Abstract

Fundo

Carcinoma da vesícula biliar (GBC) é um tumor maligno agressivo. A maior incidência de câncer de vesícula biliar em mulheres tem sido atribuído em parte a fatores hormonais. Portanto, o presente estudo foi desenhado para explorar o papel de variantes genéticas nos níveis de estrogênio (

ESR1, ESR2

) e progesterona (

PGR

) receptores no conferindo risco de câncer de vesícula biliar.

Materiais e Métodos

O estudo de caso-controle presente recrutados total de 860 indivíduos, incluindo 410 pacientes GBC, 230 pacientes colelitíase e 220 controles. Foram examinadas as associações de 6 polimorfismos seleccionados em três genes:

ESR1

(rs2234693, rs9340799, rs1801132),

ESR2

(rs1271572, rs1256049) e

PGR

(rs1042838) com risco GBC. A genotipagem de todos os polimorfismos foi feito utilizando PCR-RFLP. abordagens de redução de dimensionalidade multifatorial e de classificação e árvores de regressão foram combinados com regressão logística para descobrir interações gene-gene de alta ordem na via hormonal.

Resultados

Ao comparar a distribuição de freqüência do genótipo no cálculo biliar e GBC pacientes com a de indivíduos saudáveis, os genótipos variantes homozigoto de

ESR1

-397TT (rs2234693) polimorfismo mostrou risco significativo para o desenvolvimento de cálculos biliares [odds ratio: OR = 2,9] e GBC [OR = 1,8], respectivamente. análise de haplótipos detalhada sugeriu que

ESR1

T

rs2234693G

rs9340799C

rs1801132 tem associação significativa em conferir risco para ambos os cálculos biliares [OR = 2,2] e GBC [OR = 3,0]. No entanto, os genótipos contendo variantes (DI + II) de

PGR

(rs1042838) apresentaram baixo risco em ambos os GBC [OR = 0,4] e os pacientes colelitíase [OR = 0,4] .No realizar a análise MDR,

ESR1

IVS1-397C T,

ESR1

IVS1-351A G, e

ESR2

-789 a C produziu a mais alta precisão teste de 0,634. Estes resultados foram confirmados por análise CART que revelou que os indivíduos com os genótipos combinados de

ESR1

-397 CT ou TT,

ESR1

-351 AG ou GG e

ESR2

-789 AA tiveram o maior risco para o GBC [OR = 3,9].

Conclusão

Usando abordagens multi-analíticos, nosso estudo mostrou importante papel da

ESR1

IVS1- 397C T,

ESR1

IVS1-351A G, e

ESR2

-789 a . C variantes em GBC susceptibilidade eo risco parece ser mediada através de cálculos biliares via dependente

Citation: Srivastava a, Sharma KL, Srivastava N, Misra S, Mittal B (2012) papel significativo do estrógeno e progesterona Receptor variantes de sequência na vesícula biliar Cancer Predisposição: Estratégia multi-analítica. PLoS ONE 7 (7): e40162. doi: 10.1371 /journal.pone.0040162

editor: Amanda Ewart Toland, Ohio State University Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 01 de março de 2012; Aceito: 02 de junho de 2012; Publicação: 10 de julho de 2012

Direitos de autor: © 2012 Srivastava et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O estudo foi apoiada por pesquisa e bolsas de estudo bolsas do Conselho indiano de Pesquisa médica (ICMR) e do Departamento de Biotecnologia (DBT) Govt. da Índia. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Carcinoma da vesícula biliar é uma doença altamente fatal com diagnóstico tardio, limitadas opções de tratamento e prognóstico privado [1]. É a lesão maligna mais comum do tracto biliar e o sexto mais comum entre os tumores malignos do tracto digestivo [1], [2], [3]. Um estudo do registro de câncer de Utah (UCR) e banco de dados do câncer família sueca informou agrupamento familiar de GBC [4]. provas convincentes também existe para o papel da história familiar de cálculos biliares na etiologia do câncer de vesícula biliar [5], [6]. Além disso, o gráfico incidência do carcinoma da vesícula biliar flutua com sexo e etnia e as maiores freqüências são relatados nas mulheres pertencentes aos nativos americanos, América do Sul e Norte da Índia [7].

uma interação multifacetada entre os hormônios, alterações metabólicas , infecções, e até mesmo anomalias anatómicas foram elucidados na etiologia do carcinoma da vesícula biliar [1]. Além disso, um grande número de estudos epidemiológicos têm demonstrado forte associação da GBC com a doença do cálculo biliar colesterol [8] e com muitos de seus fatores de risco, como obesidade, alta ingestão de hidratos de carbono, e sexo feminino [9]. Em mulheres pós-menopausa, a terapia de reposição hormonal aumenta significativamente o risco de doenças da vesícula biliar [10], [11] sugerindo um papel notável de hormônios sexuais na etiologia da GBC [12], [13], [14], [15], [16] .Também as mulheres são duas a seis vezes mais afetadas que os homens. No total, estas evidências têm levantado a possibilidade de que os esteróides sexuais (estrogênio e progesterona) poderia desempenhar um papel fisiopatológico chave no desenvolvimento do carcinoma da vesícula biliar. As hormonas de estrogénio e de progesterona actuar sobre os tecidos alvo por ligação aos seus respectivos receptores. Os receptores de estrogénio (

ESR1, ESR2

) e receptor de progesterona (

PGR)

genes estão localizados no cromossoma 6q25.1, 14q21-22 e 11q22, respectivamente, e a sua expressão têm sido detectados em vesícula biliar humana normal mucosa [15] e GBC foram mostrados [16] variantes alélicas de genes de receptores de estrogénio a ser associado com a susceptibilidade ou progressão com vários distúrbios, tais como enfarte do miocárdio [17], de cálculos biliares de colesterol e doenças do tracto biliar [18]. Além disso, os ensaios funcionais sugerem que

ESR1

IVS1-397C T polimorfismo afecta um local de ligação para a família de factores de transcrição myb [19], [20] e o polimorfismo também foi estudada em vários estudos de associação de cancro da mama [17], [21], [22]. Pelo contrário, a hormona progesterona desempenha um papel importante na regulação do nível de estrogénio e a protecção contra vários cancros [23], [24].

Dado o papel potencial hormonal em doenças da vesícula biliar, e também o anteriormente explorados papel da

ESR /PGR

polimorfismos em cancros relacionados do sexo feminino, a hipótese de que variantes genéticas em

ESR1

,

ESR2

e

PGR

genes podem ter significativa impacto sobre os riscos de câncer de vesícula biliar. Portanto, no presente estudo, investigamos um painel de 6 polimorfismos bem estudados em

ESR1, ESR2 Comprar e

PGR

genes em um design de caso-controle, envolvendo 410 pacientes GBC, 230 pacientes colelitíase e 220 de câncer /controles sem colelitíase do norte da Índia. Além de regressão logística (LR), duas abordagens não-paramétricas, a redução multifatorial dimensionalidade (MDR) e classificação e árvore de regressão (CART) foram aplicados para explorar as interações gene-gene de alta ordem na modulação do risco de câncer de vesícula biliar. Para o melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro relatório que investigou o papel das variações genéticas em genes de receptores hormonais utilizando a abordagem multi-analítica para definir perfis de risco individuais para câncer de vesícula biliar e litíase biliar.

Resultados

características da População

as características demográficas da GBC e pacientes colelitíase em relação à sua idade e sexo controles pareados são apresentados na Tabela 1. a média de idade em todos os três grupos eram comparáveis ​​e não demonstraram estatisticamente significativa diferenças. Mais de 90% dos pacientes eram GBC em estágios avançados de cancro (fases III e IV) e foram encontrados cálculos biliares de estar presente em 50,5% dos pacientes GBC. Cerca de 31% dos pacientes GBC foram associados com o uso de tabaco, de alguma forma (fumar, mascar, ou em ambos). Foi observado durante a coleta de dados que a maioria dos pacientes do sexo feminino eram donas de casa e os pacientes do sexo masculino não estavam envolvidos em quaisquer ocupações perigosas. Todos os pacientes com câncer e cálculo biliar eram casos incidentes, e nenhum dos controles tinham história familiar de câncer.

Allelic Distribuição de Polimorfismos estudei em Controles

A distribuição genotípica e alélica do

ESR1

IVS1-397C T (rs2234693), IVS1-351A G (rs9340799), Ex4-122C G (rs1801132),

ESR2

-789 A C (rs1271572), 1082 G A (rs1256049) e

PGR

ins /del (rs1042838) são mostrados na Tabela 2. O observada frequências dos genótipos de todos os polimorfismos estudados nos controlos estavam em conformidade com o equilíbrio de Hardy-Weinberg (p 0,05). As freqüências dos alelos variantes de nosso estudo foram semelhantes aos relatórios publicados anteriores [25].

Associação de

ESR1

,

ESR2

e

PGR

polimorfismos com GBC e cálculos biliares

a Tabela 3 mostra o risco de carcinoma da vesícula biliar e pedras, em relação a cada um dos SNPs da

ESR1, ESR2

e

PGR.

ao comparar a distribuição de freqüência do genótipo dos nossos grupos de estudo, ou seja, GBC e os pacientes colelitíase com a dos controles, os genótipos variantes homozigoto de

ESR1

IVS1-397C (rs2234693) polimorfismo T mostrou aumento estatisticamente significativo para o desenvolvimento de GBC ( p = 0,02; [OR], 1.8) e de cálculos biliares (p = 0,001; [OR], 2,9). Além disso, em pacientes gallstone

ESR1

IVS1-351A G conferiu maior risco (P = 0,002; [OR], 2,6). Pelo contrário, não foram observadas diferenças significativas na distribuição de

ESR1

IVS1-351A G, Ex4-122C G, (rs1801132) e

ESR2

-789 A C (rs1271572 ), EX6 1082 G a (rs1256049) polimorfismos em qualquer dos grupos, tanto no genotípica e níveis alélicas. Os genótipos contendo variantes (DI + II) de

PGR

ins /del (rs1042838) apresentaram baixo risco em ambos os pacientes GBC e cálculo biliar que também foi significativa (p = 0,004; [OR], 0,4; p = 0,009; [OR], 0,4 Tabela 2), quando comparados com homozigotos do tipo selvagem genótipo DD

O estudo indivíduos foram estratificados em machos e fêmeas.. Em pacientes GBC do sexo masculino, o TT genótipo variante de

ESR1

IVS1-397C (rs2234693) polimorfismo T mostraram um aumento significativo do risco de GBC (p = 0,009; [OR], 4,8), enquanto IVS1-351A G ( rs9340799) polimorfismo conferiu maior risco para GBC no sexo feminino (p = 0,026; [OR], 2,4). Estes resultados conflitantes podem ser, em parte devido ao número insuficiente de machos em comparação com os pacientes do sexo feminino GBC. Nenhuma das variantes genéticas do

ESR2

e

PGR

ins /del risco específico do género conferida por GBC tanto no genotípica e níveis alélicas. Resultados semelhantes foram obtidos quando comparados machos e fêmeas colelitíase com a respectiva sexo controles segregadas. (Dados não mostrados.).

ESR1

e

PGR

polimorfismos e Modulação de Risco na presença de cálculos

Uma vez que os cálculos biliares estão presentes em mais do que 50% dos pacientes GBC, os casos de cancro foram separados em dois grupos com base na presença ou ausência de cálculos biliares de acompanhamento e comparados de forma independente com os controlos (Tabela 3). pacientes GBC com cálculos biliares que acompanham foram encontrados para ter maior risco de desenvolver a doença com

ESR1

IVS1-397 CT + TT (rs2234693) genótipos (p = 0,002; [OR], 1,6 Tabela 3). Em contraste,

ESR1

Ex4-122C G (rs1801132) não foi encontrado para ser associado significativamente em ambos os subgrupos. Em caso de

PGR

ins /del (rs1042838), foi observado um efeito protetor em pacientes GBC independentemente do seu estatuto de cálculos biliares (Tabela 3). No entanto, na comparação entre os pacientes GBC com cálculos biliares com pacientes colelitíase (sem câncer), os resultados não mostraram associação com todos os polimorfismos estudados de

ESR1, ESR2

e

PGR,

tanto em genotípica e alélica níveis. (Dados não mostrados.).

Desequilíbrio de Ligação e Análise de haplótipos da

ESR1

no caso e controle Grupos em

Na análise LD,

ESR1

rs2234693 e rs9340799 foram encontrados para estar em desequilíbrio de ligação (D ‘= 0,575). Haplótipos foram construídos para os três polimorfismos no

gene ESR1

incluindo IVS1-397C T (rs2234693); IVS1-351A G (rs9340799) e Ex4-122C G (rs1801132). Os haplótipos compreendendo os alelos selvagens homozigotos foram tomadas como referência e a diferença nas frequências de haplótipos entre pacientes e controles foram testados utilizando o teste do qui-quadrado.

Haplotipos análise dos estudados três polimorfismos de

ESR1

revelou que a distribuição de t

rs2234693G

rs9340799C

rs1801132 haplotipo foi significativamente mais elevada em ambos os GBC (27,5% v 13,7% /s) e gallstone pacientes (25,1% v /s 13,7) em comparação com os controlos e foi conferindo alto risco para GBC (p = 0,0001; [OR], 3,0 Tabela 4) e a doença do cálculo biliar (p = 0,0012; [OR], 2,2 Tabela 4). haplótipos globais análise indicou uma diferença estatisticamente significativa entre casos e controles GBC com base no padrão de distribuição da

ESR1

haplótipos (p = 0,001). No entanto, nenhum dos

ESR2

haplótipos foram encontrados para ser associado com GBC e o risco de cálculos biliares.

interação gene-gene

Como pode haver interações significativas entre

PGR, ESR1

e

ESR2

, foi realizada análise global interação gene gene-. Os resultados apresentados na Tabela 5 revelou interação significativa em variantes específicas dos três genes com interação total Valor de p . 0,0001

Associação da Relação de alta ordem com Risco GBC por Análise MDR

os nossos resultados anteriores têm demonstrado o envolvimento de interações gene-gene de alta ordem no reparo do DNA e vias inflamatórias no GBC susceptibilidade [26]. Portanto, nós verificamos para tais interações nas variantes genéticas de genes de receptores hormonais, através da análise de MDR e CART.

A Tabela 6 mostra o melhor modelo de interação por meio de análise MDR. O melhor modelo de um fator para prever o risco GBC era

ESR1

IVS1-397C T SNP (testando a precisão = 0,519, CVC = 10/10, permutação p = 0,025). O melhor modelo de dois fatores de

ESR1

mutação IVS1 351A G e

ESR2

-789 A C tinha uma precisão de teste melhorado de 0,564 (permutação p = 0,001), no entanto, a CVC foram diminuídos (10/06). O melhor modelo de interação foi o modelo de três fatores, incluindo

ESR1

IVS1-397C T

ESR1

mutação IVS1 351A G e

ESR2

-789 A C SNPs, que produziu a mais alta precisão de teste de 0,634 e o CVC máxima de 10/10 (permutação p = 0,001). O modelo de quatro fatores que consiste em

ESR1

IVS1-397C T, mutação IVS1 351A G, Ex4-122C G e

ESR2

-789 A C também melhorou a precisão de teste em comparação com o modelo de um fator (CVC = 10/10 permutação p = 0,001). Para os três SNPs identificados no melhor modelo de interação,

ESR1

IVS1-397C T, mutação IVS1 351A G e

ESR2

-789 A C foram combinados e dicotomizados de acordo com o software MDR . Indivíduos que transportam o estrato risco combinado tinha um aumento do risco 4,0 vezes superior para GBC (p = 0,001). Além disso, um efeito combinado de

ESR1

IVS1-397C T, mutação IVS1 -351A G e

ESR2

-789 A C foi avaliada por análise de regressão logística (Tabela 7) com a

ESR1

IVS1-397TT, IVS1-351GG e

ESR2

-789 AA como genótipos de risco. Os indivíduos foram classificados em quatro grupos com base no número de genótipos de risco eles realizadas e os sem qualquer risco genótipo foram designados como o grupo de referência. Verificou-se que os valores de p para os indivíduos com um e dois genótipos de risco foi de 0,46 e 0,015, respectivamente, no entanto, o valor de p e RUP para os três genótipos de risco não pôde ser verificada, devido à ausência da combinação variante nos controlos (Tabela 7). Estes resultados sugerem um efeito dose gene significativo de

ESR1

IVS1-397C T, mutação IVS1 -351A G e

ESR2

-789 A . C

Associação da Relação de alta ordem com Risco GBC por carrinho de análise

a árvore resultante final foi gerada pela análise CART (Tabela 8). Consistente com o melhor modelo de um fator MDR, a divisão inicial do nó raiz na árvore de decisão foi

ESR1

IVS1-397C T, sugerindo que esta SNP é o fator de risco mais forte para GBC entre os polimorfismos analisados . Uma inspecção mais aprofundada da estrutura da árvore revelou padrões de interação distintas entre os indivíduos com

ESR1

IVS1-397 CT ou TT e aqueles com os

ESR2

-789 AC ou CC genótipos. Indivíduos portadores

ESR1

IVS1-397CC,

ESR1

-122CC e

ESR2

-789 AC ou AA genótipos teve a menor taxa de casos de 33,3%, e tomado como referência. Usando o nó de terminal que compreende os

ESR1

Ex4-122 CC portadores do genótipo como referência, os indivíduos que transportam tanto o

ESR1

-397 CT ou TT,

ESR1

-351 AG ou GG e

ESR2

-789 genótipos AC apresentaram um risco significativamente mais elevado para GBC (OR ajustado 3,6; 95% CI, 1,7-9,1), enquanto que os indivíduos com os genótipos combinados de

ESR1 viajantes – 397 CT ou TT,

ESR1

-351AG ou GG,

ESR2

-789 AA tiveram o maior risco para o GBC (OR ajustado 3,9; 95% CI, 2,0-9,8) (Tabela 8) . Assim, combinando a análise loco único, CART e MDR descobrimos que variações genéticas individuais em qualquer

ESR1

ou

ESR2

não pode ser responsável em conferir alto risco para a doença, mas sim um gene ordem superior interações gene-são susceptíveis de ser envolvido na susceptibilidade genética para GBC.

Análise in silico de variantes genéticas no gene Atividade

Como os SNPs estão localizados em sequências não-codificantes, era plausível que os SNPs podem ter influência na transcrição do gene. In silico análise usando FAST-SNP e F-SNP mostraram alteração na regulação da transcrição e de splicing alternativo para a maioria de SNPs seleccionados (Tabela 8). Para a análise in-SILCO de PROGINS, Polyphen “resultado mostrou a mudança como benigna enquanto SIFT sugeriu” tolerado “mudança (Tabela 9).

Discussão

As diferenças genéticas em genes de hormônios sexuais pode ter um efeito sobre as suas actividades respectivas, causando assim a divergência inter-individual na propensão para GBC. Além disso, a forte incidência fêmea aumentou a probabilidade de que os estrogénios podem desempenhar um papel fisiopatológico fundamental na progressão do cancro da vesícula biliar [27]. Além disso, a expressão e estudos funcionais mostraram interações diretas entre VHS e domínios de receptores PGR [28], [29]. Há evidências de que o risco inerente de GBC de colelitíase em pacientes sem história familiar de cálculos biliares tiveram um risco 21 vezes, enquanto que aqueles com ambos os cálculos biliares e uma história familiar positiva teve um 57 vezes maior risco [6].

no presente estudo, foi aplicada uma estratégia multi-analítica, combinando LR, MDR e abordagens CART a analisar sistematicamente as associações entre o risco GBC e um painel de polimorfismos genéticos envolvidos na via hormonal.

no único análise lócus,

ESR1

IVS1-397C (rs2234693) polimorfismo T mostrou associação significativa com o risco GBC. Nossos resultados de LR, MDR e CART também analisa de forma consistente sugeriu que

ESR1

IVS1-397C polimorfismo T é o mais importante fator de susceptibilidade individual para o desenvolvimento GBC. Além disso, o gene – análise da interação gene mostraram interações significativas entre estas variantes hormonais. Além disso genethe estratégias multi-analíticos também revelou interações gene-gene de ordem superior entre

ESR1

IVS1-397C T, mutação IVS1 -351A G e

ESR2

-789 A polimorfismos C em GBC risco.

Em executar a análise detalhada dos haplótipos, descobrimos que o carcinoma da vesícula biliar e cálculos biliares indivíduos que carregam

risco de ESR1

haplótipos IVS1-397T, IVS1-351G, Ex4-122C conferiu aumento tanto para GBC e cálculos biliares indicando que

ESR1

haplótipo como um fator de risco. Assim, portadores de

ESR1

haplótipos tinha 3,04 vezes maior risco de carcinoma de vesícula biliar em comparação com os não-portadores, enquanto que os mesmos haplótipos conferiu 2,2 vezes o risco para doenças colelitíase aumento. Em contraste,

Alu

polimorfismo de inserção dos receptores de progesterona (

PGR

) conferiu menor risco em GBC e os pacientes colelitíase.

Recentemente, um estudo realizado por Park et al. na população chinesa avaliaram as variações de receptores hormonais (

ESR1, ESR2

) em relação ao câncer do trato biliar (35) e relatou uma associação com o

ESR1

(rs1801132) e

ESR2

(rs1255953) variantes de risco GBC, mas não observamos qualquer associação significativa com esses polimorfismos ex�icas. Em vez disso, encontramos associação com a intrônica (

ESR1

) e promotor (

ESR2

) polimorfismos. A razão por trás esta discrepância pode ser a variação populacional. As freqüências alélicas de

ESR1

e

ESR2

polimorfismos não eram comparáveis ​​entre os dois estudos. Além disso, o número total de casos GBC inscritos por Park et al foi relativamente menor em comparação com o presente estudo, que aumenta as chances de erro tipo II β em seu estudo. É também possível que o SNPs da

ESR1

e

ESR2

podem não ser que confere efeitos diretos sobre GBC suscetibilidade e os seus efeitos podem ser mediados através da sua ligação a alguns polimorfismos funcionais chave.

A associação entre a

ESR1

polimorfismos e risco de GBC /cálculos biliares são biologicamente credível. Os estudos em animais mostraram que ESRs estão presentes na árvore de hepato-biliar-pancreático [30], [31], [32], incluindo as células epiteliais do ducto biliares e vesícula biliar, o que sugere que os estrogénios podem desempenhar um papel em doenças da vesícula biliar. Além disso, imuno-histoquímica e estudos quantitativos de RT PCR revelaram também que o nível de expressão

gene ESR1

é aproximadamente 50 vezes mais elevada em comparação com

ESR2

[33] Em modelos animais, o estradiol 17beta promovido gallstone formação envolve a regulação positiva da expressão hepática de ERalpha mas não ERbeta, e as ações litogênicos de estrogênio pode ser completamente bloqueada pelos agentes antiestrogênicos ICI 182,780 [34]. Esses estudos mostram que ESR-1 é jogador-chave e os resultados podem oferecer uma nova abordagem para o tratamento de cálculos biliares e câncer de vesícula biliar através da inibição da actividade ER hepática com um específicas do fígado, antagonistas ERalpha selectivos. Alguns estudos têm destacado o papel significativo do

ESR-2

rs1271572 no risco de câncer de ovário [35], [36]. Além disso, um estudo realizado por MARIE-génica Consórcio sugeriu que maior risco foi observado em indivíduos com genótipos combinados de ambos

ESR1

e

ESR2

genes que modificados risco associado com a monoterapia com estrogênio usado no cancro da mama [37 ]. Da mesma forma, em nosso estudo, a aplicação de interações gene-gene e abordagens multianalytical revelou que o risco GBC foi maior quando os genótipos variantes de

ESR1

e selvagem

ESR2

-789 A C estavam presentes em combinações .

pode também ser mencionado que variantes genéticas em vários outros genes da biossíntese de estrogênio, transporte e metabolismo mostraram associação significativa tanto com a doença do cálculo biliar e câncer do trato biliar, possivelmente através da modulação do metabolismo hormonal [18]. O IVS1-397C T e IVS1-351A polimorfismos G ter sido uma importante área de pesquisa em doenças tais como a osteoporose [22], [38], [39] doença cardiovascular [40] e do cancro [41]. Um número de hipóteses para o significado funcional destes polimorfismos foram relatados na literatura. Dada a sua localização, 397 e 351 pares de bases a montante do início do exão 2, possíveis mecanismos funcionais incluem alterações da expressão ESR1 pela ligação de factores de transcrição e influenciando splicing alternativo diferencial. Os nossos estudos in silico suporta ainda mais a influência de variantes genéticas do receptor de estrogénio sobre a transcrição de genes e os mecanismos de splicing. Assim, o estrogénio podem aumentar o colesterol cholelithogenesis aumentando funções de receptores de estrogénios no fígado e vesícula biliar [42]. Considerando a importância dos receptores hormonais em função da vesícula biliar, as variantes hipótese pode resultar em cálculos biliares de colesterol, seguido por inflamação crônica e metaplasia ainda mais intensa, em última análise, progredindo para GBC que por sua vez podem ser categorizadas como a via dependente de cálculos biliares de receptores de estrógeno.

Para o polimorfismo do receptor de progesterona, muito pouco se sabe sobre as consequências funcionais pelos quais

Alu

inserção no receptor de progesterona proteger os indivíduos de carcinoma da vesícula biliar e cálculos biliares. PROGINS códigos de alelos para PGR que consiste em 306 pb de inserção Alu no intron G.

PGR

ins /del está em perfeito desequilíbrio de ligação (D ‘= 1,0) com V660L polimorfismo (rs1042838) [43] (ie O alelo de transporte de inserção (PGR I) exibe maior estabilidade do mRNA e é transcrito a um mais estável e transcricionalmente activo proteico [44]. O alelo de inserção PROGINS foi reportado como inversamente correlacionadas com o risco de cancro da mama [45], [46], [47] e a endometriose [48] em algumas populações [49], [50 ], [51]. acredita-se que o aumento da PGR podem inibir a actividade mitogénica dos factores do crescimento semelhantes à insulina (IGFs), possivelmente através da regulação do crescimento da proteína de ligação ao factor semelhante a insulina 1 (IBP-1) e, assim, influenciar cancro risco [52], [53], [54].

Limitações do estudo

Embora, tamanho da amostra do presente estudo é suficiente para produzir um poder de 80%, mas é limitado em análise de subgrupo. Portanto, o estudo pode exigir a confirmação em coortes maiores. Porque este é um estudo de associação, não podemos descartar a presença de um possível desequilíbrio de ligação com outros genes vizinhos que podem explicar a associação significativa com fenótipos de câncer de vesícula biliar ou prognóstico adverso.

Em conclusão, nosso estudo mostrou que

ESR1

IVS1-397C T (rs2234693),

ESR1

IVS1-351A G (rs9340799),

ESR2

-789 A C (rs1271572) polimorfismos e suas interações de ordem superior podem conferir risco de carcinoma da vesícula biliar aumentada, provavelmente através de cálculos biliares via mediada

Métodos

Declaração de Ética

O protocolo do estudo. foi aprovado pelo comitê de ética institucional de Sanjay Gandhi Mensagem Instituto Universitário de Ciências Médicas (SGPGIMS), e os autores seguiram as normas da Declaração de Helsinque Associação do mundo. Todos os participantes foram fornecidos com consentimento informado por escrito para o estudo.

Estudo da População

O estudo de caso-controle presente recrutados um total de 860 indivíduos, incluindo 410 pacientes GBC que incluiu 230 casos GBC anteriores [ ,,,0],26], 230 pacientes colelitíase (GS) e 220 indivíduos saudáveis. Todos os assuntos não relacionados eram de etnia indiana do Norte. Os pacientes foram consecutivamente diagnosticados entre junho de 2006 e setembro de 2011, o Departamento de Gastro-cirurgia, Sanjay Gandhi Mensagem Instituto Universitário de Ciências Médicas e Departamento de Oncologia Cirúrgica, CSMMU Lucknow, na Índia. GBC foi definida como tumores resultantes na camada (mucosa) mais interior e propagação através do peritoneu visceral (tecido que cobre a vesícula biliar) e /ou para o fígado e /ou a um órgão próximo (tal como o estômago, intestino delgado, cólon, pâncreas, ou canais biliares fora do fígado), e para os nódulos linfáticos próximos. diagnóstico de câncer para todos os casos foi confirmada por agulha fina aspirado citologia celular (FNAC) e histopatologia, obtendo-se uma taxa de resposta de 94%. Estadiamento do câncer foi documentada de acordo com a AJCC /UICC estadiamento [55]. Na doença do cálculo biliar, cálculos biliares sintomáticos foram detectados por ultrassonografia transabdominal. Os controles saudáveis ​​foram recrutados a partir de indivíduos não aparentados livres de qualquer doença maligna da população em geral. Indivíduos com cálculos biliares silenciosas detectados por ultra-sonografia foram excluídos os controles. Os controles foram frequência correspondente aos pacientes de idade (± 5 anos) e sexo. No recrutamento, consentimento informado foi obtido de cada sujeito e as informações sobre as características demográficas, como sexo, idade e hábito de fumar, foi recolhido por meio de questionário.

amostras de DNA e genotipagem

Com base de estudos funcionais e epidemiológicos anteriores [17], foram selecionados um total de 6 polimorfismos funcionais definidos pelo literatura em três genes importantes envolvidos pertencentes aos receptores de estrogênio e progesterona. polimorfismos de nucleotídeo único candidato (SNPs) foram escolhidos com base no seguinte: (a) a freqüência do alelo de mais de cinco por cento na literatura ou bases de dados [56] (b) validados substituições alélicas, e /ou (c) alterações funcionais ligadas a alelos substituição relatado na literatura. Estes incluíram três polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) em estrogênio receptor 1 (

ESR1

: IVS1-397C rs2234693 T, IVS1-351A rs9340799 G) e Ex4-122C G (rs1801132) do gene, dois SNPs no receptor de estrogênio 2 (

ESR2

: -789 a Crs1271572, 1082 G a rs1256049) do gene e um SNP no receptor de progesterona (

PGR

: ins /del rs1042838). O ADN genómico foi extraído a partir de 5 ml de leucócitos do sangue periférico de acordo com o método padrão salting out [57]. A amostra de sangue e os detalhes clínicos foram coletados de cada participante no recrutamento. Os polimorfismos foram genotipados usando o método de polimorfismo de fragmentos de PCR ou PCR-restrição, como descrito anteriormente por Lai

et al

[58] e Rowe

et al

. [59]. Os fragmentos de PCR digeridos foram separados em gel de poliacrilamida e coloração com brometo de etídio e observadas com sistema de imagem de raios ultravioleta (Bio-Rad Model). A genotipagem foi realizada sem o conhecimento do caso ou controle de status. A 10% mascarado amostra aleatória de casos e controles foram testados duas vezes por diferentes profissionais de laboratório e a reprodutibilidade foi de 100%.

Análise Estatística

As estatísticas descritivas foram apresentados como média e desvio-padrão [SD ] para medidas contínuas, enquanto o valor absoluto e percentagens foram utilizados em medidas categóricas. A bondade do qui-quadrado de teste de encaixe foi usado para qualquer desvio Hardy Weinberg nos controles. Diferenças nas freqüências genotípicas e alélicas entre os grupos de estudo foram estimados pelo teste do qui-quadrado. LR multivariada incondicional foi utilizada para estimar odds ratio [OR] e seus intervalos de confiança de 95% [IC] de ajuste para idade e sexo. As RUP foram ajustados para fatores de confusão, como idade e sexo. Um valor de p bicaudal menor que 0,05 foi considerado um resultado estatisticamente significante. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software SPSS versão 16.0 (SPSS, Chicago, IL, EUA). análise de haplótipos foi realizada utilizando SNPstatwww.snpstats.in [60].

redução de dimensionalidade Multifactor (MDR) método é não-paramétrico, o método livre de modelo genético para superar algumas das limitações de regressão logística (ou seja, o tamanho da amostra limitações) para a detecção e caracterização de gene de interacções de genes [61].