1
,
hsa-miR-101
,
hsa-miR-143
,
hsa-miR-145
,
hsa-miR-127 Comprar e
hsa-miR-29c Quais são reprimidos no carcinoma urotelial de bexiga em comparação com urothelium histologicamente normais combinados [27]. Nossos resultados de sequenciamento profundas foram amplamente consistentes com esses achados. A regulação positiva de
HSA-miR-182 Comprar e
hsa-miR-183
ea regulação negativa da
hsa-miR-143
foram encontrados em carcinoma urotelial de bexiga em comparação com pareados urothelium histologicamente normal em nossa avaliação em tempo real qPCR. O perfil de miRNAs em 106 cancros da bexiga e 11 amostras normais utilizando microarrays revelou que um conjunto de miRNAs são regulados positivamente ou regulados negativamente em cancros da bexiga [13]. Destes miRNAs desregulados,
hsa-miR-21
,
hsa-miR-20a
,
hsa-miR-184
,
hsa-miR-26a
,
hsa-miR-125b
,
hsa-miR-29a
,
hsa-miR-29c
e assim por diante share os padrões de expressão semelhantes com os nossos resultados.
hsa-miR-133a
,
hsa-miR-133b
e
hsa-miR-195
são reprimidos em cancros da bexiga [28]. Estes miRNAs mostrou downregulation na nossa análise de sequenciação e
hsa-miR-195
downregulation foi comfirmed pelo Real-Time qPCR neste estudo.
Usamos combinado urothelium histologicamente normal adjacente como controle em nosso estudo . Tem sido relatado que colhidas amostras de urotélio histologicamente normal de pacientes com cancro da bexiga têm alterações genéticas [29]. Algumas aberrações cromossómicas partilhados por tanto um tumor e um tecido olhando histologicamente normais adjacentes ao tumor pode causar alterações semelhantes de expressão de miARN. Para compensar esta fraqueza, comparamos os nossos resultados com vários relatórios publicados usando urothelium de indivíduos normais como controle [10], [13], [28]. Uma grande coleção de achados foram comparáveis entre deles e nosso. Nossos resultados também foram consistentes com aqueles papéis usando combinado urothelium histologicamente normal adjacente como o controlo relativo a um lote de miRNAs [26], [27]. resultados que se sobrepõem entre os dados publicados e nossos resultados são apresentados na Tabela 2.
Para o melhor de nosso conhecimento, esta é a primeira análise ao nível do genoma de miRNAs em câncer de bexiga humana por sequenciamento de profundidade. Descobrimos que uma colecção de miARNs desregulados foram expressas de forma aberrante em carcinoma da bexiga em comparação com urotelial combinados urotélio histologicamente normais, sugerindo que pode desempenhar um papel como oncogenes ou supressores de tumor em desenvolvimento e /ou a progressão deste cancro. Nossos dados fornecem novos insights sobre a biologia do câncer. Mais trabalho será necessário para determinar os potenciais papéis dos miRNAs como biomarcadores de diagnóstico e candidatos alvos terapêuticos para o cancro da bexiga.
Materiais e Métodos
As amostras dos pacientes
O consentimento informado foi obtido de todos os pacientes eo estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board da Universidade de Pequim Shenzhen Hospital. Cinquenta e um doentes com carcinoma da bexiga urotelial que receberam cistectomia radical parcial ou foram incluídos no estudo. Desses pacientes, nove foram usados para análise de sequenciação de profundidade inicial de miRNAs e quarenta e dois foram utilizados para uma avaliação extra. carcinoma urotelial de bexiga foi diagnosticado histopatologicamente. carcinoma urotelial da bexiga e combinados urothelium histologicamente normal a partir de cada assunto foram congeladas em nitrogênio líquido immmediately após a ressecção. Informação detalhada de nove bexiga pacientes com carcinoma urotelial em conjunto sequenciação profunda está resumida na Tabela S4.
RNA Extração
Quando a proporção de células cancerosas em uma secção de tecido foi superior a 80%, o congelado bloco foi sujeita a extracção de ARN. O ARN total foi extraído a partir de cinquenta e um pares de carcinoma da bexiga urotelial congelados instantaneamente e combinados urotélio histologicamente normais utilizando o reagente TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) de acordo com o protocolo do fabricante. A integridade do RNA foi avaliada pela Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, EUA).
miRNA seqüenciamento e análise
Dezoito bibliotecas de ARN pequenas preparados a partir de nove pares de bexiga snap-congelados carcinoma urotelial e combinados urothelium histologicamente normais foram construídos, amplificado e sequenciado. O ARN total foi usado para sequenciação de miARN. Após 5’adapter e 3’adapter foram ligados a pequenos RNAs, transcrição reversa foi realizada. Em seguida, foi realizada por PCR e os produtos de PCR foram purificados. Por último, as bibliotecas de miRNA foram construídos e sequenciado pela Estação Cluster Illumina e Genome Analisar (Illumina Inc, CA, EUA) em Beijing Genomics Institute Shenzhen acordo com o protocolo do fabricante.
Baixa qualidade lê foram removidos e as sequências de adaptador foram cortadas com precisão com o auxílio de um algoritmo de programação dinâmica antes de posterior análise. Após eliminação do duplicado lê, os restantes leituras de pelo menos 18 nt foram mapeados para um genoma de referência humano (hg19) usando SOAP V2.0 [30]. Para identificar etiquetas de seqüências provenientes de exons de codificação, repetições, rRNA, tRNA, snRNA e snoRNA, UCSC RefGene, RepeatMasker, dados NCBI RefSeq e as anotações ncRNA compilados a partir dos dados do NCBI Genbank (https://www.ncbi.nih.gov ) foram usados. Para identificar novos genes de miRNA, todas as estruturas de ARN em grampo-like abrangendo pequenas etiquetas de RNA foram identificados utilizando MIREAP (https://sourceforge.net/projects/mireap).
métodos estatísticos confirmação em tempo real qPCR e
Três superexpresso (
hsa-miR-182
,
hsa-miR-183 Comprar e
hsa-miR-200a) e dois miRNAs underexpressed (
HSA-miR-143
e
hsa-miR-195
) foram avaliados em todos os pacientes incluídos no estudo. Estes miRNAs foram selecionados porque eles foram significativamente desregulamentado na análise inicial sequecing profundo. snRNA U6 foi utilizado como o controle endógeno. Real-Time qPCR foi realizada utilizando o miRNA qRT-PCR Kit All-in-One ™ Detection (GeneCopoiea Inc, Rockville, MD, EUA). 10 ug de ARN total foi convertido em cDNA de acordo com o protocolo do fabricante. A PCR foi realizada num volume total de reacção de 20 ul, incluindo 10 ul de 2xAll-in-One ™ qPCR mistura, 2 jil de adaptador universal Iniciador de PCR (2 uM), 2 ul de all-in-one ™ qPCR do iniciador (2 uM), 2 uL de ADNc da primeira cadeia (diluído em 1:05), 50xROX corante de referência de 0,4 uL e 3,6 uL de água duplamente destilada. As reacções foram realizadas e analisadas utilizando o Prism 7000 fluorescente quantitativa PCR Sistema ABI (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). As reações de PCR foram realizadas para o câncer e cDNA normal em triplicado para cada conjunto. Os parâmetros de ciclagem para a RCP foram as seguintes: (1) um passo de desnaturação inicial de 15 min a 95 ° C; (2) 40 ciclos, com um ciclo que consiste de 15 s a 95 ° C, 20 s a 55 ° C, e 30 s a 70 ° C. Os números de catálogo de All-in-One ™ miRNA qPCR Primers estão listadas na Tabela S5. A mediana em cada triplicado foi usado para calcular as concentrações de miRNA relativos (ΔCt = Ct
medianmiRNA-Ct
mediansnRNAU6). mudanças expressão de dobra foram calculados usando 2
-ΔΔCt métodos [31]. As diferenças de expressão miRNA entre o câncer e controle foram analisados utilizando
t
Student dentro SPSS (versão 16.0 SPSS Inc.). Um valor de p 0,05 foi considerado estatisticamente significante
Informações de Apoio
Tabela S1..
miRNAs foram diferencialmente expressos entre carcinoma urotelial de bexiga e combinados urothelium histologicamente normal.
doi: 10.1371 /journal.pone.0018286.s001
(XLS)
Tabela S2.
As sequências dos novos candidatos miRNA foram detectados em carcinoma urotelial de bexiga e combinados urothelium histologicamente normal.
doi: 10.1371 /journal.pone.0018286.s002
(XLS)
Tabela S3. valores
Delt-CT de Real-Time qPCR em pacientes com carcinoma urotelial cinquenta e uma bexiga.
doi: 10.1371 /journal.pone.0018286.s003
(DOC)
Tabela S4.
As informações do paciente em conjunto sequenciamento profundo.
doi: 10.1371 /journal.pone.0018286.s004
(DOC)
Tabela S5. Catálogo
Primer.
doi: 10.1371 /journal.pone.0018286.s005
(DOC)
Reconhecimentos
Agradecemos a todos os doadores que participaram neste programa, todos os nossos colegas de trabalho que contribuíram para a construção do tecido Urológica Banco na Universidade de Pequim Shenzhen Hospital e todos aqueles que dedicaram ao serviço de sequenciamento de profundidade em Beijing Genomics Institute Shenzhen.